способ ускорения заживления кожных повреждений, вызванных денервацией и нарушением кровоснабжения

Формула изобретения

Способ ускорения заживления кожных повреждений, вызванных денервацией и нарушением кровоснабжения, характеризующийся тем, что вводят иммуномодулятор, при этом в качестве иммуномодулятора используют тилорон, который в терапевтически эффективном количестве вводят наружно в виде аппликаций или подкожно в виде инъекций.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной медицине, и касается способа использования лекарственных средств для ускорения заживления поврежденной кожи при нарушении ее иннервации и кровоснабжения.

Тенденция к прогрессивному увеличению числа больных с патологией кожи, их социальная дезадаптация придает проблеме эффективных способов лечения большую научно-практическую и социальную значимость.

Несмотря на существенные успехи в разработке новых методов и средств терапии имеется значительный контингент пациентов, резистентных к проводимому лечению.

При нарушении иннервации кожи в ней возникают нарушения трофики и развиваются патологические изменения: шелушение, атрофия рогового слоя, изъязвления и иногда длительно незаживающие трофические язвы. Нарушения трофических функций сочетаются обычно с изменением физико-химического состояния тканей, метаболизма.

Нарушение кровоснабжения сопровождается целым спектром изменений васкуляризируемых тканей, в том числе кожи. Сосудистые расстройства снижают резистентность кожи к воздействию физических раздражителей, повышают проницаемость для химических веществ. Изменения кожных покровов при сосудистой ишемии варьируют от дистрофических нарушений до выраженных воспалительных и эрозивно-язвенных процессов.

Патологические изменения кожи при нарушении иннервации и кровоснабжения с тенденцией к хронизации и торпидности течения процесса имеют общий патогенетический механизм - значимые отклонения в иммунной реакции организма [Скрипкин Ю.К., Шарапова Г.Я., Резайкина А.В. и др. Иммунология в дерматологии // Вести, дерматологии и венерологии. - 1993. - № 4. - С.4-13].

Важнейшими факторами регуляции защитных реакций человека, в том числе реакций воспаления и иммунитета, являются цитокины, синтезируемые лимфоидными и нелимфоидными клетками. Цитокины в первую очередь регулируют развитие местных защитных реакций в тканях с участием различных типов клеток крови, эндотелия, соединительной ткани и эпителия, что чрезвычайно важно для заживления повреждения и восстановления поврежденной структуры тканей.

На уровне целостного организма цитокины осуществляют связь между иммунной, нервной, эндокринной, кроветворной и другими системами и служат для их вовлечения в организацию и регуляцию защитных реакций воспаления и иммунного ответа, а также регулируют ряд нормальных физиологических функций. В настоящее время цитокины считаются одними из наиболее перспективных лекарственных средств для применения в клинической практике. Среди многочисленных цитокинов особое место отводится интерферонам, выполняющим функцию короткодистантных медиаторов межклеточного взаимодействия [Серебренникова С.Н., Семинский И.Ж. Роль цитокинов в воспалительном процессе (сообщение 1, 2) // Сибирский медицинский журнал. 2008, № 6, 8].

Снижение иммунологической активности влияет на восстановление целостности поврежденной ткани. Рациональные способы иммунокоррекции позволяют индуцировать адекватную иммунологическую реакцию.

Известен способ лечения трофических язв, длительно незаживающих ран растворами для наружного применения и парентеральными растворами дерината (дезоксирибонуклеата натрия) (производство ЗАО "ФП "Техномедсервис" RU № 002916/02 от 18.08.2008. RU № 002916/01 от 27.02.2008 г.). Деринат обладает иммуномодулирующим, противовоспалительным, репаративным, регенерирующим действием.

Раствор дерината наносят в виде аппликационных повязок с препаратом 3-4 раза в день с одновременным интраназальным введением от 1 до 6 месяцев. Парентерально его вводят по схеме в течение 20 дней.

Недостатки способа - сложность применения, длительные сроки заживления (от 1 до 6 месяцев).

Одним из самых эффективных индукторов эндогенного интерферона у человека является тилорон, значительно превосходящий аналогичные препараты по эффективности, длительности действия, широте спектра его применения и безвредности.

Тилорон - низкомолекулярный синтетический индуктор интерферона ароматического ряда, относящийся к производным флуоренона. Химическое название - 2,7-бис-[2-(диэтиламино)этокси]-9Н-флуорен-9-он (и в виде дигидрохлорида). Брутто-формула - C₂₅H ₃₄N₂O₃. [Рекомендации по применению препарата Амиксин в клинической практике, М., 2007, 46 с.]. Амиксин ^® и Лавомакс^® - торговое название препаратов тилорона. Тилорон зарегистрирован в России в качестве противовирусного и иммуномодулирующего лекарственного препарата (регистрационный номер 96/252/3).

Тилорон стимулирует образование в организме интерферонов , и . Кроме того, он активирует стволовые клетки костного мозга, стимулирует гуморальный иммунитет, увеличивая продукцию иммуноглобулинов IgM и IgG, уменьшает степень иммунодепрессии, восстанавливает соотношения Т-супрессоров и Т-хелперов. Препарат оказывает воздействие на системы перекисного окисления и антиперекисной защиты [Влияние тилорона на системы перекисного окисления и антиперекисной защиты в норме и при гипоксии / Б.Н.Галкин, В.А.Баринов, Л.А.Тиунов и др. // Вопр. мед. химии. - 1990. - Т.36, № 1. - С.60-62].

Биотрансформации в организме подвергается незначительная часть введенного препарата, он не кумулируется, экскретируется в основном в неизменном виде с калом (около 70%) и мочой (около 9%). Т1/2 составляет 48 часов. В соответствии с классификацией уровня токсичности веществ тилорон относится к классу малотоксичных препаратов (IV класс опасности).

Системное введение тилорона оправдано для более эффективной активации клеток-мишеней, расположенных в разных частях тела, при наружном нанесении достигается максимально интенсивное локальное влияние препарата на патологический очаг, с незначительными системными проявлениями, а следовательно, минимальными побочными действиями.

Известна фармацевтическая композиция для лечения гнойно-деструктивных поражений кожи и слизистой, характеризующаяся тем, что она содержит тилорон, смешанный с мягкой основой, и выполнена в виде мягкой формы: мази или геля или крема при следующем соотношении компонентов, мас.%: тилорон 0,005-10,00; мягкая основа - остальное, (RU 2351322, А61К 31/06, 10.04.2009). В этом патенте описана мазь следующего состава:

В 100 г 3% мази содержится, г:

тилорон	3,0
полиэтиленоксид ПЭО-400	67,0
полиэтиленоксид ПЭО-1500	17,0
вода очищенная	до 100 г

Однако в этом патенте указано, что мазь может быть использована для лечения гнойно-деструктивных поражений кожи и слизистых оболочек, но не показано, что композиция может быть использована при кожных повреждениях, вызванных денервацией и нарушением кровоснабжения.

Известна также композиция, которая может быть использована для лечения заболеваний с признаками иммунной недостаточности, содержащая тилорон и гидрофильный растворитель, при следующем соотношении компонентов, мас.%: тилорон - 0,005-10,000, гидрофильный растворитель - остальное (RU 2364390, А61К 31/06, 20.08.2009).

Однако в патенте показано, что она может быть использована для лечения гнойно-деструктивных поражений кожи и слизистых оболочек, но не указано, что композиция может быть использована при кожных повреждениях, вызванных денервацией и нарушением кровоснабжения.

Задачей данной работы является разработка способа ускорения заживления кожных повреждений, вызванных денервацией и нарушением кровоснабжения.

Технический эффект, который может быть получен при использовании предлагаемого объекта, заключается в ускорении заживления поврежденной кожи при нарушении ее иннервации и кровоснабжения.

Способ осуществляют следующим образом: тилорон вводят в терапевтически эффективном количестве наружно в виде аппликаций или подкожно в виде инъекций.

Для аппликаций наносят на поврежденную поверхность

2%-ную мазь тилорона в количестве 0,03 г на однократную аппликацию до полного выздоровления. Состав мази: тилорон - 1 г, полиэтиленоксид ПЭО-400 - 39,2 г, ПЭО-1500 - 9,8 г.

В качестве контроля используют мазеобразующую основу (состав: ПЭО-400 - 80%, ПЭО-1500 - 20%). Препараты хранят в холодильнике при 4°С.

При подкожном введении проводят перифокальное обкалывание поврежденного участка 0,003%-ным инъекционным раствором тилорона в дозе 3 мг на 1 кг веса первые три дня ежедневно, далее - через день, курс - 10 инъекций.

Перифокальное обкалывание 0,003% инъекционным раствором тилорона проводят по базовой схеме. Для обкалывания субстанцию тилорона (порошок) непосредственно перед введением (ex tempore) растворяют в стерильном 0,9% растворе хлорида натрия (физиологическом растворе) в условиях ламината. Готовый раствор представлял собой однородную красную прозрачную жидкость.

В качестве контроля используют стерильный физиологический раствор. Условия хранения: комнатная температура не выше 25°С.

Исследование выполняли согласно утвержденному письменному протоколу и стандартным операционным процедурам (СОП) исследовательской лаборатории.

Исследования были выполнены на 50 аутбредных самцах крыс. Крысы CD SPF-статуса были произведены в условиях барьерной зоны Лаборатории биологических испытаний ФИБХ РАН и являются потомками F1 генетически и микробиологически контролируемой популяции, поддерживаемой в НПП «Питомник лабораторных животных ФИБХ». К началу введения веществ возраст животных составлял 20-22 недели. Начальная масса животных (масса перед проведением операции) составляла 500-600 грамм. Эти животные были произведены специально для этого исследования и в других экспериментах не использовались.

Количество животных, использованное в исследовании, было необходимо для получения статистически значимых результатов изучаемых параметров.

На первом этапе исследования у всех животных патологические изменения кожи ступни задних лап у крыс CD вызывали путем перерезки большеберцового нерва и перевязки подколенной артерии. Хирургические операции выполняли под наркозом (кетамин 10% - 60 мг/кг, ксилазин 2% - 10 мг/кг, 0,11 мл на 100 г массы животного). После наркотизации животного приступали к подготовке операционного поля: удаляли шерсть на задней части бедра, кожу обрабатывали дезсредством «Декосепт». Наркотизированное животное фиксировали за лапки в спинном положении на стальном хирургическом столике. Кожу обрабатывали 0,5% раствором хлоргексидина биглюконата на 70%-ном этаноле. Операционное поле изолировали стерильной марлевой салфеткой и делали продольный разрез кожи длиной около 3 см. Края стенки операционной раны раздвигали с использованием ранорасширителей. Осторожно, не повреждая других тканей, выделяли большеберцовый нерв и фиксировали его безопасными зажимами. Хирургическими ножницами нерв иссекался, и заново сшивали хирургическими нитками, после чего нерв извлекался из зажимов. Далее осторожно выделялась подколенная артерия и стягивалась лигатурой. В процессе работы во избежание пересушивания операционного поля, периодически обрабатывали стерильным физиологическим раствором. Накладывали прерывистый шов на операционную рану. В качестве шовного материала и для лигатур используют Ethilon - полифиламентная резорбируемая антимикробная полиамидная нить. Во время операции используют только стерильные материалы. В результате вызванных повреждений у животных развивались патологические изменения кожи ступни задних лап.

Контролем служили задние конечности контралатеральной стороны.

На втором этапе, когда площадь поражения достигла значительных размеров (около 200 мм²), формировали группы животных:

группа № 1 - интактные животные,

группа № 2 - животные, получавшие аппликации мази тилорона,

группа № 3 - животные, получавшие аппликации мазеобразующего вещества,

группа № 4 - животные, получавшие подкожные инъекции тилорона,

группа № 5 - животные, получавшие подкожные инъекции растворителя, использовавшегося для разведения тилорона (физиологический раствор).

Проводили введение исследуемого препарата различными способами в соответствии с групповой принадлежностью:

- наружно-ежедневные аппликации 2% мази на поврежденную поверхность в количестве 0,03 г на однократную аппликацию, достаточном для покрытия всей пораженной поверхности до полного выздоровления (группа № 2);

- подкожные инъекции - обкалывание поврежденного участка 0,003% инъекционным раствором тилорона в дозе 3 мг на 1 кг веса первые три дня ежедневно, далее через день, курс - 10 инъекций (группа № 4).

Дозы тилорона для введения крысам были рассчитаны на основании планируемого применения тилорона в клинике с использованием коэффициента пересчета, равного 6. Объем мази был подобран до начала эксперимента и являлся достаточным для покрытия всей площади кожи стопы используемых животных.

Животным контрольных групп в эти же сроки вводили контрольные вещества: мазеобразующую основу (группа № 3), растворитель (группа № 5). Кроме того, в исследовании использовали интактный контроль (животные с патологическими изменениями кожи стопы, но не получавшие тестируемых или контрольных препаратов - группа № 1). Количество животных в каждой группе - 10.

Ежедневно регистрировали изменение площади поражения стопы методом компьютерной планиметрии и вычисляли относительное уменьшение зоны повреждения в процентах к первому дню введения.

При сравнении динамики изменения площади повреждения стопы у животных различных групп было показано, что тилорон демонстрирует эффективность: при его введении в виде ежедневных аппликаций 2%-ной мази терапевтический эффект был достигнут на 14 день, при подкожном введении 0,003%-ного инъекционного раствора - на 18 день.

У контрольных групп заживление поврежденной поверхности происходило на 40-43 день, т.е. в 2,2-3,7 раза медленнее (фиг.1).

В Таблице 1 приведены группы животных и используемые в способе дозы.

На фиг.1 представлена динамика изменения площади поражения для всех групп животных.

На фиг.2 показано состояние лапы животного № 9 из группы № 2, на момент начала эксперимента (кругом отмечена зона поражения).

На фиг.3 представлено состояние лапы животного № 9 из группы № 2 на 7 день эксперимента (кругом отмечена зона поражения).

На фиг.4 показано состояние лапы животного № 9 из группы № 2 на 14 день эксперимента.

На фиг.5 - состояние лапы животного № 6 из группы № 4 на момент начала эксперимента (кругом отмечена зона поражения).

На фиг.6 - состояние лапы животного № 6 из группы № 4 на 9 день эксперимента (кругом отмечена зона поражения).

На фиг.7 - состояние лапы животного № 9 из группы № 4 на момент 18 день эксперимента.

Возможность осуществления предлагаемого способа подтверждается описанными ниже примерами, но не ограничивается ими.

Пример 1. Всем животным группы № 2 ежедневно делали аппликации 2%-ной мази тилорона. Для этого на поврежденную поверхность наносили мазь в количестве 0,03 г на однократную аппликацию, достаточном для покрытия всей пораженной поверхности, до полного выздоровления.

У животного № 9 из группы № 2 на начало эксперимента площадь поражения составляла 203,1 мм² в виде гиперемии с участками отслойки эпидермиса (фиг.2). В течение 4 дней область поражения возросла до 227,1 мм².

В последующие дни наблюдали снижение площади поражения (фиг.3) с исходом в дистрофически измененную кожу на 14 день эксперимента (фиг.4).

Пример 2. Всем животным группы № 4 проводили подкожно обкалывание поврежденного участка 0,003%-ным инъекционным раствором тилорона в физиологическом растворе, приготовленным непосредственно перед введением, в дозе 3 мг на 1 кг веса первые три дня ежедневно, далее через день, курс - 10 инъекций.

У животного № 6 из группы № 4 на начало эксперимента площадь поражения составляла 202,8 мм² в виде гиперемии с участками отслойки эпидермиса (фиг.5). В течение 4 дней область поражения возросла до 271,0 мм². В последующие дни наблюдалось снижение площади поражения (фиг.6) с исходом в дистрофически измененную кожу на 18 день эксперимента (фиг.7).

Таким образом, показано, что предлагаемый способ позволяет повысить эффективность лечения за счет сокращения сроков заживления повреждения кожи, что обеспечивается иммуномодулирующим действием тилорона при наружном нанесении и перифокальном обкалывании препаратами тилорона кожных повреждений, вызванных денервацией и нарушением кровоснабжения.

Таблица 1
Группы животных и используемые дозы.
№ Группы	Группа	Вещество	Доза действующего вещества	Объем введения/ нанесения	Кол-во животных в группе
1	Интактные животные	-	-	-	10
2	Мазь - тилорон	2% мазь тилорона	0,6 мг/на одну аппликацию	30 мг/ на одну аппликацию	10
3	Мазь - контроль	мазеобразующее вещество	0 мг/ на одну аппликацию	30 мг/на одну аппликацию	10
4	Подкожное введение тилорона (обкалывание)	0,003% инъекционный раствор тилорона	3 мг/кг	1 мл/кг массы тела	10
5	Подкожное введение-контроль (обкалывание-контроль)	физиологически и раствор	0 мг/кг	1 мл/кг массы тела	10