лечение рака с применением вирусов, фторпиримидинов и камптотецинов

Формула изобретения

1. Способ лечения млекопитающего, имеющего неоплазму, включающий введение субъекту вируса ньюкаслской болезни, фторпиримидина и соединения камптотецина за один или более цикл в общем количестве, эффективном для лечения субъекта.

2. Способ по п.1, в котором вирус является репликативно-компетентным.

3. Способ по п.1, в котором вирус является мезогенным штаммом вируса ньюкаслской болезни.

4. Способ по п.1, в котором вирус вводят внутривенно.

5. Способ по п.1, в котором соединением фторпиримидина является 5-фторурацил.

6. Способ по п.5, дополнительно включающий введение субъекту лейковорина.

7. Способ по п.5, в котором 5-фторурацил вводят посредством непрерывной инфузии в течение по крайней мере 22 ч на дозу.

8. Способ по п.1, в котором соединение камптотецина выбрано из группы, состоящей из иринотекана, топотекана, 9-аминокамптотецина, эксатекана, каренитецина, рубитекана, луртотекана и гомокамптотецина.

9. Способ по п.8, в котором соединением камптотецина является иринотекан.

10. Способ по п.1, в котором вирусом является мезогенный штамм вируса ньюкаслской болезни, фторпиримидином является 5-фторурацил, а соединением камптотецина является иринотекан.

11. Способ по п.1, в котором вирус ньюкаслской болезни, фторпиримидин и соединение камптотецина вводят в течение двух или более циклов.

12. Способ по п.1, в котором соединение камптотецина вводят субъекту от 24 ч до одного месяца до введения вируса.

13. Способ по п.12, в котором соединение камптотецина вводят субъекту от 24 ч до одной недели до введения вируса ньюкаслской болезни.

14. Способ по п.1, в котором соединение камптотецина вводят субъекту от 24 ч до одного месяца после введения вируса.

15. Способ по п.14, в котором соединение камптотецина вводят субъекту от 24 ч до одной недели после введения вируса ньюкаслской болезни.

16. Применение вируса ньюкаслской болезни для изготовления лекарственного средства для лечения в комбинации с фторпиримидином и соединением камптотецина субъекта, имеющего неоплазму.

17. Применение фторпиримидина для изготовления лекарственного средства для лечения в комбинации с вирусом ньюкаслской болезни и соединением камптотецина субъекта, имеющего неоплазму.

18. Применение соединения камптотецина для изготовления лекарственного средства для лечения в комбинации с вирусом ньюкаслской болезни и соединением фторпиримидина субъекта, имеющего неоплазму.

19. Применение по любому из пп.16-18, в котором вирус является репликативно-компетентным.

20. Применение по п.18, в котором вирус является мезогенным штаммом вируса ньюкаслской болезни.

21. Применение по любому из пп.16-18, в котором вирус вводят внутривенно.

22. Применение по любому из пп.16-18, в котором соединением фторпиримидина является 5-фторурацил.

23. Применение по любому из пп.16-18, в котором соединение камптотецина выбрано из группы, состоящей из иринотекана, топотекана, 9-аминокамптотецина, эксатекана, каренитецина, рубитекана, луртотекана и гомокамптотецина.

24. Применение по п.23, в котором соединением камптотецина является иринотекан.

25. Применение по любому из пп.16-18, в котором вирусом ньюкаслской болезни является мезогенный штамм вируса ньюкаслской болезни, фторпиримидином является 5-фторурацил, а соединением камптотецина является иринотекан.

26. Применение по любому из пп.16-18, в котором вирус ньюкаслской болезни, фторпиримидин и соединение камптотецина вводят в течение двух или более циклов.

27. Применение по любому из пп.16-18, в котором соединение камптотецина вводят субъекту от 24 ч до одного месяца до введения вируса ньюкаслской болезни.

28. Применение по п.27, в котором соединение камптотецина вводят субъекту от 24 ч до одной недели до введения вируса.

29. Применение по любому из пп.16-18, в котором соединение камптотецина вводят субъекту от 24 ч до одного месяца после введения вируса ньюкаслской болезни.

30. Применение по п.29, в котором соединение камптотецина вводят субъекту от 24 ч до одной недели после введения вируса ньюкаслской болезни.

Описание изобретения к патенту

Уровень техники изобретения

Совместное применение некоторых вирусов с 5-фторурацилом для лечения рака раскрыто в WO 94/25627 (страница 12).

Совместное применение онколитических вирусов с камптотецинами раскрыто в WO 2005/113018 (Wellstat Biologies Corp.). Лечение рака с применением некоторых мутантных вирусов герпеса в комбинации с любым из множества противораковых агентов, включая иринотекан и топотекан, раскрыто в публикации патента США 2002/0071832 (Fong, и др.), абзацы 7 и 40. Способы лечения неоплазий с применением специфичных к клеткам-мишеням аденовирусных векторов в комбинации с противоопухолевыми агентами, включая иринотекан или топотекан, раскрыты в публикации патента США № 2003/0068307 (Yu, и др.) страница 13. См. также Nemunaitis, и др., Cancer Gene Ther. (2003) 10(5): 341-352; и Meek, и др., Cancer Res. (2001) 61(13): 5083-5089.

Совместное применение иринотекана, 5-фторурацила (5-FU) и лейковорина (LV) раскрыто в: Teufel и др., 2004 (BMC Cancer 4:38); Tournigand и др., 2004 (J Clin Oncol 2:229-237); Andre и др., 1999 (Eur J Cancer 35:1343-7); Colucci и др., 2005 (J Clin Oncol 22); Bouche и др., 2004 (J Clin Oncol 22:4319-4328); Ducreux и др., 1999 (J Clin Oncol 17:2901-8); Kohne и др., 2005 (J Clin Oncol 23); Saltz и др., 1996 (J Clin Oncol 14:2959-67); Goto и др., 2004 (Int J Clin Oncol 9:354-8). Дополнительные комбинации иринотекана и 5-FU перечислены в Таблице 3 Vanhoefer и др., 2001 (J Clin Oncol 19:1501-18) и Sastre и др., 2005 (Cancer Chemother Pharmacol 55:453-60).

Сущность изобретения

Это изобретение предоставляет способ лечения млекопитающего, имеющего опухоль, включающий введение субъекту вируса, соединения фторпиримидина и соединения камптотецина в общем количестве, эффективном для лечения субъекта; в котором вирус выбран из группы, включающей вирус ньюкаслской болезни, вирус кори, вирус везикулярного стоматита, вирус гриппа, вирус Sindbis, пикорнавирус и вирус миксомы.

Это изобретение предполагает применение вируса и/или соединения фторпиримидина и/или камптотецина в производстве лекарственного средства для лечения, в комбинации с другими упомянутыми компонентами, субъекта, имеющего неоплазму; при этом вирус выбран из группы, включающей вирус ньюкаслской болезни, вирус кори, вирус везикулярного стоматита, вирус гриппа, вирус Sindbis, пикорнавирус и вирус миксомы. Лекарственное средство может содержать один, два или все три из перечисленных компонентов.

Краткое описание чертежей

Фигура 1. График средних объемов опухоли ксенотрансплантатов карциномы толстой кишки SW620 как функция времени после начала лечения, сравнивающий активность тройной комбинации NDV (1E+09 PFU) + иринотекан (25 мг/кг) + 5-FU (25 мг/кг) с каждым агентом в отдельности или только с носителем.

Фигура 2. График средних объемов опухоли ксенотрансплантатов карциномы толстой кишки SW620 как функция времени после начала лечения, сравнивающий активность тройной комбинации NDV (1E+09 PFU)+иринотекан (25 мг/кг)+5-FU (25 мг/кг) с каждой двойной комбинацией (NDV+иринотекан; иринотекан+5-FU; NDV+5-FU) или с одним носителем.

Фигура 3. График средних объемов опухоли ксенотрансплантатов карциномы толстой кишки SW620 как функция времени после начала лечения, сравнивающий активность тройной комбинации NDV (1E+09 PFU) + иринотекан (15 мг/кг)+5-FU (100 мг/кг) с каждым агентом в отдельности или только с носителем.

Фигура 4. График средних объемов опухоли ксенотрансплантатов карциномы толстой кишки SW620 как функция времени после начала лечения, сравнивающий активность тройной комбинации NDV (1E+09 PFU)+иринотекан (15 мг/кг)+5-FU (100 мг/кг) с каждой двойной комбинацией (NDV+иринотекан; иринотекан+5-FU; NDV+5-FU) или только с носителем.

Подробное описание изобретения

Применяемый термин "включающий" не является ограничивающим. Пункт формулы изобретения, в котором применяется этот термин, может содержать другие элементы в дополнение к указанным в этом пункте формулы изобретения. Таким образом, например, формула изобретения может охватывать режимы лечения, которые также включают другие терапевтические агенты или терапевтические дозы вирусов, которые конкретно в ней не указаны, при условии, что указанные элементы или их эквиваленты имеются в наличии.

Применяемое здесь сокращение "NDV" является аббревиатурой вируса ньюкаслской болезни. Применяемое сокращение "DLT" является аббревиатурой дозолимитирующей токсичности. Применяемый термин "бляшкообразующая единица" (PFU) означает одну инфекционную вирусную частицу. Применяемое обозначения "BPFU" означает миллиард PFU. Сокращение "PP" означает очищенный от бляшек. Таким образом, например, PPMK107 означает очищенный от бляшек штамм MK107 вируса ньюкаслской болезни. Применяемое отношение "PFU/m²", которое является стандартной единицей для выражения дозировок, означает PFU на квадратный метр площади поверхности пациента. Применяемый термин "репликативно-компетентный вирус" относится к вирусу, который образует инфекционное потомство в раковых клетках.

В варианте осуществления этого изобретения вирус является репликативно-компетентным.

В соответствии с этим изобретением, когда вирусом является вирус ньюкаслской болезни, он может иметь низкую (лентогенный), умеренную (мезогенный) или высокую (велогенный) вирулентность. Уровень вирулентности определяют согласно тесту среднего времени летальности на зародышах (MDT). (Alexander, "Chapter 27: Newcastle Disease" in Laboratoiy Manual for the Isolation and Identification of Avian Pathogens, 3rd ed., Purchase, et al. eds. (Kendall/Hunt, Iowa), page 117.) Вирусы классифицируют с помощью теста MDT как лентогенные (MDT> 90 часов); мезогенные (MDT от 60 до 90 часов) и велогенные (MDT <60 часов). В настоящее время предпочтительными являются мезогенные NDV. В соответствии с этим изобретением, можно применять любой обычный путь или способ введения вирусов субъекту. Примеры путей введения относятся к WO 00/62735. В одном варианте осуществления этого изобретения вирус вводят системно, например внутривенно. Для внутривенного введения терапевтического вируса в соответствии с этим изобретением предпочтительно, чтобы вирус был мезогенным штаммом вируса ньюкаслской болезни. В предпочтительном варианте осуществления этого изобретения человеческому субъекту вводят внутривенно мезогенный штамм вируса ньюкаслской болезни от 12×10⁹ до 120×10⁹ PFU/м ² на дозу, более предпочтительно от 12×10⁹ до 48×10⁹ PFU/м² на дозу. Применяемое здесь соотношение "мг/м²" означает миллиграмм на квадратный метр площади поверхности пациента.

В вариантах осуществления этого изобретения пикорнавирусом является полиовирус, эховирус или коксаки-вирус. Примеры коксаки-вирусов, которые являются подходящими в соответствии с этим изобретением, включают следующие типы: A21, A13, A15 и Аl 8. Примеры подходящих эховирусов включают эховирус 1 типа.

Применение фторпиримидинов в качестве противораковых агентов рассмотрено в Petty & Cassidy (2004) CUIT. Cancer Drug Targets, 4:191-204; and Lamont and Schilsky (1999) Clin. Cancer Res. 5:2289-2296. Эти агенты являются фторированными пиримидинами, которые обладают противоопухолевой активностью посредством нескольких механизмов, включая ингибирование синтеза и функции РНК, ингибирование активности тимидилатсинтазы и включение в ДНК.

Термины "фторпиримидин" или "соединение фторпиримидина" означают одно или более следующих соединений: 5-фторурацил (5-FU); капецитабин; 5-фтор-2'-дезоксиуридин (FudR); фторафур; эмитефур; энилурацил/5-FU; S-I (комбинация пролекарства 5-FU фторацура и двух модуляторов 5-FU, назвываемых 5-хлор-2,4-дигидроксипуридин и оксоновой кислоты в мольном отношении 1:0,4:1); и UFT (комбинация фторафура и урацила в мольном отношении 1:4) (Lamont и Schilsky, 1999). 5-FU часто вводится с лекарственным средством лейковорином для усиления цитотоксических эффектов 5-FU (см., например, Jolivet, 1995, Eur J Cancer 3 IA: 1311-1315 and Rustum et al., 1998; Cancer J Sci Am 4:12- 18). Методы дозирования и введения и режимы применения фторпиримидинов и лейковорина известны в области техники (см., например. Vincent et al., 1999 (Anticancer Drugs 10:337-54); Jolivet, 1995), и их оптимизация для конкретного пациента возможна в пределах способностей опытного клинициста. Болюсное введение 5-FU обычно производят пациентам-людям в дозе от 370 до 500 мг/м² ежедневно в течение 5 дней каждые 4-5 недель или более предпочтительно 500 мг/м² еженедельно. В варианте осуществления этого изобретения одна или более доз 5-фторурацила вводятся с помощью непрерывной инфузии в течение по крайней мере 22 часов на дозу. Непрерывное введение 5-FU включает внутривенное болюсное введение 400 мг/м² , с последующим введением 600 мг/м² в течение более чем 22 часов. В другом варианте осуществления после болюсного введения 400 мг/м² вводят 2400 мг/м² в течение более чем 46 часов. Лейковорин обычно вводят пациентам-людям в дозе от 200 до 500 мг/м², которую вводят непосредственно до или во время введения 5-FU.

Применение камптотецинов как противораковых агентов рассмотрено в Garcia-Carbonero и др., Clin. Cancer Res. (March 2002) 8: 641-661; и в Pizzolato JF and Saltz LB, The camptothecins. Lancet 2003 361:2235-42. Камптотецины обладают противоопухолевой активностью, основанной на их связывании и ингибировании топоизомеразы I, ядерного фермента, который уменьшает торсионное напряжение при репликации ДНК и который играет важную роль в репликации ДНК. Топотекан и иринотекан были одобрены для клинического применения Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA). Другие камптотецины находятся в разработке как противораковые терапевтические средства (Ulukan and Swaan, (Campothecins: a review of their chemotherapeutic potential. Drugs, 2002, 62:2039-57); и Garcia-Carbonero and Supko, 2002).

Применяемый термин "соединение камптотецина" означает, что учитывается класс соединений, включающий камптотецины, аналоги камптотецина, производные камптотецина или конъюгаты камптотецина. Эти соединения основаны на характерной главной цепи камптотецина, состоящей из пяти колец:

В соответствии с этим изобретением можно применять любое соединение камптотецина. Примеры соединений камптотецина включают иринотекан (CAMPTOSAR; 7-этил-10-[4-(1-пиперидино)-1-пиперидино]-карбонилоксикамптотецин), топотекан (HYCAMPTIN; (S)-9-N,N-диметиламиноэтил-10-гидроксикамптотецин), 9-аминокамптотецин (9-амино-20(S)-камптотецин), 9-нитрокамптотецин (также называемый рубитекан), луртотекан (7-(4-метилпиперазинометилен)-10,11-этилендиокси-20(S)-камптотецин), эксатекан, каренитецин и гомокамптотецин. Структуру и клиническую информацию о некоторых соединениях камптотецина можно найти в Garcia-Carbonero, и др., Clin. Cancer Res. (March 2002) 8: 641-661. Примеры соединений камптотецина могут также быть найдены в патентах США № 4604463, № 6403569, и № 5004758, и в WO 2004/012661, WO 2003/101998, WO 2003/101996, WO 2003/101406, WO 2003/093274, WO 2003/086471, WO 01/76597, WO 01/64194, WO 00/70275, WO 00/53607, WO 99/17805, WO 99/17804, WO 99/05103, WO 98/35969, WO 97/28164, WO 97/25332, WO 97/16454, содержание которых приведено здесь в качестве ссылки.

В соответствии с комбинированной терапией этого изобретения соединение камптотецина можно вводить от одного месяца до введения вируса до спустя один месяц после введения вируса. В более специфичных вариантах осуществления соединение камптотецина и вирус вводят субъекту в пределах одного периода в двадцать четыре часа; или соединение камптотецина вводят от двадцати четырех часов до одного месяца, предпочтительно от двадцати четырех часов до одной недели до введения вируса; или соединение камптотецина вводят субъекту от двадцати четырех часов до одного месяца, предпочтительно от двадцати четырех часов до одной недели после введения вируса. "Химиотерапию в основном назначают с регулярными интервалами, называемыми циклами. Цикл может включать одну дозу с последующими несколькими днями или неделями без лечения. Это дает время нормальным клеткам в организме восстановиться от побочных эффектов лекарственного средства. В альтернативном варианте, дозы можно вводить несколько дней подряд, или через день в течение нескольких дней, с последующим периодом отдыха.. .. число циклов... может быть определено перед началом лечения... или может быть гибким, чтобы учитывать, как лечение воздействует на раковую опухоль." (Из "Planning Drug Doses and Schedules", на вебсайте Американского общества борьбы с раковыми заболеваниями, посещенного 23 мая 2005.) В варианте осуществления этого изобретения вирус, соединения фторпиримидина и камптотецина вводят за один или более циклов, более предпочтительно за два или более циклов. Один цикл может продолжаться, например, в течение 8 недель, 6 недель, 30 дней или 3 недель.

Ниже в Таблицах с 3 по 6 представлены образцы режимов введения, которые также являются подходящими в отношении введения вирусов, фторпиримидинов и камптотецинов помимо представленных, в количествах, которые соответствуют или отличаются от тех, что приведены в примерах. Соответственно, в дальнейших вариантах осуществления этого изобретения вирусы, соединения фторпиримидина и камптотецина вводят циклически согласно режиму введения, показанному в любой из Таблиц с 3 по 6.

Методы дозирования и введения и режимы введения камптотецинов и противораковых вирусов известны в области техники (см., например Garcia-Carbonero, и др.; WO 00/62735; WO 2004/000209; и Pecora, и др., J. Clin. Oncol. (2002) 20 (9): 2251-2266), и, таким образом, оптимизация под конкретного пациента находится в пределах способностей опытного клинициста. Иринотекан обычно вводят пациентам-людям в дозе от 62,5 до 125 мг/м² четыре раза в неделю, или более предпочтительно от 80 до 125 мг/м² четыре раза в неделю; или от 300 до 350 мг/м² однократно каждые три недели, или более предпочтительно от 300 до 350 мг/м² однократно каждые три недели.

Субъект, лечение которого проводится в соответствии с этим изобретением, может быть либо человеком или млекопитающим, не являющимся человеком. В соответствии с этим изобретением, можно осуществлять лечение любой опухоли, включая, но не ограничиваясь ими, следующие: ректальный рак, тазовый рак, рак толстой кишки, рак легкого, рак молочной железы, рак предстательной железы, глиобластому, рак почки, рак поджелудочной железы, рак области головы и шеи, рак эндометрия, нейробластому, карциноид, меланому, рак яичников, саркому, рак желудочно-пищеводного соединения, рак желудка, рак пищевода, рак печени и рак шейки матки.

Несмотря на то что мониторинг лечения не является существенным аспектом изобретения, существуют методы определения терапевтических эффектов лечения. Они включают определение размера опухоли после введения вируса, и уменьшение опухоли в размерах является положительным результатом.

Изобретение будет лучше понятно при ссылке на следующие примеры, которые иллюстрируют описанное здесь изобретение, но не ограничивают его. В следующих примерах NDV является тройным очищенным от бляшек MK107, который является аттенуированной (мезогенной) версией вируса ньюкаслской болезни, описанного более подробно в международной публикации патента WO 00/62735, опубликованной 26 октября 2000 (Pro-Virus, Inc). Все содержание WO 00/62735 и предварительной заявки на патент США № 60/565,631, поданной 27 апреля 2004, приведено здесь в качестве ссылки.

Примеры

Пример 1. NDV в комбинации с 5-фторурацилом. (5-FU).

Атимическим мышам ввели подкожно 10 миллионов клеток фибросаркомы человека HT 1080. Семь дней спустя, когда опухоли имели размер приблизительно от 120 до 150 мм³, животные были рандомизированы и получали лечение по одному из 10 различных режимов лечения (см. Таблицу 1 для подробностей), которые включали субоптимальные дозы внутривенного NDV (2E+07 или 1E+08 PFU), 100 мг/кг болюсного 5-фторурацила (5-FU), вводимые интраперитонеально, и подкожную имплантацию пилюли, содержащей 5 мг 5-FU (Каталоговый #Z-190, Innovative Research of America; Sarasota, Florida) или пилюли с плацебо (Каталоговый #C-111, Innovative Research of America; Sarasota, Florida) и другие контрольные варианты с носителем. Если производили имплантацию пилюль, то это осуществляли в участке, находящемся на удаленом расстоянии от подкожных опухолей. Дата первого введения лекарственных препаратов обозначена как День 0 в Таблице 1 ниже. Пилюли с 5-FU применяли для обеспечения более медленного высвобождения 5-FU, чем при болюсном введении. Эти пилюли с 5-FU применяли для того, чтобы приблизить эффекты к непрерывной инфузии 5-FU или введению орального аналога 5-FU, такого как капецитабин, в течение нескольких дней.

Таблица 1 Режимы лечения, тестируемые на атимических мышах, пораженных опухолью
Группа	Номер мыши	День лечения 0	День лечения 2	День лечения 4
1	11	M/La	5FU пилюля	M/L a
2	11	M/La	Пилюля-контроль	M/La
3	11	M/La	5FU пилюля	NDV,1E+0,8
4	11	M/La	Пилюля-контроль	NDV,1E+0,8
5	11	M/La	5FU болюс
6	11	M/La	5FU болюс	M/L a
7	11	M/La	Болюс-контрольb	NDV,1E+0,8
8	11	M/La	Болюс-контрольb	M/La
9	11	NDV,2E+0,7	5FU болюс	M/La
10	11	NDV,2E+0,7	Болюс-контрольb	M/La
a M/L: контроль с носителем маннитол (5 %)/лизин (1 %)
b Болюсный контроль: Вода для инъекции

Частота полной регрессии опухоли (CR, 100% уменьшение размеров опухоли) наблюдалась намного чаще в группе, получавшей как NDV, так и 5-FU (либо в виде болюсного введения, либо в виде пилюли), чем в группе, получавшей только 5-FU, или NDV. См. Таблицы 2a-c.

Таблица 2a Лечение мышей, пораженных опухолью, болюсным введением 5-FU через два дня после лечения NDV приводит к большему ответу опухоли на лечение, чем при применении любого агента в отдельности
Группа	Лечение	Полученный ответ опухоли на лечение (CR), %
6	Болюсно 5-FU	0
8	Контрольный болюс	0
9	Оба NDV и болюсно 5-FU	63
10	NDV и контрольный болюс	18

Таблица 2b Лечение мышей, пораженных опухолью, болюсным введением 5-FU за два дня до лечения NDV приводит к большему ответу опухоли на лечение, чем при применении любого агента в отдельности
Группа	Лечение	Полученный ответ опухоли на лечение (CR), %
5	Оба NDV и болюсно 5-FU	36
6	Болюсно 5-FU	0
7	NDV и контрольный болюс	0
8	Контрольный болюс	0

Таблица 2c Лечение мышей, пораженных опухолью, пилюлями с 5-FU за два дня до лечения с NDV приводит к большему ответу опухоли на лечение, чем при применении любого агента в отдельности
Группа	Лечение	Полученный ответ опухоли на лечение (CR), %
1	Пилюля 5-FU	0
2	Контрольная пилюля	0
3	Оба NDV и пилюля 5-FU	27
4	NDV и контрольная пилюля	0

Пример 2. NDV в комбинации с иринотеканом, 5-фторурацилом (5-FU) и лейковорином.

Пациенты, страдающие раком, получали лечение NDV, с последующим лечением иринотеканом, лейковорином и 5-фторурацилом. В каждом цикле из 6 недель лечение NDV включало суммарно от 9 до 12 внутривенных введений лекарственного средства, осуществляемых в течение 5 недель, с последующим периодом отдыха в течение одной недели (см. Таблицу 3 ниже). Первая доза каждого цикла содержит от 12 до 24 миллиардов PFU/м² (вводится в течение 3 часов для 1 курса и в течение 1 часа для всех других курсов), с последующими дополнительными дозами от 24 до 48 миллиардов PFU/м² (каждую дозу вводят в течение 1 часа). Иринотекан (180 мг/м² внутривенно в течение 90 минут) вводят каждую последующую неделю, начиная со 2 недели 1 цикла (например, см. Таблицу 8 ниже). Лейковорин (400 мг/м² внутривенно в течение 120 минут) вводят одновременно с каждой дозой иринотекана с последующим немедленным внутривенным болюсным введением 5-FU (400 мг/м²), а затем непрерывной внутривенной инфузией 5-FU (2400 мг/м²) в течение 46 часов, с применением насоса для внутривенных введений. Пациентам назначают также дополнительные 6 недельные курсы (также называемые циклами) NDV, иринотекана, 5-FU и лейковорина.

Таблица 3 Комбинация лечения NDV с применением иринотекана (от 80 до 125 мг/м2 ), лейковорина и 5-FU. Циклы лечения повторяют каждые 6 недель
Цикл	Неделя	NDV?	Иринотекан/Лейковорин/5FU
1	1	Да, две дозы	Нет
2	Да, от двух до 3 доз	Нет
3	Да, от двух до трех доз	Да
4	Да, от одной до 2 доз	Нет
5	Да, от двух до 3 доз	Да
6	Нет	Нет
2	1	Да, две дозы	Да
2	Да, от двух до трех доз	Нет
3	Да, от двух до трех доз	Да
4	Да, от одной до 2 доз	Нет
5	Да, от двух до трех доз	Да
6	Нет	нет

Пример 3. NDV в комбинации с иринотеканом, 5-фторурацилом (5-FU) и лейковорином.

Проводили лечение пациентов с колоректальным раком, как в Примере 2, применяя NDV, иринотекан, лейковорин и 5-фторурацил в режиме, приведенном в Таблицах 4-6 ниже. В каждом цикле из 6 недель лечение NDV включало суммарно 10 внутривенных введений лекарственного средства в течение 5 недель с последующим периодом покоя в течение одной недели (см. Таблицы 4-6 ниже). Первая доза в каждом цикле содержала 12-24 миллиарда PFU/м² (вводимых в течение 3 часов для 1 курса и в течение 1 часа для всех других курсов) с последующим дополнительным введением от 24 до 48 миллиардов PFU/м² (каждую дозу вводили в течение 1 часа). Иринотекан (180 мг/м ² внутривенно в течение 90 минут) вводили каждую последующую неделю, начинаясь с 2 недели 1 цикла. Лейковорин (400 мг/м ² внутривенно в течение 120 минут) вводили одновременно с каждой дозой иринотекана с последующим немедленным внутривенным болюсным введением 5-FU (400 мг/м²) и затем непрерывной внутривенной инфузией 5-FU (2400 мг/м²) в течение 46 часов, с применением насоса для внутривенных введений. Пациентам проводились дополнительные 6 недельные курсы введения (также называемые циклами) NDV, иринотекана, 5-FU и лейковорина.

Таблица 4 Комбинация для лечения больных с колоректальным раком, включающая NDV, иринотекан (от 80 до 125 мг/м2), лейковорин и 5-FU. Циклы лечения повторяли каждые 6 недель
Цикл	Неделя	NDV?	Иринотекан/Лейковорин/5FU
1	1	Да, две дозы, вводимые с перерывом в 3 дня	Нет
2	Да, 3 дозы, вводимые с перерывом в 2 дня	Нет
3	Да, две дозы, вводимые с перерывом в 4 дня	Да
4	Да, одна доза	Нет
5	Да, две дозы, вводимые с перерывом в 4 дня	Да
6	Нет	Нет
2 и более	1	Да, две дозы, вводимые с перерывом в 4 дня	Да
2	Да, две дозы, вводимые с перерывом в 4 дня	Нет
3	Да, две дозы, вводимые с перерывом в 4 дня	Да
4	Да, две дозы, вводимые с перерывом в 4 дня	Нет
5	Да, две дозы, вводимые с перерывом в 4 дня	Да
6	Нет	Нет

Таблица 5 Обычная схема лечения - Цикл 1
Понедельник	Вторник	Среда	Четверг	Пятница	Суббота	Воскресенье
1 NDV Доза 1	2	3	NDV Доза 2	5	6	7
8 NDV Доза 3	9	10 NDV Доза 4	11	12 NDV Доза 5	13	14
15 NDV Доза 6	16	17 иринотекан LV/5FU	18	19 NDV Доза 7	20	21
22 NDV Доза8	23	24	25	26	27	28
29 NDV Доза 9	30	31 иринотекан LV/5FU	32	33 NDV Доза 10	34	35
36	37	38	39	40	41	42

Таблица 6 Обычная схема лечения - Циклы 2 и выше:
Понедельник	Вторник	Среда	Четверг	Пятница	Суббота	Воскресенье
1 NDV Доза 1	2	3 иринотекан LV/5FU	4	5 NDV Доза 2	6	7
8 NDV Доза 3	9	10	11	12 NDV Доза 4	13	14
15 NDV Доза 6	16	17 иринотекан LV/5FU	18	19 NDV Доза 6	20	21
22 NDV Доза8	23	24	25	26 NDV Доза 8	27	28
29 NDV Доза 9	30	31 иринотекан LV/5FU	32	33 NDV Доза 10	34	35
36	37	38	39	40	41	42

Пример 4

Атимическим мышам вводили подкожно 10 миллионов клеток карциномы толстой кишки человека SW620 (приобретенных от American Type Culture Collection, Manassas, VA). Через пять дней (в называемый день 0 ниже), когда размер подкожных опухолей составлял приблизительно 85 мм³, группы из 11-12 животных были рандомизированы на 8 групп, получавших лечение:

- NDV+Иринотекан

- NDV+5-FU-NDV+Иринотекан+5-FU

- Иринотекан

- 5-FU

- Иринотекан+5-FU

- Только носитель

В течение Дня 0 все мыши получали либо NDV (1E+09 PFU), либо носитель с помощью внутривенного пути введения согласно принципу лечения, представленному выше. Через два дня, в День 2, всем мышам выполнили первую интраперитонеальную инъекцию либо иринотекана (25 мг/кг), либо носителя, а затем 1 час спустя выполнили вторую интраперитонеальную инъекцию либо 5-FU (25 мг/кг), либо носителя согласно принципу лечения, представленному выше. Носителем для NDV был водный раствор 5% маннитола/1% лизина. Носителем для иринотекана был физиологический раствор. Носителем для 5-FU была вода для инъекций. У всех мышей периодически определяли размеры опухоли, применяя штангенциркуль.

Как показано на фигуре 1, комбинация NDV+иринотекан+5-FU заметно превосходила по противоопухолевой активности применение каждого агента в отдельности или контроля-носителя. Как показано на фигуре 2, комбинация NDV+иринотекан+5-FU превосходила по противоопухолевой активности любую из комбинаций из двух лекарственных средств (NDV + Иринотекан; Иринотекан+5-FU; NDV+5-FU).

Пример 5

Этот эксперимент выполнили, как в Примере 4, за исключением следующего: (1) лечение начали через семь дней после подкожного введения опухолевых клеток SW620; (2) подкожные опухоли имели размер приблизительно 100 мм³, (3) в группе, получавшей лечение, было 13 мышей; (4) доза иринотекана составляла 15 мг/кг вместо 25 мг/кг; и (5) доза 5-FU составляла 100 мг/кг вместо 25 мг/кг. Как и прежде, животные были рандомизированы на 8 групп, получавших лечение:

- NDV-NDV+Иринотекан

- NDV+5-FU

- NDV+Иринотекан+5-FU

- Иринотекан

- 5-FU-Иринотекан+5-FU

- Только носитель

Как и прежде, в течение Дня 0 все мыши получали либо NDV (1E+09 PFU), либо носитель с помощью внутривенного способа введения согласно принципу лечения, представленному выше. Через два дня, в День 2, всем мышам выполнили первую интраперитонеальную инъекцию либо иринотекана (15 мг/кг), либо носителя, а затем через 1 час выполнили вторую интраперитонеальную инъекцию либо 5-FU (100 мг/кг), либо носителя согласно принципу лечения, представленному выше. У всех мышей периодически определяли размеры опухоли, применяя штангенциркуль.

Как показано на фигуре 3, комбинация NDV+иринотекан+5-FU снова заметно превосходила по противоопухолевой активности применение каждого агента в отдельности или носителя-контроля. Как показано на фигуре 4, комбинация NDV+иринотекан+5-FU заметно превосходила по противоопухолевой активности применение любой из комбинации из двух лекарственных средств (NDV+Иринотекан; Иринотекан+5-FU; NDV+5-FU). Кроме того, получены данные о синергическом противоопухолевом эффекте от использования всех трех агентов, выражаемые в стойкой регрессии опухоли. Как показано в Таблице 7, наблюдалась более полная регрессия опухолей (CRs), которая была стойкой (то есть, продолжалась до Дня 90) при применении тройной комбинации NDV+иринотекан+5-FU, в отличие от любой другой группы лечения, включая применение любой комбинации из двух лекарственных средств (NDV+Иринотекан; Иринотекан+5-FU; NDV+5-FU) и каждого из агентов в отдельности.

Таблица 7 При лечении мышей, пораженных опухолью, с помощью тройной комбинации NDV+Иринотекан+5-FU наблюдались более стойкие и полные реакции пухолей на лечение, чем при применении любого из агентов в отдельности или любой комбинации из двух лекарственных средств
Лечение	Номер мыши	Стойкий эффект CRs*,%
NDV	13	0
NDV+Иринотекан	13	23
NDV+5-FU	13	0
NDV+Иринотекан+ 5-F	13	46
Иринотекан	13	0
5-FU	13	0
Иринотекан+5-FU	13	0
Только носитель	13	0
*CRs, которая продолжалась до Дня 90