вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных и способ ее получения

Формула изобретения

1. Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающая вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток, и пищевые и формообразующие компоненты, отличающаяся тем, что содержит в качестве вакцинного штамма культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU₅₀ /см³, в качестве пищевых и формообразующих компонентов содержит рыбную муку, говяжий жир, парафин или пищевой полимер и неочищенное зерно хлебных злаков, дополнительно содержит маркер - тетрациклин при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный
штамм вируса бешенства с титром инфекционности
6,0-8,5 lg FFU50/см3	1,0-4,0
Тетрациклин	0,3-1,2
Парафин или пищевой полимер	5,0-10,0
Неочищенное зерно хлебных злаков	5,0-15,0
Рыбная мука	30,0-40,0
Говяжий жир	остальное

2. Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.1, отличающаяся тем, что в качестве авирулентного штамма вируса бешенства содержится авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 или ERA G333.

3. Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.1, отличающаяся тем, что в качестве неочищенного зерна хлебных злаков содержится зерно пшеницы, ржи, ячменя, овса.

4. Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.1, отличающаяся тем, что в качестве пищевого полимера содержит коллаген, или крахмал, или целлюлозу.

5. Способ получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающий вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток, и пищевые и формообразующие компоненты, отличающийся тем, что вакцинный штамм вируса бешенства выращивают в перевиваемых монослойно-суспензионных сублиниях клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/13-02 или почки сайги, полученную культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU₅₀/см³, замораживают при минус 20-40°С, далее тетрациклин, парафин, неочищенное зерно хлебных злаков, рыбную муку, говяжий жир перемешивают в течение 25-30 мин при температуре 55-60°С, полученную массу разливают в пластиковые формы при температуре 40-45°С, в каждую ячейку формы помещают культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, и замораживают при температуре минус 20-40°С.

6. Способ получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.5, отличающийся тем, что культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, помещают в контейнеры.

7. Способ получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.6, отличающийся тем, что в качестве контейнера для культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства, используют пакеты из полиэтилена или блистеры из желатина.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, может быть использовано при разработке средств специфической профилактики и, в частности, для получения вакцины против бешенства животных.

Одним из наиболее важных факторов борьбы с бешенством является оральная вакцинация диких плотоядных, являющихся природным резервуаром болезни.

Известен способ получения антирабической вакцины, согласно которому репродуцированный в роллерном монослое культуры перевиваемых клеток ВНК-21 вирус бешенства подвергают термической обработке до сохранения им в обрабатываемой популяции 0,001-0,0001% интрацеребральных мышиных ЛД₅₀, затем термообработанный вирус вновь размножают в названной клеточной системе и полученную вируссодержащую культуральную жидкость используют в качестве производственного посевного материала для заражения производственной роллерной расплодки клеток ВНК-21. Инфицированные клетки производственной расплодки вновь высевают на примерно учетверенное количество бутылей, где они культивируются в течение 5-6 суток, с проведением трех сборов вируссодержащей культуральной жидкости, пригодной для изготовления сухих и жидких антирабических вакцин с иммуногенностью 2,3-2,5 МЕ/мл. Этот способ исключает возможность включения в состав конечного продукта мозговой ткани овец и, следовательно, возбудителя скрейпи. Этим он выгодно отличается от предыдущего аналога (патент РФ 2191600, зарегистрирован 27 октября 2002 г.).

Недостатком аналога является сложность процесса получения целевого продукта, поскольку промышленная реализация сопровождается очень трудоемкими и многочисленными операциями, связанными с раздельным получением вирусного и клеточного производственного посевного материала в роллерных бутылях, а также с мойкой и подготовкой большого количества сосудов культивирования и индивидуальной боксовой работой с каждым из них. Многократное манипулирование с бутылями, содержащими незараженные клетки и клетки, инфицированные вирусом бешенства, увеличивает вероятность бактериального загрязнения вакцинного сырья и обусловливает необходимость тщательного контроля каждого сбора вируса из каждого сосуда культивирования. Все это приводит к удорожанию конечного продукта и затрудняет производство препарата на должном качественном уровне, в необходимых для ветеринарной практики количествах.

Известен также способ получения антирабической вакцины для животных, включающий приготовление посевного материала из штамма вируса бешенства, инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей жидкости с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме (патент РФ № 2287343, «Способ получения антирабической вакцины», бюл. № 26, 31.05.2005, МКИ А61K 39/205).

Наиболее близким техническим решением является вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающая вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток и пищевые и формообразующие компоненты (патент РФ 2311924, МКИ А61K 39/205, бюл. 16, 2007.12.10), в частности, содержит лиофилизированный вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства с защитными компонентами, молоко сухое обезжиренное, лактозу, порошок яичный, мел тонкодисперсный Т-60, мел тонкодисперсный Т-90 и стеарат кальция при определенном соотношении компонентов.

Недостатки этого технического решения состоят в том, что полученная вакцина имеет низкое качество целевого продукта, выявляемое при оральном введении животным, обладает низкой иммуногенностью, обуславливающей не высокую защиту организма диких животных. Она не является гомогенной, брикеты не стандартизованы, не устойчивы к воздействию влаги и могут крошиться при хранении.

Технический результат от использования изобретения заключается в повышении эффективности за счет увеличения антигенной и иммуногенной активности и безвредности вакцины.

Поставленная задача достигается тем, что вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающая вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток и пищевые и формообразующие компоненты, отличается тем, что содержит в качестве вакцинного штамма культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU₅₀/см³, в качестве пищевых и формообразующих компонентов содержит рыбную муку, говяжий жир, парафин или пищевой полимер и неочищенное зерно хлебных злаков, дополнительно содержит маркер-тетрациклин, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 1,0-4,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-
8,5 lg FFU50/см3
Тетрациклин	- 0,3-1,2
Парафин или пищевой полимер	- 5,0-10,0
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 5,0-15,0
Рыбная мука	- 30,0-40,0
Говяжий жир	- остальное

Поставленная задача достигается также тем, что вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.1, отличается тем, что в качестве авирулентного штамма вируса бешенства содержится авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 или ERA G333.

Поставленная задача достигается также тем, что в вакцине против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных в качестве неочищенного зерна хлебных злаков содержится зерно пшеницы, ржи, ячменя, овса.

Поставленная задача достигается также тем, что в вакцине против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных в качестве пищевого полимера содержится коллаген или крахмал или целлюлоза.

Поставленная задача достигается также тем, что в способе получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающем вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток, и пищевые и формообразующие компоненты, вакцинный штамм вируса бешенства выращивают в перевиваемых монослойно-суспензионных сублиниях клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/13-02 или почки сайги, полученную культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU₅₀/см³, замораживают при минус 20-40°С, далее тетрациклин, парафин, неочищенное зерно хлебных злаков, рыбную муку, говяжий жир перемешивают в течение 25-30 минут при температуре 55-60°С, полученную массу разливают в пластиковые формы при температуре 40-45°С, в каждую ячейку формы помещают культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, и замораживают при температуре минус 20-40°С.

Поставленная задача достигается также тем, что в способе получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, помещают в контейнеры.

Поставленная задача достигается также тем, что в способе получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных в качестве контейнера для культуральной жидкости, содержащего авирулентный штамм вируса бешенства, используют пакеты из полиэтилена или блистеры из желатина.

Тетрациклин (химическое название [4S-(4альфа,4а альфа,5а альфа,6бета,12а альфа)]-4-(Диметиламино)-1,4,4а,5,5а,6,11,12а-октагидро-3,6,10,12,12а-пентагидрокси-6-метил-1,11-диоксо-2-нафтаценкарбоксамид (и в виде гидрохлорида или тригидрата) /Брутто-формула C ₂₂H₂₄N₂O₈/) - антибактериальное вещество широкого спектра, бактериостатическое. Нарушает образование комплекса между транспортной РНК и рибосомой, что приводит к нарушению синтеза белка. Активен в отношении грамотрицательных бактерий. Используется в предложении в качестве маркера (при заглатывании вакцины тетрациклин накапливается в зубах животных и по его количеству определяют, какое количество вакцины потребляло животное).

Известно использование перевиваемой монослойно-суспензионной сублинии клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/13-02 для изготовления противовирусных вакцин против ящура и бешенства (патент РФ № 2300562, МКИ C12N 5/06, бюл. № , 2007.06.10)

Известно использование клеток почки сайги для культивирования вируса ящура (патент РФ № 2311924, МКИ А61K 39/205, Бюл. № 16, 2007.12.10), однако нет сведений о возможности культивирования на них вируса бешенства РВ-97 или ERA G333.

Использование неочищенного зерна хлебных злаков позволяет нарушать целостность слизистой ротовой полости животных, что увеличивает эффект их вакцинирования.

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие признаки, аналогичные заявляемым, т.е. предложение соответствует критерию «новизна».

Предложение осуществимо в лабораторных и промышленных условиях, направлено на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 6,0 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 30-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см². На каждый 1 см² носителя пришлось 2,1×10⁵ клеток и 0,4 мл питательной среды.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 30-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 lg FFU ₅₀/см³, которую замораживают при температуре минус 20°С по 1 г. Далее смешивают: 0,3 г тетрациклина, 5 г парафина, 5 г неочищенного овса, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 lg FFU ₅₀/см³, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 1,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 0,3
Парафин	- 5,0
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 5,0
Рыбная мука	- 30,0
Говяжий жир	- остальное

Пример 2

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 7,0 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 30 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 lg FFU ₅₀/см³, которую замораживают при температуре минус 40°С по 4 г. Далее смешивают: 1,2 г тетрациклина, 10 г парафина, 15 г неочищенного овса, 40 г рыбной муки и 29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 lg FFU ₅₀/см³, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 4,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 8,5 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 1,2
Парафин	- 10
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 15,0
Рыбная мука	- 40,0
Говяжий жир	- остальное

Пример 3

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 6,3 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 40-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см². На каждый 1 см² носителя пришлось 2,1×10⁵ клеток и 0,4 мл питательной среды.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU₅₀/см³, которую замораживают при температуре минус 20°С по 1 г. Далее смешивают: 0,3 г тетрациклина, 5 г парафина, 5 г неочищенного зерна пшеницы, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU₅₀/см³, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 1,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 0,3
Парафин	- 5,0
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 5,0
Рыбная мука	- 30,0
Говяжий жир	- остальное

Пример 4

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 7,0 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 30-100 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см². На каждый 1 см² носителя пришлось 2,1×10⁵ клеток и 0,4 мл питательной среды.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU₅₀/см³, которую замораживают при температуре минус 40°С по 4 г. Далее смешивают: 1,2 г тетрациклина, 10 г парафина, 15 г неочищенного зерна пшеницы, 40 г рыбной муки и 29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU₅₀/см³, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 4,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 8,5 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 1,2
Парафин	- 10
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 15,0
Рыбная мука	- 40,0
Говяжий жир	- остальное

Пример 5

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 6,3 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см². На каждый 1 см² носителя пришлось 2,1×10⁵ клеток и 0,4 мл питательной среды.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 lg FFU ₅₀/см³, которую замораживают при температуре минус 20 С по 1 г. Далее смешивают: 0,3 г тетрациклина, 5 г коллагена, 5 г неочищенного зерна ржи, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 lg FFU₅₀ /см³, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 1,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 0,3
Пищевой полимер	- 5,0
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 5,0
Рыбная мука	- 30,0
Говяжий жир	- остальное

Пример 6

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 7,0 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см ². На каждый 1 см² носителя пришлось 2,1×10 ⁵ клеток и 0,4 мл питательной среды.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 lg FFU ₅₀/см³, которую замораживают при температуре минус 40°С по 4 г. Далее смешивают: 1,2 г тетрациклина, 10 г коллагена, 15 г неочищенного зерна ржи, 40 г рыбной муки и 29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 lg FFU ₅₀/см³, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 4,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 8,5 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 1,2
Пищевой полимер	- 10
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 15,0
Рыбная мука	- 40,0
Говяжий жир	- остальное

Пример 7

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 6,3 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см². На каждый 1 см² носителя пришлось 2,1×10⁵ клеток и 0,4 мл питательной среды.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU₅₀/см³, которую замораживают при температуре минус 20°С по 1 г. Далее смешивают: 0,3 г тетрациклина, 5 г крахмала, 5 г неочищенного зерна ячменя, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU₅₀/см³, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 1,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 0,3
Пищевой полимер	- 5,0
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 5,0
Рыбная мука	- 30,0
Говяжий жир	- остальное

Пример 8

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 7,0 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU₅₀/см³, которую замораживают при температуре минус 40°С по 4 г. Далее смешивают: 1,2 г тетрациклина, 10 г крахмала, 15 г неочищенного зерна ячменя, 40 г рыбной муки и 29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU₅₀/см³, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°C, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 4,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 8,5 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 1,2
Парафин	- 10
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 15,0
Рыбная мука	- 40,0
Говяжий жир	- остальное

Пример 9

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 6,3 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см². На каждый 1 см² носителя пришлось 2,1×10⁵ клеток и 0,4 мл питательной среды.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU₅₀/см³, которую замораживают при температуре минус 20°С по 1 г. Далее смешивают: 0,3 г тетрациклина, 5 г целлюлозы, 5 г неочищенного зерна ячменя, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU₅₀/см³, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 1,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 0,3
Пищевой полимер	- 5,0
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 5,0
Рыбная мука	- 30,0
Говяжий жир	- остальное

Пример 10

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 7,0 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см ². На каждый 1 см² носителя пришлось 2,1×10 ⁵ клеток и 0,4 мл питательной среды.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU₅₀/см³, которую замораживают при температуре минус 40°С по 4 г. Далее смешивают: 1,2 г тетрациклина, 10 г целлюлозы, 15 г неочищенного зерна ячменя, 40 г рыбной муки и 29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU₅₀/см³, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 4,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 8,5 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 1,2
Парафин	- 10
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 15,0
Рыбная мука	- 40,0
Говяжий жир	- остальное

Пример 11

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 6,3 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость - вируссодержащий материал с содержанием авирулентного штамма вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 lg FFU₅₀/см ³, который разливают в контейнеры - полиэтиленовые пакетики, по 1 г и замораживают при температуре минус 20°С. Далее смешивают: 0,3 кг тетрациклина, 5 кг парафина, 5 кг неочищенного овса, 30 кг рыбной муки и 58,7 кг говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С. На металлические столы помещают формы пластиковые для розлива массы и наполняют их по 99 г в каждую ячейку формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно) помещают контейнер (полиэтиленовый пакетик) с замороженным вируссодержащим материалом массой 1 г и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты пищевой массой. Заполненную форму по транспортерной ленте помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 1,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 0,3
Парафин	- 5,0
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 5,0
Рыбная мука	- 30,0
Говяжий жир	- остальное

Пример 12

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 7,0 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см ². На каждый 1 см² носителя пришлось 2,1×10 ⁵ клеток и 0,4 мл питательной среды.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость - вируссодержащий материал с содержанием авирулентного штамма вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 lg FFU₅₀/см ³, который разливают в контейнеры - полиэтиленовые пакетики, по 4 г и замораживают при температуре минус 40°С. Далее смешивают: 1,2 кг тетрациклина, 10 кг парафина, 15 кг неочищенного овса, 40 кг рыбной муки и 29,8 кг говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С. На металлические столы помещают формы пластиковые для розлива полученной смеси по 96 г в каждую ячейку формы и распределяют ее шпателем по всей площади формы так, чтобы все ячейки формы были заполнены массой. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно) помещают контейнер (полиэтиленовый пакетик) с замороженным вируссодержащим материалом массой 4 г и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты пищевой массой. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно) помещают контейнер с замороженным вируссодержащим материалом и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты массой для приманок. Заполненную форму по транспортерной ленте помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 4,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 8,5 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 1,2
Парафин	- 10
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 15,0
Рыбная мука	- 40,0
Говяжий жир	- остальное

Пример 13

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 6,3 lg FFU₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см². На каждый 1 см² носителя пришлось 2,1×10⁵ клеток и 0,4 мл питательной среды.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость - вируссодержащий материал с содержанием авирулентного штамма вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 6,0 lg FFU₅₀/см ³, который разливают в контейнеры - желатиновые блистеры, по 1 г и замораживают при температуре минус 20°С. Далее смешивают: 0,3 кг тетрациклина, 5 кг парафина, 5 кг неочищенного овса, 30 кг рыбной муки и 58,7 кг говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 минут при температуре 55°С. На металлические столы помещают формы пластиковые для розлива массы и наполняют их по 99 г в каждую ячейку формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40,0°С в течение всего времени розлива. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5, соответственно) помещают контейнер (желатиновый блистер) с замороженным вируссодержащим материалом массой 1 г и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты пищевой массой. Заполненную форму по транспортерной ленте помещают морозильную камеру и замораживают при температуре минус 20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 1,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 0,3
Парафин	- 5,0
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 5,0
Рыбная мука	- 30,0.
Говяжий жир	- остальное

Пример 14

Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм ERA G333 с титром, например, 7,0 lg FFU ₅₀/см³ и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0×10 ⁹ клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 литров питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.

Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В нашем конкретном примере, через 45 часов культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2×10¹⁰. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 литров свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см². На каждый 1 см² носителя пришлось 2,1×10⁵ клеток и 0,4 мл питательной среды.

Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин, с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 часа, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2, 3, 4 сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2%, 3%, 7%, соответственно.

Объем каждого сбора составляет 55-56 литров. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 литров.

Получена культуральная жидкость - вируссодержащий материал с содержанием авирулентного штамма вируса бешенства ERA G333 с титром инфекционности 8,5 lg FFU₅₀/см ³, который разливают в контейнеры - желатиновые блистеры, по 4 г и замораживают при температуре минус 40°С. Далее смешивают: 1,2 кг тетрациклина, 10 кг парафина, 15 кг неочищенного овса, 40 кг рыбной муки и 29,8 кг говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 минут при температуре 60°С. На металлические столы помещают формы пластиковые для розлива массы и наполняют их по 96 г в каждую ячейку формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0, соответственно) помещают контейнер (желатиновый блистер) с замороженным вируссодержащим материалом массой 4 г и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты пищевой массой. Заполненную форму по транспортерной ленте помещают морозильную камеру и замораживают при температуре минус 40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Культуральная жидкость, содержащая авирулентный	- 4,0
штамм вируса бешенства с титром инфекционности 8,5 lg
FFU 50/см3
Тетрациклин	- 1,2
Парафин	- 10
Неочищенное зерно хлебных злаков	- 15,0
Рыбная мука	- 40,0
Говяжий жир	- остальное

Готовые вакцины, полученные по примерам 1-14, испытывают на прочность (при свободном падении с высоты 10 м вакцина оставалась целой), влагоустойчивость в деминерализованной воде (при экспозиции в течение 24 часов при 20°С вакцина сохраняла форму), контаминацию грибной и бактериальной микрофлорой (количество микробных тел в 1 см³ приманки не превышает 500), стабильность вируссодержащего материала (инфекционная активность вакцинного вируса, помещенного в приманки, не изменялась в течение 15 дней при температуре 4°С и в течение 10 дней при 20°С), безвредность (пятикратные дозы, скормленные 6-месячным щенкам лис, не вызывали видимых клинических изменений в течение 60 суток, интрацеребральное введение 6,0 lg FFU₅₀/см³ 5 лисам и 5 песцам не вызывало клинических признаков бешенства, и все животные оставались клинически здоровыми в течение 90 дней). Через 60 суток после иммунизации 7 из 11 лис, иммунизированных 1 дозой вакцины, имели титры вируснейтрализующих антител выше минимально допустимого предела в 0,5 ME, и 10 из 11 лис (91%) выжили после контрольного заражения вирулентным вирусом бешенства.

Вакцина для орального применения сохраняла свои иммунобиологические характеристики в течение 6 месяцев при минус 20°С.

Представленные данные показывают, что предлагаемая технология изготовления предлагаемой вакцины позволяет получить безвредную и стабильную вакцину против бешенства с высокой иммунологической эффективностью при оральной иммунизации плотоядных животных, обладающую привлекательностью для диких плотоядных животных и высокой поедаемостью.