способ эрадикации инфекции helicobacter pylori в желудке

Формула изобретения

1. Способ эрадикации инфекции Helicobacter pylori в желудке, включающий воздействие бактерицидного средства, в качестве которого используют поверхностно-активное вещество бензилдиметил[3-(миристоиламино)пропил] аммоний хлорид - C₂₆H₄₇ClN₂O.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что бактерицидное средство C₂₆H₄₇ClN₂O используют в виде раствора в воде и/или в пищевых минеральных или органических разбавителях при концентрации C₂₆H₄₇ClN ₂O в растворах от 0,0025 до 0,01%.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть применено для эрадикации инфекции Helicobacter pylori в желудке.

Известен способ эрадикации Helicobacter pylori в желудке, основанный на применении таблетированных форм лекарственных средств, преимущественно антибиотиков, в разнообразных сочетаниях, например, с применением двух антибиотиков в виде таблеток в стандартной дозировке (кларитромицин+амоксициллин или кларитромицин+метронидазол) и антикислотосекреторного препарата. Вместо вышеуказанной тройной схемы используется так называемая «квадротерапия», в состав которой помимо средств, ингибирующих секрецию HCl, включают те же (кларитромицин, метронидазол) или ранее неиспользованные (тетрациклин) антибиотики и висмутсодержащие препараты (Ивашкин В.Т., Исаков В.А. Российский ж-л гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2001, № 3, с.1-11).

Большинство используемых в лечебной практике схем эрадикации должны не менее чем в 80% случаев обеспечить уничтожение инфекции Helicobacter pylori при жестком контроле за режимом приема лекарств. Однако в поликлинических условиях, как правило, процент эрадикации не превышает 60-65%.

В настоящее время в России более 15-20% штаммов Helicobacter pylori резистентны к кларитромицину, а устойчивость к метронидазолу достигла почти 60%. Единственным антибиотиком, к которому у H.pylori не возникает резистентности, является амоксициллин (Захарова Н.В. Consilium medicum. Гастроэнтерология, Приложение выпуск № 2, 2004, с.7-10).

Наиболее близким аналогом к заявляемому авторами, является способ эрадикации Helicobacter pylori, заключающийся в том, что лекарственные средства в порошкообразной форме смешивают с апельсиновым соком в соотношении 1,0 г на 90-100 мл и используют этот раствор 2 раза в день за полчаса до приема пищи (Патент РФ № 2253449, A61K 31/43, 2005) в течение 7 или 4 дней. Порошкообразная форма лекарств способствует более быстрому их растворению в апельсиновом соке. Апельсиновый сок, содержащий лимонную кислоту, замедляет эвакуацию жидкости из желудка, тем самым увеличивая время взаимодействия лекарств с поверхностью слизистой оболочки. Помимо этого, органические компоненты сока, обладая выраженной сорбционной способностью, прочно связываются с люминальной поверхностью слоя слизи, нейтрализуют ее заряд и, устраняя гидрофобные свойства, облегчают диффузию раствора лекарств вглубь слоя, то есть в зону расположения инфекта.

Клиническая апробация предложенного в Патенте РФ № 2253449 способа эрадикации (жидкостной технологии) была проведена при 7-дневном курсе лечения на 100 больных хроническим гастритом и язвенной болезнью, а также на 50 аналогичных больных при 4-дневном курсе. Была использована вышеупомянутая четырехкомпонентная схема лечения: фамотидин, Де-нол, нифуратель или фуразолидон, амоксициллин (Флемоксин солютаб). При обоих режимах (4 или 7 дней) была достигнута 100% эрадикация инфекции Helicobacter pylori, тогда как при использовании подобной схемы в таблетках эрадикация не превышает 80-90%.

Целью изобретения является создание нового высокоэффективного и экономичного способа лечения гастроэнтерологических заболеваний, инициируемых бактериями Helicobacter pylori.

Технический результат в предлагаемом способе достигается тем, что для эрадикации бактерий Helicobacter pylori в желудке вместо трех-четырех лекарственных средств используют лишь одно бактерицидное поверхностно-активное вещество - бензилдиметил[3-(миристоиламино)пропил] аммоний хлорид - С₂₆Н₄₇СlN₂O, производство которого освоено отечественными фармацевтическими предприятиями. Бактерицидное средство С₂₆Н₄₇ СlN₂O используют в виде раствора в воде и/или в пищевых минеральных или органических разбавителях при концентрации С ₂₆Н₄₇СlN₂O в растворах от 0,0025 до 0,01%.

Бензилдиметил[3-(миристоиламино)пропил] аммоний хлорид - и его 0,01% водный раствор разрешены к медицинскому применению и зарегистрированы Минздравом РФ под регистрационными номерами 91/146/1 и 91/146/2. Освоено также производство и зарегистрирован в Роспотребнадзоре РФ ( № 77.99.1.2.У 7641.9.08) 15% раствор С₂₆Н ₄₇СlN₂O -Антисепт-15 (ТУ 9392-03-95548551-08).

Воздействие препарата на бактерии Helicobacter pylori исследовали на трех штаммах этих бактерий: лабораторном 26695 (для которого известна нуклеотидная последовательность генома) и двух клинических изолятах A37 и А45, выделенных от больных с хроническим гастритом. Клинические штаммы к началу исследований выдержали не более 15 пассажей на твердой питательной среде. Helicobacter pylori культивировали на твердой питательной среде: Columbian agar (Biomerieux, France), 10% FBS (HyClone, USA), 5% yeast extract, при температуре 37°C в микроаэрофильных условиях с пассированием через 48-72 ч. В жидкую питательную среду культуру Helicobacter pylori переводили, суспендировав в физиологическом растворе, клетки, выросшие на чашках, и засевая полученную суспензию бактерий в среду BHI (Biometrieux, France), содержащую 10% FBS и 5% дрожжевого экстракта. В работе использовали культуру Helicobacter pylori, выдержавшую не менее двух пассажей в жидкой среде. Суточную культуру Helicobacter pylori переводили после центрифугирования в физиологический раствор (0,9% NaCl), содержащий различные количества Бензилдиметил[3-(миристоиламино)пропил] аммоний хлорида, и инкубировали в течение при 37°C в атмосфере 5% CO₃ в течение 48 часов. Количество выживших бактерий оценивали путем посева на плотную питательную среду серийных разведений суспензии. В качестве контроля служила суспензия Helicobacter pylori в физиологическом растворе, не содержащем бензилдиметил[3-(миристоиламино)пропил] аммоний хлорид.

Подсчет количества выросших колоний проводили на четвертые сутки. Эксперименты были выполнены в трехкратной повторности. Результаты представлены в Таблице 1.

Таблица 1
	Рост Helicobacter pylori после инкубации в растворе бензилдиметил[3-(миристоиламино)пропил] аммоний хлорида
Концентрация бензилдиметил[3-(миристоиламино)пропил] аммоний хлорида в растворителе	Штамм 26695	Штамм A37	Штамм А45
0,0001%	+	+	+
0,0002%	-	-	-
0,0005%	-	-	-
0,001%	-	-	-
0,002%	-	-	-
0,005%	-	-	-
0,01%	-	-	-
Примечание:	«-» - отсутствие роста бактерий
«+» - рост бактерий отмечен

Для получения раствора бензилдиметил[3-(миристоиламино)пропил] аммоний хлорида использовали дистиллированную воду, физиологический раствор (0,9% NaCl), столовую минеральную воду, натуральные фруктовые и овощные соки.

Было выявлено, что на результаты инактивации бактерий не оказывало влияния, в каком разбавителе содержался бензилдиметил[3-(миристоиламино)пропил] аммоний хлорид, а влияние на инактивацию бактерий оказывала концентрация инактивирующего вещества.

Различий в инактивации между исследованными штаммами бактериальной культуры Helicobacter pylori не наблюдалось, что подтверждает отсутствие их резистентности к предлагаемому способу бактерицидного воздействия и следовательно высокую эффективность нового способа эрадикации инфекции.

Дополнительное изучение токсичности и безопасности применения 15% раствора С ₂₆Н₄₇СlN₂O было выполнено во ФГУН НИИ дезинфектологии Роспотребнадзора (Р.П.Родионова, Ж.П.Алексеева, М.М.Мальцева. «Научный отчет по результатам экспертизы медико-профилактического дезинфекционного средства «Антисепт-15», представляемого на государственную регистрацию». М., 2007 г.).

Исследования проведены на нескольких видах лабораторных животных (крысы, мыши, морские свинки и кролики), статистических группах - не менее 6-10 особей мелких и крупных грызунов. Подопытные и контрольные животные были одной линии, вида, возраста, пола, весовых характеристик (масса мышей - 18-22 г, крыс - 180-220 г, морских свинок - 220-250 г, кролики - 3000-3500 г).

При нанесении на кожу мышей средства С₂₆Н₄₇ СlN₂O в дозе 2500 мг/кг не отмечено ни клинических проявлений интоксикации, ни гибели животных в период 2-недельного наблюдения.

В желудок крысам - самкам и самцам вводили средство в виде 15% водного раствора в интервале доз: 500-1000-2000-3000 мг/кг. ЛД₅₀ «Антисепта 15» для крыс-самок составила 1450 мг/кг, для крыс-самцов - 1300 мг/кг По указанному параметру соединение относится к 3 классу умеренно опасных соединений, при аппликации на кожу мышей - к 4 классу мало опасных соединений согласно классификации ГОСТ 12.1.007-76.

При оценке степени опасности изучаемого вещества в насыщающих концентрациях паров у экспериментальных животных (мышей) не отмечено симптомов интоксикации, а также их гибели ни в период воздействия в течение 60 минут, ни в последующие дни наблюдения в течение 2-х недель. При обследовании подопытных животных после воздействия паров средства не выявлены изменения в показателях общетоксического действия относительно контрольной группы. Таким образом, по степени летучести соединение относится к 4 классу мало опасных согласно классификации степени опасности дезинфицирующих средств.

Изучение местного раздражающего действия на кожу проведено на двух видах животных кроликов и морских свинок при однократном воздействии (без смыва) в концентрациях водных растворов 1%-5%-15%. Проведенными сследованиями установлено, что нанесение растворов «Антисепта 15» на кожу морских свинок в указанных концентрациях не вызывало признаков раздражения кожи. Кролики были более чувствительны к веществам, но реакция была однотипной от воздействия обоих веществ: аппликации 1% водных растворов не вызывали признаков раздражения, 5% и 15% растворы вызывали слабую эритему (1 балл по классификации С.В.Суворова). Внесение в глаза кроликов 0,1% водного раствора соединения вызывало лишь кратковременный блефароспазм в течение 15-20 секунд. При этом не отмечено раздражения слизистых, радужной и роговой оболочек.

Основные результаты экспериментов по оценке токсичности и безопасности применения С₂₆Н₄₇СlN ₂O, полученные при проведении исследований на лабораторных животных, приведены в Таблице 2.

Таблица 2.
Показатели	15% раствор С26Н47СlN2O (Антисепт 15)
ЛД50 при введении в желудок крысы, мг/кг, класс опасности	1450; 1300 3
ЛД50 при нанесении на кожу, мг/кг, класс опасности	Более 2500 4
Летучесть, C20 класс опасности	Отсутствие клиники и гибели 4 класс опасности
Местное раздражающее действие на кожу (однократно), морские свинки	Отсутствует (1%-5%-15% растворы)
Местное раздражающее действие на глаза (однократно)	Отсутствует (0,1% раствор)

Клиническому применению предлагаемого способа эрадикации инфекции Helicobacter pylori в желудке должно предшествовать обязательное медицинское обследование пациента.

Диагностика хеликобактерной инфекции обычно производится путем опроса больного на наличие диспептических жалоб и симптомов и затем выполнения тестов, проводимых с целью подтвердить или опровергнуть факт наличия хеликобактерной инфекции.

Тестирование может быть выполнено с использованием гистологического или цитологического исследования желудочных биопсий, а также выпускаемой отечественной промышленностью неинвазивной тест-системы ХЕЛИК^® с цифровым аппаратом, предназначенной для первичной диагностики инфекции Helicobacter pylori, для контроля хода антихеликобактерной терапии и проверки эффективности уже проведенной терапии.

Аппарат применим в практике врачей-гастроэнтерологов, терапевтов, педиатров и семейных врачей. Чувствительность тест-системы ХЕЛИК^® с цифровым аппаратом составляет 95%, а специфичность 97%. Принцип действия тест-системы ХЕЛИК^® основан на биохимическом методе определения инфицированности бактерией Helicobacter pylori по ее уреазной активности, т.е. по способности быстро гидролизовать карбамид.

Пациент принимает раствор карбамида нормального изотопного состава, и образующийся в ходе гидролиза газ поступает в воздух ротовой полости. При помощи высокочувствительного датчика цифровой аппарат определяет содержится ли этот газ в воздухе ротовой полости и представляет эту информацию на экране. Анализируя эту информацию, врач делает вывод об инфицированности пациента.

Продолжительность обследования составляет 9 минут. Пример положительного теста первичной диагностики инфекции Helicobacter pylori приведен на фиг.1.

Предлагаемый способ эрадикации бактерий Helicobacter pylori в желудке клинически реализуется следующим образом:

при подтвержденных показаниях проведения эрадикации Helicobacter pylori натощак, утром и вечером за 30-40 минут до приема пищи пациент принимает 5-20 мл 0,1% раствора С₂₆Н₄₇СlN₂O, дополнительно разведенного в 100-200 мл свежепрокипяченной воды или апельсинового сока комнатной температуры;

после приема препарата больному необходимо лечь на левый бок и, занимая лежачее положение, поворачиваться каждые 2-4 минуты с боку на бок;

по прошествии 30 минут больной может принимать пищу;

эта эрадикационная терапия проводится в течение 3-4 дней утром и вечером. Контрольное определение Helicobacter pylori проводят теми же методами не менее чем через четыре недели после проведенного курса эрадикации.

Пример отрицательного теста повторной диагностики инфекции Helicobacter pylori приведен на фиг.2.

Клиническое наблюдение в течение года за больными показало отсутствие обострения заболеваний. Полученные результаты подтверждают повышение эффективности эрадикации при использовании технологии приема растворов бактерицидного средства С₂₆Н₄₇ СlN₂O, возможность существенного сокращения сроков терапии и снижения финансовых затрат на лечение.