повышение целостности барьера у больных с вич

Формула изобретения

1. Применение полиненасыщенных жирных кислот для изготовления композиции для лечения пациента, инфицированного вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), включающей:

а. эйкозапентаеновую кислоту (ЭПК), докозагексаеновую кислоту (ДГК) и арахидоновую кислоту (АРК), в которых содержание длинноцепочечной полиненасыщенной жирной кислоты с 20 и 22 атомами углерода не превышает 85 вес.% общего содержания жира; и

b. по меньшей мере два различных олигосахарида (OL1 и OL2), которые не перевариваются или только частично перевариваются в кишечнике под действием кислот или пищеварительных ферментов, присутствующих в верхних отделах пищеварительного тракта человека, но которые поддаются ферментации кишечной флорой человека, где два различных олигосахарида имеют гомологию моносахаридных единиц ниже 90%.

2. Применение по п.1, в котором композиция дополнительно содержит гамма-линоленовую кислоту (ГЛК).

3. Применение по п.1, где пациентом является человек, имеющий количество CD4+ Т-лимфоцитов от 200 до 700 клеток/мкл крови, причем указанный пациент не подвергался высокоактивной антиретровирусной терапии.

4. Пищевая композиция для улучшения целостности кишечного барьера у пациента, инфицированного ВИЧ, содержащая:

а. ЭПК, ДГК и АРК, в которой содержание длинноцепочечной полиненасыщенной жирной кислоты с 20 и 22 атомами углерода не превышает 85 вес.% общего содержания жира; и

b. по меньшей мере два различных олигосахарида (OL1 и OL2), которые не перевариваются или только частично перевариваются в кишечнике под действием кислот или пищеварительных ферментов, присутствующих в верхних отделах пищеварительного тракта человека, но которые поддаются ферментации кишечной флорой человека, в которой два различных олигосахарида имеют гомологию моносахаридных единицах ниже 90%; и

с. кислые олигосахариды, предпочтительно полимер уроновой кислоты со СП от 2 до 60.

5. Композиция по п.4, содержащая галактоолигосахарид и фруктан, выбираемый из группы, состоящей из фруктоолигосахаридов, инулина и их смесей.

6. Композиция по п.4 или 5, в которой по меньшей мере 10 вес.% олигосахаридов имеют степень полимеризации (СП) от 2 до 5 и по меньшей мере 5 вес.% имеет СП от 10 до 60.

7. Композиция по п.4 или 5, содержащая от 7,5 до 12,5% энергетических белков; от 40 до 55% энергетических углеводов; и от 35 до 50% энергетических жиров, в которой указанный белок выбирают из группы, состоящей из гидролизованного молочного белка, растительного белка и/или аминокислот.

8. Композиция по п.4 или 5, имеющая калорийность от 0,6 до 0,8 ккал/мл; осмоляльность от 50 до 500 мосм/кг; и вязкость ниже 50 мПа.

9. Композиция по п.4 или 5, которая дополнительно содержит ГЛК.

10. Композиция по п.4 или 5 для применения в качестве лекарственного средства.

11. Применение композиции по любому из пп.4-9 для изготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения диареи у пациента, инфицированного вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ).

Описание изобретения к патенту

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к способу повышения целостности кишечного барьера у больных с ВИЧ и к композиции, подходящей для применения в таком способе.

Уровень техники изобретения

Желудочно-кишечный эпителий в норме выполняет функции селективного барьера, позволяющего всасывание питательных веществ, электролитов и воды и предотвращающего контакт с пищевыми и микробными антигенами, включающими пищевые аллергены. Желудочно-кишечный эпителий ограничивает проникновение в системную циркуляцию антигенов, которые способны вызывать воспалительные реакции, например аллергические реакции. С увеличением частоты случаев аллергии, в особенности пищевой аллергии, множество исследовательских групп занято поиском (предотвращения) лечения этих болезней.

В патенте EP 1272058 описана композиция, содержащая неперевариваемые олигосахариды для повышения плотного контакта с целью уменьшения кишечной проницаемости и ослабления аллергической реакции. Композиция может содержать LC-PUFA (длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты).

Патент EP 745001 описывает комбинацию неусвояемых олигосахаридов и жирных кислот n-3 и n-6 для лечения неспецифического язвенного колита.

У авторов Usami et al. (Clinical Nutrition 2001, 20(4): 351-359) описано влияние эйкозапентаеновой кислоты (ЭПК) на проницаемость плотного контакта в монослое клеток кишечника. В своих опытах они выявили повышение проницаемости ЭПК, что указывает на то, что ЭПК не является подходящей для повышения целостности кишечного барьера.

Рецептуры предшествующего уровня техники не были оптимально подходящими для повышения целостности барьера.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает комбинацию выбранных длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот (LC-PUFA) и выбранных олигосахаридов. Настоящая комбинация LC-PUFA и олигосахаридов эффективно повышает целостность барьера путем синергичного повышения кишечной проницаемости, продукции слизи и уменьшения выработки в слизистой оболочке медиаторов воспаления, которые способны подвергнуть риску целостность кишечного барьера. Комбинация этих соединений в пищевой или фармацевтической рецептуре является особенно подходящей для повышения целостности кишечника у больных с ВИЧ и СПИДом.

Было неожиданно выявлено, что выбранные LC-PUFA эффективно уменьшают эпителиальную трансклеточную проницаемость. В отличие от результатов авторов Usami et al. (Clinical Nutrition 2001, 20(4): 351-359) авторы настоящего изобретения выявили, что C18 и C20 полиненасыщенные жирные кислоты, особенно эйкозапентаеновая кислота (ЭПК), докозагексаеновая кислота (ДГК) и арахидоновая кислота (AРК), способны эффективно снижать проницаемость плотного контакта кишечника.

В дополнение к LC-PUFA настоящая композиция содержит олигосахариды. Выбранные олигосахариды повышают целостность барьера путем стимуляции выработки слизи, что приводит к увеличению толщины слоя слизи. Считается, что этот эффект вызван влиянием других различных олигосахаридов на выработку короткоцепочечных жирных кислот (SCFA). Следовательно, настоящая комбинация LC-PUFA и неусвояемых олигосахаридов при энтеральном введении млекопитающему синергично улучшает целостность барьера и/или синергично уменьшает кишечную проницаемость путем одновременного снижения проницаемости плотного контакта и стимуляции выработки слизи.

В дополнительном аспекте настоящая композиция улучшает качество слоя кишечной слизи. Слой слизи содержит муцины. Муцины представляют собой высокомолекулярные гликопротеиды, которые синтезируются и секретируются бокаловидными клетками. Они формируют гелеобразный слой на поверхности слизистой оболочки, повышая, таким образом, целостность барьера. Слой слизи содержит различные типы муцинов, например кислые, нейтральные и сульфированные муцины. Считается, что повышенная гетерогенность слоя слизи повышает функциональные возможности барьера.

Настоящая композиция предпочтительно содержит по меньшей мере два различных олигосахарида, которые влияют на архитектуру слизистой оболочки и предпочтительно влияют на гетерогенность муцина в слое слизи как непосредственно, так и путем изменения кишечной флоры. Считается, что каждый различный выбранный олигосахарид имеет разное влияние на количество и качество слизи. Кроме того, два различных олигосахарида также способны стимулировать качество слизи посредством своей синергичной стимуляции выработки короткоцепочечных жирных кислот (SCFA), что отражается в степени сульфирования. Авторами настоящего изобретения было неожиданно выявлено, что смесь двух различных олигосахаридов согласно настоящему изобретению синергично стимулирует выработку ацетата. Авторами настоящего изобретения также было выявлено, что выработка слизи зависит от выработки ацетата.

Дополнительно было выявлено, что в настоящей композиции для лечения больных с ВИЧ можно полезно объединять гамма-линоленовую кислоту (ГЛК), представляющую собой предшественника AРК. Больные с ВИЧ часто страдают от воспалительных заболеваний кишечника, что делает нежелательным введение больших доз AРК в связи с тем, что AРК увеличивает воспалительную реакцию. Было выявлено, что АРК можно частично заменять на ГЛК без появления отрицательного влияния на эффективность смеси жиров. Таким образом, в дополнительном аспекте настоящее изобретение обеспечивает композицию, содержащую олигосахариды, ЭПК, ДГК, AРК и ГЛК, и их использование для лечения и/или профилактики ВИЧ или СПИДа.

Настоящую композицию предпочтительно дополнительно улучшают путем обеспечения как длинноцепочечных, так и короткоцепочечных олигосахаридов. Присутствие цепей различной длины приводит к стимуляции выработки слизи в различных частях подвздошной кишки и толстой кишки. Короткоцепочечные олигосахариды (обычно со степенью полимеризации (СП) 2, 3, 4 или 5) стимулируют выработку муцина в проксимальной части толстой кишки и/или дистальной части подвздошной кишки, тогда как считается, что олигосахариды с большей длиной цепи (предпочтительно со степенью полимеризации (СП) более чем от 5 до 60) стимулируют выработку муцина в частях толстой кишки, расположенных более дистально.

Можно достигать даже еще дополнительного улучшения путем обеспечения по меньшей мере двух различных олигосахаридов, как длинноцепочечных, так и короткоцепочечных олигосахаридов. Все эти предпочтительные варианты осуществления способствуют дополнительному повышению целостности барьера на всем протяжении подвздошной кишки и/или толстой кишки.

Кроме того, было неожиданно выявлено, что ЭПК, ДГК и АРК способны уменьшать неблагоприятные эффекты интерлейкина 4 (IL-4) на кишечную проницаемость. IL-4 является цитокином, который у некоторых пациентов секретируется в повышенных количествах Т-лимфоцитами слизистых оболочек и стимулирует кишечную проницаемость. Таким образом, настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения и/или профилактики заболеваний, таких как аллергия, особенно аллергический дерматит, при которых повышена концентрация IL-4 в кишечнике.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к пищевой композиции, содержащей:

a) ЭПК, ДГК и АРК, в которых содержание длинноцепочечной полиненасыщенной жирной кислоты с 20 и 22 атомами углерода не превышает 85 вес.% общего содержания жира; и

b) по меньшей мере два различных олигосахарида, в которой два различных олигосахарида имеют гомологию моносахаридных единиц ниже 90%.

Эту композицию можно предпочтительно использовать в способе активизации целостности кишечного барьера, в указанном способе, содержащем введение млекопитающему указанной композиции.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение обеспечивает использование полиненасыщенных жирных кислот для изготовления композиции для применения в способе лечения пациента, инфицированного вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), указанный способ, содержащий введение указанному пациенту, инфицированному вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), композиции, содержащей:

a. эйкозапентаеновую кислоту (ЭПК), докозагексаеновую кислоту (ДГК) и арахидоновую кислоту (АРК), в которых содержание длинноцепочечной полиненасыщенной жирной кислоты с 20 и 22 атомами углерода не превышает 85 вес.% общего содержания жира; и

b. по меньшей мере два различных олигосахарида (OL1 и OL2), в которых два различных олигосахарида имеют гомологию моносахаридных единиц ниже 90%.

Конкретным вариантом осуществления лечения пациента, инфицированного ВИЧ, является диетотерапия. Другие варианты осуществления настоящего изобретения представляют собой вышеуказанное применение композиции в способе обеспечения диеты пациента, инфицированного ВИЧ, в указанном способе, содержащем введение указанному пациенту, инфицированному ВИЧ, указанной композиции, и также вышеуказанное применение композиции в способе активизации целостности кишечного барьера у пациента, инфицированного ВИЧ, в указанном способе, содержащем введение указанной композиции указанному пациенту, инфицированному ВИЧ.

Полиненасыщенные жирные кислоты

Авторы настоящего изобретения неожиданно выявили, что эйкозапентаеновая кислота (ЭПК, n-3), докозагексаеновая кислота (ДГК, n-3) и арахидоновая кислота (АРК, n-6) эффективно уменьшают проницаемость кишечного плотного контакта. ГЛК (n-6) также эффективно уменьшает проницаемость барьера. Следовательно, настоящая композиция, являющаяся особенно подходящей для повышения целостности кишечного барьера, содержит ЭПК, ДГА и АРК, необязательно соединенные с ГЛК.

Авторы настоящего изобретения выявили, что выбранные LC-PUFA являются эффективными в снижении проницаемости плотного контакта (см. примеры по сравнению с Usami et al.). Содержание в настоящей композиции LC-PUFA с 20 и 22 атомами углерода предпочтительно не превышает 85 вес.% общего содержания жира, предпочтительно не превышает 35 вес.%, даже более предпочтительно не превышает 15 вес.% общего содержания жира. Предпочтительно настоящая композиция содержит LC-PUFA с 20 и 22 атомами углерода в количестве по меньшей мере 0,1 вес.%, предпочтительно по меньшей мере 0,25 вес.%, более предпочтительно по меньшей мере 0,5 вес.%, более предпочтительно по меньшей мере 0,75 вес.%, даже более предпочтительно по меньшей мере 5 вес.%, даже более предпочтительно по меньшей мере 15 вес.% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 25 вес.% общего содержания жира. По той же самой причине содержание ЭПК предпочтительно не превышает 55 вес.% общего содержания жира, предпочтительно не превышает 35 вес.%, более предпочтительно не превышает 25 вес.%, но предпочтительно составляет по меньшей мере 0,05 вес.%, более предпочтительно по меньшей мере 0,1 вес.% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 1% общего содержания жира. Содержание ДГК предпочтительно не превышает 15 вес.%, более предпочтительно не превышает 10 вес.%, но составляет по меньшей мере 0,1 вес.% общего содержания жира. Поскольку выявлено, что АРК является особенно эффективной в плане снижения проницаемости плотного контакта, настоящая композиция содержит относительно большие количества, предпочтительно по меньшей мере 0,1 вес.%, даже более предпочтительно по меньшей мере 0,25 вес.%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 0,5 вес.% общего содержания жира. Содержание АРК предпочтительно не превышает 15 вес.%, предпочтительно не превышает 5 вес.%, более предпочтительно не превышает 1 вес.% полного жира. В настоящей энтеральной композиции, содержащей АРК, предпочтительно добавляют ЭПК и ДГК для уравновешивания действия АРК, например для уменьшения потенциального противовоспалительного действия метаболитов АРК. Избыток метаболитов АРК может вызывать воспаление. Настоящая пищевая композиции предпочтительно также содержит гамма-линоленовую кислоту (ГЛК, C18). ГЛК действует в качестве предшественника АРК для замещения, по меньшей мере частичного, содержания АРК в композиции с целью дополнительного уменьшения противовоспалительного эффекта АРК. Следовательно, настоящая композиция предпочтительно содержит АРК, ГЛК, ЭПК и ДГК, в которой соотношение веса (АРК+ГЛК)/ДГК предпочтительно составляет выше 0,10, предпочтительно выше 0,25 и более предпочтительно выше 0,5. Является предпочтительным соотношение ниже 25 и наиболее предпочтительно ниже 3.

Настоящая композиция предпочтительно содержит от 5 и до 75 вес.% полиненасыщенных жирных кислот в пересчете на общее содержание жира, предпочтительно от 10 и до 50 вес.%.

LC-PUFA с 20 и 22 атомами углерода можно обеспечивать в виде свободных жирных кислот, в виде триглицеридов, в виде фосфолипидов или в виде смеси одного из более чем вышеуказанного. Настоящая композиция предпочтительно содержит по меньшей мере одну из АРК и ДГК в виде фосфолипидов.

Настоящая пищевая композиция предпочтительно также обеспечивает жирную кислоту омега-9 (n-9) (предпочтительно олеиновую кислоту, 18:1), обеспечивающую достаточное количество питательных веществ. Предпочтительно настоящая композиция обеспечивает по меньшей мере 1 вес.% жирной кислоты n-9, более предпочтительно по меньшей мере 5 вес.%, в пересчете на общий вес жирных кислот. Содержание жирных кислот n-9 предпочтительно составляет менее 80 вес.%.

Подходящее ежедневное количество может составлять по меньшей мере 0,1 граммов ЭПК и 0,05 граммов АРК или АРК + ГЛК, или от 0,1 до 5 граммов ЭПК и от 0,05 до 2,5 граммов АРК или АРК + ГЛК, или от 0,5 до 2,5 граммов ЭПК и от 0,25 до 1,25 граммов АРК или АРК + ГЛК или представлять собой количество от 0,75 до 1,5 граммов ЭПК и от 0,37 до 0,75 граммов АРК или АРК + ГЛК. Подходящие ежедневные количества ДГК следуют из вышеприведенного соотношения (АРК + ГЛК)/ДГК.

Олигосахариды

Подходящие олигосахариды согласно настоящему изобретению являются сахаридами, имеющими степень полимеризации (СП), составляющую по меньшей мере 2 моносахаридные единицы, которые не перевариваются или только частично перевариваются в кишечнике под действием кислот или пищеварительных ферментов, присутствующих в верхних отделах пищеварительного тракта человека (тонкая кишка и желудок), но которые поддаются ферментации кишечной флорой человека. Термин «моносахаридные единицы» относится к единицам, имеющим замкнутую циклическую структуру, предпочтительно структуру гексозы, например в виде фуранозы или пиранозы. Степень полимеризации олигосахарида обычно составляет менее 60 моносахаридных единиц, предпочтительно менее 40, наиболее предпочтительно менее 20 единиц.

Настоящая композиция содержит по меньшей мере два различных олигосахарида, в которой олигосахариды имеют гомологию моносахаридных единиц, составляющую около 90%, предпочтительно менее 50%, даже более предпочтительно менее 25%, даже более предпочтительно менее 5%. Термин "гомология", используемый в настоящем изобретении, обозначает суммарный процент одинаковых моносахаридных единиц в различных олигосахаридах. Например, олигосахарид 1 (OL1) имеет структуру фруктоза - фруктоза - глюкоза - галактоза и, таким образом, содержит 50% фруктозы, 25% галактозы и 25% глюкозы. Олигосахарид 2 (OL2) имеет структуру фруктоза - фруктоза - глюкоза и, таким образом, содержит 66% фруктозы, 33% глюкозы. Таким образом, различные олигосахариды имеют гомологию, составляющую 75% (50% фруктозы + 25% глюкозы).

В предпочтительном варианте осуществления настоящая композиция содержит галактоолигосахариды и, по меньшей мере, один компонент, выбираемый из группы, состоящей из фруктоолигосахаридов и инулина.

Каждый из присутствующих олигосахаридов предпочтительно содержит по меньшей мере 66%, более предпочтительно по меньшей мере 90% моносахаридных единиц, выбираемых из группы, состоящей из маннозы, арабинозы, фруктозы, фукозы, рамнозы, галактозы, -D-галактопиранозы, рибозы, глюкозы, ксилозы, уроновой кислоты и их производных, подсчитываемых по общему количеству содержащихся в них моносахаридных единиц.

Согласно дополнительному варианту осуществления по меньшей мере один из олигосахаридов настоящей композиции выбирают из группы, состоящей из фруктанов, фруктоолигосахаридов, неперевариваемых декстринов галактоолигосахаридов (включающих в себя трансгалактоолигосахариды), ксилоолигосахаридов, арабиноолигосахаридов, глюкоолигосахаридов, манноолигосахаридов, фукоолигосахаридов, кислых олигосахаридов (см. ниже, например уроновые кислые олигосахариды, такие как гидролизат пектина) и их смесей. Предпочтительно настоящая композиция содержит по меньшей мере один, предпочтительно по меньшей мере два олигосахарида, выбираемых из группы, состоящей из фруктоолигосахаридов или инулина, галактоолигосахаридов и гидролизата пектина. Для хорошего количества и качества слизи настоящая композиция предпочтительно содержит по меньшей мере один олигосахарид, который содержит по меньшей мере 66% галактозы или фруктозы в виде моносахаридных единиц. В предпочтительном варианте осуществления композиция содержит по меньшей мере один олигосахарид, который содержит по меньшей мере 66% галактозы в виде моносахаридной единицы и по крайней мере один олигосахарид, который содержит по меньшей мере 66% фруктозы в виде моносахаридной единицы. В особо предпочтительном варианте осуществления настоящая композиция включает галактоолигосахарид и олигосахарид, выбираемый из группы, состоящей из фруктоолигосахаридов и инулина. Фруктоолигосахариды стимулируют выработку сульфомуцина в дистальной части толстой кишки крыс с ассоциированной человеческой флорой (Kleessen et al., (2003) Brit J Nutr 89:597-606), и галактоолигосахариды стимулируют выработку кислого муцина (Meslin et al, Brit. J.Nutr (1993), 69: 903-912)).

Для дополнительного увеличения толщины слоя слизи в области всей толстой кишки СП по меньшей мере 10 вес.% олигосахаридов в настоящей композиции составляет от 2 до 5 (то есть 2, 3, 4 и/или 5) и по меньшей мере 5 вес.% имеет СП от 10 до 60. Предпочтительно по меньшей мере 50 вес.%, более предпочтительно по меньшей мере 75 вес.% олигосахаридов имеет СП от 2 до 9 (то есть 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, и/или 9), так как считается, что они действуют на всем протяжении подвздошной кишки и проксимальных и средних частей толстой кишки, и так как снижен процент веса олигосахаридов, необходимый для включения в композицию для достижения желательного эффекта.

Предпочтительно соотношения веса составляют:

a. (олигосахариды со СП от 2 до 5) : (олигосахариды со СП 6,7,8 и/или 9) > 1;

и

b. (олигосахариды со СП от 10 до 60) : (олигосахариды со СП 6,7,8 и/или 9) > 1

в обоих случаях выше 1.

Предпочтительно оба весовых соотношения составляют выше 2, даже более предпочтительно выше 5.

Для еще более дополнительного повышения толщины слоя и качества слизи в области всей толстой кишки каждый из по меньшей мере двух различных олигосахаридов предпочтительно обеспечивают с цепью различной длины, предпочтительно по меньшей мере 10 вес.% каждого олигосахарида, в пересчете на полный вес соответствующего олигосахарида, имеет СП от 2 до 5 (то есть 2, 3, 4 и/или 5) и по меньшей мере 5 вес.% имеет СП от 10 до 60. Предпочтительно по меньшей мере 50 вес.%, более предпочтительно по меньшей мере 75 вес.% олигосахарида, в пересчете на полный вес этих олигосахаридов, имеют СП от 2 до 10, так как считается, что они действуют на всем протяжении подвздошной кишки и проксимальных и средних частях толстой кишки.

Кислые олигосахариды

Для дополнительного повышения целостности барьера настоящая композиция предпочтительно включает в себя кислые олигосахариды со СП от 2 до 60. Термин «кислый олигосахарид» относится к олигосахаридам, содержащим по меньшей мере одну кислую группу, выбираемую из группы, состоящей из N-ацетилнейраминовой кислоты, N-гликолоилнейраминовой кислоты, свободной или эстерифицированной карбоновой кислоты, сернокислой группы и фосфорнокислой группы. Кислый олигосахарид предпочтительно содержит единицы уроновой кислоты (то есть полимер уроновой кислоты), более предпочтительно единицы галактуроновой кислоты. Кислый олигосахарид может являться гомогенным или гетерогенным углеводом. Подходящими примерами являются гидролизаты пектина и/или альгината. В кишечнике полимеры уроновой кислоты гидролизуются до мономеров уроновой кислоты, стимулирующих выработку кишечного ацетата, который в свою очередь стимулирует секрецию кишечной слизи (Barcelo et al., 2000 Gut; 46:218-224).

Предпочтительно кислый олигосахарид имеет нижеприведенную структуру I, в которой терминальная гексоза (левая) предпочтительно содержит двойную связь. Гексозные единицы, отличные от терминальной гексозной единицы (единиц), предпочтительно представляют собой единицы уроновой кислоты, даже более предпочтительно единицы галактуроновой кислоты. Карбоксильные группы на этих единицах могут быть свободными или (частично) эстерифицированными, и предпочтительно, по меньшей мере, на 10% метилированными (см. ниже).

Структура I: полимерный кислый олигосахарид

в которой:

R предпочтительно выбирают из группы, состоящей из водорода, гидрокси или кислой группы, предпочтительно гидрокси; и

по меньшей мере, один, выбранный из группы, состоящей из R₂, R₃, R₄ и R₅, представляет N-ацетилнейраминовую кислоту, N-гликолоилнейраминовую кислоту, свободную или этерифицированную карбоновую кислоту, сернокислую группу и фосфорнокислую группу, и остальные R₂, R₃, R₄ и R ₅ представляют собой гидрокси и/или водород. Предпочтительно его выбирают из группы, состоящей из R₂, R₃ , R₄ и R₅, представляющей N-ацетилнейраминовую кислоту, N-гликолоилнейраминовую кислоту, свободную или этерифицированную карбоновую кислоту, сернокислую группу и фосфорнокислую группу, и остальных, представляющих собой гидрокси и/или водород. Даже более предпочтительно его выбирают из группы, состоящей из R ₂, R₃, R₄ и R₅, представляющей свободную или этерифицированную карбоновую кислоту, и остальных R₂, R₃, R₄ и R₅, представляющих собой гидрокси и/или водород; и

n представляет собой целое число и относится к количеству гексозных единиц (см. также нижеописанный раздел - Степень полимеризации), которые могут представлять собой любую гексозную единицу. Подходящее значение n является целым числом от 1 до 5000. Предпочтительно гексозная единица (единицы) является единицей уроновой кислоты. Наиболее предпочтительно R₁, R₂ и R ₃ представляют собой гидрокси, R₄ представляет собой водород, R₅ представляет собой карбоновую кислоту, n составляет любое число от 1 до 250, предпочтительно от 1 до 10, и гексозная единица является галактуроновой кислотой.

Определение, количественное измерение и анализ предпочтительных кислых олигосахаридов согласно использованию в настоящем способе приводятся заявителями в ранее поданных патентных заявках, относящихся к кислым олигосахаридам, то есть заявке WO 0/160378.

Для стимуляции повышения толщины слоя слизи в области всей толстой кишки настоящая композиция предпочтительно содержит по меньшей мере 10 вес.% кислых олигосахаридов со СП от 2 до 5 (то есть 2, 3, 4 и/или 5) и по меньшей мере 5 вес.% кислых олигосахаридов со СП от 10 до 60, указанный вес.% приводится в пересчете на общий вес олигосахаридов.

Кислые олигосахариды, используемые в настоящем изобретении, предпочтительно изготовляют из пектина, пектата, альгината, хондроитина, гиалуроновых кислот, гепарина, гепарана, бактериальных углеводов, сиалогликанов, фукоидана, фукоолигосахаридов или каррагенана, более предпочтительно из пектина и/или альгината.

Содержание олигосахарида

Настоящая композиция, находящаяся в готовой для применения жидкой форме, предпочтительно содержит от 0,1 до 100 граммов на литр неперевариваемого олигосахарида, более предпочтительно от 0,5 до 50 граммов на литр, даже более предпочтительно от 1 до 25 граммов на литр. Слишком высокое содержание олигосахаридов может вызвать дискомфорт благодаря избыточному брожению, тогда как очень низкое содержание может приводить к недостаточному слою слизи.

Соотношение веса по меньшей мере двух различных олигосахаридов предпочтительно составляет от 1 до 10, более предпочтительно от 1 до 5. Эти весовые соотношения оптимально стимулируют выработку различных типов муцина в разных частях кишечника.

В настоящую композицию согласно изобретению предпочтительно включают олигосахарид в количестве, превышающем 0,1 вес.%, предпочтительно превышающем 0,2 вес.%, более предпочтительно превышающем 0,5 вес.%, и даже более предпочтительно превышающем 1 вес.% в пересчете на общий сухой вес композиции. Содержание олигосахарида в настоящей композиции предпочтительно составляет менее 20 вес.%, более предпочтительно менее 10 вес.%, даже более предпочтительно менее 5 вес.%.

Добавление нуклеотидов и/или нуклеозидов к настоящей композиции дополнительно улучшает функционирование кишечного слизистого барьера, в особенности благодаря тому, что они ингибируют и/или или уменьшают частоту возникновения бактериальной транслокации и снижают поражение кишечника. Таким образом, настоящая композиция предпочтительно также содержит от 1 до 500 мг нуклеозидов и/или нуклеотидов на 100 граммов сухой рецептуры, даже более предпочтительно от 5 до 100 мг.

Применение

Настоящую композицию можно предпочтительно использовать в способе повышения целостности барьера у млекопитающих, особенно у людей. Настоящую композицию можно также предпочтительно использовать в способе лечения или профилактики болезней, связанных со снижением целостности барьера, в указанном способе, содержащем введение млекопитающему настоящей композиции. Настоящую композицию предпочтительно вводят перорально.

Для больных и детей настоящую композицию предпочтительно объединяют с полноценной диетой, включающей в себя белки, углеводы и жиры. Настоящую композицию предпочтительно вводить детям в возрасте от 0 до 2 лет. Композицию можно вводить пациентам, страдающим от сниженной целостности барьера, и здоровым пациентам. Настоящую композицию предпочтительно использовать в способе для обеспечения потребностей в питательных веществах у недоношенных детей (у детей, рожденных в срок до 37 недель беременности).

Настоящую композицию можно также предпочтительно использовать в способе лечения и/или профилактики поражения кишечника путем введения настоящей композиции пациенту до или после лечения, которое может вызвать поражение кишечника. Таким лечением может являться, например, хирургическое или медикаментозное лечение кишечника (например, антибиотики, анальгезирующие средства, нестероидные противовоспалительные средства (НПВС), химиотерапевтические средства и т.д.).

Настоящую композицию можно также предпочтительно использовать для лечения или профилактики заболеваний, при которых повреждение кишечного барьера лежит в основе развития течения болезни, например, в способе лечения или профилактики хронических воспалительных болезней, особенно воспалительной болезни кишечника (ВБК), синдрома раздраженной кишки (СРК), глютеновой энтеропатии, панкреатита, гепатита, артрита или диабета. Кроме того, настоящее изобретение можно использовать в способе обеспечения диеты у пациентов, которые перенесли или подвергаются хирургическому лечению брюшной полости, и у пациентов, испытывающих послеоперационную дисфункцию кишечника, и/или у пациентов с неполноценным питанием.

В дополнительном варианте осуществления настоящего изобретения настоящую композицию предпочтительно вводят пациентам с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД) и/или пациентам, инфицированным вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), например в способе лечения СПИДа и/или ВИЧ-инфекции. Указанный способ содержит пероральное введение настоящей композиции, предпочтительно объединенной с питательными веществами, выбираемыми из группы, состоящей из углеводов, белков и жиров. Композиции согласно настоящему изобретению являются особенно полезными для пациентов с количеством CD4⁺ Т-лимфоцитов, уровень которых является ниже критического, около 700 клеток/мкл крови, обычно когда высокоактивная антиретровирусная терапия (ВААРТ) еще не является необходимой, но когда пациенты уже подвергаются риску развития или даже имеют одну или более проблем, которые могут быть связаны с целостностью кишечного барьера, в особенности с дисфункцией целостности кишечного барьера. Таким образом, в дополнительном аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ для прекращения или замедления сокращения количества CD4⁺ Т-лимфоцитов или повышения количества CD4⁺ Т-лимфоцитов у больных с ВИЧ и/или СПИДом, указанный способ, содержащий введение настоящей композиции. В одном варианте осуществления способ содержит введение настоящей композиции пациенту, и указанный пациент является субъектом человеческого происхождения, имеющим CD4⁺ Т-лимфоциты в количестве от 200 до 700 клеток/мкл крови. В еще одном варианте осуществления способ содержит введение настоящей композиции пациенту, и указанный пациент не подвергается высокоактивной антиретровирусной терапии. В конкретном варианте осуществления пациент имеет CD4⁺ Т-лимфоциты в количестве от 200 до 700 клеток/мкл крови и не подвергается высокоактивной антиретровирусной терапии.

Кроме того, настоящее изобретение также можно использовать для лечения или профилактики осложнений, причиной которых является снижение целостности барьера, в особенности в способе лечения и/или профилактики диареи, особенно диареи у детей. Вследствие снижения частоты встречаемости диареи у детей настоящую композицию можно также предпочтительно использовать для уменьшения опрелости.

Введение настоящей композиции снижает проникновение пищевых и микробных антигенов, в особенности аллергенов продуктов питания, из просвета кишечника в кровеносное русло слизистой оболочки или в системную циркуляцию и, следовательно, может быть предпочтительно использовано в способе лечения или профилактики аллергии и/или аллергической реакции, в особенности в способе лечения или профилактики пищевой аллергии, например аллергической реакции, наступающей в результате приема пищевых продуктов.

Авторами настоящего изобретения также было выявлено, что ЭПК, ДГК и/или АРК способны снижать влияние IL-4 на кишечную проницаемость. Таким образом, один аспект настоящего изобретения обеспечивает способ лечения и/или профилактики заболеваний, в которых повышена концентрация IL-4 в кишечнике (например аллергические заболевания), указанный способ, содержащий введение LC-PUFA, предпочтительно выбираемых из группы, состоящей из ЭПК, ДГК и АРК, предпочтительно объединенных с выбранными олигосахаридами настоящего изобретения. Таким образом, настоящую композицию можно предпочтительно использовать в способе лечения атопического дерматита.

Настоящая композиция предпочтительно обеспечивается в виде пакетированного порошка или в виде пакетированной готовой к приему рецептуры. Размер упаковки готовой к приему рецептуры в целях предотвращения порчи продукта предпочтительно не превышает одной порции, например, предпочтительно не превышает 500 мл; и размер упаковки настоящей композиции в виде порошка предпочтительно не превышает 250 порций. Подходящие размеры упаковки для порошка составляют 2000 грамм или меньше, предпочтительно 1000 грамм или меньше.

В объем настоящего изобретения включены пакетированные продукты, снабженные этикетками, которые в прямой форме или косвенным образом побуждают потребителя к использованию указанного продукта согласно одной или более вышеописанных или нижеописанных целей. Такие этикетки могут, например, ссылаться на настоящий способ для предотвращения аллергической реакции на аллергены пищевых продуктов путем включения в них таких формулировок, как "сниженная восприимчивость к пищевому продукту", "улучшение переносимости кишечником", "улучшение переносимости пищевого продукта" или подобных им формулировок. Сходным образом можно ссылаться на настоящий способ лечения и/или профилактики аллергии путем включения в ссылки терминологического эквивалента "повышенная сопротивляемость" или "сниженная восприимчивость".

Рецептуры

Было выявлено, что настоящую композицию можно предпочтительно применять в пищевых продуктах, таких как детское питание и лечебное питание. Такие пищевые продукты предпочтительно содержат жиры, белки и углеводы и предпочтительно применяются в жидкой форме. Термин "жидкий пищевой продукт", используемый в настоящем изобретении, включает в себя сухие пищевые продукты (например, порошки), которые сопровождаются инструкциями по смешиванию указанной сухой пищевой смеси с подходящей жидкостью (например, с водой).

Таким образом, настоящее изобретение также относится к пищевой композиции, которая предпочтительно содержит от 5 до 50 эн.% жиров, от 5 до 50 эн.% белков, от 15 до 90 эн.% углеводов и комбинацию олигосахаридов и LC-PUFA настоящего изобретения. Предпочтительно настоящая пищевая композиция предпочтительно содержит от 10 до 30 эн.% жиров, от 7,5 до 40 эн.% белков, от 25 до 75 эн.% углеводов (эн.% является сокращенным обозначением энергетического процента и представляет собой относительное количество, вносимое каждым компонентом в общее значение калорийности рецептуры). Предпочтительно используют комбинацию растительных жиров и по меньшей мере одного масла, выбираемого из группы, состоящей из рыбьего жира и омега-3 растительного происхождения, из морских водорослей или микробного масла.

Используемые в пищевой рецептуре белки предпочтительно выбирают из группы животных белков нечеловеческого происхождения (из таких как молочные белки, мясные белки и яичные белки), из растительных белков (таких как соевый белок, белок пшеницы, белок риса и белок гороха), свободных аминокислот и их смеси. В особенности предпочтительными являются источник азота, получаемый из коровьего молока, в особенности белки коровьего молока, такие как казеин и белки сыворотки.

Нарушения стула (например, твердый стул, недостаточный объем стула, диарея) являются основной проблемой у многих детей и больных субъектов, получающих жидкое питание. Было выявлено, что можно уменьшить проблемы со стулом путем применения в жидком питании олигосахаридов настоящего изобретения, имеющих осмоляльность от 50 до 500 мосм/кг, более предпочтительно от 100 до 400 мосм/кг.

Ввиду вышеизложенного является также важным, что жидкое питание не обладает избыточной калорийностью, вместе с тем, однако, обеспечивает достаточную калорийность для питания субъекта. Таким образом, жидкое питание предпочтительно имеет калорийность от 0,1 до 2,5 килокалорий/мл, даже более предпочтительно калорийность от 0,5 до 1,5 ккал/мл, наиболее предпочтительно от 0,6 до 0,8 ккал/мл.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Влияние LC-PUFA на целостность барьера

Монослои (MC) эпителиальных клеток кишечника линий T84 (Американская коллекция типовых культур (ATTC), Manassas, USA) культивировали на трансвелл-фильтрах (Corning, Costar BV, The Netherlands), что позволяет отбор как слизистых, так и серозных образцов и стимуляцию эпителиальных клеток кишечника человека. Через две недели после конфлуэнтности монослои инкубировали в люминальном компартменте с полиненасыщенными жирными кислотами АРК (арахидоновая кислота; 5,8,11,14-эйкозатетраеновая кислота), ДГК (цис-4,7,10,13,16,19 докозагексаеновая кислота), ЭПК (эйкозапентаеновая кислота) или с контрольной пальмитиновой (C 16:0) кислотой (Палм) (Sigma, St. Louis, USA). Последнюю методику выбирали для имитации in vivo путей введения питательных соединений. Клетки при различных концентрациях (10 мкM и 100 мкM) инкубировали с АРК, ДГК, ЭПК, ГЛК или пальмитиновой кислотой в течение 0, 24, 48 и 72 часов. Проводили эксперименты по оценке исходной целостности барьера. Барьерную функцию эпителия определяли путем измерения трансэпителиальной резистентности (ТЭР, Ом.см²) с помощью эпителиального вольт-омметра (EVOM; World Precision Instruments, Germany) и проницаемости для ФИТЦ (флуоресцеинизотиоцианат) декстрана размером в 4 кДа (параклеточный маркер проницаемости, Sigma, USA). Резистентность (эпителиальную проницаемость для 4 кДа ФИТЦ-декстрана определяли следующим образом. Перед переносом декстрана среду подкрепляли культуральной средой без фенолового красного в течение одного часа с последующим добавлением в люминальный компартмент 5 мкл (исходный раствор 100 мг/мл) 4 кДа ФИТЦ-декстрана. После 30 минут инкубирования из сывороточного компартмента собирали 100 мкл образца и измеряли флуоресцентный сигнал при длине волны возбуждения 485 нм и эмиссии 520 нм (FLUOstar Galaxy®, BMG Labtechnologies, USA). Переносы ФИТЦ-декстрана рассчитывали по формуле пмоль ФИТЦ-декстран/см ²/час. Статистические анализы проводили с использованием ANOVA (SPSS version 10).

Результаты влияния жирных кислот (100 мкM) на спонтанную целостность барьера после 72 часов инкубирования приведены в таблице 1. В таблице 1 показано, что LC-PUFA АРК, ЭПК, ГЛК и ДГК уменьшают молекулярный перенос и повышают эпителиальную резистентность. С другой стороны, контрольные эксперименты показывают, что пальмитиновая кислота имеет обратные эффекты, то есть подвергает риску целостность барьера. Эти результаты являются показателем для предпочтительного использования в композиции согласно настоящему изобретению ЭПК, ДГК, ГЛК и АРК, и в особенности АРК и для использования в способе согласно настоящему изобретению, например, в способе для повышения целостности барьера. Этот результат дополнительно подтверждает синергичные эффекты настоящей комбинации жирных кислот и неперевариваемых олигосахаридов.

Фиг. 1 показывает зависимые от времени и дозы (10 мкM и 100 мкM) эффекты различных жирных кислот (пальмитиновой кислоты, ДГК, ГЛК и AРК) на исходную целостность барьера (ТЭР). Фиг. 1 показывает, что LC-PUFA АРК, ДГК и ГЛК улучшают целостность эпителиального барьера, что отражается в повышенной резистентности (ТЭР). Эти результаты являются показателем для предпочтительного использования в композиции согласно настоящему изобретению ЭПК, ДГК, ГЛК и АРК, в особенности АРК, и для использования в способе согласно настоящему изобретению, то есть в способе для повышения целостности барьера. Эти результаты дополнительно подтверждают синергичные эффекты настоящей комбинации жирных кислот и неперевариваемых олигосахаридов.

Таблица 1
Компонент (LC-PUFA)	Перенос	Резистентность (TER)
Контроль	79	1090
Пальмитиновая кислота	161	831
ДГК	72	1574
АРК	28	1816
ЭПК	65	1493

Пример 2. Эффект LC-PUFA на IL-4 опосредованное повреждение барьера

Монослои (MC) эпителиальных клеток кишечника линий T84 (ATTC, USA) культивировали на трансвелл-фильтрах (Corning, Costar BV, The Netherlands), что позволяет отбор как слизистых, так и серозных образцов и стимуляцию эпителиальных клеток кишечника человека. Через две недели после конфлуэнтности монослои инкубировали в присутствии IL-4 (2 нг/мл, серозный компартмент) с полиненасыщенными жирными кислотами АРК, ДГК, ГЛК, ЭПК или с контрольной пальмитиновой кислотой (10 мкМ или 100 мкМ, слизистый компартмент, Sigma, St. Louis, USA). Клетки предварительно инкубировали с ГЛК, АРК, ДГК, ЭПК или пальмитиновой кислотой в течение 48 часов перед инкубированием с IL-4. Совместное инкубирование PUFA и пальмитиновой кислоты с IL-4 продолжалось следующие 48 часов, тогда как культуральную среду и добавки заменяли через каждые 24 часа. Барьерную функцию эпителия определяли путем измерения трансэпителиальной резистентности (ТЭР) и проницаемости, как описано в примере 1. Статистические оценки проводили, как описано в примере 1.

Результаты влияния ГЛК, АРК, ДГК, ЭПК или пальмитиновой кислоты на IL-4-опосредованное повреждение барьера приведены в таблице 2. В таблице 2 показано, что LC-PUFA ГЛК, АРК, ДГК и ЭПК ингибируют повышенный перенос, вызванный IL-4. С другой стороны пальмитиновая кислота имеет нежелательный эффект и уменьшает повреждение барьера по сравнению с контролем. Эти результаты являются показателем для предпочтительного использования ГЛК, АРК, ДГК и ЭПК в рецептурах лечебного и детского питания и для профилактики или снижения IL-4-опосредованного повреждения барьера, что, например, происходит при пищевой аллергии или аллергии на коровье молоко. Этот результат дополнительно подтверждает синергичные эффекты настоящей комбинации жирных кислот и неусвояемых олигосахаридов.

Фиг. 2 показывает зависимые от времени и дозы (10 мкM и 100 мкM) защитные эффекты различных жирных кислот (ЖК) (пальмитиновой кислоты, ДГК, ГЛК и AРК) на IL-4-опосредованное повреждение барьера (перенос). Фиг. 2 показывает, что АРК, ДГК и ГЛК предохраняют от IL-4-опосредованного повреждения барьера, что отражается повышением переноса 4 кДа декстрана. Эти результаты являются показателем для предпочтительного использования ГЛК, АРК, ДГК и ЭПК в рецептурах лечебного и детского питания и для профилактики или снижения IL-4-опосредованного повреждения барьера, что, например, происходит при пищевой аллергии или аллергии на коровье молоко. Эти результаты дополнительно подтверждают синергичные эффекты настоящей комбинации жирных кислот и неусвояемых олигосахаридов.

Таблица 2
Компонент (PUFA)	Проницаемость (перенос IL-4)	Резистентность (IL-4 TЭР)
Контроль	573	281
ДГК	360	331
АРК	273	337
ЭПК	236	375
ДГК	304	328
= снижение проницаемости с помощью PUFA; = повышение резистентности с помощью PUFA

Пример 3. Эффект олигосахаридов на выработку ацетата

Микроорганизмы получали из свежих фекалий детей, находящихся на искусственном вскармливании. Свежий материал фекалий детей в возрасте от 1 до 4 месяцев объединяли и помещали в консервирующую среду на 2 часа. В качестве субстрата использовали как пребиотики (трансгалактоолигосахариды ТОС; смесь ТОС/инулина (НР) в весовом соотношении 9/1 (в/в); инулин; смесь олигофруктозы (ОФ)/инулина в весовом соотношении 1/1 (в/в), так и не использовали субстрат (чистый). Трансгалактоолигосахариды (TOС) получали от фирмы Vivinal GOS, Borculo Domo Ingredients, Zwolle, The Netherlands, они содержали неперевариваемые олигосахариды: 33 вес.% дисахаридов, 39 вес.% трисахаридов, 18 вес.% тетрасахаридов, 7 вес.% пентасахаридов и 3 вес.% гекса-, гепта и октасахаридов. Инулин (НР) получали от фирмы Orafti active food ingredients, Tienen, Belgium, то есть Raftiline HP®, со средним значением СП 23.

Среда: среда McBain и MacFarlane: буферная пептонная вода 3,0 г/л, дрожжевой экстракт 2,5 г/л, муцин (щеточная каемка) 0,8 г/л, триптон 3,0 г/л, L-цистеин-HCl 0,4 г/л, соли желчных кислот 0,05 г/л, K₂HPO₄ .3H₂O 2,6 г/л, NaHCO₃ 0,2 г/л, NaCl 4,5 г/л, MgSO₄.7H₂O 0,5 г/л, CaCl₂ 0,228 г/л, FeSO₄.7H₂O 0,005 г/л. Флаконы Скотта объемом 500 мл наполняли средой и стерилизовали 15 минут при 121°C.

Буферная среда: K₂ HPO₄.3H₂О 2,6 г/л, NaHCО₃ 0,2 г/л, NaCl 4,5 г/л, MgSO₄.7H₂O, 0,5 г/л, CaCl₂ 0,228 г/л, FeSO₄.7H₂O 0,005 г/л. Уровень pH регулировали до значения 6,3±0,1 с помощью K₂HPO₄ или NaHCO₃. Флаконы Скотта объемом 500 мл наполняли средой и стерилизовали 15 минут при 121°C.

Консервирующая среда: Буферный пептон 20,0 г/л, L-цистеин - HCl 0,5 г/л, тиогликолят натрия 0,5 г/л, 1 таблетка резаурина на литр, уровень pH регулировали до значения 6,7±0,1 с помощью 1 М NaOH или HCl. Кипятили в микроволновой печи. Сывороточные флаконы наполняли 25 мл среды и стерилизовали в течение 15 минут при 121°C.

Свежие образцы фекалий смешивали с консервирующей средой и сохраняли в течение нескольких часов при 4°C. Консервированный раствор фекалий центрифугировали при 13,000 оборотов в минуту в течение 15 минут, удаляли супернатант и смешивали фекалии со средой McBain и Mac Farlane в весовом соотношении 1:5. Из этой суспензии 3 мл фекалий соединяли во флаконе с 85 мг глюкозы или пребиотиком или без добавления (чистые) и тщательно смешивали. Извлекали образец t=0 (0,5 мл). 2,5 мл получившейся суспензии помещали в диализную трубку во флаконе на 60 мл, заполненном 60 мл буферной среды. Флакон хорошо закупоривали и инкубировали при 37°C. Образцы забирали из диализной трубки (0,2 мл) или диализного буфера (1,0 мл) с помощью шприца для подкожных инъекций через 3, 24, и 48 часов и немедленно помещали на лед для прекращения ферментации. Эксперимент проводили, используя следующие образцы:

1) 85 мг ТОС;

2) 85 мг инулина;

3) 85 мг ТОС/инулина в соотношении 9/1 (в/в) и

4) 85мг ОФ/инулина в отношении 1/1 (в/в).

Проводили количественное определение SCFA (ацетат, пропионат, бутират), используя газовый хроматограф Varian 3800 (GC) (Varian Inc., Walnut Creek, USA), снабженный датчиком ионизации пламени. В колонку вводили 0,5 мкл образца при 80°C (Stabilwax, 15×0,53 мм, толщина пленки 1,00 мкм, Restek Co, USA) с применением гелия в качестве газа-носителя (3,0 фунтов на кв. дюйм). После введения образца нагревали термостат до 160°C при скорости 16°C/в минуту с последующим нагреванием до 220°C при скорости 20°C/в минуту и в итоге с поддерживанием температуры 220°C в течение 1,5 минут. Температура инъектора и датчика составляла 200°C. В качестве внутреннего стандарта использовали 2-этилмасляную кислоту. Фиг. 3 отображает абсолютный (фиг. 3A) и относительный (фиг. 3B) профили SCFA, получаемые в результате ферментации различных олигосахаридов. Фиг. 3A показывает, что смесь двух различных олигосахаридов (ТОС/инулин), в которой два различных олигосахарида имеют гомологию моносахаридных единиц ниже 90 и различную длину цепей, приводит к значительному и синергичному повышению количества SCFA (в особенности ацетата) на грамм волокна в отличие от единственных компонентов. Фиг. 3B показывает, что добавление комбинации ТОС/инулин содействует более высокому соотношению полезного ацетата (B). Выработка ацетата in vivo трансформируется в повышенную выработку слизи бокаловидными клетками и показателями толщины слоя кишечной слизи (см. пример 4). Эти результаты являются показателем для предпочтительного применения настоящей композиции.

Пример 4. Эффекты SCFA на выработку слизи

Монослои эпителиальных клеток кишечника T84 (ATCC, USА) культивировали в 24- или 96-луночных планшетах для тканевых культур (Corning B.V.). Клетки T84 инкубировали с ацетатом, пропионатом и бутиратом короткоцепочечных жирных кислот (SCFA, Merck, USA) в течение 24 часов в концентрации в диапазоне от 0,025 до 4,0 мМ. Собирали супернатанты и/или клетки и определяли экспрессию MUC-2 (муцин). Использовали методику дот-блоттинга для определения экспрессии MUC-2 в клеточных культурах, поскольку муцины являются чрезвычайно крупными гликопротеидами (больше чем 500 кДа), что затрудняет их обработку техникой вестерн-блоттинга. Подтверждение осуществляли способом использования предварительно иммунизированной сыворотки (отрицательно окрашенные T84), CCD-18Co (ATCC, USA), клеток отрицательного контроля и бычьего сывороточного альбумина (БСА). Образцы клеток собирали в буфер Laemmli (буфер белковой изоляции) и проводили определение белков, применяя микробелковый анализ (Biorad, USA) согласно протоколу фирм-изготовителей. Образцы (0,3-0,7-1,0 мкг/2 мкл) точечно отмечали на нитроцеллюлозных мембранах (Schleicher & Schuell, Germany). Мембраны блокировали в Трис-забуференном растворе - твин TBST/5% Protivar (Nutricia, The Netherlands) с последующим инкубированием в течение 1 часа с анти-MUC-2 антителом (любезно предоставленным Dr. Einerhand, Erasmus University, Rotterdam, The Netherlands). После промывания пятна инкубировали с козьей антикроличьей пероксидазой хрена (ПХ) (Santacruz Biotechnology, USA) и для обнаружения субстрата использовали хемолюминесценцию ECL (Roche Diagnostics, The Netherlands). Денситометрию проводили с использованием Lumi-Imager (Boehringer Mannheim B.V., The Netherlands) и выражали сигнал в единицах света (BLU). Также выражали показатель BLU относительно контрольных инкубирований (% BLU). Для сравнения эффекта стимуляции SCFA на экспрессию MUC-2 вычитали исходные уровни экспрессии MUC-2.

Фиг. 4 показывает дифференциальные эффекты SCFA (ацетат, пропионат, бутират) на экспрессию MUC-2 в совместных культурах эпителиальных клеток кишечника (MC T84) и эпителиальных-мезенхимальных клеток (CC T84). Фиг. 4 также показывает, что по сравнению с пропионатом и бутиратом ацетат обладает большим потенциалом в стимуляции экспрессии MUC-2 (выработка слизи). Следовательно, настоящая комбинация олигосахаридов (которая показала повышенную выработку ацетата (смотри пример 3)) является особенно полезной для стимуляции выработки слизи, и ее можно предпочтительно использовать в способе повышения целостности барьера.

Пример 5. Рецептура I молока для детей

Компоненты (на литр), энергетическая ценность 672 килокалории; белок 15 г; сыворотка: соотношение казеина 60:40; жир 36 г; углеводы 72 г; витамин А 750 РЭ (ретиноловый эквивалент); смесь каротинов натурального происхождения 400 МЕ; витамин D 10,6 мкг; витамин F 7,4 мг; витамин K 67,0 мкг; витамин B1 (тиамин) 1000 мкг; витамин B2 (рибофлавин) 1500 мкг; витамин B6 (пиридоксин) 600 мкг; витамин B12 (цианкобаломин) 2,0 мкг; никотиновая кислота 9,0 мкг; фолиевая кислота 80 мкг; пантотеновая кислота 3000 мкг; биотин 90 мкг; витамин C (аскорбиновая кислота) 90 мг; холин 100 мг; инозитол 33 мг; кальций 460 мг; фосфор 333 мг; магний 64 мг; железо 8,0 мг; цинк 6,0 мг; марганец 50 мкг; медь 560 мкг; иод 100 мкг; натрий 160 мг; калий 650 мг; хлорид 433 мг и селен 14 мкг; обеспечивается содержание жира, включающего в себя 3 грамма рыбьего жира и 3 грамма масла 40% арахидоновой кислоты (DSM Food Specialties, Delft, Netherlands); дополнительно содержатся 4 грамма трансгалактоолигосахаридов Elix'or ^TМ (Borculo Domo Ingredients, Netherlands) и 4 грамма Raftiline ^TМ (Orafti Active Food Ingredients, Belgium).

Пример 6. Композиция питательного батончика для улучшения симптомов, связанных с ВИЧ/СПИДом

Сырой продукт	г в день	белки	углеводы	жиры	г/100 г
Молочный белок	20,00	15,00	2,10	0,80	21,04
Яичный белок	21,09	16,87	0,00	0,00	22,19
Масло бораго	4,00	0,00	0,00	4,00	4,21
Масла ЭПГ-ДГК	6,00	0,00	0,00	6,00	6,31
Галактоолигосахариды	15,38	0,00	4,78	0,00	16,18
Инулин	0,79	0,00	0,00	0,00	0,83
Гидролизат пектина	8,54	0,11	0,09	0,00	8,98
Совокупная фруктоза	15,40	0,00	11,92	0,00	16,20
Глицерин	3,85	0,00	3,83	0,00	4,05
ВСЕГО	95,05	31,98	22,72	10,80	100,00

	В день		На 100 г
	килокалорий	Энергетическая ценность %	килокалорий
энергетические белки	128	40,5	135
энергетические углеводы	91	28,8	96
энергетические жиры	97	30,8	102