способ прогнозирования развития пыльцевой бронхиальной астмы

Формула изобретения

Способ прогнозирования развития пыльцевой бронхиальной астмы путем иммуногенетического исследования, отличающийся тем, что в венозной крови определяют антигены локусов А и В системы HLA и при наличии двухлокусных гаплотипов HLA-A2/B35, и/или А10/В35, и/или А19/В16, и/или А19/В35 прогнозируют высокий риск развития пыльцевой бронхиальной астмы, а при наличии двухлокусных гаплотипов HLA-A2/B7 и/или А3/В7, и/или А11/В7, прогнозируют резистентность к развитию пыльцевой бронхиальной астмы.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к аллергологии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития пыльцевой бронхиальной астмы.

Из практики медицины известен способ прогнозирования пыльцевой бронхиальной астмы (Blumenthal M., Marcus-Bagley D., Awdeh Z. et al. HLA-DR2, [HLA-B7, SC31, DR2], and [HLA-B8, SC01, DR3] haplotypes distinguish subjects with asthma from those with rhinitis only in ragweed pollen allergy // J Immunol. - 1992. - Vol.148(2). - p.411-416), заключающийся в определении антигенного профиля системы HLA.

Недостатком способа является то, что способ известен только у больных пыльцевой аллергией с моносенсибилизацией к аллергену из пыльцы амброзии. В большинстве случаев больные поллинозом сенсибилизованы не к одной, а сразу к нескольким группам пыльцевых аллергенов. Это обстоятельство не позволяет применить известный способ прогнозирования пыльцевой бронхиальной астмы.

Изобретение направлено на повышение точности прогнозирования развития пыльцевой бронхиальной астмы.

Указанный технический результат достигается тем, что в венозной крови определяют антигены локусов А и В системы HLA и при наличии двухлокусных гаплотипов HLA-A2/B35, и/или А10/В35, и/или А19/В16, и/или А19/В35 прогнозируют высокий риск развития пыльцевой бронхиальной астмы; при наличии двухлокусных гаплотипов HLA-A2/B7, и/или А3/В7, и/или А11/В7 прогнозируют резистентность к развитию пыльцевой бронхиальной астмы.

Наиболее частыми проявлениями поллиноза являются аллергический риноконъюнктивит и пыльцевая бронхиальная астма. Как правило, поллиноз дебютирует в виде сезонного риноконъюнктивита, и у части пациентов этот фенотип пыльцевой аллергии сохраняется на всю жизнь. Однако при прогрессирующем течении поллиноза у 30-40% больных спустя 3-4 года от дебюта заболевания формируется пыльцевая бронхиальная астма, которая считается тяжелым проявлением поллиноза. До сих пор остается загадкой, почему у одних пациентов поллиноз ограничивается аллергическим ринитом, а у других развивается клиника пыльцевой бронхиальной астмы.

Как известно, поллиноз является мультифакториальным заболеванием, в развитии которого участвуют как генетические факторы, так и факторы окружающей среды. Предрасположенность к пыльцевой аллергии может быть обусловлена определенными антигенами системы HLA. Выявление ассоциаций между разными фенотипами поллиноза (сезонный аллергический ринит, пыльцевая бронхиальная астма) и антигенами системы HLA позволит прогнозировать течение пыльцевой аллергии и вовремя начать профилактические мероприятия. Таким образом, иммуногенетические исследования перспективны для определения группы риска возникновения тяжелой формы поллиноза - пыльцевой бронхиальной астмы. Все вышесказанное дает основание для применения способа прогнозирования развития пыльцевой бронхиальной астмы у больных поллинозом.

Представленным способом апробировано 65 коренных жителей Астраханской области русской национальности, страдающих пыльцевой аллергией. Случайным образом были отобраны пациенты, находившиеся на стационарном лечении на аллергологических койках Александро-Мариинской областной клинической больницы г.Астрахани, или обратившиеся за медицинской помощью к аллергологу-иммунологу консультативной поликлиники Александро-Мариинской областной клинической больницы г.Астрахани в период с августа 2005 г. по октябрь 2006 г. Контрольную группу составили 200 здоровых доноров - коренных астраханцев русской национальности, не имевших аллергической патологии.

У всех пациентов было проведено аллергологическое обследование, которое включало: сбор подробного аллергологического анамнеза, кожное аллергологическое тестирование, определение общего IgE в сыворотке крови.

Кожное тестирование осуществлялось при помощи скарификационных кожных проб с водно-солевыми экстрактами аллергенов из пыльцы растений производства ФГУП НПО «Аллерген» (г.Ставрополь). В 1 мл водно-солевого экстракта каждого аллергена содержалось 10000 PNU. Диагностический набор включал 23 пыльцевых аллергена: лещина, ольха, дуб, береза, ясень, клен, тимофеевка, овсяница, ежа, рожь, мятлик, райграс, лисохвост, пырей, кукуруза, конопля, полевица, одуванчик, лебеда, амброзия, подсолнечник, полынь, циклахена. Кожное тестирование проводилось в период ремиссии заболевания вне сезона цветения растений.

Метод типирования антигенов HLA I класса. Серологическая идентификация антигенов HLA локусов А и В осуществлялась путем исследования лимфоцитов периферической крови с помощью лимфоцитотоксической реакции. Типирование антигенов HLA I класса проводили с использованием HLA-типирующих сывороток производства ЗАО «Гисанс» (Санкт-Петербург, Россия). Принцип метода комплемент-зависимой цитотоксичности (КЗЦТ) заключается в двухэтапном воздействии на лимфоциты сначала иммунной сыворотки, содержащей известные специфичности, а затем комплемента.

Венозную кровь в объеме 4-5 мл собирают во флакон с плоским дном с добавлением антикоагулянта гепарина. Дефибринированную кровь в объеме 4 мл осторожно наслаивают на 2 мл градиента Lympholyte®-H (плотность смеси 1,077 г/см³). Центрифугируют при 1500 об/мин в течение 20 мин.

Пипеткой собирают кольцо лимфоцитов из интерфазы жидкостей для отмывания от градиента Lympholyte®-H. Взвесь лимфоцитов дважды отмывают средой Хенкса в течение 10 мин. При 1500 об/мин. Доводят концентрацию отмытых лимфоцитов до 2-4×10⁵ на 0,01 мл средой Хенкса. Осевшую взвесь лимфоцитов микрошприцем Гамильтона раскапывают по 0,001 мл в лунки планшета Терасаки, где под слоем вазелинового масла находится по 0,001 мл типирующих анти-HLA сывороток, расположенных по принципу «батарейности». Смесь инкубируют в течение 60 мин. Затем в лунки планшета Терасаки добавляют по 0,005 мл цельного кроличьего комплемента и вновь инкубируют в течение 60 мин. По окончании времени инкубации под слой вазелинового масла вносят по 0,001 мл 1% раствора трепана голубого, который перед использованием смешивают в соотношении 4:1 с 4,26% раствором NaCl. Через 5-8 минут в качестве фиксатора используется 17% раствор формалина.

Лимфоциты, имеющие на поверхности определенную специфичность HLA, взаимодействуют с иммунной анти-HLA сывороткой, вызывая реакцию клеточного лизиса. Результат определяется по проникновению красящего вещества в клетки. Интенсивность реакции оценивается по количеству лизированных клеток. В случае гибели 76-100% клеток реакция считается резко положительной и оценивается на четыре плюса (++++), при гибели 50-75% лимфоцитов она оценивается как отчетливо положительная и обозначается тремя плюсами (+++), при гибели 26-50% - как положительная реакция (++), лизис 10-25% лимфоцитов расценивается как слабоположительная реакция (+) и при наличии 0-10% погибших клеток реакция оценивается как отрицательная (-). Положительным контролем служат показатели взаимодействия лимфоцитов пациента со стандартной антилимфоцитарной сывороткой (АЛС), отрицательным - с нетоксической сывороткой лиц IV группы крови.

При обработке полученных результатов были использованы методы статистического анализа. Для оценки результатов типирования вычислялись частоты антигенов HLA.

Частоты гаплотипов HLA вычислялись непрямым методом с использованием показателя степени неравновесного сцепления по формуле Маттиуса. Для определения показателя достоверности результатов рассчитывался непараметрический критерий ² с поправкой Йетса. Значение ², превышавшее 3,841 (что соответствует р<0,05), рассматривалось как показатель достоверной разницы между частотами в сравниваемых группах. Для повышения точности результатов анализа использовалась поправка Бонферрони.

Для определения силы ассоциации между гаплотипом и изучаемым заболеванием рассчитывался показатель относительного риска (RR) для малых выборок по формуле Holdene-Woolf. Величина RR, равная 1, указывает на отсутствие различий в частоте встречаемости антигенов HLA у больных и в контроле. RR>1 (положительная ассоциация) означает, что данная специфичность HLA чаще регистрируется в группе больных. Этиологическая фракция (или атрибутивный риск) вычислялась для RR>1. Наибольшая величина этиологической фракции указывает на первичность ассоциативной связи исследуемой патологии с конкретным антигеном HLA. Если RR<1 (отрицательная ассоциация), то определяется величина превентивной фракции (PF). Величина PF показывает ту часть случаев, когда заболевание не развилось, благодаря наличию ассоциированного HLA-гена.

Проведен сравнительный анализ частоты двухлокусных гаплотипов HLA класса I локусов А и В во всех анализируемых выборках: у больных поллинозами (1 группа), сезонным аллергическим ринитом (2 группа) и пыльцевой бронхиальной астмой (3 группа) (таблица 1).

Как видно из таблицы 1, частота регистрации гаплотипа HLA-A2/B7 была достоверно высокой в общей группе «поллинозы» (10,78%), но максимальной своей величины достигала во 2-й анализируемой группе «сезонный аллергический ринит» (17,65%). В 3-й группе уровень HLA-A2/B7 был достоверно ниже как по сравнению с контролем (0,25%<4,58%; RR=0,31; ²=5,708; р<0,05), так и по сравнению со 2-й группой (0,25%<17,65%; RR=0,22; PF=0,12; ²=5,171; p<0,05). Таким образом, гаплотип HLA-A2/B7 может быть использован в качестве дифференциально-диагностического критерия: наличие его в фенотипе «препятствует» дальнейшему прогрессированию сезонного аллергического ринита с развитием пыльцевой бронхиальной астмы.

Аналогичные изменения зафиксированы и для гаплотипа HLA-A19/B7: достоверно высокий уровень в 1-й группе, максимально высокий во 2-й группе и достоверно низкий в 3-й группе как по сравнению с 1-й группой «поллинозы» (0,037%<6,15%; RR=0,17; ²=7,039, р_с<0,05), так и по сравнению со 2-й группой «сезонный аллергический ринит» (0,037%<11,77%; RR=0,08; ²=14,338; р_с<0,005). Таким образом, наличие в фенотипе индивидуума гаплотипа HLA-A19/B7 маркирует, с одной стороны, высокий риск развития поллиноза, в частности сезонного аллергического ринита, с другой - резистентность к дальнейшему прогрессированию сезонного аллергического ринита с развитием пыльцевой бронхиальной астмы.

Прямо противоположной была динамика частотных характеристик гаплотипов HLA-A10/B35, А19/В16 и А19/В35. Так, для HLA-A10/B35 зафиксировано его недостоверное повышение в 1-й группе (2,72%>0,32%; RR=7,83; ²=2,733; р>0,05), практически нормальный уровень во 2-й группе (0,517%) и достоверно высокий уровень в 3-й группе «пыльцевая бронхиальная астма» как по сравнению с контролем (12,90%>0,32%; RR=21,76; ²=14,081; р_с<0,002), так и по сравнению с группой больных сезонным аллергическим ринитом (12,90%>0,52%; RR=14,93; ²=5,544; р<0,05). Следовательно, присутствие в антигенном профиле двухлокусного гаплотипа HLA-A10/B35 маркирует высокий риск развития бронхиальной астмы как в «здоровой» популяции в целом, так и у пациентов, страдающих сезонным аллергическим ринитом. Иными словами, у А10/В35-позитивных лиц риск развития пыльцевой бронхиальной астмы в популяции в 22 раза выше, чем у А10/В35-негативных лиц, а риск дальнейшего прогрессирования поллиноза с развитием клиники пыльцевой бронхиальной астмы у А10/В35-позитивных пациентов с сезонным аллергическим ринитом в 15 раз выше, чем у А10/В35-негативных больных.

Динамическая картина для гаплотипа HLA-A19/B16 выглядела следующим образом: достоверное повышение в 1-й группе (4,62%>0,84%; RR=5,25; ²=7,566; р_с<0,05), незначительное и недостоверное повышение во 2-й группе (2,23%>0,84%; RR=2,74; ²=2,044; р>0,05) и максимально высокий его уровень в 3-й группе как по сравнению с контролем (9,68%>0,84%; RR=9,75; ²=5,886; р<0,05), так и по сравнению со 2-й анализируемой выборкой «сезонный аллергический ринит» (9,68%>2,23%; RR=4,05; ²=4,223; р<0,05).

Аналогичные, но более существенные изменения зафиксированы и для гаплотипа HLA-A19/B35: статистически значимое повышение в 1-й группе (4,23%>0,44%; RR=7,45; ²=5,163; р<0,02), практически нормальный уровень во 2-й группе (1,08%), а также значительное повышение частоты регистрации в 3-й группе как по сравнению с контролем (16,13%>0,04%; RR=27,60; ²=20,105; р_с<0,002), так и по сравнению со 2-й анализируемой выборкой «сезонный аллергический ринит» (16,13%>1,08%; RR=14,04; ²=9,393; p_c<0,05).

Иммуногенетическими маркерами пыльцевой бронхиальной астмы являются специфичности гаплотипы HLA-A2/B35, А10/В35, А19/В16, А19/В35.

Наличие в фенотипе больного сезонным аллергическим ринитом антигена гаплотипов HLA-A2/B7, А3/В7, A11/B7 препятствует дальнейшему прогрессированию данной патологии с развитием пыльцевой бронхиальной астмы.

Ниже приводятся результаты апробации.

Пример 1. Больная А., 1966 г.р., русская. Обратилась на прием к врачу-аллергологу консультативной поликлиники Александро-Мариинской областной клинической больницы г.Астрахани с жалобами на заложенность носа и нарушение носового дыхания, зуд носа, насморк и обильные выделения из носа, отечность глаз, слезотечение, зуд глаз и неба, умеренные выделения на задней стенке глотки, чувство «заложенности» и стеснения в области грудной клетки, множественные свистящие хрипы и приступообразный кашель с выделением прозрачной скудной мокроты, одышку с периодическими приступами удушья. Указанные симптомы беспокоят сезонно в период цветения растений.

Анамнез заболевания и аллергологический анамнез: Больной считает себя с 1999 г., когда впервые стала отмечать насморк, обильное водянистое отделяемое из носа, зуд глас, слезотечение. В 2004 году в возрасте 38 лет впервые присоединились симптомы атопической бронхиальной астмы: приступообразный кашель с выделением скудной мокроты, одышка с периодическими приступами удушья. Подобная симптоматика возникает в первой половине мая и в июне (первый период обострения) и в сентябре-октябре месяце (второй период обострения).

Обследовалась у аллерголога в 2005 году, занималась самолечением. В период обострений принимает антигистаминные препараты, деконгестанты, бета₂-агонисты и метилксантины, эпизодически прибегает к беклометазону дипропионату. Последние 2 года в период обострения самостоятельно лечится дипроспаном. Отмечает перекрестную пищевую аллергию на овсяные хлопья. Наследственность не отягощена. Бытовой, эпидермальной, грибковой аллергии нет. Лекарственной непереносимости нет. По профессии портниха.

Status praesens: Нормостеник. Кожные покровы чистые, обычной окраски. Гиперемия конъюнктив обоих глаз. Носовое дыхание затруднено. Периферические лимфатические узлы не увеличены. В легких ослабленное везикулярное дыхание. Сухие свистящие хрипы в нижних отделах. ЧДД - 20 в К. Границы абсолютной и относительной сердечной тупости в пределах нормы. Тоны сердца приглушены, ритмичные. PS - 76 уд. в 1 мин. АД - 120/80 мм рт.ст. Живот мягкий, не вздут, безболезненный. Печень не увеличена. Кишечник мягкий, безболезненный на всем протяжении. Дизурии и периферических отеков нет.

Данные обследования: OAК: Er - 4,38×10¹²/л, Нв - 116г/л, ЦП - 0,89; Tr - 276,6×10⁹/л, эозинофилы - 3, б - 2, п - 5, с - 60, л - 28, м - 2, СОЭ - 12 мм/ч.

Общий иммуноглобулин Е - 36,2 МЕ/мл.

Спирография: ЖЕЛ - 1,90 (59%), ФЖЕЛ - 1,59 (52%), ОФВ₁ - 1,04 (39%), т.Тиффно - 65%, ПОС - 2,5 (41%), MOC₁ - 28, MOC ₂ - 21, МОС₃ - 22.

Результаты скарификационных кожных тестов с пыльцевыми аллергенами (тесты проведены в период ремиссии заболевания): ежа сборная +, райграс +, тимофеевка +++. Результаты скарификационных кожных тестов с бытовыми, эпидермальными, пищевыми аллергенами отрицательные.

По результатам клинико-лабораторного обследования установлен заключительный клинический диагноз: Бронхиальная астма, аллергическая форма, средней степени тяжести, интермиттирующее течение. Аллергический ринит, средней степени тяжести, персистирующее течение. Аллергический конъюнктивит. Пыльцевая аллергия, перекрестная пищевая аллергия. Сенсибилизация к аллергенам из пыльцы злаковых трав.

HLA-фенотип пациентки: А10, А19, В18, В35.

Таким образом, наличие в антигенном профиле гаплотипов HLA-А10/В35 и А19/В35 обусловило формирование у больной пыльцевой бронхиальной астмы.

Пример 2. Больная К., 1977 г.р., русская, врач. Обратилась на прием к аллергологу консультативной поликлиники Александро-Мариинской областной клинической больницы г.Астрахани с жалобами на выделения из носа, чиханье, нарушение носового дыхания, отечность глаз, зуд носа, неба и глаз, слезотечение, чувство «заложенности» и стеснения в грудной клетке, приступообразный кашель с выделением прозрачной скудной мокроты, одышку с периодическими приступами удушья в летне-осенний период (начиная с середины июля).

Анамнез заболевания и аллергологический анамнез: Больной считает себя с 1992 г., когда в летние и весенние месяцы (июль-сентябрь) впервые стала отмечать признаки риноконъюнктивита. В возрасте 28 лет (2005 г.) в сезон цветения трав впервые появились приступы экспираторного удушья, сухой кашель. В период обострений принимает антигистаминные препараты, деконгестанты, метилксантины. Отмечает перекрестную пищевую аллергию на некоторые сорта натурального меда. Множественная лекарственная аллергия: на сульфаниламиды (отек Квинке), эритромицин (крапивница). До 2003 года курила по 3-4 сигареты в день. Семейный анамнез: у матери - бронхиальная астма; у дочери аллергологом диагностирован сезонный аллергический ринит.

Бытовой, эпидермальной, грибковой аллергии нет.

Status praesens: Умеренного питания. Кожные покровы чистые, обычной окраски. Слабая отечность глаз. Гиперемия склер и конъюнктив обоих глаз. Дыхание через нос затруднено. Периферические лимфатические узлы не увеличены. В легких ослабленное везикулярное дыхание. Сухие свистящие хрипы по всем легочным полям. ЧДД - 24 в 1'. Границы абсолютной и относительной сердечной тупости в пределах нормы. Тоны сердца приглушены, ритмичные. PS-82 уд. в 1 мин. АД - 125/80 мм рт.ст. Живот мягкий, не вздут, безболезненный. Печень не увеличена. Дизурии и периферических отеков нет.

Данные обследования: OAК: Er - 4,45×10¹² /л, Нв - 125 г/л, ЦП - 0,9; Tr - 355,8×10⁹/л, Le - 5,9×10⁹/л, эозинофилы - 9, б - 1, п - 4, с - 58, л - 26, м - 2, СОЭ - 18 мм/ч.

Общий иммуноглобулин Е - 266,1 МЕ/мл. Спирометрия: ФЖЕЛ - 3,46 л (84%), ОФВ₁ - 1,71 (51%), ОФВ₁/ФЖЕЛ - 50%.

Результаты скарификационных кожных тестов с пыльцевыми аллергенами (проведены в период ремиссии заболевания): клен+, ежа+, лисохвост+, тимофеевка+, подсолнечник+++, одуванчик+, полынь+++, лебеда++, амброзия+, циклахена++. Результаты скарификационных кожных тестов с бытовыми, эпидермальными, пищевыми аллергенами отрицательные.

По результатам обследования установлен заключительный клинический диагноз: Бронхиальная астма, аллергическая форма, легкое персистирующее течение. Аллергический ринит, персистирующее течение, средней степени тяжести Аллергический конъюнктивит. Пыльцевая аллергия, перекрестная пищевая аллергия. Сенсибилизация к аллергенам из пыльцы полыни, подсолнечника, лебеды, циклахены.

HLA-фенотип пациентки: A1, A19, В35, В70.

Результаты иммуногенетического исследования показали, что присутствующий в HLA-фенотипе пациентки гаплотип HLA-A19/B35 способствовал развитию пыльцевой бронхиальной астмы.

Пример 3. Больная Т., 1964 г.р., русская. Обратилась на прием к аллергологу консультативной поликлиники с жалобами на выделения из носа, отсутствие обоняния, зуд носа, глаз, слезотечение.

Анамнез заболевания и аллергологический анамнез: Больной считает себя с 1978 г. В период июль-октябрь беспокоят симптомы ринита, конъюнктивита. В период обострений лечится самостоятельно антигистаминными препаратами 1 поколения и деконгестантами. Перекрестной пищевой сенсибилизации не отмечает. Приступов удушья в период обострения не отмечала. У аллерголога раньше не обследовалась.

Наследственность не отягощена. Бытовой, эпидермальной, грибковой аллергии нет. Лекарственной непереносимости не отмечено.

Status praesens: Нормостенического телосложения. Кожные покровы чистые, обычной окраски. Дыхание через нос затруднено. Конъюнктивы обоих глаз гиперемированы. Веки отечны. Периферические лимфатические узлы не увеличены. Дыхание через нос свободное. В легких везикулярное дыхание. Хрипов нет. ЧДД - 16 в 1 минуту. Тоны сердца ясные, ритмичные. PS - 76 уд. в 1 мин. АД - 115/75 мм рт.ст. Живот мягкий, не вздут, безболезненный. Печень не увеличена. Кишечник мягкий, безболезненный на всем протяжении. Дизурии и периферических отеков нет.

Данные обследования: OAК: Er - 4,25×10 ¹²/л, Нв - 122 г/л, ЦП - 0,9; Tr - 187×10⁹ /л, Le - 6,8×10⁹/л, п - 2, с - 66, л - 30, м - 2, СОЭ - 9 мм/ч.

Общий иммуноглобулин Е - 185,9 МЕ/мл.

Результаты скарификационных кожных тестов с пыльцевыми аллергенами (проведены в период ремиссии заболевания): конопля+++, лебеда+++. Результаты скарификационных кожных тестов с бытовыми, эпидермальными, пищевыми аллергенами отрицательные.

По результатам клинико-лабораторного обследования в AM ОКБ установлен заключительный клинический диагноз: Аллергический ринит, средней степени тяжести, интермиттирующее течение. Аллергический конъюнктивит. Пыльцевая аллергия. Сенсибилизация к аллергенам из пыльцы конопли и лебеды.

HLA-фенотип пациентки: А1, А2, В7, В40.

Как видно, несмотря на длительный «стаж» заболевания (поллиноза), у больной не сформировалась пыльцевая бронхиальная астма. При иммуногенетическом исследовании у больной определен HLA - гаплотип А2/В7, что позволяет прогнозировать резистентность к развитию пыльцевой бронхиальной астмы.

Предлагаемым способом достигнуто повышение точности прогнозирования развития пыльцевой бронхиальной астмы на 80%. Использование генетических методов в клинической практике позволит предупредить формирование бронхиальной астмы у больных поллинозом и вовремя начать профилактические мероприятия.

Достоинствами способа являются его высокая достоверность, простота лабораторного выполнения, что указывает на возможность широкого применения в аллергологических стационарах и кабинетах.

Таблица 1
Распределение двухлокусных гаплотипов HLA класса I локусов А и В в зависимости от клинического варианта поллиноза (%)
Гаплотип HLA	Контроль (n=200)	Поллинозы (n=65)	Сезонный аллергический ринит (n=34)	Пыльцевая бронхиальная астма (n=31)
А1/В8	3,736	4,532	3,889	5,765
А1/В16	0,061	1,615*	1,176*	1,033
А2/В5	1,549	1,328	1,207	0,944
А2/В7	4,577	10,781**	17,647**	0,254**
А2/В16	1,311	3,076*	2,557*	1,108
А2/В17	1,969	0,558**	0,305**	0,771
А2/В35	1,112	3,708	0,994	12,903**
А2/В40	2,871	3,053	2,078	1,542
А3/В7	4,093	2,778	14,706**	0,305**
А3/В16	0,436	0,788	1,455	0,661
А3/В17	1,052	0,134**	0,189**	0,392*
А3/В35	1,629	3,541	1,317	3,226*
А3/В40	1,394	2,784	1,258	0,778
А9/В7	1,086	3,889*	8,824**	0,312
А9/В16	0,928	1,677	0,788	0,722
А9/В17	1,396	0,312*	0,617	0,418*
А9/В35	1,880	2,778	0,566	3,226*
А10/В7	0,259	2,077*	5,882*	0,578
А10/В35	0,318	2,718*	0,517	12,903**
А11/В7	1,373	2,875	2,438	0,096**
А11/В17	0,974	0,166	0,244	0,043
А11/В35	1,475	3,108	0,716	1,022
А19/В7	0,044	6,154**	11,765**	0,037
А19/В8	0,029	0,127	0,451*	0,165
А19/В16	0,836	4,615**	2,233*	9,677**
А19/В18	1,321	0,791	0,791	0,791
А19/В35	0,443	4,225**	1,076	16,129**
А28/В7	0,280	0,344	1,115*	0,117
А28/В35	0,109	0,734	0,089	2,884*