комбинация, содержащая n-(3-метокси-5-метилпиразин-2-ил)-2-(4-[1,3,4-оксадиазол-2-ил]фенил)пиридин-3-сульфонамид и антимитотическое средство, для лечения злокачественного новообразования

Формула изобретения

1. Комбинация, содержащая N-(3-метокси-5-метилпиразин-2-ил)-2-(4-[1,3,4-оксадиазол-2-ил]фенил)пиридин-3-сульфонамид и таксан, для применения при лечении рака теплокровных животных.

2. Комбинация по п.1, в которой таксаном является паклитаксел.

3. Комбинация по п.1, в которой таксаном является доцетаксел.

4. Комбинация по любому из пп.1-3 для применения в качестве лекарственного средства.

5. Фармацевтическая композиция, которая представляет собой комбинацию по любому из пунктов пп.1-3 в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.

6. Набор для лечения рака у теплокровных животных, содержащий:

а) соединение (I), в первой единичной дозированной форме;

б) таксан; во второй единичной дозированной форме; и

в) емкость, в которой содержатся указанные первая и вторая дозированные формы; и необязательно

г) с инструкциями по применению.

7. Применение комбинации по любому из пп.1-3 для приготовления лекарственного средства для применения при лечении рака у теплокровного животного, такого как человек.

8. Применение по п.7, где указанный рак представляет собой рак пищевода, миелому, печеночно-клеточный рак, рак поджелудочной железы, рак шейки матки, диффузную эндотелиому костей, нейробластому, саркому Капоши, рак яичника, рак молочной железы, рак прямой кишки, рак предстательной железы, рак мочевого пузыря, меланому, рак легкого - немелкоклеточный рак легкого (NSCLC) и мелкоклеточный рак легкого (SCLC), рак желудка, рак головы и шеи, рак головного мозга, рак почки, лимфому или лейкоз.

9. Применение по п.8, где указанный рак представляет собой рак предстательной железы.

10. Комбинация по любому из пп.1-3, для применения при лечение рака.

11. Комбинация по п.10, где указанный рак представляет собой рак пищевода, миелому, печеночно-клеточный рак, рак поджелудочной железы, рак шейки матки, диффузную эндотелиому костей, нейробластому, саркому Капоши, рак яичника, рак молочной железы, рак прямой кишки, рак предстательной железы, рак мочевого пузыря, меланому, рак легкого - немелкоклеточный рак легкого (NSCLC) и мелкоклеточный рак легкого (SCLC), рак желудка, рак головы и шеи, рак головного мозга, рак почки, лимфому или лейкоз.

12. Комбинация по п.10, где указанный рак представляет собой рак предстательной железы.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к комбинациям, содержащим N-(3-метокси-5-метилпиразин-2-ил)-2-(4-[1,3,4-оксадиазол-2-ил]фенил)пиридин-3-сульфонамид или его фармацевтически приемлемую соль, в дальнейшем "Соединение (I)", и антимитотическое цитотоксическое средство. Эти комбинации пригодны для лечения или профилактики злокачественного новообразования. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей такие комбинации, и их применению для приготовления лекарственного средства для применения для лечения или профилактики злокачественного новообразования, в особенности рака предстательной железы.

Злокачественными новообразованиями, по приблизительным подсчетам, страдают 10 млн людей во всем мире. Эти данные включают заболеваемость, распространение и смертность. В Азии выявлено более 4,4 млн случаев злокачественных опухолей, включая 2,5 млн случаев в Восточной Азии, которая является регионом мира с наивысшим коэффициентом заболеваемости. Для сравнения, в Европе выявлено 2,8 млн случаев, в Северной Америке - 1,4 млн случаев и в Африке - 627 тысяч случаев.

Например, в Великобритании и в США более чем у одного человека из трех развивается злокачественное новообразование на протяжении жизни. В США злокачественные новообразования вызывают смерть, согласно статистике, около 600 тысяч людей в год и являются причиной смертности в одном из четырех случаев, занимая второе место по уровню смертности после сердечных заболеваний, а также являются второй причиной смертности детей в возрасте от 1 до 14 лет. В настоящее время в США ежегодно выявляется около 1 млн 380 тысяч новых случаев заболеваний, исключая около 900 тысяч случаев немеланомных новообразований кожи (базальных и сквамозных клеток).

Рак также является основной причиной заболеваемости в Великобритании, и в 1997 году было зарегистрировано около 260 тысяч новых случаев (исключая немеланомный рак кожи). Злокачественные опухоли являются заболеванием, которое поражает главным образом людей пожилого возраста, около 65% случаев заболевания выявляется у людей старше 65. Так как ожидается увеличение средней продолжительности жизни в Великобритании почти в два раза по сравнению с серединой девятнадцатого века, то риск заболевания раком населения возрастает. Коэффициент смертности от других заболеваний, вызывающих смерть, таких как заболевания сердца, в последние годы снижается, тогда как смертность от злокачественных новообразований остается относительно постоянной. Это приведет к тому, что у одного человека из трех в течение жизни будет диагностировано злокачественное новообразование и один из четырех людей умрет от рака. У людей до 75 лет смертность от злокачественных новообразований численно превосходит смертность от заболеваний сердечно-сосудистой системы, включая ишемическую болезнь сердца и удар. В 2000 году было зарегистрировано 151 тысяч 200 смертей от рака. Больше одной пятой (22%) этих смертей было вызвано раком легких и четвертая часть (26%) - раком ободочной кишки, молочной железы и предстательной железы.

Во всем мире заболеваемость и смертность вследствие определенных типов злокачественных новообразований (желудка, молочной железы, предстательной железы, кожи и т.д.) характеризуются значительными территориальными отличиями, которые приписывают расовым, культурным влияниям и в особенности влиянию окружающей среды. Выявлено свыше 200 различных типов злокачественных новообразований, но четыре основных типа, а именно легких, молочной железы, предстательной железы и прямой кишки, составляют больше половины всех диагностированных случаев рака в Великобритании и США. Рак предстательной железы занимает четвертое место по встречаемости среди злокачественных заболеваний у мужчин во всем мире, и ежегодно диагностируется 400 тысяч новых случаев заболеваемости, что составляет 3,9% всех новых выявленных случаев рака.

В настоящее время для лечения злокачественных новообразований применяют хирургическое удаление, лучевую терапию и/или системную химиотерапию. При одних видах рака они являются значительно эффективными, однако при других видах они не эффективны. Существует очевидная потребность в новом терапевтическом лечении.

В последнее время антагонисты рецептора эндотелина А были идентифицированы в качестве эффективных средств при лечении злокачественных новообразований (Cancer Research, 56, 663-668, 15 февраля, 1996 г., и Nature Medicine, том 1, № 9, сентябрь 1999 г., 944-949).

Эндотелины представляют собой семейство эндогенных пептидов, состоящих из 21 аминокислоты, которое включает три изоформы: эндотелин-1, эндотелин-2 и эндотелин-3. Эндотелины образуются путем расщепления эндотелинпревращающим ферментом связи Trp²¹-Val ²² их соответствующих проэндотелинов. Эндотелины являются одними из наиболее эффективных известных сосудосуживающих средств и характеризуются значительной продолжительностью действия. Также они обладают множеством других действий, включая стимулирование пролиферации клеток и митоза, ингибирование апоптоза, транссудацию и хемотаксис, а также взаимодействуют со многими другими средствами, которые оказывают влияние на сосуды.

Эндотелины секретируются многими тканями и клетками, включая эндотелий сосудов, гладкие мышцы сосудов, почки, печень, матку, дыхательные пути, кишечник и лейкоциты. Секреция может стимулироваться гипоксией, вибрационным стрессом, физической травмой и многими гормонами и цитокинами. Повышенные уровни эндотелина были обнаружены при многих болезненных состояниях у людей, включая злокачественные новообразования.

Соединение (I) является специфическим антагонистом эндотелина А, и это свойство делает его особенно пригодным для лечения злокачественных новообразований (см. WO 2004/018044).

Антимитотические цитотоксические средства, которые связываются с тубулином (белком, непосредственно вовлеченным в деление клеток и, следовательно, в размножение раковых клеток и рост опухоли), ингибируют рост клеток млекопитающих путем препятствования делению клеток. На молекулярном уровне они могут вызывать стабилизацию (эпотилоны и таксаны) или дестабилизацию (алкалоиды барвинка) микротрубочек, задействованных в расхождении хромосом при митозе. Клетки, обработанные такими лекарственными средствами, задерживаются на стадии митоза, то есть они препятствуют процессу деления клеток, что в конечном итоге может приводить к гибели клеток вследствие неудачного митоза.

Изобретателями настоящего изобретения неожиданно было обнаружено, что комбинация Соединения (I) и антимитотического цитотоксического средства может обладать значительными преимуществами и/или синергетическим действием при лечении злокачественного новообразования.

Следовательно, согласно настоящему изобретению, обеспечивается комбинация, содержащая Соединение (I) и антимитотическое цитотоксическое средство.

В настоящем изобретении под термином "антимитотическое цитотоксическое средство" подразумевают любой химический аналог, который проявляет свое противораковое действие путем стабилизации или дестабилизации тубулиновых микротрубочек, вовлеченных в деление клеток.

Примерами "антимитотических цитотоксических средств" являются таксаны, эпотилоны и алкалоиды барвинка. Предпочтительными примерами "антимитотических цитотоксических средств" являются:

- ТАКСАНЫ, такие как (2aR,3aR,4aR,6R,9S,11S,12S,12aR,12bS)-6,12b-диацетокси-9-[3(S)-(трет-бутоксикарбониламино)-2(R)-гидрокси-3-фенилпропионилокси]-12-бензоилокси-11-гидрокси-8,13,13-триметил-2а,3,3а,4,5,6,9,10,11,12,12а,12b-додекагидро-1Н-7,11-метаноциклодека [3,4]-циклопропа[4,5]бенз[1,2-b]оксет-5-он дигидрат; Паклитаксел (Таксол), BMS184476 (7-метилтиометилпаклитаксел); BMS 188797; BMS 275183; CYC-3204 (конъюгат пенетратин-паклитаксел); Таксопрексин; DJ-927; Доцетаксел (Таксотер); XRP9881 (RPR-109881A); XRP6258 (RPR112658); Милатаксел; MST 997; МВТ-206; NBT-287; ортатаксел; Протакс-3; PG-TXL; PNU-166945; 106258; BMS-188797; 109881; BAY 598862 (IDN 5109; полусинтетический таксан); Протаксел и MAC-321 (Таксалог);

- ЭПОТИЛОНЫ: производные и аналоги:

- эпотилона А;

- эпотилона В, такие как ABJ879; BMS247550 (иксабепилон);

ЕРO906 (патупилон); ZK ЕРО;

- эпотилона С;

- эпотилона D, такие как KOS 862;

- АНАЛОГИ И ПРОИЗВОДНЫЕ АЛКАЛОИДОВ БАРВИНКА: винкристин; винбластин; винорелбин; винфлунин; Ризоксин;

- ДРУГИЕ АНТАГОНИСТЫ ТУБУЛИНА:

- вещества, связывающие бета-тубулин /антагонисты бета-тубулина, такие как Т-138067; Т 900607; D 24851; STA 5312;

- антимикротрубочковые средства, такие как HTI-286 (производное гемиастерлина), Доластатин производные (ILX-651); аналоги галихондрина, такие как Е7389; аналоги криптофицина; и дискодермолиды (NVP-XAA296).

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации Соединения (I) и любого из вышеперечисленных соединений.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается Соединение (I) и таксан.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается Соединение (I) и эпотилон.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается Соединение (I) и производное эпотилона А или его аналог.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается Соединение (I) и производное эпотилона В или его аналог.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается Соединение (I) и производное эпотилона С или его аналог.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается Соединение (I) и производное эпотилона D или его аналог.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается Соединение (I) и производное алкалоида барвинка или его аналог.

В настоящем изобретении под термином "комбинация" подразумевают одновременное, раздельное или последовательное введение. В одном варианте осуществления изобретения "комбинация" относится к одновременному введению. В другом варианте осуществления изобретения "комбинация" относится к раздельному введению. В дальнейшем варианте осуществления изобретения "комбинация" относится к последовательному введению. Если введение является последовательным или раздельным, то временной интервал для введения второго компонента должен быть достаточным для сохранения полезного и/или синергетического действия комбинации.

В одном варианте осуществления ссылка на соединение или его фармацевтически приемлемую соль относится только к соединению. В другом варианте осуществления эта ссылка относится к фармацевтически приемлемой соли соединения.

Ссылка на злокачественное новообразование предпочтительно относится к раку пищевода, миеломе, печеночно-клеточному раку, раку поджелудочной железы, раку шейки матки, диффузной эндотелиоме костей, нейробластоме, саркоме Капоши, раку яичников, раку молочной железы, раку прямой кишки, раку предстательной железы, раку мочевого пузыря, меланоме, раку легкого - немелкоклеточному раку легкого (NSCLC) и мелкоклеточному раку легкого (SCLC), раку желудка, раку головы и шеи, раку головного мозга, раку почки, лимфоме и лейкозу. Более предпочтительно она относится к раку предстательной железы. Кроме того, она предпочтительно относится к SCLC, NSCLC, раку прямой кишки, раку яичников и/или раку молочной железы. Дополнительно, она более предпочтительно относится к SCLC. Кроме того, она более предпочтительно относится к NSCLC. Дополнительно, она предпочтительно относится к раку прямой кишки. Кроме того, она более предпочтительно относится к раку яичников. Дополнительно, она более предпочтительно относится к раку молочной железы. Также она более предпочтительно относится к раку мочевого пузыря, раку пищевода, раку желудка, меланоме, раку шейки матки и/или раку почки. Дополнительно она относится к раку эндометрия, печени, желудка, щитовидной железы, прямой кишки и/или головного мозга. В другом варианте осуществления изобретения злокачественное новообразование не представляет собой меланому. В другом варианте осуществления изобретения предпочтительно злокачественное новообразование находится на метастатической стадии, и более предпочтительно рак образует метастазы в костях. В дальнейшем варианте осуществления изобретения предпочтительно злокачественное новообразование находится на метастатической стадии, и более предпочтительно рак образует метастазы в коже. В дальнейшем варианте осуществления изобретения предпочтительно злокачественное новообразование находится на метастатической стадии, и более предпочтительно рак образует метастазы в лимфатической системе. В дальнейшем варианте осуществления изобретения злокачественное новообразование находится на неметастатической стадии.

Лечение злокачественного новообразования предпочтительно относится к лечению тех злокачественных опухолей, которые экспрессируют эндотелин А. Это лечение состоит в удлинении одного или нескольких критериев, таких как ответная реакция, степень ответной реакции, время прогрессирования заболевания и коэффициент выживания.

Предпочтительными комбинациями согласно настоящему изобретению являются:

- Соединение (I) и паклитаксел;

- Соединение (I) и доцетаксел;

- Соединение (I) и иксабепилон;

- Соединение (I) и патупилон;

- Соединение (I) и винорелбин;

- Соединение (I) и ХАА296;

- Соединение (I) и Т-138067.

Подходящие фармацевтически приемлемые соли включают, например, соли со щелочным металлом (таким как натрий, калий или литий), щелочноземельными металлами (такими как кальций или магний), соли аммония и соли с органическими основаниями, которые образуют физиологически приемлемые катионы, такие как соли с метиламином, диметиламином, триметиламином, пиперидином и морфолином. Кроме того, для тех соединений, которые являются достаточно основными, подходящие фармацевтически приемлемые соли включают фармацевтически приемлемые кислото-аддитивные соли с галогенидами водорода, серной кислотой, фосфорной кислотой и органическими кислотами, такими как лимонная кислота, малеиновая кислота, метансульфоновая кислота и n-толуолсульфоновая кислота. Альтернативно, соединения могут существовать в виде цвиттер-иона.

Следовательно, в соответствии с настоящим изобретением, обеспечивается комбинация, содержащая Соединение (I) и антимитотическое цитотоксическое средство, для применения в качестве лекарственного средства.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается фармацевтическая композиция, которая содержит Соединение (I) и антимитотическое цитотоксическое средство в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается фармацевтическая композиция, которая содержит Соединение (I) в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, в комбинации с фармацевтической композицией, которая содержит антимитотическое цитотоксическое средство в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

Следовательно, в соответствии с настоящим изобретением, обеспечивается способ лечения злокачественного новообразования у теплокровного животного, такого как человек, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному животному эффективного количества Соединения (I) в комбинации с эффективным количеством антимитотического цитотоксического средства.

Для избежания неопределенности при упоминании лечения злокачественного новообразования подразумевается, что оно также относится к предотвращению метастаз и к лечению метастаз, то есть распространения рака. Таким образом, комбинация согласно настоящему изобретению может применяться для лечения пациента, у которого не обнаружено метастаз для приостановления их проявления или для увеличения периода времени, в течение которого они проявляются, а также для лечения пациента, у которого уже диагностированы метастазы, для их лечения. Кроме того, лечение злокачественного новообразования также относится к лечению уже сформировавшейся первичной опухоли или опухолей и развивающейся первичной опухоли или опухолей. В одном варианте осуществления изобретения лечение злокачественного новообразования относится к предотвращению метастаз. В другом варианте осуществления изобретения лечение злокачественного новообразования относится к лечению метастаз. В другом варианте осуществления изобретения лечение злокачественного новообразования относится к лечению уже сформировавшейся первичной опухоли или опухолей или развивающейся первичной опухоли или опухолей. В настоящем изобретении лечение злокачественного новообразования также относится к предотвращению злокачественного новообразования per se.

Дополнительно лечение злокачественного новообразования также относится к обеспечению антиангиогенного действия у теплокровного животного.

Дополнительно лечение злокачественного новообразования также относится к обеспечению антипролиферативного действия у теплокровного животного.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления настоящего изобретения, обеспечивается набор, содержащий Соединение (I) и антимитотическое цитотоксическое средство; необязательно с инструкциями по применению.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления настоящего изобретения, обеспечивается набор, содержащий:

а) Соединение (I) в первой единичной дозированной форме;

б) антимитотическое цитотоксическое средство во второй единичной дозированной форме;

в) емкость, в которой содержатся указанные первая и вторая дозированные формы; и необязательно

г) с инструкциями по применению.

Примером единичной дозированной формы для Соединения (I) может быть таблетка для перорального введения, которая описанная в дальнейшем. Примеры единичной дозированной формы для антимитотического цитотоксического средства приведены в настоящем изобретении ниже.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления настоящего изобретения, обеспечивается набор, содержащий:

а) Соединение (I) совместно с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем в первой единичной дозированной форме;

б) антимитотическое цитотоксическое средство во второй единичной дозированной форме;

в) емкость, в которой содержатся указанные первая и вторая дозированные формы; и необязательно

г) с инструкциями по применению.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается фармацевтическая композиция, которая содержит Соединение (I) и антимитотическое цитотоксическое средство в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, для применения для лечения злокачественного новообразования.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается фармацевтическая композиция, которая содержит Соединение (I) в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, в комбинации с фармацевтической композицией, которая содержит антимитотическое цитотоксическое средство в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, для применения для лечения злокачественного новообразования.

Фармацевтические композиции могут находиться в форме, подходящей для перорального введения, например в виде таблетки или капсулы, для парентерального введения (включая внутривенное, подкожное, внутримышечное, внутрисосудистое введение или инфузию) в виде стерильного раствора, суспензии или эмульсии, для местного введения в виде мази или пасты или для ректального введения в виде суппозитория. В целом вышеприведенные композиции могут быть приготовлены обычным способом при использовании обычных наполнителей.

Например, соединение (I) может быть приготовлено в виде лекарственной формы - таблетки, используя следующие наполнители:

Соединение (I);

моногидрат лактозы (наполнитель);

натрийкроскармеллоза (распадающееся средство);

повидон (связующее);

стеарат магния (смазывающее вещество);

гипромеллоза (компонент пленочного покрытия);

полиэтиленгликоль 300 (компонент пленочного покрытия);

диоксид титана (компонент пленочного покрытия).

Антимитотические цитотоксические средства могут быть приготовлены в виде лекарственных препаратов в соответствии с известными методиками. Известны, например, различные лекарственные препараты Паклитаксела. Они включают Abraxane; Acusphere; AI-850; DO/NDR/02 (препарат паклитаксела без кремофора); EndoTag-1; паклитаксел, инкапсулированный в липосомы; LPE/PLP Паклитаксел; MPI-5019; NK-105; OncoGel; Paclimer Microspheres; S-8184; ABI-007; NOVA-12005; SP-1010C-O; Pacligel; SP-1010C; Paxoral, Xorane; Genexol; Tocosol; PacoExtra; Yewtaxan; Taxosomes; Atrigel; Xyotax (паклитаксел полиглумекс; полиглутамированный паклитаксел) и SP 1010С.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления настоящего изобретения, обеспечивается набор, содержащий Соединение (I) и антимитотическое цитотоксическое средство; необязательно с инструкциями по применению; для применения для лечения злокачественного новообразования.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления настоящего изобретения, обеспечивается набор, содержащий:

а) Соединение (I) в первой единичной дозированной форме;

б) антимитотическое цитотоксическое средство во второй единичной дозированной форме;

в) емкость, в которой содержатся указанные первая и вторая дозированные формы; и необязательно

г) с инструкциями по применению;

для применения для лечения злокачественного новообразования.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления настоящего изобретения, обеспечивается набор, содержащий:

а) Соединение (I) совместно с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем в первой единичной дозированной форме;

б) антимитотическое цитотоксическое средство во второй единичной дозированной форме;

в) емкость, в которой содержатся указанные первая и вторая дозированные формы; и необязательно

г) с инструкциями по применению;

для применения для лечения злокачественного новообразования.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается применение Соединения (I) в комбинации с антимитотическим цитотоксическим средством для приготовления лекарственного средства для применения для лечения злокачественного новообразования у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления изобретения, обеспечивается применение Соединения (I), в комбинации с антимитотическим цитотоксическим средством для лечения злокачественного новообразования у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления настоящего изобретения, обеспечивается комбинация, содержащая Соединение (I) и антимитотическое цитотоксическое средство, для применения для лечения злокачественного новообразования.

В соответствии с дальнейшим вариантом осуществления настоящего изобретения, обеспечивается комбинированное лечение, предусматривающее введение эффективного количества Соединения (I) необязательно совместно с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем в комбинации с эффективным количеством антимитотического цитотоксического средства необязательно совместно с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем теплокровному животному, такому как человек, который нуждается в таком терапевтическом лечении, для применения для лечения злокачественного новообразования.

Вводимого количества Соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли должно быть достаточно для обеспечения желательного терапевтического действия. Например, Соединение (I) может вводиться теплокровному животному перорально, в единичной дозе, меньше чем 1 г ежедневно, но больше чем 2,5 мг. Предпочтительно, Соединение (I) может вводиться теплокровному животному в единичной дозе, меньшей 250 мг в сутки. В другом варианте осуществления изобретения Соединение (I) может вводиться теплокровному животному в единичной дозе, меньшей 130 мг в сутки. В дальнейшем варианте осуществления изобретения Соединение (I) может вводиться теплокровному животному в единичной дозе, меньшей 50 мг в сутки.

Антимитотические цитотоксические средства могут вводиться в количествах согласно одобренным пособиям. Их разновидности и схема введения зависят от их максимально переносимой дозы.

Дозировка каждого из лекарственных средств и их соотношение должны составляться таким образом, чтобы обеспечить максимально возможное лечебное действие, что определяется в соответствии с национальными и международными пособиями (которые периодически рецензируются и переиздаются).

Описание чертежей

На фигуре 1 приведены столбиковые диаграммы, показывающие действия

Соединения (I) и Паклитаксела, отдельно или в комбинации, на апоптоз в клеточных линиях рака яичника HEY и OVCA 433.

На фигуре 2 приведены столбиковые диаграммы, показывающие действия

Соединения (I) и Паклитаксела, отдельно или в комбинации, на рост клеток карциномы яичника HEY в условиях in vivo.

На фигуре 3 приведены столбиковые диаграммы, показывающие действия возрастающих доз двух цитотоксических средств (паклитаксела и доцетаксела), отдельно или в комбинации с эндотелином 1 или эндотелином 1 + Соединением (I), на количество жизнеспособных клеток предстательной железы (РРС-1) в культуральной системе in vitro (растущие значения оптической плотности указывают на возрастание количества живых клеток).

В дальнейшем изобретение иллюстрируется со ссылкой на нижеприведенные примеры, которые предназначены для конкретизации отдельных вариантов осуществления изобретения. Эти примеры не предназначены и никоим образом не могут истолковываться как ограничивающие объем изобретения. Является очевидным, что изобретение может быть осуществлено другим образом, чем предпочтительно описано в настоящем описании. Возможны различные модификации и вариации настоящего изобретения исходя из сущности, раскрытой в настоящем описании, и, следовательно, они подпадают под объем изобретения.

Примеры

Эксперименты, демонстрирующие повышенную активность Соединения (I) в комбинации с антимитотическими цитотоксическими средствами (паклитакселом и доцетакселом)

Введение

Для оценки действия Соединения (I) в комбинации с антимитотическим цитотоксическим средством (паклитакселом) на рост различных раковых клеток нами использовались две общепринятые линии клеток яичника человека (HEY и OVCA 433**), которые экспрессируют функциональные рецепторы эндотелина А (ЕТа) и секретируют высокие уровни эндотелина-1 (ЕТ-1). ЕТ-1 представляет собой антиапоптотический фактор в клетках различных типов, проявляющий это действие посредством ЕТа рецепторов.

** OVCA 433 получали из асцитов, полученных от пациентов с прогрессирующей серозной аденокарциномой яичника (Tsa, SW и др., (1995) Exp.Cell Res. 218: 499-507) и HEY получали из ксенотрансплантата метастаз в брюшину цистоаденокарциномы яичника (Buick, R.N. et al., (1985) Cancer Research 45: 3668-3676). Клетки РРС-1 изначально имели происхождение из опухоли предстательной железы человека, и их получали из лаборатории Dr. J. Nelson, University of Pittsburgh).

Материалы и методы

Исследования в условиях in vitro на клетках яичника: Клеточные линии опухоли яичника человека (OVCA 433 и HEY) поддерживали в культуральной среде, содержащей сыворотку, до получения количества клеток, достаточного для проведения эксперимента. После этого клетки переносили в среду без сыворотки. Через 24 часа «обеднения» по сыворотке клетки обрабатывали или Соединением (I) (1 мкМ), или паклитакселом (60 нМ), или Соединением (I) + паклитакселом. После осуществления лечебной обработки в течение 24 часов измеряли апоптоз с помощью стандартного набора для выявления клеток ELISA Plus (Boehringer Manheim).

Исследования в условиях in vitro на клетках предстательной железы: Клетки опухоли предстательной железы человека (РРС-1) поддерживали в культуральной среде, содержащей сыворотку, до получения количества клеток, достаточного для проведения эксперимента. После этого клетки переносили в среду без сыворотки. Через 23 часа «обеднения» по сыворотке клетки обрабатывали или эндотелином-1 (10^-7 М) или эндотелином-1 + Соединением (I) при концентрации 10^-7 М. Дополнительная группа клеток получала только контрольный наполнитель. Через 1 час клетки обрабатывали паклитакселом или доцетакселом при концентрации 10^-6 М, 10^-8 М или 10^-10 М в течение 24 часов. После окончания этого 24-часового периода количество жизнеспособных клеток измеряли с помощью стандартного МТТ анализа (Mossman, J Immunol Methods. (1983) 65, 55-63).

Исследования в условиях in vivo: Атимическим мышам подкожно вводили 1,5×10⁶ клеток HEY в бок. Через 7 дней, после формирования привитых опухолей, мышей рандомизировали на 4 группы для лечения по 10 мышей в каждой группе. Одна группа получала лечение Соединением (I), которое вводили с помощью ежедневных внутрибрюшинных инъекций (10 мг/кг/день) в течение 21 дня. Вторая группа получали внутривенные инъекции паклитаксела (20 мг/кг) каждые 4 дня за 3 приема. Третья группа получала оба средства - паклитаксел и Соединение (I), а четвертой группе инъецировали таким же путем только наполнитель. Все эксперименты осуществляли в трех повторах.

Результаты

Исследования в условиях in vitro на клетках яичника: Добавление либо Соединения (I), либо паклитаксела не оказывало существенного влияния на апоптоз. Однако при комбинировании Соединения (I) с паклитакселом обнаружили чрезвычайно значительное повышение апоптоза по сравнению с введением наполнителя в контрольные клетки или отдельным введением соединения. Результаты приведены на фигуре 1, где "*" указывает на статистически значимое повышение по сравнению с контрольными значениями.

Исследования в условиях in vitro на клетках предстательной железы: Дополнительные возрастающие дозы либо паклитаксела, либо доцетаксела существенно уменьшали количество жизнеспособных клеток предстательной железы, оставшихся в культуре клеток после проведения лечения в течение 24 часов. Это уменьшение количества жизнеспособных клеток отменяется при сопутствующем введении эндотелина-1, действия, которое блокируется Соединением (I). См. фигуру 3.

Исследования в условиях in vivo: Соединение (I) в виде монотерапии приводит к существенному ингибированию ксенотрансплантатированных клеток яичника HEY. Степень ингибирования является сходной той, которая достигается при введении паклитаксела в виде монотерапии. Совместное введение Соединения (I) с паклитакселом вызывает потенцирующее действие Соединения (I) на противоопухолевые действия паклитаксела, приводя к частичной или полной регрессии опухоли. Результаты приведены на фигуре 2.

Выводы

Полученные данные свидетельствуют о том, что Соединение (I), специфический антагонист рецептора эндотелина, потенцирует действия паклитаксела на апоптоз в клетках яичника в условиях in vitro и ингибирующие свойства паклитаксела на рост опухолей яичника в условиях in vivo. Кроме того, соединение (I) отменяет ингибирующие действия эндотелина-1 на клеточную гибель, вызванную цитотоксическим средством (паклитакселом или доцетакселом). Таким образом. Соединение (I) в комбинации с паклитакселом или доцетакселом потенциально пригодно для лечения злокачественных новообразований.