способ получения n-гликозидов индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дионов, обладающих цитотоксической и противоопухолевой активностью

Формула изобретения

1. Способ получения N-гликозидов индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дионов, обладающих цитотоксической и противоопухолевой активностью, общей формулы (Ia-г)



где Gly - гликозидный остаток: (а) L-арабинопиранозил-, (б) D-галактопиранозил-, (в) D-рибопиранозил-, (г) D-ксилопиранозил-, путем взаимодействия соответствующего ацетилгликозилиндола с оксалилхлоридом в хлористом метилене с получением соответствующего ацетилгликозида индол-3-илглиоксилилхлорида, добавления к нему производного индол-3-илуксусной кислоты и триэтиламина в среде растворителя с получением соответствующего производного 3-(индол-3-ил)-4-(ацетилгликозилиндол-3-ил)фуран-2,5-диона, применения фотохимического окисления в присутствии йода в бензоле до соответствующего производного фуранокарбазола с последующей обработкой полученного продукта водным раствором аммиака в N,N-диметилформамиде при повышенной температуре и давлении, отличающийся тем, что в качестве производного индол-3-илуксусной кислоты используют 1-формилиндол-3-илуксусную кислоту, а в качестве растворителя - диоксан; продукт, полученный после реакции с 1-формил-индол-3-илуксусной кислотой, выделяют добавлением в реакционную массу воды с отделением полученного продукта в виде осадка, не требующего предварительной очистки для проведения дальнейшего фотохимического окисления.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что получены неописанные ранее N-ацетилгликозиды бис(индолил)фурандионов общей формулы (IIa-г)



где Gly - гликозидный остаток: (а) L-арабинопиранозил-, (б) D-галактопиранозил-, (в) D-рибопиранозил-, (г) D-ксилопиранозил-.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что получены неописанные ранее N-ацетилгликозиды индолофуранокарбазолов общей формулы (IIIa-г)



где Gly - гликозидный остаток: (а) L-арабинопиранозил-, (б) D-галактопиранозил-, (в) D-рибопиранозил-, (г) D-ксилопиранозил-.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области фармацевтической химии и касается способа получения N-гликозидов индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дионов с различными углеводными остатками общей формулы (Iа-г), обладающих цитотоксической и противоопухолевой активностью.

где Gly - гликозидный остаток: (а) L-арабинопиранозил-, (б) D-галактопиранозил-, (в) D-рибопиранозил-, (г) D-ксилопиранозил-.

Известны синтетические способы получения гликозидов индолокарбазолов (введение углеводного остатка непосредственно в молекулу индолокарбазола или его предшественника - производного индола):

а) гликозилирование по методу Кенигса-Кнорра с использованием ацетобромглюкозы, серебряных или ртутных солей в качестве активирующих агентов [патенты США 5.668.271, 5.591.842 и патент Японии 9-604293]. В этом случае гликозиды образуются с невысоким выходом в виде смеси аномеров;

б) гликозилирование по методу Данишевского с использованием 1,2-ангидросахара [Michel Gallant, James Т. Link and Samuel J. Danishefsky, J. Org. Chem., 58 (1993), p.343-349; Margaret M. Faul, Leonard L. Winneroski and Christine Krumrich, J. Org. Chem., 64 (1999), p.2465-2470] также приводит к образованию смеси аномеров;

в) использование реакции Мицунобу [патенты США 5.804.564, 5.922.860 и патент Японии 9-530682] значительно повышает выход продукта гликозилирования.

Недостатком этих способов является их трудоемкость, так как они требуют добавления в схему синтеза дополнительных стадий - введения защитных групп в индолокарбазол и последующего их удаления, многостадийного синтеза производного углевода, применяемого в реакции гликозилирования, с дальнейшим хроматографическим разделением смесей изомеров.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ получения N-гликозидов индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дионов общей формулы (Iа-г), включающий использование в качестве исходных пер-O-ацетилированных гликозидов индола, которые под действием оксалилхлорида в хлористом метилене превращали в гликозиды индол-3-илглиоксилилхлорида и конденсировали их с индол-3-илуксусной кислотой в дихлорэтане с триэтиламином. Полученные бис(индолил)фурановые производные фотохимическим окислением кислородом воздуха в бензоле превращали в соответствующие ацетилгликозиды индолофуранокарбазола. Взаимодействие этих соединений с аммиаком в N,N-диметилформамиде приводило к гликозидам индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дионов общей формулы (Iа-г) [С.Я.Мельник, А.А.Бахмедова, Л.Д.Гараева, Т.Д.Миникер, И.Л.Плихтяк, Л.В.Эктова, Т.П.Иванова, В.М.Аданин, И.В.Ярцева, Биоорган, химия, 1996 г., т.22, № № 10-11, с.832-837; А.А.Бахмедова, Л.Д.Гараева, О.В.Горюнова, Т.Д.Миникер, И.Л.Плихтяк, Л.В.Эктова, Т.П.Иванова, В.М.Аданин, И.В.Ярцева, С.Я.Мельник, Биоорганическая химия, 1997 г., т.23, № 8, с.667-674, патент РФ № 2255089]. Этот способ был выбран в качестве прототипа.

Прототип имеет следующие недостатки:

1) выход ацетилгликозидов бис(индолил)фурановых производных, ключевых соединений для получения гликозидов индолопирролокарбазолов, составляет лишь 5-10%;

2) длительность проведения ключевой реакции получения ацетилгликозидов бис(индолил)фурандионов составляет 6 часов;

3) для выделения ацетилгликозидов бис(индолил)фурановых производных требуется трудоемкая хроматографическая очистка.

Задачей настоящего изобретения является устранение указанных недостатков путем создания усовершенствованного способа получения N-гликозидов индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дионов, обладающих цитотоксической и противоопухолевой активностью.

Способ осуществляется следующим образом: на пер-О-ацетилированные гликозиды индола действуют оксалилхлоридом в хлористом метилене, полученные ацетилгликозиды индол-3-илглиоксилилхлорида кипятят в диоксане в присутствии триэтиламина с 1-формилиндоло-3-илуксусной кислотой не более двух часов и выливают реакционную смесь в воду. Осадок 3-(1-формилиндол-3-ил)-4-(ацетилгликозилиндол-3-ил) фуран-2,5-дионов общей формулы (IIа-г) фильтруют и подвергают фотохимическому окислению кислородом воздуха в бензоле в присутствии каталитических количеств йода с образованием соответствующих производных карбазола общей формулы (IIIa-г). Взаимодействие этих соединений с водным аммиаком в диметилформамиде приводит к получению N-гликозидов индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-дионов формулы (Iа-г).

Примеры осуществления изобретения

Пример 1

Способ получения 3-(1-формилиндол-3-ил)-4-[1-(2,3,4-три-O-ацетил- -L-арабинопиранозил)индол-3-ил]фуран-2,5-диона (IIа)

К раствору 1,2 ммоль 1-(2,3,4-три-O-ацетил- -L-арабинопиранозил)индола [Preobrazhenskaya M.N., Korbukh I. A. "Chemistry of Nucleosides and Nucleotides" v.3, N.Y.: Plenum Press, 1993. p.1-105; Magnin A.A. Stephen A.M., Davies R.J.H. Tetrahedron. 1972, v.28, p.3069-3085] в 10 мл CH ₂Cl₂ прибавили 1,8 ммоль оксалилхлорида. Реакционную смесь выдерживали 18 часов при температуре 20-22°С, затем упаривали досуха. К остатку добавляли 12 мл диоксана, 1,2 ммоль N-формилиндол-3-илуксусной кислоты и 2,4 ммоль триэтиламина, смесь кипятили в течение 2 ч и вылили в воду. Осадок отфильтровали, высушили и получили соединение (IIа) с выходом 63%. ¹ Н-ЯМР (СDСl₃): 9.22 (уш с, 1Н, СНО), 8.37 (уш с, 1Н индол), 8.16 (с, 1Н индол), 7.98 (уш с, 1Н индол), 7.54 (д, 1Н индол), 7.27 (т, 1Н, индол), 7.14 (т, 1Н, индол), 7.03-6.99 (м, 2Н, индол), 6.73 (д, 2Н, индол), 5.68 (дд, 1Н, Н2', J _2'3' 10.1), 5.52 (д, 1Н, H1', J_1'2' 8.9), 5.50 (т, 1Н, Н4'), 5.32 (дд, 1Н, Н3', J_3'4' 3.45), 4.31 (дд, 1Н, Н5', J_5'4' 2.1), 3.99 (д, 1Н, Н5'', J_5'5'' 13.4), 2.29, 2.05, 1.74 (3 с, 9Н, 3 Ас). Масс-спектр: М⁺ 614.

Способ получения 13-формил-12-(2,3,4-три-O-ацетил- -L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]фурано[3,4-с]карбазол-5,7-диона (IIIа)

К раствору 0.37 ммоль 3-(1-формилиндол-3-ил)-4-[1-(2,3,4-три-O-ацетил- -L-арабинопиранозил) индол-3-ил]фуран-2,5-диона (IIа) в 200 мл бензола, помещенному в кварцевую колбу, добавляли 20 мг йода и облучали ртутной лампой, контролируя ход реакции с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) на силуфоле в системе бензол - ацетон 4:1. Растворитель упаривали в вакууме, остаток очищали препаративной ТСХ в системе бензол - ацетон 4:1. Выход соединения (IIа) - 66%. ¹Н-ЯМР (CDCl₃): 9.87 (с, 1Н, СНО), 9.12 (д, 1Н, Ar), 9.10 (д, 1Н, Ar), 8.57 (д, 1Н, Ar), 8.057 (уш д, 1Н, Ar), 7,77 (т, 1Н, Ar), 7.72 (т, 1Н, Ar), 7.67 (т, 1Н, Ar), 7.58 (т, 1Н, Ar), 5.83 (д, 1Н, H1', J_1'2' 8.7), 5.74 (уш с, 1Н, Н2'), 5.48 (с, 1Н, Н4'), 5.14 (дд, 1Н, Н3' J_3'2' 9.6, J_3'4' 3.3), 4.48 (дд, 1Н, Н5', J_5'4' 2.2), 4.07 (д, 1Н, Н5'', J_5'5'' 13.6), 1.88, 1.26, 0.95 (3 с, 9Н, 3 Ас). Масс-спектр: M⁺ 612.

Способ получения 12-( -L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-диона (Iа)

Смесь, состоящую из 0.33 ммоль 13-формил-12-(2,3,4-три-O-ацетил- -L-арабинопиранозил)индоло[2,3-а]фурано[3,4-с]карбазол-5,7-диона (IIIа), 5 мл диметилформамида и 5 мл 33%-ного водного аммиака, нагревали в течение 4 часов в автоклаве при температуре 140°С и далее оставляли на 18 часов при температуре 20-22°С. Растворитель упаривали в вакууме, к остатку добавляли воду. Выпавший осадок отфильтровывали, сушили и очищали препаративной ТСХ в системе хлороформ - метанол 4:1. Выход соединения (Iа) - 65%. ¹ Н-ЯМР (DMSO-d₆): 12.07 (с, 1Н, NH), 9.97 (с, 1Н, NH индол), 9.19 (д, 1Н, Ar), 9.09 (д, 1Н, Ar), 7.89 (д, 1Н, Ar), 7.67 (д, 1Н, Ar), 7.54 (м, 2Н, Ar), 7.35 (м, 2Н, Ar), 6.05 (уш д, 1Н, H1', J_1'2' 9.0), 6.75, 5.26, 5.14 (3 уш с, 3Н, 3-ОН), 4.22 (м, 1Н, Н2'), 4.30-4.10 (м, 3Н, Н3', Н5', Н5''), 3.89 (м. 1Н, Н4'). Масс-спектр: M⁺ 457.

Пример 2

Способ получения 3-(1-формилиндол-3-ил)-4-[1-(2,3)4,6-тетра-O-ацетил- -D-галактопиранозил) - индол-3-ил]фуран-2,5-диона (IIб).

Бис(индолил)фуран-2,5-дион (IIб) получали из 1-(2,3,4,6-тетра-O-ацетил- -D-галактопиранозил)индола аналогично способу получения соединения (IIа). Выход соединения (IIб) - 62%. ¹Н-ЯМР (СDСl₃): 9.22 (уш с, 1Н, СНО), 8.37 (уш с, 1Н индол), 8.11 (с, 1Н индол), 7.97 (уш с, 1Н индол), 7.56 (д, 1Н индол), 7.28 (т, 1Н, индол), 7.15 (т, 1Н, индол), 7.03 (м, 2Н, индол), 6.76 (с, 2Н, индол), 5.66 (т, 1Н, Н2', J_2'3' 9.9), 5.61-5.57 (м, 2Н, H1', Н4'), 5.30 (т, 1Н, Н3', J_3'4' 3.3), 4.31-4.20 (м, 3Н, Н5', Н6', Н6''), 2.28, 2.08, 2.02, 1.76 (4 с, 12Н, 4 Ас). Масс-спектр: М⁺ 687.

Способ получения 13-формил-12-(2,3,4,6-тетра-O-ацетил- -D-галактопиранозил)индоло[2,3-а]фурано[3,4-с]карбазол-5,7-диона (IIIб)

Фуранокарбазол (IIIб) получали из бис(индолил)фуран-2,5-диона (IIб) аналогично способу получения фуранокарбазола (IIIa). Выход соединения (IIIб) - 63%. ¹Н-ЯМР (CDCl₃): 9.90 (с, 1Н, СНО), 9.11 (д, 1Н, Аr), 9.09 (д, 1Н, Ar), 8.55 (д, 1Н, Ar), 8.06 (д, 1Н. Ar), 7.78-7.71 (м, 2Н, Ar), 7.66 (т, 1Н, Ar), 7.58 (т, Н, Ar), 5.91 (д, 1Н, H1', J_1'2' 8.8), 5.78 (т, 1Н, Н2'), 5.61 (д, 1Н, Н4', J_4'3' 2.6), 5.16 (дд, 1Н, Н3'), 4.51 (дд, 1Н, Н5'), 4.35 (м, 2Н, Н6', Н6''), 2.35, 2.22. 1.88, 0.99 (4 с, 12Н, 4 Ас). Масс-спектр: M⁺ 685.

Способ получения 12-( -D- галактопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-диона (Iб)

Пирролокарбазол (Iб) получали из фуранокарбазола (IIIб) аналогично способу получения пирролокарбазола (Iа). Выход соединения (Iб) - 62%. ¹Н-ЯМР (DMSO-d₆): 12.17 (с, 1Н, NH), 11.07 (с, 1Н, NH индол), 9.20 (д, 1Н, Ar), 9.09 (д, 1Н, Ar), 7.95 (д, 1Н, Ar), 7.70 (д, 1H, Ar), 7.59 (м, 2Н, Аr), 7.37 (м, 2Н, Аr), 6.18 (д, 1H, H1', J_1'2' 7.0), 6.82, 5.35, 5.21, 4.86 (4 уш c, 4H, 4-OH), 4.23 (м, 1Н, Н2'), 3.84 (м, 1Н, Н3'), 4.20-4.10 (м, 2Н, Н4', Н5'), 3.80-3.60 (м, 2Н, Н6', Н6''). Масс-спектр: М ⁺ 487.

Пример 3

Способ получения 3-(1-формилиндол-3-ил)-4-[1-(2,3,4-три-O-ацетил- -D-рибопиранозил)индол-3-ил]фуран-2,5-диона (IIв)

Бис(индолил)фуран-2,5-дион (IIв) получали из 1-(2,3,4-три-O-ацетил- -D-рибопиранозил)индола аналогично соединению (IIа). Выход соединения (IIв) - 62%. ¹Н-ЯМР (CDCl₃): 9.22 (уш с, 1Н, СНО), 8.40 (уш с, 1Н индол), 8.05 (с, 1Н индол), 7.98 (уш с, 1Н индол), 7.46 (д, 1Н индол), 7.26 (м, 1Н индол), 7.15 (т, 1Н индол), 6.96 (д, 2Н, индол), 6.78 (м, 2Н, индол), 5.84 (д. 1Н, H1', J_1'2' 9.1), 5,76 (уш.с., 1Н, Н3'), 5.41 (дд, 1Н, Н2', J_2'3' 2.9), 5.23 (м, 1Н, Н4'), 4.15 (дд, 1Н, Н5', J_5'4' 5.3, J_5'5'' 11.0), 4.04 (т, 1Н, Н5''), 2.29, 2.08, 1.75 (4 с, 9Н, 3 Ас). Масс-спектр: М⁺ 614.

Способ получения 13-Формил-12-(2,3,4-три-O-ацетил- -D-рибопиранозил)индоло[2,3-а]фурано[3,4-с]карбазол-5,7-диона (IIIв)

Фуранокарбазол (IIIв) получали из бис(индолил)фуран-2,5-диона (IIв) аналогично способу получения фуранокарбазола (IIIа). Выход соединения (IIIв) - 63%. ¹Н-ЯМР (CDCl₃): 9.98 (с, 1Н, СНО), 9.15 (д, 1Н, Ar), 9.07 (д, 1Н, Ar). 8.64 (д. 1Н, Ar), 7.89 (д, 1Н, Ar), 7.78 (т, 1Н, Ar), 7.68 (т, 1Н, Ar), 7.55 (т, 1Н, Ar), 6.17 (д, 1Н, Н1', J_1'2' 8.7), 5.68 (уш.с., 1Н, Н3'), 5.54 (дд, 1Н, Н2'), 5.30 (м, 1Н, Н4'), 4.36 (дд, 1Н, Н5', J_5'4' 5.5, J_5'5'' 11.1), 4.14 (т, 1Н, Н5''), 2.07, 2.05, 1.26 (3с, 9Н, 3 Ас). Масс-спектр: М⁺ 612.

Способ получения 12-( -D-рибопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-диона (Iв)

Пирролокарбазол (Iв) получали из фуранокарбазола (IIIв) аналогично способу получения пирролокарбазола (Iа). Выход соединения (IIIв) - 50%. ¹Н-ЯМР ((СD₃) ₂СО): 10.66 (с, 1Н, NH), 9.86 (с, 1Н, NH индол), 9.27 (д, 1Н, Ar), 9.20 (д, 1Н, Ar), 7.90-7.30 (м, 6Н, Ar), 6.41 (уш д, 1Н, H1'), 4,70-4.00 (м, 5Н, Н2', Н3', Н4', Н5', Н5''). Масс-спектр: M⁺ 457.

Пример 4

Способ получения 3-(1-Формилиндол-3-ил)-4-[1-(2,3,4-три-O-ацетил- -D ксилопиранозил)индол-3-ил]фуран-2,5-диона (IIг).

Бис(индолил)фуран-2,5-дион (IIг) получали из 1-(2,3,4-три-O-ацетил- -D-ксилопиранозил)индола аналогично способу получения соединения (IIа). Выход соединения (IIг) - 61%. ¹Н-ЯМР (CDCl ₃): 9.22 (уш с, 1Н, CHO), 8.37 (уш с, 1Н индол), 8.11 (с, 1Н индол), 7.97 (уш с, 1Н индол), 7.45 (д, 1Н индол), 7.26 (т, 1Н, индол), 7.14 (м, 1Н, индол), 6.98 (д, 2Н, индол), 6.75 (д, 2Н, индол), 5.57 (д., 1Н, Н1', J_1'2' 8.9), 5.49 (т, 1Н, Н3', J_3'4' 9.6), 5.39 (т, 1Н, Н2', J_2'3' 9,6), 5.23 (ддд, 1Н, Н4', J_4'5' 5.7, J_4'5'' 10.5), 4.41 (дд, 1Н, Н5', J_5'5'' 11.1), 3.64 (т, 1Н, Н5''), 2.11, 2.06, 1.70 (3 с, 9Н, 3 Ас). Масс-спектр: М⁺ 614.

Способ получения 13-Формил-12-(2,3,4-три-O-ацетил- -D-ксилопиранозил)индоло[2,3-а]фурано[3,4-с]карбазол-5,7-диона (IIIг)

Фуранокарбазол (IIIг) получали из бис(индолил)фуран-2,5-диона (IIг) аналогично способу получения фуранокарбазола (IIIа). Выход соединения (IIIг) - 85%. ¹Н-ЯМР (CDCl₃): 9.89 (с, 1Н, CHO), 9.13 (д, 1Н, Аr), 9.08 (д, 1Н, Ar), 7.94 (д, 1Н, Ar), 7.81-7.67 (м, 3Н, Ar), 7.58 (д, 1Н, Ar), 5,85 (д, 1Н, H1', J_1'2' 9.0), 5.45 (т, 1Н, Н2'), 5.29-5.25 (м, 2Н, Н3', Н4'), 4.62(дд, 1Н, Н5', J _5'4' 5.2), 3.71 (т. 1Н, Н5', J_5'5'' 11-6), 2.10, 1.89, 0.96 (3 с, 9Н, 3 Ас). Масс-спектр: М ⁺ 614.

Способ получения 12-( -D-ксилопиранозил)индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол-5,7-диона (Iг)

Пирролокарбазол (Iг) получали из фуранокарбазола (IIIг) аналогично способу получения пирролокарбазола (Iа). Выход соединения (IIIг) - 70%. ¹Н-ЯМР ((СD₃) ₂СО): 10.62 (с, 1Н, NH), 9.88 (с, 1Н, NH индол), 9.27 (д, 1Н, Ar), 9.20 (д, 1Н, Ar), 7.95 (д, 1Н, Ar), 7.81 (д, 1Н, Ar), 7.58 (т, 1Н, Ar), 7.55 (т, 1Н, Ar), 7.38 (т, 1Н, Ar), 7.36 (т.1Н, Ar), 6.24 (уш.д., 1Н, Н1'), 4.70- 3.75 (м, 5Н, Н2', Н3', Н4', Н5', Н5''). Масс-спектр: M⁺ 457.

Синтезированные гликозиды охарактеризованы данными спектров ¹Н-ЯМР и масс-спектров высокого разрешения. Спектры ¹Н-ЯМР записаны на приборе Bruker WH-360 (Германия) с программным обеспечением, внутренний стандарт - тетраметилсилан, химические сдвиги приведены в миллионных долях (м.д.). При описании формы сигналов приведены следующие сокращения: с - синглет, д - дублет, т - триплет, м - мультиплет, дд - дублет дублетов, уш. с - уширенный синглет; значения констант спин-спинового взаимодействия J приведены в герцах. Масс-спектры зарегистрированы на масс-спектрометре Finnigan MAT 8430 (Германия) с системой обработки данных SS-300 при ускоряющем напряжении 3 кВ, энергии ионизирующих электронов 70 эВ, температуре источника ионов 250°С, температуре испарения образца 170-250°С, с применением системы прямого ввода вещества в область ионизации. Приведены значения m/z. Препаративную ТСХ проводили на пластинах (20×20 см) с силикагелем LSL ₂₅₄ 5-40 мкм (Chemapol, ЧР) при толщине слоя 1 мм. Аналитическую ТСХ проводили на силуфоле (Chemapol, ЧР).

Техническим результатом заявленного способа является то, что внесенные на стадии получения гликозидов бис (индолил)фуран-2,5-дионов общей формулы (IIа-г) изменения, а именно использование в качестве одного из реагентов формилиндолилуксусной кислоты и диоксана в качестве растворителя, позволяют повысить выход гликозидов бисиндолов с 5-10% до 61-63%, сокращают время проведения реакции с 6 до 2-х часов и значительно упрощают их выделение с чистотой, достаточной для использования на следующей стадии фотохимического окисления в производные фуранокарбазола (IIIa-г).

Полученные согласно предлагаемому способу соединения общей формулы (Iа-г) относятся к потенциальным противоопухолевым препаратам. У этих соединений выявлена ранее неизвестная противоопухолевая активность в отношении рака шейки матки РШМ-5 и лимфоцитарной лейкемии L-5178y.

Цитотоксические свойства синтезированных гликозидов изучали в Российском онкологическом научном центе им. Н.Н. Блохина РАМН на культурах опухолевых клеток человека: CaOv - рака яичника, MS - меланомы Симпсона, MCF-7 - рака молочной железы. Цитотоксический эффект оценивали с помощью МТТ - анализа (Microculture Tetrazolium Test), основанного на спектрометрическом измерении количества голубого формазана, который образуется из желтой соли тетразолия под действием дегидрогеназ живых клеток [Campling В.Т., Pym J., Baker H.M., Cole S.P., Lam Y.M., Br. J. Cancer, 1991, 63(1) p.75-83]. Критерием активности служил цитотоксический индекс IC₅₀ (концентрация препарата в микромолях, подавляющая рост опухолевых клеток на 50%). Полученные результаты приведены в таблице.

Порядковый номер	Углеводный остаток (Gly)	Линия клеток и IC50 (10-6 M)*)
Iа	L-Ara	CaOv 5.0; MS 0.7; MSF-7 0.3;
Iб	D-Gal	CaOv 0.1; MS 0.1;
Iв	D-Rib	CaOv 5.0;
Iг	D-Xyl	CaOv 0.7; MS 0.1.
*) Значения IC50, меньшие или равные 10 -5 M, соответствуют критерию отбора соединений для изучения противоопухолевой активности in vivo.

Противоопухолевую активность изучали по стандартным методикам [в кн. «Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США». - Под ред. З.П.Софьиной. А.Б.Сыркина (СССР), А.Голдина, А.Кляйна (США). - М.: Медицина, 1979 с.296] на экспериментальных животных-опухоленосителях - мышах линии СВА и мышах гибридах первого поколения BDF-1, полученных из питомника «Столбовая». Экспериментальными моделями служили солидные опухоли (рак шейки матки РШМ-5, асцитная карцинома Эрлиха) и лимфоцитарная лейкемия L-5178y. Мышам прививали взвесь опухолевых клеток солидной опухоли в количестве 30-60 мг (разведение в стандартной среде 1:10) подкожно или асцитную жидкость, содержащую 10⁶ лейкозных клеток, в количестве 0.3 мл, внутрибрюшинно. Лечение начинали через 24 часа после прививки лейкоза или через 48 часов после прививки солидной опухоли. Препараты готовили непосредственно перед введением и вводили внутрибрюшинно в течение 5 дней. Критериями противоопухолевой активности служили: увеличение продолжительности жизни (УПЖ 25%) при лейкозах и торможение роста опухоли (ТРО 50%) при солидных опухолях.

Результаты проведенных исследований:

- у мышей с РШМ-5 при применении соединения (Iа) в дозе 40 мг/кг ТРО составило 86% в первый день и 58% на 22-й день после окончания лечения; при применении соединения (Iб) в дозе 75 мг/кг ТРО составило 79,5% в первый день и 61% на 26-й день после окончания лечения; при применении соединений (Iв) в дозе 40 мг/кг ТРО составило по 53% в первый день после окончания лечения и на 21-й день - 48%, при применении соединения (Iг) в дозе 40 мг/кг ТРО составило 53% в первый день после окончания лечения и на 21 день - 56%;

- у мышей с асцитной опухолью Эрлиха при использовании соединения (Iа) в дозе 40 мг/кг УПЖ составило 309% (более 3,5 месяцев) и у одной мыши достигнут полный эффект. При применении соединения (Iб) в дозе 100 мг/кг УПЖ составило 272% (более 3,5 месяцев) и у одной мыши достигнут полный эффект. При использовании соединения (Iв) в дозе 40 мг/кг УПЖ составило 87%, а при применении соединения (Iг) в дозе 40 мг/кг - 147%;

- у мышей с лимфоцитарной лейкемией L5178y (неадаптированной) при использовании соединения (Iа) в дозе 40 мг/кг УПЖ составило 47% и при применении соединения (Iб) в дозе 100 мг/кг - 54%; при адаптированной форме лейкемии L5178y применение соединения (Iб) в дозе 100 мг/кг привело к УПЖ 223%; для соединения (Iв) в дозе 40 мг/кг УПЖ составило 96%, а для соединения (Iг) в дозе 40 мг/кг УПЖ составило 187%.

Таким образом, на опытных животных установлена выраженная противоопухолевая активность соединений общей формулы (Iа-г).