способы и фармацевтические композиции для лечения и профилактики инфекции гепатита с

Формула изобретения

1. Способ лечения или профилактики вирусной инфекции гепатита С у нуждающегося в этом субъекта, предусматривающий введение субъекту терапевтически эффективного количества 3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорина или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата в сочетании с терапевтически эффективным количеством второго средства или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, где второе средство выбирают из группы, состоящей из:

(a) модуляторов протеазы NS3-4A;

(b) нуклеозидных модуляторов РНК-зависимой РНК-полимеразы NS5B;

(c) ненуклеозидных модуляторов РНК-зависимой РНК-полимеразы NS5B;

(d) рибавирина; и

(e) иммуномодулирующих средств.

2. Способ по п.1, в котором второе средство представляет собой модулятор протеазы NS3-4A.

3. Способ по п.1, в котором второе средство представляет собой BILN 2061 или VX-950.

4. Способ по п.1, в котором второе средство представляет собой (1R,2S,5S)-3-азабицикло[3.1.0]гексан-2-карбоксамид, N-[3-амино-1-циклобутилметил)-2,3-диоксопропил]-3-[(2S)-2-[[[1,1-диметилэтил]амино]карбониламино]-3,3-диметил-1-оксобутил]-6,6-диметил.

5. Способ по п.1, в котором второе средство представляет собой IFN или пэгилированный IFN.

6. Способ по п.1, в которой второе средство представляет собой IFN , IFN 2a, IFN 2b, пэгилированный IFN 2a или пэгилированный IFNa2b.

7. Способ по п.5, дополнительно включающий введение рибавирина.

8. Способ по п.6, дополнительно включающий введение рибавирина.

9. Способ по п.1, в котором указанное введение является последовательным.

10. Способ по п.1, в котором указанное введение является одновременным.

11. Способ по п.1, в котором 3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин или его фармацевтически приемлемую соль или сольват вводят перорально.

12. Способ по п.1, в котором количество вводимого 3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорина составляет приблизительно от 1 до приблизительно 1000 мг в сутки.

13. Способ по п.12, в котором количество вводимого 3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорина составляет приблизительно от 25 до 150 мг в сутки.

14. Фармацевтическая композиция, содержащая 3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин для лечения или профилактики вирусной инфекции гепатита С или его фармацевтически приемлемую соль или сольват в сочетании с терапевтически эффективным количеством второго средства или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, где второе средство выбирают из группы, состоящей из:

(a) модуляторов протеазы NS3-4A;

(b) нуклеозидных модуляторов РНК-зависимой РНК-полимеразы NS5B;

(c) ненуклеозидных модуляторов РНК-зависимой РНК-полимеразы NS5B;

(d) рибавирина; и

(e) иммуномодулирующих средств.

15. Набор, содержащий 3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин для лечения или профилактики вирусной инфекции гепатита С или его фармацевтически приемлемую соль или сольват и второе средство или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, где второе средство выбирают из группы, состоящей из:

(a) модуляторов протеазы NS3-4A;

(b) нуклеозидных модуляторов РНК-зависимой РНК-полимеразы NS5B;

(c) ненуклеозидных модуляторов РНК-зависимой РНК-полимеразы NS5B;

(d) рибавирина; и

(e) иммуномодулирующих средств.

16. Набор по п.15, в котором указанный 3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин или его фармацевтически приемлемую соль или сольват и второе средство или его фармацевтически приемлемую соль или сольват готовят для последовательного введения.

17. Набор по п.15, в котором указанный 3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин или его фармацевтически приемлемую соль или сольват и второе средство или его фармацевтически приемлемую соль или сольват готовят для одновременного введения.

Описание изобретения к патенту

По данной заявке испрашивается приоритет согласно предварительным заявкам США: № № 60/722679, поданной 30 сентября 2005 г., озаглавленной "СПОСОБЫ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ИНФЕКЦИИ ГЕПАТИТА C", David Houck, и 60/787549, поданной 29 марта 2006 г., озаглавленной "СПОСОБЫ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ИНФЕКЦИИ ГЕПАТИТА C", David Houck. Описание указанных выше заявок включено в настоящий документ посредством ссылки.

1. ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к способам и фармацевтическим композициям для применения в лечении и профилактике вирусной инфекции гепатита C у нуждающегося в этом субъекта. В определенных аспектах настоящее изобретение относится к способам лечения инфекции гепатита C посредством введения нуждающемуся в этом субъекту определенного количества 3-эфир- или 3-тиоэфирциклоспорина по изобретению в сочетании со вторым средством в количествах, эффективных для лечения или профилактики инфекции.

2. УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

В 1989 г. был обнаружен вирус, являющийся причиной посттрансфузионного гепатита не-A не-B, и назван вирус гепатита C (HCV). После этого, кроме вирусов типа A, типа B и типа C найдено несколько типов вирусов гепатита, где гепатит, вызываемый HCV, называют гепатит C. Полагают, что субъекты, инфицированные HCV, включают несколько процентов населения мира, а инфекция HCV, как правило, становится хронической.

HCV представляет собой оболочечный РНК-содержащий вирус, где геном представляет собой одноцепочечную плюс-цепь РНК, и он принадлежит роду Hepacivirus из Flavivirus (на основе The International Committee on Taxonomy of Viruses, International Union of Microbiological Societies). Из указанных выше вирусов гепатита, например вирус гепатита B (HBV), который представляет собой ДНК-содержащий вирус, удаляется иммунной системой, и инфекция этим вирусом оканчивается острой инфекцией, за исключением новорожденных и младенцев с еще неразвитой иммунологической компетентностью. В отличие от этого HCV каким-то образом обходит иммунную систему хозяина посредством неизвестного механизма. После инфекции этим вирусом даже у взрослого со зрелой иммунной системой часто развивается персистирующая инфекция.

Когда хронический гепатит ассоциирован с персистирующей инфекцией HCV, он с высокой скоростью развивается в цирроз или рак печени. Удаление опухоли посредством операции не очень помогает, так как у субъекта часто развивается рецидивирующий рак печени вследствие остаточного воспаления в незлокачественных частях.

Таким образом, желателен эффективный терапевтический способ для лечения инфекции гепатита C. Кроме симптоматической терапии для подавления воспаления с применением противовоспалительного средства очень необходима разработка терапевтического средства, которое снижает HCV до низкого уровня без воспаления и устраняет HCV. Оптимальное терапевтическое средство могло бы обеспечивать вирологический ответ, классифицируемый как "устойчивый вирологический ответ", который определяют как невыявляемые уровни вируса в крови через шесть или более месяцев после завершения лечения гепатита C.

В настоящее время эффективным известным способом устранения HCV является только лечение интерфероном в качестве единственного средства или в сочетании с рибавирином. Однако интерферон может устранять вирус только приблизительно у 33-46% подвергаемой воздействию популяции. У остальных субъектов он не оказывает эффекта или обеспечивает только временный эффект. Таким образом, с большой надеждой ожидается лекарственное средство против HCV для использования вместо интерферона или вместе с интерфероном.

Циклоспорин A хорошо известен вследствие его иммуносупрессорной активности и ряда терапевтических применений, включая противогрибковую, противопаразитическую и противовоспалительную активность, а также активность против HIV. О циклоспорине A и его определенных производных сообщалось как об обладающем активностью против HCV, см. Watashi et al., 2003, Hepatology 38:1282-1288, Nakagawa et al., 2004, Biochem. Biophys. Res. Commun. 313:42-7 и Shimotohno and Watashi, 2004, American Transplant Congress, Abstract No. 648 (American Journal of Transplantation, 2004, 4(s8): 1-653).

Однако проблемой для известных циклоспоринов является их нефротоксичность. Например, циклоспорин A (циклоспорин) может вызывать нефротоксичность и гепатотоксичность. Нефротоксичность - серьезное осложнение терапии циклоспорином - характеризуется интенсивной почечной вазоконстрикцией, которая часто прогрессирует до хронического повреждения с необратимым повреждением структуры почки (Busauschina et al., 2004 Transplant Proc. 36: страницы 229S-233S и Myers BD and Newton L., J. Am. Soc. Nephrol. 1991, (2 Supp.1), страницы S45-52). Нефротоксичность, ассоциированную с циклоспорином, отмечали у доли трансплантированных пациентов величиной от 25 до 38%. Почечная дисфункция может начаться в любой момент времени и колеблется от раннего обратимого поражения до позднего прогрессирования до необратимой хронической почечной недостаточности. Острая нефротоксичность может возникнуть вскоре после трансплантации или через недели или месяцы, с олигурией, острым снижением уровня клубочковой фильтрации и почечного тока плазмы (Kahan, 1989).

При длительном введении циклоспорина хроническая нефротоксичность характеризуется прогрессирующим и, как правило, необратимым снижением функции почек, и это опирается на гистологическое поражение в диапазоне от бороздчатого фиброза до ишемического коллапса клубочка, гломерулярного склероза и атрофии канальцев.

Для борьбы с вирусом во всем мире необходимы эффективные способы и композиции для лечения или профилактики инфекции гепатита C.

3. СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Обнаружено, что определенные 3-замещенные производные циклоспорина обладают активностью против HCV. Также обнаружено, что некоторые из указанных 3-замещенных производных циклоспорина обладают неожиданно хорошими токсикологическими профилями или отдельно, или в сочетании со вторым средством. Таким образом, настоящее изобретение относится к способам лечения или профилактики инфекции HCV 3-замещенными производными циклоспорина по изобретению вместе со вторым средством, эффективным для лечения или профилактики инфекции HCV. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям для применения в этих способах.

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к применению производного 3-эфир- или 3-тиоэфирциклоспорина по изобретению вместе со вторым терапевтическим средством, пригодным для лечения или профилактики инфекции HCV. Иллюстративные терапевтические средства подробно описаны в разделах ниже.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, одиночным стандартным лекарственным формам и наборам, пригодным для использования для лечения или профилактики инфекции HCV, содержащим терапевтически или профилактически эффективное количество производного 3-эфир- или 3-тиоэфирциклоспорина и терапевтически или профилактически эффективное количество второго терапевтического средства, пригодного для лечения или профилактики инфекции HCV.

В определенных вариантах осуществления 3-замещенное производное циклоспорина по изобретению выбрано из группы, состоящей из 3-эфирциклоспорина; 3-эфир,4-гамма-гидроксиметиллейцинциклоспорина; 3-тиоэфирциклоспорина; и 3-тиоэфир,4-гамма-гидроксиметиллейцинциклоспорина. В конкретных вариантах осуществления 3-замещенное производное циклоспорина соответствует общей формуле (I):

где A представляет собой остаток формулы (IIa) или (IIb):

B представляет собой этил, 1-гидроксиэтил, изопропил или н-пропил;

R¹ представляет собой:

алкил с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий от одного до шести атомов углерода, необязательно замещенный одной или несколькими группами R³, которые могут являться одинаковыми или различными; алкенил с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий от двух до шести атомов углерода, необязательно замещенный одной или несколькими группами, которые могут являться одинаковыми или различными, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, амино, моноалкиламино и диалкиламино; алкинил с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий от двух до шести атомов углерода, необязательно замещенный одной или одной или несколькими группами, которые могут являться одинаковыми или различными, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, амино, моноалкиламино и диалкиламино;

циклоалкил, содержащий от трех до шести атомов углерода, необязательно замещенный одной или несколькими группами, которые могут являться одинаковыми или различными, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, амино, моноалкиламино и диалкиламино;

алкоксикарбонил с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий от одного до шести атомов углерода;

R² представляет собой изобутил или 2-гидроксиизобутил;

X представляет собой -S(O)_n- или кислород;

R³ выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, карбоксила, алкокси, алкоксикарбонила, -NR⁴ R⁵ и -NR⁶(CH₂)_mNR ⁴R⁵;

R⁴ и R⁵ , которые могут быть одинаковыми или различными, представляют собой: водород;

алкил с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий от одного до шести атомов углерода, необязательно замещенный одной или несколькими группами R⁷, которые могут являться одинаковыми или различными; алкенил с неразветвленной или разветвленной цепью или алкинил, содержащий от двух до четырех атомов углерода;

циклоалкил, содержащий от трех до шести атомов углерода, необязательно замещенный алкилом с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащим от одного до шести атомов углерода;

фенил, необязательно замещенный группами в количестве от одной до пяти, которые могут являться одинаковыми или различными, выбранными из группы, состоящей из галогена, алкокси, алкоксикарбонила, амино, алкиламино и диалкиламино;

гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным или ненасыщенным, содержащим пять или шесть атомов кольца и от одного до трех гетероатомов, которые могут быть одинаковыми или различными, выбранными из азота, серы и кислорода;

или R⁴ и R⁵, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, формируют насыщенное или ненасыщенное гетероциклическое кольцо, содержащее от четырех до шести атомов кольца, где это кольцо может необязательно содержать другой гетероатом, выбранный из группы, состоящей из азота, кислорода и серы, и может быть необязательно замещено группами в количестве от одной до четырех, которые могут являться одинаковыми или различными, выбранными из группы, состоящей из алкила, фенила и бензила;

R⁶ представляет собой водород или алкил с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий от одного до шести атомов углерода;

R⁷ выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, карбоксила, алкоксикарбонила и -NR ⁸R⁹;

R⁸ и R⁹ , которые могут быть одинаковыми или различными, каждый представляет собой водород или алкил с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий от одного до шести атомов углерода;

n представляет собой ноль, один или два;

m представляет собой целое число от двух до четырех;

галоген означает фтор, хлор, бром или йод;

или его фармацевтически приемлемую соль.

В определенных случаях заместители A, B, R¹ и R² могут вносить вклад в оптическую и/или стереоизомерию.

4. КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На фиг. 1A представлена величина противовирусной синергии для комбинации соединения 0 и IFN ;

На фиг. 1B представлена величина противовирусной синергии для комбинации соединения T и IFN ; и

На фиг. 1C представлена величина противовирусной синергии для комбинации циклоспорина A и IFN .

На фиг. 2 представлена величина противовирусной синергии для комбинации соединения O и 2'-C-метилцитидина.

На фиг. 3A представлена величина противовирусной синергии для комбинации соединения O и соединения 3

На фиг. 3B представлена величина цитотоксичности для комбинации соединения O и соединения 3.

5. ОПИСАНИЕ ИЛЛЮСТРАТИВНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

5.1. Определения

Настоящее изобретение относится к способам лечения или профилактики инфекции гепатита C нуждающегося в этом субъекта, фармацевтическим композициям и лекарственным формам, пригодным для таких способов. Способы и композиции подробно описаны в разделах ниже.

В отношении соединений и комплексов по изобретению, если не указано иначе, следующие ниже термины обладают указанными ниже значениями.

"Циклоспорин" относится к любому соединению циклоспорина, известному специалистам в данной области, или его производному. См., например, Ruegger et al, 1976, Helv. Claim. Acta. 59:1075-92; Borel et al, 1977, Immunology 32:1017-25; содержание которых, таким образом, включено в данное описание посредством ссылки в полном объеме. Иллюстративные соединения по изобретению представляют собой производные циклоспорина. Если не указано иначе, циклоспорин, описываемый в настоящем документе, представляет собой циклоспорин A, а производное циклоспорина, описываемое в настоящем документе, представляет собой производное циклоспорина A.

"Алкил" относится к моновалентным насыщенным алифатическим алкильным группам, в частности имеющим приблизительно до 11 атомов углерода, более конкретно, таким как низший алкил, от 1 до 8 атомов углерода, и еще более конкретно - от 1 до 6 атомов углерода. Углеводородная цепь может быть неразветвленной или разветвленной. Этот термин проиллюстрирован такими группами, как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, н-гексил, н-октил, трет-октил и т.п. Термин "низший алкил" относится к алкильным группам, имеющим от 1 до 6 атомов углерода.

"Алкилен" относится к двухвалентным насыщенным алифатическим алкильным группам, в частности с количеством атомов углерода приблизительно до 11, а более конкретно от 1 до 6 атомов углерода, которые могут быть линейными или разветвленными. Этот термин иллюстрирован такими группами, как метилен (-CH₂-), этилен (-CH ₂CH₂-), изомеры пропилена (например, -CH ₂CH₂CH₂- и -CH(CH₃)CH ₂-) и т.п.

"Алкенил" относится к одновалентным олефиновым ненасыщенным алкильным группам предпочтительно с количеством атомов углерода приблизительно до 11, в частности от 2 до 8 атомов углерода, а более конкретно от 2 до 6 атомов углерода, которые могут быть линейными или разветвленными и содержать, по меньшей мере, 1, а в частности - от 1 до 2 участков олефиновой ненасыщенности. Конкретные алкенильные группы включают этенил (-CH-CH₂), н-пропенил (-CH₂CH=CH₂ ), изопропенил (-C(CH₃)=CH₂), винил и замещенный винил и т.п.

"Алкенилен" относится к двухвалентным олефиновым ненасыщенным алкильным группам, в частности с количеством атомов углерода приблизительно до 11, а более конкретно - от 2 до 6 атомов углерода, которые могут быть линейными или разветвленными и содержать, по меньшей мере, 1, а в частности - от 1 до 2 участков олефиновой ненасыщенности. Этот термин иллюстрирован такими группами, как этенилен (-CH=CH-), изомеры пропенилена (например, -CH=CHCH₂- и -C(CH₃)=CH- и -CH=C(CH ₃)-) и т.п.

"Алкинил" относится к ацетильным ненасыщенным алкильным группам, в частности с количеством атомов углерода приблизительно до 11, а более конкретно от 2 до 6 атомов углерода, которые могут быть линейными или разветвленными и содержать, по меньшей мере, 1, а в частности - от 1 до 2 участков алкинильной ненасыщенности. Конкретные неограничивающие примеры алкинильных групп включают ацетиленовую, этинильную (-C CH), пропаргильную (-CH₂C CH) и т.п.

"Алкокси" относится к группе -OR, где R представляет собой алкил. Конкретные алкоксигруппы включают в качестве примера метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, трет-бутокси, втор-бутокси, н-пентокси, н-гексокси, 1,2-диметилбутокси и т.п.

"Алкоксикарбонил" относится к радикалу -C(O)-алкокси, где алкокси является такой, как определено в настоящем документе.

"Амино" относится к радикалу -NH₂.

"Карбоксил" относится к радикалу -C(O)OH.

"Диалкиламино" означает радикал -NRR', где R и R' независимо представляют собой алкильную, замещенную алкильную, арильную, замещенную арильную, циклоалкильную, замещенную циклоалкильную, циклогетероалкильную, замещенную циклогетероалкильную, гетероарильную или замещенную гетероарильную группу, как определено в настоящем документе.

"Галоген" или "гало" относится к хлору, брому, фтору или йоду.

"Гидрокси" относится к радикалу -OH.

"Моноалкиламино" относится к группе алкил-NR'-, где R' выбран из водорода и алкила.

"Нитро" относится к радикалу -NO₂.

"Тиоалкокси" относится к группе -SR, где R представляет собой алкил.

"Фармацевтически приемлемая соль" относится к любой соли соединения по данному изобретению, которая сохраняет свои биологические свойства и которая не является токсичной или иным образом нежелательной для фармацевтического применения. Такие соли можно получать из множества органических и неорганических противоионов, хорошо известных в данной области. Такие соли включают: (1) кислотно-аддитивные соли, образуемые с органическими или неорганическими кислотами, такими как соляная, бромистоводородная, серная, азотная, фосфорная, сульфаминовая, уксусная, трифторуксусная, трихлоруксусная, пропионовая, капроновая, циклопентилпропионовая, гликолевая, глутаровая, пировиноградная, молочная, малоновая, янтарная, сорбиновая, аскорбиновая, яблочная, малеиновая, фумаровая, винная, лимонная, бензойная, 3-(4-гидроксибензоил)бензойная, пикриновая, коричная, миндальная, фталевая, лауриновая, метансульфоновая (метилат), этансульфоновая, 1,2-этандисульфоновая, 2-гидроксиэтансульфоновая, бензолсульфоновая (безулат), 4-хлорбензолсульфоновая, 2-нафталинсульфоновая, 4-толуолсульфоновая, камфорная, камфорсульфоновая, 4-метилбицикло[2.2.2]-окт-2-ен-1-карбоновая, глюкогептоновая, 3-фенилпропионовая, триметилуксусная, трет -бутилуксусная, лаурилсерная, глюконовая, бензойная, глутаминовая, гидроксинафтойная, салициловая, стеариновая, циклогексилсульфаминовая, хинная, муконовая кислота и т.п. кислоты; или (2) соли, формируемые, когда находящийся в исходном соединении кислотный протон или (a) замещен ионом металла, например ионом щелочного металла, ионом щелочноземельного металла или ионом алюминия, или гидроксидами щелочных металлов или щелочноземельных металлов, такими как гидроксид натрия, калия, кальция, магния, алюминия, лития, цинка и бария, аммиака, или (b) координатные соединения с органическим основанием, такие как алифатические, алициклические или ароматические органические амины, такие как аммоний, метиламин, диметиламин, диэтиламин, пиколин, этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, этилендиамин, лизин, аргинин, орнитин, холин, N,N'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, диэтаноламин, прокаин, N-бензилфенэтиламин, N-метилглюкаминпиперазин, трис(гидроксиметил)аминометан, гидроксид тетраметиламмония и т.п.

Дополнительно соли содержат, исключительно в качестве примера и когда соединение содержит основную функциональную группу, соли нетоксичных органических или неорганических кислот, такие как гидрогалогениды, например гидрохлорид и гидробромид, сульфат, фосфат, сульфамат, нитрат, ацетат, трифторацетат, трихлорацетат, пропионат, гексаноат, циклопентилпропионат, гликолят, глутарат, пируват, лактат, малонат, сукцинат, сорбат, аскорбат, малат, малеат, фумарат, тартрат, цитрат, бензоат, 3-(4-гидроксибензоил)бензоат, пикрат, циннамат, манделат, фталат, лаурат, метансульфонат (мезилат), этансульфонат, 1,2-этандисульфонат, 2-гидроксиэтансульфонат, бензолсульфонат (безилат), 4-хлорбензолсульфонат, 2-нафталинсульфонат, 4-толуолсульфонат, камфорaт, камфорсульфонат, 4-метилбицикло[2.2.2]-окт-2-ен-1-карбоксилат, глюкогептонат, 3-фенилпропионат, триметилацетат, трет-бутилацетат, лаурилсульфат, глюконат, бензоат, глутамат, гидроксинафтоат, салицилат, стеарат, циклогексилсульфамат, хиннат, муконат и т.п., натрий, калий, кальций, магний, аммоний, тетраалкиламмоний и т.п.

Термин "физиологически приемлемый катион" относится к нетоксическому, физиологически приемлемому катионному противоиону кислотной функциональной группы. Такие катионы проиллюстрированы катионами натрия, калия, кальция, магния, аммония и тетраалкиламмония и т.п.

"Сольват" относится к соединению по настоящему изобретению или его соли, которое дополнительно включает стехиометрическое или нестехиометрическое количество растворителя, связанного нековалентными межмолекулярными силами, где растворитель представляет собой воду, а сольват представляет собой гидрат.

Следует понимать, что соединения с одинаковой молекулярной формулой, но различающиеся по природе или последовательности связи их атомов или расположению их атомов в пространстве, называют "изомерами". Изомеры, отличающиеся по расположению их атомов в пространстве, называют "стереоизомерами".

Стереоизомеры, которые не являются зеркальными отображениями друг друга, называют "диастереомерами", а стереоизомеры, которые являются неналагающимися зеркальными изображениями друг друга, называют "энантиомерами". Когда соединение содержит центр асимметрии, например, когда он связан с четырьмя различными группами, возможна пара энантиомеров. Энантиомер можно охарактеризовать посредством абсолютной конфигурации его центра ассиметрии и его обозначают как (R) или (S) по правилам Cahn and Prelog (Cahnetal, 1966, Angew. Chem. 78:413-447, Angew. Chem., Int. Ed. Engl. 5:385-414 (список опечаток: Angew. Chem., Int. Ed. Engl. 5:511); Prelog and Helmchen, 1982, Angew. Chem. 94:614-631, Angew. Chem. Internal Ed. Eng. 21:567-583; Mata and Lobo, 1993, Тетраhedron: Asymmetry 4:657-668), или его можно охарактеризовать способом, в котором молекула вращает плоскость поляризованного света, и ее обозначают как правовращающая или левовращающая (т.е., как (+)- или (-)-изомеры, соответственно). Хиральное соединение может существовать в виде любого из индивидуальных энантиомеров или в виде их смеси. Смесь, содержащую равные соотношения энантиомеров, называют "рацемическая смесь".

В определенных вариантах осуществления соединения по данному изобретению могут содержать один или несколько центров ассиметрии; следовательно, такие соединения можно получать в виде индивидуального (R)- или (S)-энантиомера или в виде их смеси. Если не указано иначе, например, посредством обозначения стереохимических свойств в любом из положений формулы, описание или название конкретного соединения в описании и формуле изобретения предназначено для включения обоих индивидуальных энантиомеров и их смесей, рацемических и других. Способы определения стереохимических свойств и разделения стереоизомеров хорошо известны в данной области. В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к стереоизомерам соединений, представленных в настоящем документе при лечении основанием.

В определенных вариантах осуществления соединения по изобретению являются "стереохимически чистыми". Стереохимически чистое соединение обладает уровнем стереохимической чистоты, который специалисты в данной области могли бы признавать как "чистый". Конечно, этот уровень чистоты является меньшим чем 100%. В определенных вариантах осуществления "стереохимически чистое" означает соединение, которое в значительной степени свободно от альтернативных изомеров. В конкретных вариантах осуществления соединение на 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5 или 99,9% свободно от других изомеров.

"Саркозин" или "Sar" относится к аминокислотному остатку, известному специалистам в данной области, со структурой -N(Me)CH₂C(O)-. Специалисты в данной области могут определить саркозин как N-метилглицин.

Как применяют в настоящем документе, термины "субъект" и "пациент" используют в настоящем документе взаимозаменяемо. Термины "субъект" и "субъекты" относятся к животным, таким как млекопитающие, включая не являющихся приматами млекопитающих (например, корова, свинья, лошадь, кошка, собака, крыса и мышь) и приматов (например, обезьяну, такую как яванский макак, шимпанзе, и человека) и, например, человека. В одном из вариантов осуществления субъект устойчив к современным способам лечения инфекции гепатита C или не отвечает на них. В другом варианте осуществления субъект представляет собой сельскохозяйственное животное (например, лошадь, корову, свинью и т.д.) или домашнее животное (например, собаку или кошку). В одном из вариантов осуществления субъект представляет собой человека.

Как применяют в настоящем документе, термины "терапевтическое средство" и "терапевтические средства" относятся к любому средству(ам), которые можно использовать в лечении или профилактике нарушения или одного, или нескольких его симптомов. В определенных вариантах осуществления термин "терапевтическое средство" относится к соединению по изобретению. В некоторых других вариантах осуществления термин "терапевтическое средство" не относится к соединению по изобретению. В одном из вариантов осуществления терапевтическое средство представляет собой средство, для которого, известно, что оно является пригодным или его использовали, или в настоящее время используют для лечения или профилактики нарушения или одного, или нескольких его симптомов.

"Терапевтически эффективное количество" означает количество соединения или комплекса, или композиции, которого при введении субъекту для лечения заболевания достаточно для осуществления такого лечения заболевания. "Терапевтически эффективное количество", среди прочего, может варьировать в зависимости от соединения, заболевания, его тяжести, возраста, массы и т.д. субъекта, подлежащего лечению.

"Лечение" заболевания или нарушения в одном из вариантов осуществления относится к улучшению состояния при заболевании или нарушении, существующих у субъекта. В другом варианте осуществления "лечение" относится к улучшению, по меньшей мере, одного физического параметра, который может быть неразличим субъектом. В другом варианте осуществления лечение относится к модуляции заболевания или нарушения, физически (например, стабилизация явного симптома) или физиологически (например, стабилизация физического параметра), или обоими способами. В другом варианте осуществления лечение относится к задержке начала заболевания или нарушения.

Как применяют в настоящем документе, термины "профилактическое средство" и "профилактические средства", так как их применяют, относятся к любому средству(ам), которые можно использовать для предотвращения нарушения или одного или нескольких его симптомов. В определенных вариантах осуществления термин "профилактическое средство" относится к соединению по изобретению. В некоторых других вариантах осуществления термин "профилактическое средство" не относится к соединению по изобретению. Например, профилактическое средство представляет собой средство, для которого, известно, что оно является пригодным или его использовали, или в настоящее время используют для предотвращения или задержки начала, развития или прогрессирования и/или тяжести нарушения.

Как применяют в настоящем документе, термины "предотвращать", "предотвращающий" и "предотвращение" относятся к предотвращению рецидива, возникновения или развития одного или нескольких симптомов нарушения у субъекта, являющемуся следствием введения лекарственного средства (например, профилактического или терапевтического средства) или введения сочетания лекарственных средств (например, сочетания профилактических или терапевтических средств).

Как применяют в настоящем документе, фраза "профилактически эффективное количество" относится к количеству лекарственного средства (например, профилактического средства), которого достаточно для осуществления предотвращения развития, рецидива или возникновения одного или нескольких симптомов, ассоциированных с нарушением (или для усиления, или улучшения профилактического эффекта(ов) другого лекарственного средства (например, другого профилактического средства)).

Как применяют в настоящем документе, термин "в сочетании" относится к применению более чем одного лекарственного средства (например, одного или нескольких профилактических и/или терапевтических средств). Применение термина "в сочетании" не ограничивает порядок, в котором лекарственные средства (например, профилактические и/или терапевтические средства) вводят субъекту с нарушением. Первое лекарственное средство (например, профилактическое или терапевтическое средство, такое как соединение по изобретению) субъекту с нарушением можно вводить до введения второго лекарственного средства (например, профилактического или терапевтического средства) (например, за 5 минут, 15 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 6 часов, 12 часов, 24 часа, 48 часов, 72 часа, 96 часов, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недель, 6 недель, 8 недель или 12 недель), одновременно с ним, или после него (например, через 5 минут, 15 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 6 часов, 12 часов, 24 часа, 48 часов, 72 часа, 96 часов, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недели, 6 недель, 8 недель или 12 недель).

Как применяют в настоящем документе, термин "синергический" относится к сочетанию соединения по изобретению и другого лекарственного средства (например, профилактического или терапевтического средства), которое использовали или используют в настоящее время для предотвращения, регуляции или лечения нарушения, которое более эффективно, чем суммарные эффекты лекарственных средств. Синергический эффект сочетания лекарственных средств (например, сочетания профилактических или терапевтических средств) позволяет использовать меньшие дозы одного или нескольких лекарственных средств и/или менее частое введение указанных лекарственных средств субъекту с нарушением. Возможность использовать меньшие дозы лекарственного средства (например, профилактического или терапевтического средства) и/или вводить указанное лекарственное средство менее часто уменьшает токсичность, ассоциированную с введением указанного лекарственного средства субъекту без снижения эффективности указанного лекарственного средства для предотвращения или лечения нарушения. Кроме того, синергический эффект может приводить к улучшению эффективности средств для предотвращения или лечения нарушения. Наконец, синергический эффект сочетания лекарственных средств (например, сочетания профилактических или терапевтических средств) может позволить избежать или снизить неблагоприятные или нежелательные побочные эффекты, ассоциированные с применением любого из лекарственных средств по-отдельности.

Термин "этикетка" относится к отображению записанного, распечатанного или графического содержания на первичной упаковке изделия, например к записанному материалу, нанесенному на ампулу, содержащую фармацевтически активное средство.

Термин "маркировка" относится ко всем этикеткам и другому записанному, напечатанному или графическому содержимому на изделии или любых из его контейнеров или оберток, или к сопровождению такого изделия, например, вкладышем в упаковку или инструктивными видеозаписями или DVD, сопровождающими контейнер фармацевтически активного средства или относящимися к нему.

5.2. Варианты осуществления изобретения

Настоящее изобретение частично основано на открытии того, что соединения по изобретению эффективны для лечения и профилактики инфекции гепатита C у нуждающегося в этом субъекта. Таким образом, настоящее изобретение относится к способам лечения инфекции гепатита C у нуждающегося в этом субъекта. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам профилактики инфекции гепатита C у нуждающегося в этом субъекта. В основном способы по изобретению включают стадию введения нуждающемуся в этом субъекту определенного количества соединения по изобретению, эффективного для лечения или профилактики инфекции гепатита C, в сочетании со вторым средством, эффективным для лечения или профилактики инфекции. Способы лечения подробно описаны в разделах ниже. Соединение может представлять собой соединение по изобретению, как описано в разделах ниже, а второе средство может представлять собой любое второе средство, описанное в разделах ниже. В определенных вариантах осуществления соединение находится в форме фармацевтической композиции или лекарственной формы, как описано в разделах ниже.

Не намереваясь связываться любой конкретной теорией процесса, полагают, что соединения по изобретению ингибируют репликацию вируса гепатита C (HCV) посредством механизма, отличного от механизма современных лекарственных средств против HCV. Современное лекарственное средство против HCV, как указано выше, представляет собой совместное введение интерферона и рибавирина. Полагают, что современное лекарственное средство для лечения или профилактики инфекции HCV действует посредством регуляции иммунной системы субъекта. Полагают, что соединения по настоящему изобретению действуют посредством регуляции или ингибирования клеточных процессов, критичных для репликации HCV у хозяина. Такие механизмы обсуждаются в примерах ниже. Действуя посредством нового механизма, соединения, композиции и способы по изобретению предоставляют новое лекарственное средство для лечения или профилактики инфекции HCV. По существу они эффективны для любого субъекта инфицированного HCV или с риском инфицирования HCV, а особенно для субъектов, не отвечающих на современную терапию.

В вариантах осуществления изобретения субъект может представлять собой любого субъекта, инфицированного HCV или с риском инфекции HCV. Инфекцию или риск инфекции можно определить любым способом, считающимся подходящим практикующим специалистом в данной области. В одном из вариантов осуществления субъекты представляют собой людей, инфицированных HCV.

HCV может представлять собой любой HCV, известный специалистам в данной области. Существует, по меньшей мере, шесть генотипов и, по меньшей мере, 50 подтипов HCV, известных в настоящее время специалистам в данной области. HCV может быть любого генотипа или подтипа, известного специалистам. В определенных вариантах осуществления генотип или подтип HCV еще не охарактеризован. В определенных вариантах осуществления субъект инфицирован HCV с одним генотипом. В некоторых вариантах осуществления субъект инфицирован HCV нескольких подтипов, квазивидов или нескольких генотипов.

В определенных вариантах осуществления HCV представляет собой HCV генотипа 1 и может быть любого подтипа. Например, в определенных вариантах осуществления HCV представляет собой HCV генотипа 1a, 1b или 1c. Полагают, что инфекция HCV генотипа 1 плохо отвечает на современную терапию интерфероном. Способы по настоящему изобретению могут быть эффективными для лечения инфекции HCV с генотипом 1.

В определенных вариантах осуществления HCV отличается от HCV с генотипом 1. В определенных вариантах осуществления HCV представляет собой HCV с генотипом 2 и может быть любого подтипа. Например, в определенных вариантах осуществления HCV представляет собой HCV подтипа 2a, 2b или 2c. В определенных вариантах осуществления HCV представляет собой HCV с генотипом 3 и может быть любого подтипа. Например, в определенных вариантах осуществления HCV представляет собой HCV подтипа 3a, 3b или 10a. В определенных вариантах осуществления HCV представляет собой HCV с генотипом 4 и может быть любого подтипа. Например, в определенных вариантах осуществления HCV представляет собой HCV подтипа 4a. В определенных вариантах осуществления HCV представляет собой HCV с генотипом 5 и может быть любого подтипа. Например, в определенных вариантах осуществления HCV представляет собой HCV подтипа 5a. В определенных вариантах осуществления HCV представляет собой HCV с генотипом 6 и может быть любого подтипа. Например, в определенных вариантах осуществления HCV представляет собой HCV подтипа 6a, 6b, 7b, 8b, 9a или 11a. См., например, Simmonds, 2004, J. Gen. Virol. 85:3173-88; Simmonds, 2001, J. Gen. Virol, 82, 693-712, содержание которых в полном объеме включено в данное описание посредством ссылки.

В определенных вариантах осуществления субъект никогда не проходил лечения или профилактики инфекции HCV. В дополнительных вариантах осуществления изобретения субъект ранее проходил лечение или профилактику инфекции HCV. Например, в определенных вариантах осуществления субъект не отвечал на лечение HCV. Фактически, при современной терапии интерфероном, до 50% или более субъектов с HCV не отвечают на лечение. В определенных вариантах осуществления субъект может представлять собой субъекта, который проходил лечение, но продолжал страдать от вирусной инфекции или одного, или нескольких ее симптомов. В определенных вариантах осуществления субъект может представлять собой субъекта, который проходил лечение, но не смог достичь устойчивого вирологического ответа. В определенных вариантах осуществления субъект проходил лечение инфекции HCV, но не смог продемонстрировать снижения уровней РНК HCV в 2 log ₁₀ раз через 12 недель после лечения. Полагают, что субъекты, не продемонстрировавшие более чем 2 log₁₀ раза снижения сывороточной РНК HCV через 12 недель после лечения, имеют 97-100% шанс отсутствия ответа. Так как соединения по настоящему изобретению действуют посредством механизма, отличного от современного лекарственного средства против HCV, полагают, что соединения по изобретению должны являться эффективными при лечении таких неотвечающих субъектов.

В определенных вариантах осуществления субъект представляет собой субъекта, который прервал лечение HCV вследствие одного или нескольких осложнений, ассоциированных с лечением. В определенных вариантах осуществления субъект представляет собой субъекта, где современное лекарственное средство не показано. Например, определенные лекарственные средства против HCV ассоциированы с психоневрологическими событиями. Интерферон (IFN)-альфа и рибавирин ассоциированы с высоким уровнем депрессии. Симптомы депрессии в ряде медицинских нарушений были связаны с плохим исходом. В течение лечения HCV у субъектов с предшествующим психическим нарушением или без возникали опасные для жизни или смертельные психоневрологические события, включая суицид, суицидальные и связанные с убийством идеи, депрессия, повторение привыкания к лекарственному средству/передозировки лекарственного средства и агрессивное поведение. Ограничение для лечения хронического гепатита C представляет собой индуцированная интерфероном депрессия, особенно для субъектов с психическими нарушениями. Психические побочные эффекты являются частыми при лечении интерфероном и являются причиной приблизительно от 10 до 20% приостановок лечения инфекции HCV.

Таким образом, настоящее изобретение относится к способам лечения или профилактики инфекции HCV у субъектов, где риск психоневрологических событий, таких как депрессия, служит противопоказанием лечению современным лекарственным средством против HCV. Настоящее изобретение также относится к способам лечения или профилактики инфекции HCV у субъектов, где психоневрологическое событие, такое как депрессия или ее риск, служит причиной приостановки лечения современным лекарственным средством против HCV. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам лечения или профилактики инфекции HCV у субъектов, где психоневрологическое событие, такое как депрессия и ее риск, служит причиной снижения дозы современного лекарственного средства против HCV.

Современное лекарственное средство также противопоказано субъектам, гиперчувствительным к интерферону или рибавирину, или обоим, или к любому другому компоненту фармацевтического препарата для введения интерферона или рибавирина. Современное лекарственное средство не показано для субъектов с гемоглобинопатиями (например, большая талассемия, серповидноклеточная анемия) и для других субъектов с риском гематологических побочных эффектов от современного лекарственного средства. Частые гематологические побочные эффекты включают супрессию костного мозга, нейтропению и тромбоцитопению. Кроме того, рибавирин токсичен для эритроцитов и ассоциирован с гемолизом. Таким образом, настоящее изобретение также относится к способам лечения или профилактики инфекции HCV у субъектов, гиперчувствительных к интерферону или рибавирину, или обоим, у субъектов с гемоглобинопатией, например, у субъектов с большой талассемией и субъектов с серповидноклеточной анемией и у других субъектов с риском гематологических побочных эффектов от современного лекарственного средства.

В определенных вариантах осуществления субъект получал предыдущее лекарственное средство против HCV и прервал лечение до применения способа по изобретению. В дополнительных вариантах осуществления субъект проходил лечение и продолжал получать предыдущее лекарственное средство наряду с применением способа по изобретению. Способы по изобретению можно проводить совместно с другим лечением HCV в соответствии с решением специалиста в данной области. В определенных вариантах осуществления способы или композиции по изобретению можно применять совместно с уменьшенной дозой другого лекарственного средства против HCV.

В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения субъекта, который устойчив к лечению интерфероном. Например, в некоторых вариантах осуществления субъект может представлять собой субъекта, который не смог ответить на лечение одним или несколькими средствами, выбранными из группы, состоящей из интерферона, интерферона , пэгилированного интерферона , интерферона и рибавирина, интерферона и рибавирина, и пэгилированного интерферона и рибавирина. В некоторых вариантах осуществления субъект может представлять собой субъекта, который плохо отвечал на лечение одним или несколькими средствами, выбранными из группы состоящей из интерферона, интерферона , пэгилированного интерферона , интерферона и рибавирина, интерферона и рибавирина, и пэгилированного интерферона и рибавирина. Также можно использовать пролекарственное средство из рибавирина, такое как тарибавирин.

В дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения инфекции HCV у субъектов, которые являются беременными или могут забеременеть, так как современное лекарственное средство также противопоказано для беременных женщин.

В определенных вариантах осуществления у субъекта имеется совместная инфекция HCV и HIV или он подвержен риску такой инфекции. Например, в США 30% субъектов с HIV коинфицированы HCV и данные указывают на то, что люди, инфицированные HIV, имеют более быстрое течение инфекции гепатита C. Maier and Wu, 2002, World J Gastroenterol 8:577-57. Способы по изобретению можно использовать для лечения или профилактики инфекции HCV у таких субъектов. Полагают, что устранение HCV у этих субъектов снизит смертность от заболевания печени в последней стадии. Фактически риск прогрессирующего заболевания печени у субъектов с тяжелым СПИД-ассоциированным иммунодефицитом выше, чем у субъектов без него. См., например, Lesens et al, 1999, J. Infect. Dis. 179:1254-1258. В одном из вариантов осуществления соединения по изобретению показаны для супрессии HIV у субъектов с HIV. См., например, патенты США № № 5977067; 5994299, 5948884 и 6583265 и публикации PCT № № W099/32512, WO99/67280, содержание которых, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Таким образом, в определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения или профилактики инфекции HIV и инфекции HCV у нуждающихся в этом субъектов.

В определенных вариантах осуществления способы или композиции по изобретению применяют у субъекта после трансплантации печени. Гепатит C является лидирующей причиной трансплантации печени в США, а многие субъекты, перенесшие трансплантацию печени, остаются HCV-позитивными после трансплантации. Настоящее изобретение относится к способам лечения таких субъектов с рецидивом HCV соединением или композицией по изобретению. В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения субъекта до, во время или после трансплантации печени для предотвращения рецидива инфекции HCV.

5.2.1. Соединения, применяемые по изобретению

В определенных вариантах осуществления соединение по изобретению представляет собой производное циклоспорина, эффективное для лечения или профилактики инфекции гепатита C у нуждающегося в этом субъекта. Как применяют в настоящем документе, если не указано иначе, термин "циклоспорин" относится к соединению циклоспорина A, как известно специалистам в данной области. См., например, Ruegger et al, 1976, Helv. Chim. Acta. 59:1075-92; Borel et al, 1977, Immunology 32:1017-25; содержание которых, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Термин "производное циклоспорина" относится к любому производному циклоспорина с активностью против инфекции гепатита C, несмотря на то является ли производное природным, синтетическим или полусинтетическим.

В конкретных вариантах осуществления производное циклоспорина отличается от циклоспорина A по третьему положению, т.е. по положению N-метилглицина, известному специалистам в данной области. В определенных вариантах осуществления производное циклоспорина представляет собой 3-эфирциклоспорин. В дополнительных вариантах осуществления производное циклоспорина представляет собой 3-тиоэфирциклоспорин. Производное циклоспорина может дополнительно включать другие модификации циклоспорина, известные специалистам в данной области. В дополнительных вариантах осуществления циклоспорин дополнительно содержит остаток 4-гамма-гидроксиметиллейцина. Таким образом, в определенных вариантах осуществления производное циклоспорина представляет собой 3-эфир, 4-гамма-гидроксиметиллейцин. В дополнительных вариантах осуществления производное циклоспорина представляет собой 3-тиоэфир, 4-гамма-гидроксиметиллейцин.

В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения или профилактики инфекции гепатита C у субъекта, предусматривающим введение субъекту терапевтически или профилактически эффективного количества производного циклоспорина общей формулы (I) или или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата:

вместе со вторым средством, эффективным для лечения или профилактики инфекции HCV.

В формуле (I) A, B, X, R¹ и R² являются такими, как определено выше.

В определенных вариантах осуществления A соответствует формуле (IIa). В дополнительных вариантах осуществления A соответствует формуле (IIb). В одном из вариантов осуществления A представляет собой остаток формулы (IIa) выше.

В определенных вариантах осуществления B представляет собой этил.

В определенных вариантах осуществления R¹ представляет собой 2-аминоэтил, 2-аминопропил, 2-моноалкиламиноэтил, 2-моноалкиламинопропил, 2-диалкиламиноэтил 2-диалкиламинопропил, 2-моноциклоалкиламиноэтил, 2-моноциклоалкиламинопропил, 2-дициклоалкиламиноэтил или 2-диалкиламинопропил, где алкил представляет собой линейную или разветвленную цепь, содержащую от одного до четырех атомов углерода, а циклоалкил содержит от трех до шести атомов углерода.

В дополнительном варианте осуществления R¹ представляет собой алкил с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий от одного до четырех атомов углерода, в другом варианте осуществления - один или два атомов углерода, необязательно замещенный одной группой R³.

В определенных вариантах осуществления R² представляет собой изобутил. В других вариантах осуществления R² представляет собой 2-гидроксиизобутил.

В одном из вариантов осуществления X представляет собой кислород или серу. В определенных вариантах осуществления X представляет собой кислород. В дополнительных вариантах осуществления X представляет собой серу.

В определенных вариантах изобретения R³ выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, карбоксила, алкоксикарбонила, -NR⁴R⁵ и -NR⁶(CH₂)_mNR⁴R ⁵.

R³ представляет собой гидрокси или -NR⁴R⁵, где каждый из R⁴ и R⁵, которые могут являться одинаковыми или различными, представляет собой водород или алкил с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий от одного до шести атомов углерода или от одного до четырех атомов углерода. В дополнительном варианте осуществления R³ представляет собой -NR⁴R⁵ .

В определенных вариантах изобретения, когда X представляет собой серу, R¹ выбран из группы, состоящей из N,N-диметиламиноэтила, N,N-диэтиламиноэтила, N-метил-N- трет-бутиламиноэтила и N-этил-N-трет-бутиламиноэтила.

В определенных вариантах осуществления X представляет собой серу, R² представляет собой изобутил, а R ¹ выбран из группы, состоящей из N,N-диметиламиноэтила, N,N-диэтиламиноэтила, N-метил-N-трет-бутиламиноэтила и N-этил-N-трет-бутиламиноэтила.

В определенных вариантах осуществления X представляет собой серу, R² представляет собой 2-гидроксиизобутил, а R¹ выбран из группы, состоящей из N,N-диметиламиноэтила, N,N-диэтиламиноэтила, N-метил-N-трет-бутиламиноэтила и N-этил-N-трет-бутиламиноэтила.

Кроме того, соединениями формулы (I) являются соединения, у которых R¹ представляет собой алкил с линейной или разветвленной цепью, содержащий от двух до шести атомов углерода, необязательно замещенный группой R³; или алкенил с линейной или разветвленной цепью, содержащий от двух до четырех атомов углерода; а R³ представляет собой гидрокси, -NR⁴R⁵ или метокси.

Кроме того, соединениями формулы (I) являются соединения, у которых каждый из R⁴ и R⁵, которые могут являться одинаковыми или различными, представляет собой водород; алкил с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий от одного до четырех атомов углерода, или R⁴ и R⁵ , вместе с атомом азота, к которому они присоединены, формируют насыщенное кольцо, содержащее в кольце шесть атомов; где атомы кольца, отличные от азота, независимо выбраны из углерода и кислорода.

В дополнительном варианте осуществления R³ выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, карбоксила, алкоксикарбонила, -NR⁴R⁵ и -NR⁶ (CH2)_mNR⁴R⁵. Переменная m может представлять собой целое число от двух до четырех.

В определенных вариантах осуществления галоген представляет собой фтор, хлор или бром. В одном из вариантов осуществления галоген представляет собой фтор или хлор.

В одном из вариантов осуществления в способах и композициях, предоставленных в настоящем документе, применяют соединения формулы (I), в которых X представляет собой кислород, а R¹ представляет собой 2-метоксиэтил, или их фармацевтически приемлемые соли.

В другом варианте осуществления в способах и композициях, предоставленных в настоящем документе, применяют соединения формулы (I), в которых X представляет собой кислород или серу, а R¹ представляет собой пропил, замещенный -NR⁴R⁵ или метокси, или их фармацевтически приемлемые соли.

В числе соединений, применяемых в способах и композициях по настоящему изобретению, находятся производные циклоспорина, перечисленные ниже:

3-метоксициклоспорин;

3-этоксициклоспорин;

3-пропоксициклоспорин;

3-изопропоксициклоспорин;

3-(2-аминоэтокси)циклоспорин;

3-(2-N-метиламиноэтокси)циклоспорин;

3-(2-N-этиламиноэтокси)циклоспорин;

3-(2-диметиламиноэтокси)циклоспорин;

3-(2-диэтиламиноэтокси)циклоспорин;

3-(2-трет-бутил-метиламиноэтокси)циклоспорин;

3-(2-трет-бутил-этиламиноэтокси)циклоспорин;

3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-4-[4'-гидрокси-MeLeu]-циклоспорин;

3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-циклоспорин;

3-[(R)-2-(гидрокси)этилтио-Sar]-4-[4'-гидрокси-MeLeu]-циклоспорин;

3-[(R)-2-(гидрокси)этилтио-Sar]-циклоспорин;

3-[(R)-2-(N,N-диэтиламино)этилтио-Sar]-4-[4'-гидрокси-MeLeu]-циклоспорин;

3-[(R)-2-(N,N-диэтиламино)этилтио-Sar]-циклоспорин;

3-(втор-бутокси)циклоспорин;

3-[2-(1,4-дигидропирид-1-ил)этокси)циклоспорин;

и их фармацевтически приемлемые соли.

В определенных вариантах осуществления соединения, пригодные в способах и композициях по изобретению, включают следующее:

Соединение	Название
A	3-метоксициклоспорин
B	3-(2-аминоэтокси)циклоспорин
C	3-(2-N,N-диметиламиноэтокси)циклоспорин
D	3-(изопропокси)циклоспорин
E	3-(2-этилбутокси)циклоспорин
F	3-(2,2-диметилпропокси)циклоспорин
G	3-(2-гидроксиэтокси)циклоспорин
H	3-(3-гидроксипропокси)циклоспорин
I	3-[2-(N-метиламино)этокси]циклоспорин
J	3-[2-(N-метил-N-изопропиламино)этокси]циклоспорин
K	3-[2-(пиперидин-1-ил)этокси]циклоспорин
L	3-[2-(N-морфолин)этокси)циклоспорин
M	3-этоксициклоспорин
N	3-(2-метоксиэтилтио)-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин
O	3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин
P	3-этилтиоциклоспорин
Q	3-пропенилтиоциклоспорин
R	3-[(2-метокси)этилтио]циклоспорин
S	3-(метилтио)-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин
T	3-(метокси)-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин
U	3-(проп-2-ен-1-окси)-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин
V	3-(изопропокси)-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин
W	3-(этокси)-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин
X	3-[2-(метокси)этокси]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин
Y	3-[3-(метокси)пропокси]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин

В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики вирусной инфекции гепатита C у субъекта посредством введения нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества соединения по изобретению, выбранного из группы, состоящей из соединения от A до Y, или их фармацевтически приемлемых солей, и эффективного количества второго средства, как описано ниже.

В одном из вариантов осуществления соединение представляет собой соединение O или его фармацевтически приемлемую соль вследствие высокого уровня его активности и его токсикологического профиля, как описано в примерах ниже.

В другом варианте осуществления в предоставленных в настоящем документе способах и композициях применяют соединения C и T или их фармацевтически приемлемые соли.

В определенных вариантах осуществления производные циклоспорина по изобретению, в которых R¹ представляет собой алкил, замещенный одной или несколькими группами R³, где R³ представляет собой -NR⁴ R⁵ или -NR⁶(CH₂)_m NR⁴R⁵, а R⁴, R⁵ и R⁶ являются такими, как определено выше, известными способами можно конвертировать в кислотно-аддитивные соли. Следует понимать, что эти соли также входят в объем настоящего изобретения. Иллюстративные соли по изобретению и способы их получения описаны в разделах ниже.

В качестве примера фармацевтически приемлемых солей можно привести соли с щелочными металлами, например, натрием, калием или литием, или с щелочноземельными металлами, например, магнием или кальцием, аммонийную соль или соли азотистых оснований, например этаноламин, диэтаноламин, триметиламин, триэтиламин, метиламин, пропиламин, диизопропиламин, N,N-диметилэтаноламин, бензиламин, дициклогексиламин, N-бензилфенэтиламин, N,N'-дибензилэтилендиамин, дифенилендиамин, бензгидриламин, хинин, холин, аргинин, лизин, лейцин или дибензиламин.

В качестве примера аддитивных солей с фармацевтически приемлемыми кислотами можно привести соли, формируемые с неорганическими кислотами, например гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты; нитраты или фосфаты, или с органическими кислотами, например сукцинаты, фумараты, тартраты, ацетаты, пропионаты, малеаты, цитраты, метансульфонаты, этансульфонаты, п-толуолсульфонаты, изотионаты или эмбонаты, или с замещенными производными этих соединений. Предпочтительными солями являются сукцинат, фосфат, цитрат, ацетат, гидрохлориды, метансульфонат и пропионат. Определенные из этих солей соли являются новыми и по существу составляют дополнительный элемент по настоящему изобретению.

В практических вариантах осуществления изобретения соединение находится в чистой форме. Чистота может представлять собой любую чистоту, известную специалистам в данной области, такую как абсолютная чистота, стереохимическая чистота или обе. В определенных вариантах осуществления соединение по изобретению является, по меньшей мере, на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% чистым. В определенных вариантах осуществления соединение по изобретению является, по меньшей мере, на 90% чистым. В дополнительных вариантах осуществления по изобретению соединение является, по меньшей мере, на 98% чистым. Способы очистки соединений по изобретению описаны ниже.

5.2.2. Получение соединений по изобретению

Соединения по изобретению можно приготовлять, выделять или получать любым способом, известным специалистам в данной области. Иллюстративные способы получения подробно описаны в примерах ниже.

Кроме того, циклоспорины, замещенные в 3-положении тиоэфирными или эфирными группами можно получать способами, описанными в патентах США № № 5977067; 5994299, 5948884 и 6583265 и в публикациях PCT № № W099/32512, WO99/67280. Таким образом, содержание этих ссылок включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

Соединения после синтеза можно очищать любым способом, известным специалистам в данной области для очистки производных циклоспорина. В определенных вариантах осуществления соединение по изобретению очищают хроматографией. Например, соединение по изобретению можно очистить с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Пригодным примером очистки ВЭЖХ является следующее: колонку ВЭЖХ с размерами 10 мм (диаметр) × 50 мм (длина), содержащую 5-мкм неподвижную фазу с обращенной фазой (октадецилсилан или октасилан) уравновешивают подвижной фазой, содержащей 0,1% муравьиную кислоту, от 50 до 90% воды и от 50 до 10% ацетонитрила. Важно, что колонку нагревают, по меньшей мере, до 65°C, или, теоретически, до 85°C. Поток подвижной фазы составляет от 10 до 16 мл/минуту и нагрет до 60°C. На колонку, в объеме растворителя от 0,1 до 0,8 мл, предпочтительно диметилсульфоксида, наносят приблизительно от 5 до 25 мг производного циклоспорина. Поток подвижной фазы поддерживают, а его состав приводят в соответствие с линейным градиентом до 90% или 100% ацетонитрила в течение периода от 20 до 60 минут. Пики соединения детектируют с применением испарительной детекции светорассеяния и/или детекции по изменяющемуся ультрафиолетовому излучению при установках длине волны от 205 до 215 нм. Пики соединения собирают в подвижной фазе, которую удаляют в вакууме; образцы тщательно высушивают в вакууме и анализируют посредством ЯМР, IR и ВЭЖХ-МС для определения идентичности и чистоты.

5.2.3. Фармацевтические соли соединений по изобретению

Как указано выше, производное циклоспорина по изобретению может находиться в нейтральной форме или в форме соли. Форма соли может представлять собой любую форму соли, известную специалистам в данной области. Особенно подходящими формами соли являются формы соли, которые координированы с фосфатом, цитратом, ацетатом, хлоридом, метансульфонатом или пропионатом.

Когда соединение по настоящему изобретению, например соединение по изобретению, замещено основной группой, может формироваться кислотно-аддитивная соль. Кислота, которую можно использовать для получения кислотно-аддитивной соли, предпочтительно включает кислоту, которая при комбинировании со свободным основанием образует фармацевтически приемлемую соль, т.е. соль, анион которой является нетоксичным для субъекта в фармацевтических дозах соли. Фармацевтически приемлемые соли в объеме изобретения представляют собой соли, полученные из следующих солей: неорганические кислоты, такие как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, сульфаминовая кислота и азотная кислота; и органические кислоты, такие как уксусная, трифторуксусная, трихлоруксусная, пропионовая, капроновая, циклопентилпропионовая, гликолевая, глутаровая, пировиноградная, молочная, малоновая, янтарная, сорбиновая, аскорбиновая, яблочная, малеиновая, фумаровая, винная, лимонная, бензойная, 3-(4-гидроксибензоил)бензойная, пикриновая, коричная, миндальная, фталевая, лауриновая, метансульфоновая, этансульфоновая, 1,2-этандисульфоновая, 2-гидроксиэтансульфоновая, бензолсульфоновая, 4-хлорбензолсульфоновая, 2-нафталинсульфоновая, 4-толуолсульфоновая, камфорная, камфорсульфоновая, 4-метилбицикло[2.2.2]-окт-2-ен-1-карбоновая, глюкогептоновая, 3-фенилпропионовая, триметилуксусная, трет -бутилуксусная, лаурилсерная, глюконовая, бензойная, глутаминовая, гидроксинафтойная, салициловая, стеариновая, циклогексилсульфаминовая, хинная, муконовая кислота и т.п. кислоты.

Соответствующие кислотно-аддитивные соли включают гидрогалогениды, например гидрохлорид и гидробромид, сульфат, фосфат, сульфамат, нитрат, ацетат, трифторацетат, трихлорацетат, пропионат, гексаноат, циклопентилпропионат, гликолят, глутарат, пируват, лактат, малонат, сукцинат, сорбат, аскорбат, малат, малеат, фумарат, тартрат, цитрат, бензоат, 3-(4-гидроксибензоил)бензоат, пикрат, циннамат, манделат, фталат, лаурат, метансульфонат (мезилат), этансульфонат, 1,2-этандисульфонат, 2-гидроксиэтансульфонат, бензолсульфонат (безилат), 4-хлорбензолсульфонат, 2-нафталинсульфонат, 4-толуолсульфонат, камфорат, камфорсульфонат, 4-метилбицикло[2.2.2]-окт-2-ен-1-карбоксилат, глюкогептонат, 3-фенилпропионат, триметилацетат, трет-бутилацетат, лаурилсульфат, глюконат, бензоат, глутамат, гидроксинафтоат, салицилат, стеарат, циклогексилсульфамат, хиннат, муконат и т.п.

По дополнительной характеристике изобретения кислотно-аддитивные соли соединений по данному изобретению можно получать реакцией свободного основания с соответствующей кислотой посредством применения или адаптации известных способов. Например, кислотно-аддитивные соли соединений по данному изобретению можно получать или посредством растворения свободного основания в водном или водно-спиртовом растворе или других подходящих растворителях, содержащих подходящую кислоту, и выделением соли посредством испарения раствора, или посредством проведения реакции свободного основания и кислоты в органическом растворе, в случае чего соль отделяется непосредственно или ее можно получить посредством концентрирования раствора.

Кислотно-аддитивные соли соединений по данному изобретению, например соединений по изобретению, можно восстанавливать из солей посредством применения или адаптации известных способов. Например, исходные соединения по изобретению можно восстанавливать из их кислотно-аддитивных солей посредством обработки щелочами, например, раствором водного бикарбоната натрия или водным раствором аммиака.

Когда соединение по изобретению, например соединение по изобретению, замещено кислотной группой, могут формироваться основно-аддитивные соли. Фармацевтически приемлемые соли, включая, например, соли щелочных и щелочноземельных металлов, в объеме изобретения представляют собой соли, полученные из следующих оснований: гидрид натрия, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид кальция, гидроксид магния, гидроксид алюминия, гидроксид лития, гидроксид цинка, гидроксид бария и органические амины, такие как алифатические, алициклические или ароматические органические амины, такие как аммиак, метиламин, диметиламин, диэтиламин, пиколин, этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, этилендиамин, лизин, аргинин, орнитин, холин, N,N'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, диэтаноламин, прокаин, N-бензилфенэтилглюкаминпиперазин, трис(гидроксиметил)аминометан, гидроксид тетраметиламмония и т.п.

Соли металлов соединений по настоящему изобретению, например соединений по изобретению, можно получать привидением в контакт гидрида, гидроксида, карбоната или подобного реакционноспособного соединения выбранного металла в водном или органическом растворителе со свободной кислотной из соединения. Применяемый водный растворитель может представлять собой воду или он может представлять собой смесь воды с органическим растворителем, например спиртом, таким как метанол или этанол, кетоном, таким как ацетон, алифатическим простым эфиром, таким как тетрагидрофуран, или сложным эфиром, таким как этилацетат. Такие реакции обычно проводят при температуре окружающей среды, но, при желании, их можно проводить с нагреванием.

Аминовые соли соединений по настоящему изобретению, например соединений по изобретению, можно получить приведением в контакт амина в водном или органическом растворителе со свободной кислотной из соединения. Подходящие водные растворители включают воду и смеси воды со спиртами, такими как метанол или этанол, простыми эфирами, такими как тетрагидрофуран, нитрилами, такими как ацетонитрил, или кетонами, такими как ацетон. Сходным образом можно получать соли аминокислот.

Основно-аддитивные соли соединений по данному изобретению, например соединений по изобретению, можно получать из солей посредством применения или адаптации известных способов. Например, исходные соединения по изобретению можно восстанавливать из их основно-аддитивных солей обработкой кислотой, например соляной кислотой.

5.3. Вторые средства, пригодные в способах по изобретению

Настоящее изобретение относится к способам лечения или профилактики, включающим введение второго средства, эффективного для лечения или профилактики инфекции HCV у нуждающегося в этом субъекта. Второе средство может представлять собой средство, известное специалистам в данной области, как являющееся эффективным для лечения или профилактики инфекции HCV. Второе средство может представлять собой второе средство, известное в настоящее время специалистам в данной области, или второе средство может представлять собой второе средство, которое будет разработано позже для лечения или профилактики HCV. В определенных вариантах осуществления второе средство одобрено в настоящее время для лечения или профилактики HCV.

В определенных вариантах осуществления соединение по изобретению вводят в сочетании с одним вторым средством. В дополнительных вариантах осуществления второе средство вводят в сочетании с двумя вторыми средствами. В дополнительных вариантах осуществления второе средство вводят в сочетании с двумя или более вторыми средствами.

Подходящие вторые средства включают низкомолекулярные, перорально биодоступные ингибиторы ферментов HCV, основанные на нуклеиновых кислотах средства, поражающие вирусную РНК, средства, которые могут регулировать иммунный ответ хозяина. Иллюстративные вторые средства включают: (i) одобренные в настоящее время лекарственные средства (пэг-интерферон и рибавирин), (ii) соединения, направленные на ферменты HCV, (iii) лекарственные средства, направленные на вирусный геном (например, интерферирующая РНК или РНКи) и (iv) иммуномодулирующие средства, такие как рибавирин, интерферон (INF) и агонисты Toll-рецепторов.

В определенных вариантах осуществления второе средство представляет собой модулятор протеазы NS3-4A. Протеаза NS3-4A представляет собой гетеродимерную протеазу, содержащую амино-концевой домен белка NS3 и небольшой кофактор NS4A. Ее активность необходима для образования компонентов комплекса репликации вирусной РНК.

Одним из подходящих ингибиторов протеазы NS3-4A является BILN 2061 (Ciluprevir; Boehringer Ingelheim), макроциклическая имитация ингибиторов пептидных продуктов. Хотя клинические испытания с BILN 2061 были остановлены (преклиническая кардиотоксичность), он был первым ингибитором NS3 для тестирования у людей. См. Lamarre et al, 2003, Nature 426:186-189, содержание которого, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме

Другим подходящим ингибитором протеазы NS3-4A является VX-950 (Vertex/Mitsubishi), полученный из продукта расщепления протеазы пептидомиметический ингибитор протеазы NS3-4A. Полагают, что он стабилизирован в активном центре фермента посредством кетоамида. См., например, Lin et al, 2005, J. Biol. Chem., Vol. 280(44) pp. 36784-36791, 2005, неопубликованную статью M506462200 (электронная публикация); Summa, 2005, Curr. Opin. Investig. Drugs. 6:831-7, содержание которых, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

Дополнительные подходящие ингибиторы протеазы NS3-4A, которые являются кетоамидными ингибиторами, включают ингибиторы, описанные в US Serial No. 09/908955, опубликованную как US 2004/0254117, содержание которой, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. В числе описанных в ней соединений находятся (1R,2S,5S)-3-азабицикло[3.1,0]гексан-2-карбоксамид,N-[3-амино-1-циклобутилметил)-2,3-диоксопропил]-3-[(2S)-2-[[[1,1-диметилэтил]амино]карбониламино]-3,3-диметил-1-оксобутил]-6,6-диметил, известный как SCH503034. Другой кетоамидный ингибитор протеазы NS3-4A представляет собой 1,1-диметилэтил[1(S)-[[(1R,5S)-2(S)-[[[1-(циклопропилметил)-3-[[2-[[2-(диметиламино)-2-оксо-1(S)-фенилэтил]амино]-2-оксоэтил]амино]-2,3-диоксопропил]амино]карбонил]-6,6-диметил-3-азабицикло[3.1.0]гексан-3-ил]карбонил]-2,2-диметилпропил]карбамат, известный как SCH6 (также известный как SCH 446211).

В определенных вариантах осуществления второе средство представляет собой модулятор РНК-зависимой РНК-полимеразы (RdRp) NS5B HCV. Находясь в пределах белка NS5B, RdRp синтезирует РНК, используя РНК-матрицу. Эта биохимическая активность отсутствует в клетках млекопитающих.

Один из подходящих модуляторов RdRp представляет собой NM283 (Valopicitabine; Idenix/Novartis). NM283 представляет собой пероральное пролекарство (сложный эфир валина) NM107 (2'-C-метилцитидин) в фазе II испытаний лечения или профилактики инфекции HCV. См., например, публикацию патентной заявки США № 20040077587, содержание которой, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

Другие подходящие модуляторы RdRp включают аналоги 7-деазануклеозидов. Например, 7-деаза-2'-C-метиладенозин представляет собой мощный и селективный ингибитор репликации вируса гепатита C с превосходными фармакокинетическими свойствами. Olsen et al, 2004, Antimicrob. Agents Chemother. 48:3944-3953, содержание которой, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

В дополнительных вариантах осуществления второе средство представляет собой ненуклеозидный модулятор NS5B. В клинических условиях оценивают, по меньшей мере, три различных класса ненуклеозидных ингибиторов (NNI) NS5B.

Подходящие ненуклеозидные модуляторы NS5B включают JTK-003 и JTK-009. JTK-003 прошел до фазы II. Подходящие ненуклеозидные модуляторы NS5B включают 6,5-конденсированные гетероциклические соединения на основе бензимидазольного или индольного ядра. См., например, Hashimoto et al, WO 00147883, содержание которой, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

Дополнительные подходящие NNI полимеразы включают R803 (Rigel) и HCV-371, HCV-086 и HCV-796 (ViroPharma/Wyeth). Дополнительные подходящие NNI включают производные тиофена, которые являются обратимыми аллостерическими ингибиторами полимеразы NS5B и связываются с участком, находящимся рядом с участком, занимаемым ингибиторами на основе бензимидазола, но отличающимся от него. См., например, Biswal, et al, 2005, J. Biol. Chem. 280, 18202-18210 (2005).

Дополнительные подходящие для способов по изобретению NNI включают бензoтиадиазины, такие как бензo-1,2,4-тиадиазины. Показано, что производные бензo-1,2,4-тиадиазина являются высокоселективными ингибиторами РНК-полимеразы HCV. Dhanak, et al, 2002, J. Biol. Chem. 277:38322-38327, содержание которой, таким образом, включено в данное описание посредством ссылки в полном объеме.

Дополнительные подходящие для способов по изобретению NNI и их механизмы описаны в LaPlante et al., 2004 Angew Chem. Int. Ed. Engl 43:4306-4311; Tomei et al., 2003, J. Virol 77:13225-13231; Di Marco et al, 2005, J. Biol. Chem. 280:29765-70; Lu, H., WO 2005/000308; Chan et al, 2004, Bioorg. Med. Chem. Lett. 14:797-800; Chan et al, 2004, Bioorg. Med. Chem. Lett. 14:793-796; Wang et al, 2003, J. Biol. Chem. 278:9489-9495; Love, et al, 2003, J. Virol. 77:7575-7581; Gu et al, 2003, J. Biol. Chem. 278:16602-16607; Tomei et al, 2004, J. Virol. 78:938-946 и Nguyen et al, 2003, Antimicrob. Agents Chemother. 47:3525-3530; содержание каждой из которых, таким образом, включено в данное описание посредством ссылки в полном объеме.

В дополнительном варианте осуществления второе средство представляет собой средство, способное к интерференции с РНК HCV, такое как малая ингибирующая РНК (миРНК) или короткая шпилечная РНК (кшРНК), направленные к полинуклеотиду HCV. В тканевой культуре миРНК и вектор, кодирующий короткую шпилечную РНК (кшРНК), направленные против вирусного генома, эффективно блокируют репликацию репликонов HCV. См., например, Randall et al, 2003, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100:235-240, содержание которой, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

В дополнительном варианте осуществления второе средство представляет собой средство, которое модулирует иммунный ответ субъекта. Например, в определенных вариантах осуществления второе средство может представлять собой одобренное в настоящее время лекарственное средство для инфекции HCV, такое как интерферон (IFN), пэгилированный IFN, IFN и рибавирин или пэгилированный IFN и рибавирин. В одном из вариантов осуществления интерфероны включают IFN , IFN 2a и IFN 2b и, в частности пэгилированный IFN 2a (PEGASYS®) или пэгилированный IFN 2b (PEGINTRON®). В определенных вариантах осуществления второе средство может представлять собой обратимый ингибитор инозинмонофосфатдегидрогеназы (IMPDH), такой как микофеноловая кислота или ее производное, например микофенолат мофетил (CELLSEPT®). Другим примером ингибитора IMPDH является меримеподиб, [(3S)-оксолан-3-ил]N-[[3-[[3-метокси-4-(1,3-оксазол-5-ил)фенил]карбамоиламино]фенил]метил]карбамат (известный как VX-497).

В дополнительном варианте осуществления второе средство представляет собой модулятор Toll-подобных рецепторов (TLR). Полагают, что TLR являются мишенями для стимуляции врожденного антивирусного ответа. Подходящие TLR включают в качестве неограничивающих примеров TLR3, TLR7, TLRS и TLR9. Полагают, что Toll-подобные рецепторы чувствуют присутствие проникающих микроорганизмов, таких как бактерии, вирусы и паразиты. Они экспрессируются иммунными клетками, включая макрофаги, моноциты, дендритные клетки и B-клетки. Стимуляция или активация TLR может вызывать острый воспалительный ответ посредством индукции противомикробных генов и провоспалительных цитокинов и хемокинов.

В определенных вариантах осуществления второе средство представляет собой полинуклеотид, содержащий мотив CpG. Синтетические олигонуклеотиды, содержащие неметилированные мотивы CpG, являются мощными антигонистами TLR9. Стимуляция дендритных клеток этими олигонуклеотидами приводит к продукции фактора некроза опухоли-альфа, интерлейкина-12 и IFN-альфа. Лиганды TLR9 также являются мощными стимуляторами B-клеточной пролиферации и секреции антител. Одним из подходящих содержащих CpG олигонуклеотидов является CPG-10101 (Actilon; Coley Pharmaceutical Group), который оценивают в клинических условиях.

Другим подходящим модулятором TLR является ANA975 (Anadys). Полагают, что ANA975 действует через TLR7, и известно, что он вызывает мощный противовирусный ответ посредством индукции и высвобождения воспалительных цитокинов, таких как IFN-альфа.

В другом варианте осуществления второе средство представляет собой целгосивир. Целгосивир представляет собой ингибитор альфа-глюкозидазы I и действует посредством управляемого хозяином гликозилирования. В преклинических условиях целгосивир продемонстрировал сильный синергизм с IFN и рибавирином. См., например, Whitby et al, 2004, Antivir Chem. Chemother. 15(3):141-51. Целгосивир в настоящее время проходит фазу II исследования монотерапии у пациентов с хроническим HCV в Канаде.

Дополнительные иммуномодулирующие средства и их механизмы или мишени описаны в Schetter & Vollmer, 2004, Curr. Opin. Drug Discov. Dev. 7:204-210; Takeda et al, 2003, Annu. Rev. Immunol. 21:335-376; Lee et al, 2003, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100:6646-6651; Hosmans et al, 2004, Hepatology 40 (Suppl. 1), 282A и патенте США № 6924271; содержание каждой из которых, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

В другом варианте осуществления второе средство представляет собой урсодезоксихолевую кислоту или ее производное (такое как тауроурсодезоксихолевая кислота, конъюгат урсодезоксихолевой кислоты с таурином). Известно, что урсодезоксихолевая кислота является высокоэффективным ингибитором пролиферации вируса гепатита C, который не дает побочной реакции, например, см. патенты США № № 5846964 и 5863550, содержание каждого из которых, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

5.4. Фармацевтические композиции и способы введения

Производные циклоспорина, применяемые в способах по настоящему изобретению, предпочтительно предоставляют с применением фармацевтических композиций, содержащих, по меньшей мере, одно соединение общей формулы (I), при необходимости в форме соли, используемое или отдельно, или в форме сочетания с одним или несколькими совместимыми и фармацевтически приемлемыми носителями, такими как разбавители или вспомогательные вещества, или с другим средством против HCV.

В определенных вариантах осуществления с производными циклоспорина по изобретению можно формулировать или упаковывать второе средство по изобретению. Конечно, второе средство только тогда будет сформулировано с производным циклоспорина по настоящему изобретению когда, по оценке специалистов в данной области, такой совместный состав не должен препятствовать активности средства или способу введения. В определенных вариантах осуществления производное циклоспорина по изобретению и второе средство формулируют раздельно. Их можно упаковывать совместно или упаковывать отдельно для удобства практикующего специалиста в данной области.

В клинической практике активные средства по настоящему изобретению можно вводить любым традиционным способом, в частности перорально, парентерально, ректально или посредством ингаляции (например, в форме аэрозолей). В определенных вариантах осуществления производные циклоспорина по настоящему изобретению вводят перорально.

Применение можно осуществлять в виде твердых композиций для перорального введения, в виде таблеток, пилюль, твердых желатиновых капсул, порошков или гранул. В этих композициях активный продукт по изобретению смешан с одним или несколькими инертными разбавителями или вспомогательными веществами, такими как сахароза, лактоза или крахмал.

Эти композиции могут содержать вещества, отличные от разбавителей, например смазку, такую как стеарат магния, или покрытие, предназначенное для контролируемого высвобождения.

Применение можно осуществлять в виде жидких композиций для перорального введения в виде растворов, которые являются фармацевтически приемлемыми, суспензий, эмульсий, сиропов и эликсиров, содержащих инертные разбавители, такие как вода или парафиновое масло. Эти композиции также могут содержать вещества, отличные от разбавителей, например увлажняющие, подслащивающие или вкусовые вещества.

Композиции для парентерального введения могут представлять собой эмульсии или стерильные растворы. Применение можно осуществлять в виде растворителя или носителя в виде пропиленгликоля, полиэтиленгликоля, растительных масел, в частности оливкового масла, или инъецируемых сложных органических эфиров, например этилолеата. Эти композиции также могут содержать вспомогательные вещества, в частности увлажняющие, изотонизирующие, эмульгирующие, диспергирующие и стабилизирующие вещества. Стерилизацию можно проводить несколькими способами, например с применением бактериологического фильтра, посредством радиации или нагреванием. Их также можно получать в форме стерильных твердых композиций, которые можно растворять во время применения в стерильной воде или любой другой инъецируемой стерильной среде.

Композиции для ректального введения представляют собой суппозитории или ректальные капсулы, которые, в дополнение к активному компоненту, содержат наполнители, такие как кокосовое масло, полусинтетические глицериды или полиэтиленгликоли.

Композиции также могут представлять собой аэрозоли. Для применения в форме жидких аэрозолей композиции могут представлять собой стабильные стерильные растворы или твердые композиции, растворяемые во время применения в апирогенной стерильной воде, в солевом растворе или любом другом фармацевтически приемлемом носителе. Для применения в форме сухих аэрозолей, предназначенных для непосредственной ингаляции, активный компонент тонко измельчают и комбинируют с водорастворимым твердым разбавителем или носителем, например декстраном, маннитом или лактозой.

В одном из вариантов осуществления композиция по изобретению представляет собой фармацевтическую композицию или одиночную стандартную лекарственную форму. Фармацевтические композиции и одиночные стандартные лекарственные формы по изобретению содержат профилактически или терапевтически эффективное количество одного или нескольких профилактических или терапевтических средств (например, соединение по изобретению, или другое профилактическое или терапевтическое средство), и, как правило, один или несколько фармацевтически приемлемых носителей или эксципиентов. В конкретном варианте осуществления и в данном контексте термин "фармацевтически приемлемый" означает одобренный регулирующим агентством федерального или государственного правительства или приведенный в фармакопее США или других общепризнанных фармакопеях по применению у животных, а более конкретно - у людей. Термин "носитель" относится к разбавителю, адъюванту (например, адъювант Фрейнда (полный и неполный)), эксципиенту или носителю, с которыми вводят лекарственное средство. Такие фармацевтические носители могут представлять собой стерильные жидкости, такие как вода и масла, включая масла нефтяного, животного, растительного или животного происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, сезамовое масло и т.п. Когда фармацевтическую композицию вводят внутривенно, вода представляет собой предпочтительный носитель. В качестве жидких носителей также можно применять солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина, особенно для инъецируемых растворов. Примеры подходящих фармацевтических носителей описаны в "Remington's Pharmaceutical Sciences" у E.W. Martin.

Стандартные фармацевтические композиции и лекарственные формы содержат один или несколько эксципиентов. Подходящие эксципиенты хорошо известны специалистам в области фармацевтики, а неограничивающие примеры подходящих эксципиентов включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, моностеарат глицерина, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерин, пропилен, гликоль, воду, этанол и т.п. Подходит ли конкретный эксципиент для включения в фармацевтическую композицию или лекарственную форму зависит от множества факторов, хорошо известных в данной области, включая в качестве неограничивающих примеров путь, которым лекарственную форму будут вводить субъекту и конкретные активные ингредиенты в лекарственной форме. При желании, композиция или одиночная стандартная лекарственная форма могут также содержать незначительные количества увлажняющих или эмульгирующих средств или буферирующих pH средств.

Композиции без лактозы по изобретению могут содержать эксципиенты, которые хорошо известны в данной области и перечислены, например, в фармакопее США (USP) SP (XXI)/NF (XVI). В основном композиции без лактозы содержат активный ингредиент, связывающее вещество/наполнитель и смазку в фармацевтически совместимых и фармацевтически приемлемых количествах. Иллюстративные лекарственные формы без лактозы содержат активный ингредиент, микрокристаллическую целлюлозу, прежелатинизированный крахмал и стеарат магния.

Данное изобретение также включает безводные фармацевтические композиции и лекарственные формы, содержащие активные ингредиенты, так как вода может облегчать разрушение некоторых соединений. Например, добавление воды (например, 5%) широко распространено в фармацевтической области как средство имитации долговременного хранения для определения таких характеристик, как срок годности и стабильность составов с течением времени. См., например, Jens T. Carstensen, Drug Stability: Principles & Practice, 2d. Ed., Marcel Dekker, NY, NY, 1995, pp. 379-80. Фактически, вода и нагревание ускоряют разрушение некоторых соединений. Таким образом, воздействие воды на состав может представлять большое значение, так как сырость и/или влажность часто встречаются при производстве, обработке, упаковке, хранении, транспортировке и применении составов.

Безводные фармацевтические композиции и лекарственные формы по изобретению можно получать с применением безводных или содержащих малое количество влаги ингредиентов и в условиях с низкой влажностью или с низкой сыростью. Фармацевтические композиции и лекарственные формы, которые содержат лактозу и, по меньшей мере, один активный ингредиент, содержащий первичный или вторичный амин, предпочтительно являются безводными, если исключить значительный контакт с сыростью и/или влажностью при производстве, упаковке и/или хранении.

Безводную фармацевтическую композицию следует получать и хранить так, чтобы сохранялся ее безводный характер. Таким образом, безводные композиции предпочтительно упаковывают с применением материалов, для которых известно, что они предотвращают воздействие воды так, что их можно включать в подходящие формулярные наборы. Примеры подходящих упаковок включают в качестве неограничивающих примеров, герметически закрытую фольгу, пластик, контейнеры для однократной дозы (например, ампулы), блистерные упаковки и контурные упаковки ленточного типа.

Изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям и лекарственным формам, содержащим одно или несколько соединений, которые снижают скорость, с которой активный ингредиент разрушается. Такие соединения, которые обозначают в настоящем документе как "стабилизаторы", включают в качестве неограничивающих примеров, антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, pH-буферы или солевые буферы.

Фармацевтические композиции и одиночные стандартные лекарственные формы могут принимать форму растворов, суспензий, эмульсий, таблеток, пилюль, капсул, порошков, составов с замедленным высвобождением и т.п. Пероральный состав может включать стандартные носители, такие как маннит, лактоза, крахмал, стеарат магния, сахаринат натрия, целлюлоза, карбонат магния и т.д., фармацевтических степеней. Такие композиции и лекарственные формы содержат профилактически или терапевтически эффективное количество профилактического или терапевтического средства, предпочтительно в очищенной форме, вместе с подходящим количеством носителя так, чтобы обеспечить форму для надлежащего введения субъекту. Состав должен соответствовать способу введения. В определенном варианте осуществления фармацевтические композиции или одиночные стандартные лекарственные формы являются стерильными и находятся в подходящей форме для введения субъекту, например животному, такому как млекопитающее, например человек.

Фармацевтическую композицию по изобретению формулируют так, чтобы она сочеталась с предназначенным маршрутом введения. Примеры маршрутов введения включают в качестве неограничивающих примеров парентеральное, например внутривенное, интрадермальное, подкожное, внутримышечное, пероральное, буккальное, сублингвальное, ингаляционное, интраназальное, трансдермальное, топическое, трансмукозальное, внутриопухолевое, внутрисиновиальное и ректальное введение. В конкретном варианте осуществления композицию формулируют в соответствии со стандартными процедурами, чтобы фармацевтическая композиция была адаптирована для внутривенного, подкожного, внутримышечного, перорального, интраназального или топического введения человеку. В одном из вариантов осуществления фармацевтическую композицию формулируют в соответствии со стандартными процедурами для подкожного введения человеку. Как правило, композиции для внутривенного введения представляют собой растворы в стерильном изотоническом водном буфере. Когда необходимо, композиция также может включать растворитель и местный анестетик, такой как лигнокаин, для уменьшения боли в участке инъекции.

Примеры лекарственных форм включают в качестве неограничивающих примеров: таблетки; каплеты; капсулы, такие как мягкие эластические желатиновые капсулы; саше; пастилки; лепешки; дисперсии; суппозитории; мази; припарки (горячие компрессы); пасты; порошки; повязки; кремы; пластыри; растворы; наклейки; аэрозоли (например, назальные спреи или ингаляторы); гели; жидкие лекарственные формы, подходящие для перорального или слизистого введения субъекту, включая суспензии (например, водные или неводные жидкие суспензии, жидкие эмульсии "масло в воде" или эмульсии "вода в масле"), растворы и эликсиры; жидкие лекарственные формы, подходящие для парентерального введения субъекту, и стерильные твердые вещества (например, кристаллические или аморфные твердые вещества), которые можно восстанавливать с получением жидких лекарственных форм, подходящих для парентерального введения субъекту.

Состав, форма и тип лекарственных форм по изобретению, как правило, варьирует в зависимости от их применения. Например, лекарственная форма, применяемая при начальном лечении вирусной инфекции, может содержать большие количества одного или нескольких из содержащихся в ней активных ингредиентов, чем лекарственная форма, применяемая для поддержания лечения той же инфекции. Подобным образом, парентеральная лекарственная форма может содержать меньшие количества одного или нескольких из содержащихся в ней активных ингредиентов, чем пероральная лекарственная форма, применяемая для лечения того же заболевания или нарушения. Эти и другие пути, которыми конкретные лекарственные формы, входящие в данное изобретение, отличаются один от другого, легко понятны специалистам в данной области. См., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th ed., Mack Publishing, Easton PA (2000).

Как правило, ингредиенты композиций по изобретению поставляют или отдельно, или смешанными вместе в стандартной лекарственной форме, например в виде сухого лиофилизированного порошка или безводного концентрата в герметически закрытом контейнере, таком как ампула или саше, с указанием количества активного средства. Когда композицию необходимо вводить посредством инфузии, ее можно разливать в бутылку для инфузий, содержащую стерильную воду или солевой раствор фармацевтической степени. Когда композицию вводят посредством инъекции, можно предоставлять ампулу со стерильной водой для инъекции или солевым раствором так, чтобы до введения ингредиенты можно было смешать.

Стандартные лекарственные формы по изобретению содержат соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, сольват или гидрат, находящиеся в диапазоне приблизительно от 0,1 мг до приблизительно 1000 мг в сутки, вводимые в виде одной дозы раз в сутки утром или в виде дробных доз на протяжении суток, принимаемых с пищей. Конкретные лекарственные формы по изобретению содержат приблизительно 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 1,0, 2,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 20,0, 25,0, 50,0, 100, 200, 250, 500 или 1000 мг активного циклоспорина.

5.4.1. Пероральные лекарственные формы

Фармацевтические композиции по изобретению, подходящие для перорального введения, могут находиться в виде дискретных лекарственных форм, в качестве неограничивающих примеров, таких как таблетки (например, жевательные таблетки), каплеты, капсулы и жидкости (например, ароматизированные сиропы). Такие лекарственные формы содержат предопределенные количества активных ингредиентов, и их можно получать способами фармацевтики, хорошо известными специалистам в данной области. В основном см. Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th ed., Mack Publishing, Easton PA (2000).

В определенных вариантах осуществления пероральные лекарственные формы являются твердыми и их получают в безводных условиях с применением безводных ингредиентов, как подробно описано в разделе выше. Однако объем изобретения простирается за безводные твердые пероральные лекарственные формы. По существу в настоящем разделе описаны дополнительные формы.

Типичные пероральные лекарственные формы по изобретению получают смешивая активный ингредиент(ы) в однородную смесь, по меньшей мере, с одним эксципиентом в соответствии с общепринятыми способами фармацевтического составления. Эксципиенты могут принимать множество форм в зависимости от формы препарата, желательной для введения. Например, эксципиенты, пригодные для использования в пероральных жидких или аэрозольных лекарственных формах, включают в качестве неограничивающих примеров, воду, гликоли, масла, спирты, ароматизаторы, консерванты и красители. Примеры эксципиентов, пригодных для использования в твердых пероральных лекарственных формах (например, порошках, таблетках, капсулах и каплетах), включают в качестве неограничивающих примеров, крахмалы, сахара, микрокристаллическую целлюлозу, разбавители, гранулирующие средства, смазки, связывающие средства и дезинтегрирующие средства.

По причине простоты их введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее предпочтительные пероральные стандартные лекарственные формы, в случае чего применяют твердые эксципиенты. При желании, таблетки можно покрывать стандартными водными и безводными способами. Такие лекарственные формы можно получать любыми способами фармацевтики. В основном фармацевтические композиции и лекарственные формы получают посредством равномерного и гомогенного перемешивания активных ингредиентов с жидкими носителями, тонкоизмельченными твердыми носителями или и с теми, и с другими, а затем придания продукту формы желательного представление, если это необходимо.

Например, таблетку можно получать прессованием или формованием. Прессованные таблетки можно получать прессованием в подходящих машинах активных ингредиентов в сыпучих формах, таких как порошок или гранулы, необязательно смешанных с эксципиентом. Формованные таблетки можно получать, формуя в подходящих машинах смесь порошкового соединения, смоченного инертным жидким разбавителем.

Примеры эксципиентов, которые можно использовать в пероральных лекарственных формах по изобретению, включают в качестве неограничивающих примеров связывающие средства, наполнители, дезинтегрирующие средства и смазки. Связывающие средства, пригодные для использования в фармацевтических композициях и лекарственных формах, включают в качестве неограничивающих примеров кукурузный крахмал, картофельный крахмал или другие крахмалы, желатин, природные и синтетические смолы, такие как гуммиарабик, альгинат натрия, альгиновая кислота, другие альгинаты, порошковый трагакант, гуаровая смола, целлюлоза и ее производные (например, этилцеллюлоза, ацетат целлюлозы, карбоксиметилцеллюлоза кальция, карбоксиметилцеллюлоза натрия), поливинилпирролидон, метилцеллюлозу, прежелатинизированный крахмал, гидроксипропилметилцеллюлозу (например, № № 2208, 2906, 2910), микрокристаллическую целлюлозу и их смеси.

Примеры наполнителей, пригодных для использования в фармацевтических композициях и лекарственных формах, описываемых в настоящем документе, включают в качестве неограничивающих примеров тальк, карбонат кальция (например, гранулы или порошок), микрокристаллическую целлюлозу, порошковую целлюлозу, декстраны, каолин, маннит, кремниевую кислоту, сорбит, крахмал, прежелатинизированный крахмал и их смеси. Связывающее вещество или наполнитель в фармацевтических композициях по изобретению, как правило, присутствуют приблизительно в количестве от 50 до приблизительно 99 массовых процентов фармацевтической композиции или лекарственной формы.

Подходящие формы микрокристаллической целлюлозы включают в качестве неограничивающих примеров, вещества, продаваемые как Авицел PH 101, Авицел PH 103, Авицел RC 581, Авицел PH 105 (доступные в FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PA) и их смеси. Конкретное связывающее вещество представляет собой смесь микрокристаллической целлюлозы и карбоксиметилцеллюлозы натрия, продаваемой как Авицел RC 581. Подходящие безводные эксципиенты или добавки, или эксципиенты, или добавки с низкой влажностью включают Авицел PH 103 и крахмал 1500 LM.

Для получения таблеток, распадающихся при воздействии водного окружения, в композициях по изобретению используют дезинтегрирующие средства. Таблетки, содержащие слишком много дезинтегрирующего средства, могут распадаться при хранении, тогда как таблетки, содержащие слишком мало, могут не распадаться при желательной скорости или в желательных условиях. Таким образом, для формирования твердых пероральных лекарственных форм по изобретению следует использовать достаточное количество дезинтегрирующего средства, которое не является ни большим, ни маленьким, для неблагоприятного изменения высвобождения активных ингредиентов. Количество используемого дезинтегрирующего средства варьируется в зависимости от типа состава, и специалисты в данной области легко его определят. Типичные фармацевтические композиции содержат приблизительно от 0,5 до приблизительно 15 массовых процентов дезинтегрирующего средства, в частности - приблизительно от 1 до приблизительно 5 массовых процентов дезинтегрирующего средства.

Дезинтегрирующие средства, которые можно использовать в фармацевтических композициях и лекарственных формах по изобретению, включают в качестве неограничивающих примеров агар-агар, альгиновую кислоту, карбонат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, кроскармеллозу натрия, кросповидон, полакрилин калия, крахмалгликолят натрия, картофельный или тапиоковый крахмал, прежелатинизированный крахмал, другие крахмалы, глины, другие альгины, другие целлюлозы, смолы и их смеси.

Смазки, которые можно использовать в фармацевтических композициях и лекарственных формах по изобретению, включают в качестве неограничивающих примеров стеарат кальция, стеарат магния, минеральное масло, светлое минеральное масло, глицерин, сорбит, маннит, полиэтиленгликоль, другие гликоли, стеариновую кислоту, лаурилсульфат натрия, тальк, гидрогенизированное растительное масло (например, арахисовое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, сезамовое масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло), стеарат цинка, этилолеат, этиллауринат, агар и их смеси. Дополнительные смазки включают, например, силоидный силикагель (Аэросил 200, производимый W.R. Grace Co. из Baltimore, MD), коагулированный аэрозоль синтетического диоксида кремния (продаваемый Degussa Co. из Piano, TX), CAB O SIL (пирогенный продукт диоксида кремния, продаваемый Cabot Co. из Boston, MA) и их смеси. Если их вообще применяют, смазки, как правило, используют в количество менее чем приблизительно 1 массовый процент фармацевтических композиций или лекарственных форм, в которые их добавляют.

5.4.2. Лекарственные формы с отсроченным высвобождением

Активные ингредиенты, такие как соединения по изобретению, можно вводить с применением средств или устройств доставки с контролируемым высвобождением, которые хорошо известны специалистам в данной области. Примеры включают в качестве неограничивающих примеров средства или устройства доставки, описанные в патентах США № № : 3845770; 3916899; 3536809; 3598123 и 4008719; 5674533; 5059595; 5591767; 5120548; 5073543; 5639476; 5354556; 5639480; 5733566; 5739108; 5891474; 5922356; 5972891; 5980945; 5993855; 6045830; 6087324; 6113943; 6197350; 6248363; 6264970; 6267981; 6376461; 6419961; 6589548; 6613358; 6699500, каждый из которых включен в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме. Такие лекарственные формы можно использовать для обеспечения медленного или контролируемого высвобождения одного или нескольких активных ингредиентов с применением, например, гидроксипропилметилцеллюлозы, других полимерных матриксов, гелей, проницаемых мембран, осмотических систем, многослойных покрытий, микрочастиц, липосом, микросфер или их сочетания с обеспечением желательного профиля высвобождения в изменяющихся пропорциях. Для применения с активными ингредиентами по изобретению можно легко выбрать подходящие составы с контролируемым высвобождением, известные специалистам в данной области, включая составы, описываемые в настоящем документе. Таким образом, изобретение относится к одиночным стандартным лекарственным формам, подходящим для перорального введения, в качестве неограничивающих примеров, таким как таблетки, капсулы, желатиновые капсулы и каплеты, которые адаптированы для контролируемого высвобождения.

Все фармацевтические препараты с контролируемым высвобождением имеют общей целью улучшение лечения лекарственными средствами по сравнению с лечением, достигаемым при применении их неконтролируемых аналогов. В идеале применение оптимально разработанного препарата с контролируемым высвобождением при медицинском лечении характеризуется минимумом вещества лекарственного средства, применяемого для лечения или контроля состояния с минимальным промежутком времени. Преимущества составов с контролируемым высвобождением включают длительную активность лекарственного средства, уменьшенную частоту дозирования и возросшее соблюдение субъектом схемы лечения. Кроме того, составы с контролируемым высвобождением можно использовать для воздействия на время начала действия или другие характеристики, такие как уровни лекарственного средства в крови, и, таким образом, можно воздействовать на возникновение побочных (например, вредных) эффектов.

Большинство составов с контролируемым высвобождением разрабатывают для начального высвобождения такого количества лекарственного средства (активного ингредиента), которое быстро обеспечивает желательный терапевтический эффект, и постепенного и непрерывного высвобождения других количеств лекарственного средства для поддержания этого уровня терапевтического или профилактического воздействия в течение длительного периода времени. Для поддержания этого постоянного уровня лекарственного средства в организме лекарственное средство необходимо высвобождать из лекарственной формы со скоростью, которая будет замещать то количество лекарственного средства, которое будет метаболизировано и выделено из организма. Контролируемое высвобождение активного ингредиента можно стимулировать различными условиями, включая в качестве неограничивающих примеров, pH, температуру, ферменты, воду или другие физиологические условия или соединения.

В определенных вариантах осуществления лекарственное средство можно вводить с применением внутривенного вливания, имплантируемого осмотического насоса, трансдермального пластыря, липосом или других способов введения. В одном из вариантов осуществления можно использовать насос (см., Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald et al., Surgery 88:507 (1980); Saudek et al, N. Engl. J. Med. 321:574 (1989)). В другом варианте осуществления можно использовать полимерные вещества. В другом варианте осуществления систему с контролируемым высвобождением можно помещать у субъекта на соответствующий участок, определенный практикующим специалистом, т.е. что, таким образом, требует только части системной дозы (см., например, Goodson, Medical Applications of Controlled Release, vol. 2, pp. 115-138 (1984)). Другие системы с контролируемым высвобождением обсуждаются в обзоре Langer (Science 249:1527-1533 (1990)). Активный ингредиент можно распределять в твердом внутреннем матриксе, например полиметилметакрилате, полибутилметакрилате, пластифицированном или непластифицированном поливинилхлориде, пластифицированном нейлоне, пластифицированном полиэтилентерефталате, природном каучуке, полиизопрене, полиизобутилене, полибутадиене, полиэтилене, сополимерах этилена и винилацетата, кремнийорганических каучуках, полидиметилсилоксанах, кремний карбонатных сополимерах, гидрофильных полимерах, таких как гидрогели сложных эфиров акриловой и метакриловой кислот, коллагене, сшитом поливиниловом спирте и сшитом частично гидролизованном поливинилацетате, который окружен внешней полимерной мембраной, например полиэтиленом, полипропиленом, сополимерами этилена/пропилена, сополимерами этилена/этилакрилата, сополимерами этилена/винилацетата, кремнийорганическими каучуками, полидиметилсилоксанами, неопреновой резиной, хлорированным полиэтиленом, поливинилхлоридом, сополимерами винилхлорида с винилацетатом, винилиденхлоридом, этиленом и пропиленом, ионсодержащим полимером полиэтилентерефталата, бутилкаучуком, эпихлоргидриновыми каучуками, сополимером этилена/винилового спирта, терполимером этилена/винилацетата/винилового спирта и сополимером этилена/винилоксиэтанола, которая нерастворима в жидкостях организма. Затем на стадии контроля скорости высвобождения активный ингредиент диффундирует через внешнюю полимерную мембрану. Доля активного ингредиента в таких парентеральных композициях сильно зависит от его конкретной природы, а также от потребностей субъекта.

5.4.3. Парентеральные лекарственные формы

Хотя твердые безводные пероральные лекарственные формы являются предпочтительными, настоящее изобретение также относится к парентеральным лекарственным формам. Парентеральные лекарственные формы можно вводить субъектам различными путями, включая в качестве неограничивающих примеров подкожный, внутривенный (включая болюсную инъекцию), внутримышечный и внутриартериальный. Так как их введение, как правило, обходит естественную защиту субъекта от загрязнителей, парентеральные лекарственные формы предпочтительно являются стерильными или поддающимися стерилизации до введения субъекту. Примеры парентеральных лекарственных форм включают в качестве неограничивающих примеров, готовые для инъекции растворы, сухие продукты, готовые к растворению или суспендированию в фармацевтически приемлемом носителе для инъекций, готовые для инъекции суспензии и эмульсии.

Подходящие носители, которые можно использовать для получения парентеральных лекарственных форм по изобретению, хорошо известны специалистам в данной области. Примеры включают в качестве неограничивающих примеров воду для инъекций USP; водные носители, в качестве неограничивающих примеров, такие как инъекция хлорид натрия, инъекция Рингера, инъекция декстрозы, инъекция декстрозы и хлорида натрия и инъекция лактата Рингера; смешивающиеся с водой носители, в качестве неограничивающих примеров, такие как этиловый спирт, полиэтиленгликоль и полипропиленгликоль; и неводные носители, в качестве неограничивающих примеров, такие как кукурузное масло, хлопковое масло, арахисовое масло, сезамовое масло, этилолеат, изопропилмиристат и бензилбензоат.

В парентеральные лекарственные формы по изобретению также можно добавлять соединения, которые увеличивают растворимость одного или нескольких активных ингредиентов, описываемых в настоящем документе.

5.4.4. Трансдермальные, топические и слизистые лекарственные формы

Хотя твердые безводные пероральные лекарственные формы являются предпочтительными, настоящее изобретение также относится к трансдермальным, топическим и слизистым лекарственным формам. Трансдермальные, топические и слизистые лекарственные формы по изобретению включают в качестве неограничивающих примеров глазные растворы, спреи, аэрозоли, кремы, лосьоны, мази, гели, растворы, эмульсии, суспензии или другие формы, известные специалисту в данной области. См., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 16^th, 18th и 20^th eds., Mack Publishing, Easton PA (1980, 1990 & 2000) и Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4th ed., Lea & Febiger, Philadelphia (1985). Лекарственные формы, подходящие для лечения слизистых тканей, в пределах полости рта можно формулировать в виде полосканий или в виде пероральных гелей. Кроме того, трансдермальные лекарственные формы включают пластыри "резервуарного типа" или "матричного типа", которые можно прикладывать к коже и держать в течение определенного периода времени для обеспечения проникновения желательного количества активных ингредиентов.

Подходящие эксципиенты (например, носители и разбавители) и другие вещества, которые можно использовать для получения трансдермальных, топических и слизистых лекарственные формы, охватываемых данным изобретением, хорошо известны специалистам в фармацевтической области и зависят от конкретной ткани, на которой применяют данную фармацевтическую композицию или лекарственную форму. Имея в виду этот факт, типичные эксципиенты включают в качестве неограничивающих примеров, воду, ацетон, этанол, этиленгликоль, пропиленгликоль, бутан-1,3-диол, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, минеральное масло и их смеси для формирования лосьонов, тинктур, кремов, эмульсий, гелей или мазей, которые являются нетоксичными и фармацевтически приемлемыми. При желании в фармацевтические композиции и лекарственные формы также можно добавлять увлажнители или смачиватели. Примеры таких дополнительных ингредиентов хорошо известны в данной области. См., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 16 ^th, 18th и 20^th eds., Mack Publishing, Easton PA (1980,1990 & 2000).

В зависимости от конкретной ткани для лечения дополнительные компоненты можно использовать до лечения активными ингредиентами по изобретению, совместно с ним или после него. Например, для содействия доставки активных ингредиентов в ткань можно использовать усилители всасывания. Подходящие усилители всасывания включают в качестве неограничивающих примеров: ацетон; различные спирты, такие как этанол, олеил и тетрагидрофурил; алкилсульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; диметилацетамид; диметилформамид; полиэтиленгликоль; пирролидоны, такие как поливинилпирролидон; виды поливинилпирролидона (повидон, поливидон); мочевину и различные водорастворимые или нерастворимые сложные эфиры сахаров, такие Tween 80 (полисорбат 80) и Span 60 (сорбитанмоностеарат).

Для улучшения доставки одного или нескольких активных ингредиентов также можно регулировать pH фармацевтической композиции или лекарственной формы, или ткани, к которой применяют фармацевтическую композицию или лекарственную форму. Подобным образом для улучшения доставки можно регулировать полярность носителя растворителя, его ионную силу или тоничность. Также в фармацевтические композиции или лекарственные формы для благоприятного изменения гидрофильности или липофильности одного или нескольких активных ингредиентов для улучшения доставки можно добавлять такие соединения, как стеараты. При этом стеараты могут служить в качестве липидного носителя для состава, в качестве эмульгирующего средства или поверхностно-активного вещества и в качестве усилителя доставки или усиливающего всасывание средства. Для дополнительной регулировки свойств получающейся композиции можно использовать различные соли, гидраты или сольваты активных ингредиентов.

5.4.5. Лекарственные и стандартные лекарственные формы

В лекарственных средствах для человека врач определяет дозировку, которую он рассматривает как наиболее подходящую для профилактического или терапевтического лечения и в соответствии с возрастом, массой, стадии инфекции и другими факторами конкретного субъекта, подлежащего лечению. Как правило, дозировки составляют приблизительно от 1 до приблизительно 1000 мг в сутки для взрослого, или приблизительно от 5 до приблизительно 250 мг в сутки, или приблизительно от 10 до 50 мг в сутки для взрослого. В определенных вариантах осуществления дозировки составляют приблизительно от 5 до приблизительно 400 мг в сутки, а более предпочтительно - от 25 до 200 мг в сутки для взрослого. Также предпочтительны уровни дозы приблизительно от 50 до приблизительно 500 мг в сутки.

В предпочтительных аспектах настоящее изобретение относится к способам лечения или профилактики вирусной инфекции гепатита C у субъекта посредством введения нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли с высоким терапевтическим индексом против вируса гепатита C. Терапевтический индекс можно измерять любым способом, известным специалистам в данной области, таким как способ, описанный в примерах ниже. В определенных вариантах осуществления терапевтический индекс представляет собой отношение концентрации, при которой соединение является токсичным, к концентрации, которая является эффективной против вируса гепатита C. Токсичность можно измерять любым способом, известным специалистам, включая цитотоксичность (например, IC₅₀ или IC₉₀ ) и летальную дозу (например, LD₅₀ или LD₉₀ ). Подобным образом эффективные концентрации можно измерять любым способом, известным специалистам, включая эффективную концентрацию (например, EC₅₀ или EC₉₀) и эффективную дозу (например, ED₅₀ или ED₉₀). Предпочтительно в отношении сравнивают сходные измерения (например, IC₅₀ /EC₅₀, IC₉₀/EC₉₀, LD₅₀ /ED₅₀ или LD₉₀/ED₉₀). В определенных вариантах осуществления терапевтический индекс может составлять до 2,0, 5,0, 10,0, 15,0, 20,0, 25,0, 50,0, 75,0, 100,0, 125,0, 150,0 или выше.

Количество соединения или композиции по изобретению, которое будет эффективно для предотвращения или лечения нарушения, или одного или нескольких его симптомов, будет варьировать в зависимости от природы и тяжести заболевания или состояния, и маршрута введения активного ингредиента. Частота и дозировка также будут варьировать в зависимости от факторов, специфичных для каждого субъекта, в зависимости от конкретного вводимого лекарственного средства (например, терапевтические или профилактические средства), тяжести нарушения, заболевания или состояния, маршрута введения, а также возраста, массы тела, ответа и истории болезни субъекта. Эффективные дозы можно экстраполировать на основании кривых доза-ответ, полученных в тестовых системах in vitro или в моделях на животных.

Иллюстративные дозы композиции включают количества миллиграмм или микрограмм активного соединения на килограмм субъекта или массы образца (например, приблизительно от 10 микрограмм на килограмм до приблизительно 50 миллиграмм на килограмм, приблизительно от 100 микрограмм на килограмм до приблизительно 25 миллиграмм на килограмм, или приблизительно от 100 микрограмм на килограмм до приблизительно 10 миллиграмм на килограмм). Для композиций по изобретению вводимая субъекту дозировка, как правило, составляет от 0,140 до 3 мг/кг массы тела субъекта, исходя из массы активного соединения. В определенных вариантах осуществления вводимая субъекту дозировка составляет от 0,20 до 2,00 мг/кг или от 0,30 до 1,50 мг/кг массы тела субъекта.

В основном рекомендуемый диапазон суточных доз соединения по изобретению для описываемых в настоящем документе состояний лежит в пределах диапазона приблизительно от 0,1 мг до приблизительно 1000 мг в сутки, вводимого как одной дозы раз в сутки или в виде дробных доз на протяжении суток. В одном из вариантов осуществления суточную дозу вводят дважды в сутки в равных дробных дозах. В частности, диапазон суточных доз должен составлять приблизительно от 10 мг до приблизительно 200 мг в сутки, более конкретно приблизительно от 10 мг до приблизительно 150 мг в сутки или даже более конкретно - приблизительно от 25 до приблизительно 100 мг в сутки. Как будет понятно специалистам в данной области, в некоторых случаях может быть необходимым применять дозировки активного ингредиента вне диапазонов, описываемых в настоящем документе. Кроме того, следует отметить, что клинические или лечащие врачи знают, как и когда прервать, скорректировать или закончить лечение в соответствии с ответом субъекта.

Как легко поймут специалисты в данной области, для различных заболеваний и состояний могут подходить разные терапевтически эффективные количества. Подобным образом количества, достаточные для предотвращения, регулировки, лечения или облегчения таких состояний, но недостаточные для вызова или достаточные для снижения неблагоприятных воздействий, ассоциированных с композицией по изобретению, также включены в описанные выше дозируемые количества и протоколы частоты дозирования. Кроме того, когда субъекту вводят несколько доз соединения по изобретению, не все дозы должны быть одинаковыми. Например, вводимую субъекту дозу можно увеличивать для улучшения профилактического или терапевтического эффекта композиции или ее можно уменьшить для снижения одного или нескольких побочных эффектов, которые испытывает конкретный субъект.

В конкретном варианте осуществления дозировка композиции по изобретению или композиция по изобретению на основе массы активного соединения, вводимая для профилактики, лечения, регуляции или облегчения нарушения или одного или нескольких его симптомов у субъекта, составляет 0,1 мг/кг, 1 мг/кг, 2 мг/кг, 3 мг/кг, 4 мг/кг, 5 мг/кг, 6 мг/кг, 10 мг/кг или 15 мг/кг массы тела субъекта или более. В другом варианте осуществления дозировка композиции по изобретению или композиция по изобретению, вводимая для профилактики, лечения, регуляции или облегчения нарушения или одного, или нескольких его симптомов у субъекта, составляет стандартную дозу в размере от 0,1 до 200 мг, от 0,1 до 100 мг, от 0,1 до 50 мг, от 0,1 до 25 мг, от 0,1 до 20 мг, от 0,1 до 15 мг, от 0,1 до 10 мг, от 0,1 до 7,5 мг, от 0,1 до 5 мг, от 0,1 до 2,5 мг, от 0,25 до 20 мг, от 0,25 до 15 мг, от 0,25 до 12 мг, от 0,25 до 10 мг, от 0,25 до 7,5 мг, от 0,25 до 5 мг, от 0,5 до 2,5 мг, от 1 до 20 мг, от 1 до 15 мг, от 1 до 12 мг, от 1 до 10 мг, от 1 до 7,5 мг, от 1 до 5 мг или от 1 до 2,5 мг.

В определенных вариантах осуществления лечение или профилактику можно начинать одной или несколькими ударными дозами соединения или композиции по изобретению с последующими одной или несколькими поддерживающими дозами. В таких вариантах осуществления ударная доза может составлять, например, приблизительно от 60 до приблизительно 400 мг в сутки или приблизительно от 100 до приблизительно 200 мг в сутки в течение от одних суток до пяти недель. За ударной дозой может следовать одна или несколько поддерживающих доз. Каждая поддерживающая доза независимо может составлять приблизительно от 10 мг до приблизительно 200 мг в сутки, более конкретно - приблизительно от 25 мг до приблизительно 150 мг в сутки или даже более конкретно - приблизительно от 25 до приблизительно 80 мг в сутки. Поддерживающие дозы предпочтительно вводят ежедневно и их можно вводить в виде однократных доз или дробных доз.

В определенных вариантах осуществления дозу соединения или композиции по изобретению можно вводить для достижения равновесной концентрации активного ингредиента в крови или сыворотке субъекта. Равновесную концентрацию можно определить посредством измерения в соответствии со способами, доступными специалистам, или она может основываться на физических свойствах субъекта, таких как рост, масса и возраст. В определенных вариантах осуществления вводят достаточное количество соединения или композиции по изобретению для достижения равновесной концентрации в крови или сыворотке субъекта приблизительно от 300 до приблизительно 4000 нг/мл, приблизительно от 400 до приблизительно 1600 нг/мл или приблизительно от 600 до приблизительно 1200 нг/мл. В течение от одних до пяти суток можно вводить ударные дозы для достижения равновесной концентрации в крови или сыворотке приблизительно от 1200 до приблизительно 8000 нг/мл или приблизительно от 2000 до приблизительно 4000 нг/мл. Можно вводить поддерживающие дозы для достижения равновесной концентрации в крови или сыворотке субъекта приблизительно от 300 до приблизительно 4000 нг/мл, приблизительно от 400 до приблизительно 1600 нг/мл или приблизительно от 600 до приблизительно 1200 нг/мл.

В определенных вариантах осуществления можно повторять введение одной и той же композиции по изобретению, а введения можно разделять, по меньшей мере, 1 сутками, 2 сутками, 3 сутками, 5 сутками, 10 сутками, 15 сутками, 30 сутками, 45 сутками, 2 месяцами, 75 сутками, 3 месяцами или 6 месяцами. В других вариантах осуществления можно повторять введение одного и того же профилактического или терапевтического средства, а ведение можно разделять, по меньшей мере, 1 сутками, 2 сутками, 3 сутками, 5 сутками, 10 сутками, 15 сутками, 30 сутками, 45 сутками, 2 месяцами, 75 сутками, 3 месяцами или 6 месяцами.

В определенных аспектах настоящее изобретение относится к единицам дозирования, содержащим соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, в форме, подходящей для введения. Такие формы подробно описаны выше. В определенных вариантах осуществления единица дозирования содержит от 1 до 1000 мг, от 5 до 250 мг или от 10 до 50 мг активного ингредиента. В конкретных вариантах осуществления единицы дозирования содержат приблизительно 1, 5, 10, 25, 50, 100, 125, 250, 500 или 1000 мг активного ингредиента. Такие единицы дозирования можно получать способами, известными специалистам в данной области.

В способах комбинированного лечения по изобретению необходимо использовать дозы вторых средств. В определенных вариантах осуществления в способах комбинированного лечения по изобретению применяют дозы, меньшие, чем дозы, которые использовали или используют в настоящее время для профилактики или лечения HCV. Рекомендованные дозы вторых средств можно получить на основе знания специалистов. Для тех вторых средств, которые одобрены для клинического использования, рекомендованные дозы описаны, например, в Hardman et al, eds., 1996, Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis Of Basis Of Therapeutics 9^th Ed, Mc-Graw-Hill, New York; Physician's Desk Reference (PDR) 57^th Ed., 2003, Medical Economics Co., Inc., Montvale, NJ, которые включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.

В различных вариантах осуществления лекарственные средства (например, производное циклоспорина по изобретению и второе средство) вводят с интервалом менее чем 5 минут, с интервалом менее чем 30 минут, с интервалом 1 час, с интервалом приблизительно 1 час, с интервалом приблизительно от 1 до приблизительно 2 часов, с интервалом приблизительно от 2 часов до приблизительно 3 часов, с интервалом приблизительно от 3 часов до приблизительно 4 часов, с интервалом приблизительно от 4 часов до приблизительно 5 часов, с интервалом приблизительно от 5 часов до приблизительно 6 часов, с интервалом приблизительно от 6 часов до приблизительно 7 часов, с интервалом приблизительно от 7 часов до приблизительно 8 часов, с интервалом приблизительно от 8 часов до приблизительно 9 часов, с интервалом приблизительно от 9 часов до приблизительно 10 часов, с интервалом приблизительно от 10 часов до приблизительно 11 часов, с интервалом приблизительно от 11 часов до приблизительно 12 часов, с интервалом приблизительно от 12 часов до 18 часов, с интервалом от 18 часов до 24 часов, от 24 часов до 36 часов, от 36 часов до 48 часов, от 48 часов до 52 часов, от 52 часов до 60 часов, от 60 часов до 72 часов, от 72 часов до 84 часов, от 84 часов до 96 часов или с интервалом от 96 часов до 120 часов. В определенных вариантах осуществления два или более лекарственных средства вводят в течение одного визита пациента.

В определенных вариантах осуществления производное циклоспорина по изобретению и второе средство вводят циклически. Цикличность лекарственного средства подразумевает введение первого лекарственного средства (например, первых профилактических или терапевтических средств) в течение некоторого периода времени, с последующим введением второго лекарственного средства (например, вторых профилактических или терапевтических средств) в течение некоторого периода времени, с последующим введением третьего лекарственного средства (например, третьих профилактических или терапевтических средств) в течение некоторого периода времени и так далее, и повторение этого последовательного введения, т.е. цикл для уменьшения развития устойчивости к одному из средств, во избежание или снижения побочных эффектов одного из средств и/или для улучшения эффективности лечения.

В определенных вариантах осуществления можно повторять введение одного и того же средства, а введения могут разделяться, по меньшей мере, 1 сутками, 2 сутками, 3 сутками, 5 сутками, 10 сутками, 15 сутками, 30 сутками, 45 сутками, 2 месяцами, 75 сутками, 3 месяцами или 6 месяцами. В других вариантах осуществления можно повторять введение одного и того же средства, а введения могут разделяться, по меньшей мере, 1 сутками, 2 сутками, 3 сутками, 5 сутками, 10 сутками, 15 сутками, 30 сутками, 45 сутками, 2 месяцами, 75 сутками, 3 месяцами или 6 месяцами.

В определенных вариантах осуществления производное циклоспорина по изобретению и второе средство вводят пациенту, предпочтительно млекопитающему, более предпочтительно - человеку, в последовательности и в пределах временного интервала так, что производное циклоспорина может действовать совместно с другим средством с обеспечением большего благоприятного эффекта, чем если бы их вводили иным образом. Например, второе активное средство можно вводить в то же время или последовательно в любом порядке в различные моменты времени; однако если не вводить в то же время, их следует вводить достаточно близко по времени так, чтобы обеспечить желательный терапевтический или профилактический эффект. В одном из вариантов осуществления производное циклоспорина и второе активное средство оказывают свое воздействие в перекрывающихся интервалах времени. Каждое второе активное средство можно вводить раздельно в любой подходящей форме и любым подходящим маршрутом. В других вариантах осуществления производное циклоспорина вводят до введения второго активного средства, одновременно с ним или после него.

В различных вариантах осуществления производное циклоспорина и второе средство вводят с интервалом менее чем приблизительно 1 час, с интервалом приблизительно 1 час, с интервалом приблизительно от 1 часа до приблизительно 2 часов, с интервалом приблизительно от 2 часов до приблизительно 3 часов, с интервалом приблизительно от 3 часов до приблизительно 4 часов, с интервалом приблизительно от 4 часов до приблизительно 5 часов, с интервалом приблизительно от 5 часов до приблизительно 6 часов, с интервалом приблизительно от 6 часов до приблизительно 7 часов, с интервалом приблизительно от 7 часов до приблизительно 8 часов, с интервалом приблизительно от 8 часов до приблизительно 9 часов, с интервалом приблизительно от 9 часов до приблизительно 10 часов, с интервалом приблизительно от 10 часов до приблизительно 11 часов, с интервалом приблизительно от 11 часов до приблизительно 12 часов, с интервалом не более чем 24 часа или с интервалом не более чем 48 часов. В других вариантах осуществления производное циклоспорина и второе средство вводят одновременно.

В других вариантах осуществления производное циклоспорина и второе средство вводят с интервалом приблизительно от 2 до 4 суток, с интервалом приблизительно от 4 до 6 суток, с интервалом приблизительно 1 неделю, с интервалом приблизительно от 1 до 2 недель или с интервалом более 2 недель.

В определенных вариантах осуществления производное циклоспорина и второе средство вводят пациенту циклически. Цикличность лекарственного средства подразумевает введение первого лекарственного средства в течение некоторого периода времени, с последующим введением второго лекарственного средства в течение некоторого периода времени и/или третьего лекарственного средства в течение некоторого периода времени и повторение этого последовательного введения. Цикличность лекарственного средства может уменьшить развитие резистентности к одному или нескольким из лекарственных средств, избежать или снизить побочные эффекты одного из лекарственных средств и/или улучшить эффективность лечения.

В определенных вариантах осуществления производное циклоспорина и второе активное средство вводят в цикле длительностью менее чем приблизительно 3 недели, приблизительно однократно каждые две недели, приблизительно однократно каждые 10 суток или приблизительно однократно каждую неделю. Один цикл может включать введение производного циклоспорина и второго средства посредством инфузии в течение приблизительно 90 минут в каждом цикле, приблизительно 1 час в каждом цикле, приблизительно 45 минут в каждом цикле. Каждый цикл может включать, по меньшей мере, 1 неделю покоя, по меньшей мере, 2 недели покоя, по меньшей мере, 3 недели покоя. Количество вводимых циклов приблизительно составляет от 1 до приблизительно 12 циклов, более обычно - приблизительно от 2 до приблизительно 10 циклов и более обычно - приблизительно от 2 до приблизительно 8 циклов.

В других вариантах осуществления курсы лечения проводят у пациента параллельно, т.е. индивидуальные дозы второго средства вводят отдельно, но в пределах временного интервала так, что производное циклоспорина может работать совместно со вторым активным средством. Например, один компонент можно вводить один раз в неделю в сочетании с другими компонентами, которые можно вводить один раз каждые две недели или один раз каждые три недели. Другими словами, схемы дозирования осуществляют параллельно, даже если лекарственные средства вводят не одновременно или в течение одних суток.

Второе средство может действовать с производным циклоспорина аддитивно или синергически. В одном из вариантов осуществления производное циклоспорина вводят одновременно с одним или несколькими вторыми средствами в той же фармацевтической композиции. В другом варианте осуществления производное циклоспорина вводят одновременно с одним или несколькими вторыми средствами в раздельных фармацевтических композициях. В другом варианте осуществления производное циклоспорина вводят до или после введения второго средства. Изобретение относится к введению производного циклоспорина и второго средства одним и тем же или различными маршрутами введения, например пероральным и парентеральным. В определенных вариантах осуществления, когда производное циклоспорина вводят одновременно со вторым средством, которое потенциально вызывает вредные побочные эффекты, включая в качестве неограничивающих примеров, токсичность, второе активное средство можно эффективно вводить в дозе, которая лежит ниже порога, который вызывает вредный побочный эффект.

5.5. Наборы

Изобретение также относится к наборам для применения в способах лечения или профилактики инфекции HCV. Наборы могут включать соединение или композицию производного циклоспорина по изобретению, второе средство или композицию и инструкции, предоставляющие информацию для медицинского работника относительно способа применения для лечения или профилактики бактериальной инфекции. Инструкции можно предоставлять в печатной форме или в форме электронного средства, такого как гибкий диск, CD или DVD, или в форме адреса веб-сайта, где можно получить такие инструкции. Единица дозирования производного или композиции циклоспорина по изобретению или второго средства или композиции могут включать такую дозу, которая при введении субъекту может поддерживать терапевтически или профилактически эффективный уровень соединения или композиции в плазме у субъекта в течение, по меньшей мере, 1 суток. В некоторых вариантах осуществления соединение или композицию можно включать в виде стерильной водной фармацевтической композиции или композиции сухого порошка (например, лиофилизированного). В одном из вариантов осуществления соединение представляет собой соединение формулы (I).

В некоторых вариантах осуществления предоставлена подходящая упаковка. Как применяют в настоящем документе, "упаковка" относится к твердому матриксу или материалу, обычно применяемому в системе и способному к поддержанию производного циклоспорина по изобретению и/или второго средства, подходящих для введения субъекту, в пределах фиксированных границ. Такие материалы включают стеклянные и пластиковые (например, полиэтиленовые, полипропиленовые и поликарбонатные) бутылки, флаконы, бумагу, пластик и многослойные оболочки из полимерной пленки и т.п. Если применяют способ стерилизации электронным пучком, упаковка для обеспечения стерилизации содержимого должна обладать достаточно низкой плотностью.

Следующие примеры иллюстрируют синтез репрезентативных производных циклоспорина, применяемых по настоящему изобретению. Эти примеры не предназначены для ограничения объема изобретения и их не следует рассматривать как ограничивающие его объем. Понятно, что изобретение можно применять иначе, чем конкретно описано в настоящем документе. Ввиду приведенных в настоящем документе указаний возможны многочисленные модификации и вариации настоящего изобретения и, таким образом, они находятся в объеме изобретения.

6. ПРИМЕРЫ

6.1. Пример 1: 3-метокси-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин

3-Метокси-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин:

К раствору 1,4-диацетил-3-метокси-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорина (275 мг) в метаноле (15 мл) добавляли 25% масс. метоксида натрия в метаноле (0,12 мл) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов в атмосфере азота. Метанол удаляли при пониженном давлении, а осадок разбавляли этилацетатом (50 мл), отмывали насыщенным хлоридом аммония (30 мл), соляным раствором (30 мл) и сушили над безводным сульфатом натрия. После удаления растворителя остаток очищали с применением препаративной жидкостной хроматографии с выходом 33 мг указанного в заголовке соединения (Соединение T).

Сигналы ЯМР для этого соединения в дейтерохлороформе составляют (м.д.) 5,80 (синглет, H саркозина) и четыре дублетных сигнала NH 7,14, 7,39, 7,69, и 7,96. LCMS (ESI): рассчитано для C₆₃H₁₁₃N₁₁ O₁₄: 1247, найдено 1248,5 (M + H)⁺.

3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин :

3-[(R)-2-(N,N-диметиламино)этилтио-Sar]-4-(гамма-гидроксиметиллейцин)циклоспорин (соединение O) получают как описано, например, в патенте США № 5977067.

6.2. Пример 2. Активность HCV

Этот пример демонстрирует, что соединения по изобретению являются эффективными против инфекции HCV. Кроме того, этот пример демонстрирует, что соединения по изобретению при сравнении с циклоспорином A демонстрируют благоприятный эффект или цитотоксичность, или оба.

Соединения по настоящему изобретению тестировали на активность против HCV с применением способов, адаптированных из способов, описанных Kriger et al, 2001, Journal of Virology, 75:4614-4624, Pietschmann et al., 2002, Journal of Virology 76:4008-4021 и с применением РНК-конструкций HCV, как описано в патенте США № 6630343. Таким образом, содержание этих ссылок включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

Соединения тестировали в клеточной линии гепатомы человека ET (lub ubi neo/ET), где РНК-репликон HCV содержал стабильный репортерный ген люциферазы (LUC). РНК-репликон HCV ET содержит 5'-конец HCV (внутренний участок связывания рибосомы (IRES) HCV и первыми несколькими аминокислотами корового белка HCV), который направлял продукцию слитного белка люциферазы светляка (LUC), убиквитина и неомицинфосфотрансферазы (NeoR). Расщепление убиквитина высвобождает белки LUC и NeoR. Элемент IRES EMCV контролирует трансляцию структурных белков HCV NS3-NS5. Белок NS3 расщепляет полипротеин HCV с высвобождением зрелых белков NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B, которые необходимы для репликации HCV. На 3'-конце репликона находится оригинальный 3'-NTR HCV. Активность репортера LUC прямо пропорциональна уровням репликации HCV и представляющие положительный контроль противовирусные соединения дают воспроизводимый антивирусный ответ с использованием конечной точки LUC.

Соединения растворяли в DMSO при пяти полулогарифмах концентрации каждое в диапазоне от 0,02 до 2,0 мкМ, от 0,03 до 3 мкМ, от 2,0 до 20 мкМ или от 1 до 100 мкМ. Субконфлюэнтные культуры линии ET высевали в 96-луночные планшеты, предназначенные для анализа числа клеток (цитотоксичности) или противовирусной активности и на следующие сутки в соответствующие лунки добавляли соединения. Клетки обрабатывали через 72 часа, когда клетки все еще оставались субконфлюэнтными. Антивирусную активность выражали как EC₅₀ и EC ₉₀, эффективные концентрации соединений, снижающих вирусную репликацию на 50 и 90%, соответственно. Значения EC₅₀ и EC₉₀ соединения получали на основании уровней РНК HCV, оцениваемых как направляемая РНК-репликоном HCV активность LUC. Цитотоксичность выражали как IC₅₀ и IC₉₀ , концентрация соединения, которая ингибирует жизнеспособность клеток на 50 и 90%, соответственно. Значения IC₅₀ и IC₉₀ соединения рассчитывали с применением колориметрического анализа в качестве показателя количества клеток и цитотоксичности. Активность репортера LUC прямо пропорциональна уровням РНК HCV в клеточной линии человека. Анализ репликонов HCV подтверждали в параллельных экспериментах с применением интерферона-альфа-2b в качестве положительного контроля. Также посредством сравнения тестировали циклоспорин. Соединения по изобретению сильно ингибируют репликацию HCV в клетках печени человека в большей степени, чем циклоспорин. Кроме того, при рассмотрении уровня цитотоксичности большинство соединений по данному изобретению демонстрируют более широкий коэффициент безопасности (например, цитотоксичность IC ₅₀ в зависимости от антивирусной EC₅₀), чем циклоспорин.

Получены следующие результаты (см. таблицу) (если не указано иначе все значения представлены в нМ), "н/о" означает, что данные не определяли

Соединение	Активность HCV	Цитотоксичность
EC50	EC90	IC50	IC90
O	122	300	13440	>20000
T	80	410	>2000	>2000
Циклоспорин	400	1420	5780	19403

6.3. Пример 3: Связывание циклофилина и активность HCV

В этом примере предоставлены дополнительные способы оценки эффективности соединений по изобретению для лечения или профилактики инфекции HCV у нуждающегося в этом субъекта.

Показано, что определенные циклоспорины эффективны для лечения или профилактики инфекции HCV вследствие связывания циклоспорина с циклофилином B (CyPB). См. Watashi et al, 2005, Molecular Cell 19:111-122; Nakagawa et al, 2005 Gastroenterology 129(3):1031-41, содержание которой, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Хотя и не имея намерения связываться какой-либо конкретной теорией действия, полагают, что циклофилин B является критичным для эффективной репликации генома HCV. Циклоспорин A и производные циклоспорина, которые ингибируют циклофилин B, могут существенно снижать репликацию HCV в стандартных анализах.

Таким образом, показано, что соединения по настоящему изобретению эффективны для лечения или профилактики инфекции HCV при оценке их связывания или модуляции циклофилина, например циклофилина B. Модуляцию циклофилина соединением по данному изобретению измеряют стандартными способами, например способами, описанными в Watashi et al, 2005, способами, описанными в Nakagawa et al, 2005, или способами, описанными в Billich et al,J. Virol 69:2451-2461, содержание которых, таким образом, включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

6.4. Пример 4: Пероральные лекарственные формы

Одно или несколько соединений по изобретению можно формулировать в виде капсулы. Такая капсула может содержать от 10 до 200 мг соединения и один или несколько эксципиентов, выбранных из группы, состоящей из микрокристаллической целлюлозы, прежелатинизированного крахмала, лактозы, крахмалгликолята натрия, кросповидона, повидона, гидроксипропилцеллюлозы, стеарата магния и диоксида кремния. Полученный состав можно инкапсулировать в одну или несколько стандартных композиций для инкапсуляции, таких как желатин или пластификатор.

Одно или несколько соединений по изобретению можно формулировать в виде соли в сироп или эликсир. Соединение или соединения могут находиться в общей концентрации от 5 до 50 мг/мл. Сироп или эликсир может дополнительно содержать полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, смеси полиэтиленгликоля, PEG 400, блок-сополимер этиленоксида и пропиленоксида (например, полоксамер 407), полисорбат 20, этанол, сахар, лимонную кислоту и/или вкусовые добавки.

6.5. Пример 5: Аддитивная и синергическая активность против HCV соединений по изобретению в сочетании с интерфероном

Соединения и комбинации оценивали в анализе репликона HCV, описанном в примере 2, с указанными ниже изменениями.

Для анализа одного соединения их растворяли в DMSO, каждое при пяти полулогарифмах концентрации в диапазоне от 0,02 до 2 мкМ или от 0,2 до 20 мкМ. Значения EC ₅₀ и EC₉₀, а также значения IC₅₀ и IC₉₀ соединения определяли в соответствии с примером 2. Анализ репликации HCV подтверждали в параллельных экспериментах с применением интерферона-альфа-2b в качестве положительного контроля. Также тестировали циклоспорин A.

Для анализа эффективности и цитотоксичности двух соединений (например, лекарственного средства 1 и лекарственного средства 2) в сочетаниях при пяти в отношении девяти полулогарифмов концентраций использовали анализ оценки антивирусной активности на РНК-репликон HCV. Анализ проводили с применением формата планшета для микротитрования для размещения сред, лекарственного средства, клеток и вируса. Для анализа количества клеток (цитотоксичности) или антивирусной активности субконфлюэнтные культуры линии ET переносили в 96-луночные планшеты; приблизительно через 24 часа в соответствующие лунки добавляли лекарственные средства 1 и 2. Клетки обрабатывали через 72 часа, когда клетки все еще были субконфлюэнтными. Уровни РНК-репликона HCV оценивали в виде направляемой РНК-репликоном HCV активности Luc, как описано в Пример 2. Цитотоксичность оценивали как концентрации лекарственного средства, уменьшающие число клеток, как описано в примере 2.

Соединения по данному изобретению тестировали как "лекарственное средство 2" при девяти концентрациях от 0,0078 до 2,0 мкМ. Интерферон-альфа (Sigma) тестировали как лекарственное средство 1 при количества от 0,005 до 0,5 международных единиц на мл (МЕ/мл). Данные, полученные из этих "шахматных" анализов, анализировали с применением программ MacSynergy II (v 2.01) (Prichard & Shipman, 1990, Antiviral Res. U:181-205) и Delta Graph (v 1.5d). Каждую точку данных, использованную для получения трехмерных графиков (фиг. 1A-1C), определяли на основе результатов трех образцов. Статистическую релевантность данных анализировали и определяли на одном из трех уровней достоверности (68, 95 или 99%) для отображения комбинированных результатов как аддитивные, синергические или антагонистические.

Эффекты сочетаний лекарственных средств рассчитывали на основе активности каждого соединения, при тестировании по отдельности. Ожидаемую аддитивную противовирусную защиту вычитали из экспериментально определенной антивирусной активности при каждой концентрации сочетания, получая в результате положительное значение (синергия), отрицательное значение (антагонизм) или ноль (аддитивность). Результаты, представленные в трехмерном виде при каждой концентрации сочетания, давали поверхность активности, располагающуюся выше (синергия) или ниже (антагонизм) "плоскости аддитивности". Синергию определяют как сочетания лекарственных средств, дающие значения синергии, большие 50. Незначительную синергическую активность и высокую синергическую активность оперативно определяют как дающие значения синергии 50-100 и >100, соответственно. Аддитивные взаимодействия лекарственных средств характеризуются значениями синергии в диапазоне от -50 до 50. Антагонистические взаимодействия лекарственных средств характеризуются значениями синергии в диапазоне от -50 до -100, а значения < -100 являются высоко антагонистичными.

Для соединения O, соединения T и циклоспорина A значение на поверхности рассчитывали и выражали в виде значения синергии (в единицах концентрации, умноженных на концентрацию, умноженную на процент; например мкМ² %, нМ²%, нМмкМ%, а для IFN (МЕ/мл)мкМ% и т.д.) при 95% доверительном интервале (фиг. 1A-1C).

Как показано на фиг. 1A, сочетание соединения O и IFN является высоко синергическим. EC₅₀ соединения O в отдельности составляла 100 нМ, а IC₅₀ соединения O в отдельности составляла > 2000 нМ. При 95% доверительном интервале величина противовирусной синергии составляла 122 МЕ/млмкМ% или была высоко синергической.

Как показано на фиг. 1B, сочетание соединения T и IFN является аддитивным. EC₅₀ соединения T в отдельности составляло 200 нМ, а IC₅₀ соединения T в отдельности составляла > 2000 нМ. При 95% доверительном интервале величина противовирусной синергии составляла 6 МЕ/млмкМ% или была аддитивной.

Как показано на фиг. 1C, сочетание циклоспорина A и IFN является аддитивным. EC₅₀ циклоспорина A в отдельности составляла 750 нМ, а IC₅₀ циклоспорин A в отдельности составляла > 2000 нМ. При 95% доверительном интервале величина противовирусной синергии составляла 43 МЕ/млмкМ% или была аддитивной.

6.6. Пример 6: Активность соединений по изобретению в сочетании с ингибитором обратной транскриптазы против HCV

Соединения и комбинации оценивали в анализе репликона HCV, описанном в примере 5, с указанными ниже изменениями.

Соединение O по данному изобретению тестировали как "лекарственное средство 2" при девяти концентрациях от 0,0078 до 2,0 мкМ. 2'-C-метилцитидин (активную форму пролекарственного средства валопицитабина и мощный ингибитор NS5B) добавляли как "лекарственное средство 1"; лекарственное средство 1 тестировали при 62,5, 125, 250 и 500 нМ.

Для соединения O значение на поверхности рассчитывали и выражали в виде значения синергии (в единицах концентрации, умноженных на концентрацию, умноженную на процент; например мкМ² %) при 95% доверительном интервале (фиг. 2).

Как показано на фиг. 2, сочетание соединения O и 2'-C-метилцитидина является высоко синергическим. В этом эксперименте значения EC ₅₀ соединения O и 2'-C-метилцитидина по отдельности составляли 250 нМ и 750 нМ, соответственно. IC₅₀ соединения O в отдельности составляла >2000 нМ. При 95% доверительном интервале величина противовирусной синергии составляла 228 мкМ ²% или была высоко синергической.

6.7. Пример 7: Активность против HCV и токсичность соединений по изобретению в сочетании с ингибитором протеазы

Соединения и комбинации оценивали в анализе репликона HCV, описанном в примере 5, с указанными ниже изменениями. (1R, 2S, 5S)-3-азабицикло[3.1,0]гексан-2-карбоксамид, N-[3-амино-1-циклобутилметил)-2,3-диоксопропил]-3-[(2S)-2-[[[1,1-диметилэтил]амино]карбониламино]-3,3-диметил-1-оксобутил]-6,6-диметил, ингибитор протеазы (ингибитор протеазы NS3-4A HCV), здесь и ниже, обозначаемый, как соединение 3, получали способами, описанными в публикации патентной заявки США № 2005/0249702 и публикации PCT № WO2004/113294, содержание которых включено посредством ссылки (соединение тестировали как диастереомерную смесь 1:1 с хиральным центром, связанным с группой циклобутилметила: т.е. атом углерода 1,3-амино-1-циклобутилметила-2,3-диоксопропил остаток).

Эффекты сочетаний лекарственных средств рассчитывали на основе активности каждого соединения, при тестировании по отдельности. Ожидаемую аддитивную противовирусную защиту вычитали из экспериментально определенной антивирусной активности при каждой концентрации сочетания, получая в результате положительное значение (синергия), отрицательное значение (антагонизм) или ноль (аддитивность). Результаты анализов сочетаний, представленные в трехмерном виде при каждой концентрации сочетания, дают поверхность активности, располагающуюся выше (синергия) или ниже (антагонизм) плоскости аддитивности. Значение на поверхности рассчитывали и выражали в виде значения синергии (в единицах концентрации, умноженных на концентрацию, умноженную на процент; например мкМ ²%, нМ²%, нМмкМ% и т.д.) рассчитанные при 95% доверительном интервале. Для этих исследований синергию определяют как сочетания лекарственных средств, дающие значения синергии, большие 50. Аддитивные взаимодействия лекарственных средств характеризуются значениями синергии в диапазоне от -50 до 50, тогда как значения синергии от -50 до -100 считают незначительно антагонистичными и значения <-100 являются высоко антагонистичными

Как показано на фиг. 3A, сочетание соединения O и соединения 3 являлось аддитивным и немного синергическим.

Как показано на фиг. 3B, сочетание соединения O и соединения 3 показало антагонистическую цитотоксичность, т.е. сниженную токсичность.

6.8. Пример 8: Активность производных циклоспорина против вируса вирусной диареи крупного рогатого скота в сочетании с исследованиями с интерфероном и рибавирином

Соединения оценивали по отдельности и в сочетании с рибавирином или интерфероном-альфа (IFN- ) в клетках почек коров Madin-Darby против штамма NADL (National Animal Disease Laboratory) заменителя HCV, вируса вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV). BVDV также является представителем семейства вирусов Flaviviridae, обладая многими общими важными свойствами с HCV, и его признают как пригодный заменитель для оценки антивирусных соединений для применения против HCV (Buckwald VE, Wei J, Wenzel-Mathers M, Russell J. "Synergistic in vitro interactions between alpha interferon and ribavirin against bovine viral diarrhea virus and yellow fever virus as surrogate models of hepatitis C virus replication" Antimicrob Agents Chemother. 2003, 47:2293). BVDV и HCV обладают сходными структурами геномной РНК и оба для инициации трансляции используют внутренний участок связывания рибосомы (IRES). С применением общепринятой клеточной линии-хозяина, известной как клетки почек коров Madin-Darby (MDBK), соединения тестировали против BVDV, по отдельности и в сочетании с интерфероном и рибавирином.

Используемая в данном разделе методология для тестирования соединений в виде одиночных средств или сочетаний лекарственных средств против цитопатического эффекта BVDV в клетках MDBK ранее была описана: Buckwald VE, et al. Antimicrob Agents Chemother. 2003, 47: 2293). Предоставлено краткое изложение способов. Соединения по данному изобретению растворяли в DMSO для получения исходных растворов для разведения в анализе. Соединения последовательно разводили, начиная от высокой концентрации 10 или 20 мкМ, с полулогарифмическими интервалами для оценки в антивирусном анализе in vitro . В качестве единственных средств рибавирин (Sigma, St. Louis, MO) и интерферон-альфа (IFN- , Sigma) оценивали при высоких тестовых концентрациях 100 мкМ и 10 Ед/мл, соответственно, и при последовательных разведениях с полулогарифмическими интервалами для оценки в антивирусном анализе in vitro. Клетки MDBK суспендировали при 5×10 ⁴ клеток/мл в среде для культивирования тканей и добавляли в плоскодонные планшеты для титрования в объеме 100 мкл. С применением гемацитометра и исключения красителя трипанового синего проводили количественную оценку общего числа клеток и выживаемости клеток. Планшеты инкубировали при 37°C/5% CO₂ в течение ночи для того, чтобы позволить клеткам прикрепиться.

BVDV получали из American Type Culture Collection (ATCC) и растили в клетках MDBK для получения исходных пулов вируса. Вирус суспендировали и разбавляли в среде для культивирования ткани так, чтобы количество добавляемого в каждую лунку вируса в объеме 100 мкл составляло количество, определенное как приводящее к гибели клеток в размере от 85 до 95% через 6 суток после заражения.

Каждый планшет для микротитрования содержал лунки с контролем клеток (только клетки), лунки с контролем вируса (клетки и вирус), лунки для определения токсичности лекарственного средства (только клетки и соединение), лунки для колориметрического контроля лекарственного средства (только лекарственное средство) и экспериментальные лунки (соединение с клетками и вирусом). Образцы тестировали в трех экземплярах при тестировании эффективности и в двух - при тестировании цитотоксичности. После инкубации при 37°C в инкубаторе с 5% CO₂ тестовые планшеты окрашивали тетразолиновым красителем XTT (гидроксид 2,3-бис-(2-метокси-4-нитро-5-сульфофенил)-5-[(фениламино)карбонил]-2H-тетразолия). XTT-тетразолий метаболизировали митохондриальные ферменты метаболически активных клеток до растворимого формазанового продукта, позволяя быстрый количественный анализ ингибирования индуцированной BVDV гибели клеток тестируемыми веществами против BVDV. Раствор XTT получали каждые сутки в виде маточного раствора 1 мг/мл в среде (RPMI1640). Получали раствор феназинметосульфата (PMS) при 0,15 мг/мл в PBS и хранили в темноте при -20°C. Непосредственно перед применением получали исходный раствор XTT/PMS, добавляя 40 мкл PMS на мл раствора XTT. В каждую лунку планшета добавляли пятьдесят микролитров XTT/PMS и планшет повторно инкубировали в течение 4 часов при 37°C. Планшеты заклеивали адгезивными покрытиями для планшетов и осторожно встряхивали или несколько раз переворачивали для смешения растворимого формазанового продукта, планшет подвергали спектроскопическому анализу при 450/650 нм с применением сканера планшетов Molecular Devices Vmax plate reader.

Анализ данных - Исходные данные собирали из программного обеспечения Softmax Pro 4,6 и импортировали в таблицу Microsoft Excel 2003 для анализа посредством расчетов для аппроксимации линейной зависимости. Антивирусную активность выражали как EC₅₀ и EC₉₀, эффективную концентрацию соединения, снижающую вирусную репликацию посредством 50 и 90%, соответственно; цитотоксичность выражали как IC₅₀ и IC₉₀, концентрацию соединений, которая ингибирует выживаемость клеток на 50 и 90%, соответственно. Данные суммированы в таблицах значений средней оптической плотности при каждой концентрации соединений для лунок для тестирования эффективности, токсичности и колориметрического анализа, наряду с рассчитанными значениями доли снижения вирусного цитопатического эффекта (CPE) и жизнеспособности клеток; данные использовали для графического представления процента жизнеспособности клеток и процента снижения вирусного CPE при каждой тестируемой концентрации.

Эксперименты лекарственное средство-сочетание лекарственных средств

Анализ противовирусной оценки BVDV использовали для тестирования эффективности и цитотоксичности двух соединений (например, лекарственного средства 1 и лекарственного средства 2) в сочетаниях из пяти по отношению к девяти полулогарифмических концентраций. Анализ проводили с применением формата планшета для микротитрования для размещения сред, лекарственного средства, клеток и вируса. Статистические оценки проводили способом Prichard and Shipman (Antiviral Research 1990,14:181-206). Пять концентраций каждого тестируемого соединения (лекарственное средство 1) тестировали во всех возможных сочетаниях с девятью концентрациями рибавирина или IFN- (лекарственное средство 2). Конечное количественное определение проводили посредством окрашивания XTT-тетразолием для подсчета жизнеспособности клеток. Эффекты сочетания лекарственных средств рассчитывали на основе активности двух соединений при тестировании по отдельности. Ожидаемую аддитивную противовирусную защиту вычитали из экспериментально определенной антивирусной активности при каждой концентрации сочетания, получая в результате положительное значение (синергия), отрицательное значение (антагонизм) или ноль (аддитивность). Результаты анализа сочетаний выражали в виде значения синергии (мкМ²%), рассчитанного на 95% доверительном интервале.

Для исследования BVDV синергию определяют как сочетания лекарственных средств, дающие значения синергии, большие 50 мкМ²%. Незначительную синергическую активность и высокую синергическую активность определили, как дающие значения синергии 50-100 мкМ²% и >100 мкМ²%, соответственно. Значения синергии от -50 до 50 мкМ²% считают аддитивными, а значения синергии, меньшие -50 мкМ²%, рассматривают как антагонистические.

Результаты сочетания лекарственных средств с рибавирином в анализе BVDV:

Соединения по изобретению и рибавирин были синергическими в отношении противовирусной активности против BVDV, суррогатного вируса для HCV человека. Когда соединения по изобретению тестировали в сочетании с рибавирином, значительной антагонистической активности не наблюдали. Соединения C и O были более синергическими, чем циклоспорин A, со значениями синергии на 25% больше чем у циклоспорина A.

Результаты сочетания лекарственных средств с IFN- в анализе BVDV:

Для соединения C или CsA в сочетании с IFN- показаны аддитивные взаимодействия при действии против BVDV. Соединение O проявляло синергическое взаимодействие с IFN-a. Антагонистическая цитотоксичность являлась результатом сочетания соединения O и IFN- или соединения C и IFN- , таким образом, означая снижение токсичности для клеток-мишеней для этих соединений при использовании в сочетании по сравнению с токсичностью этих соединений по отдельности. Синергическую токсичность, т.е. увеличение токсичности в сочетании, по сравнению с каждым соединением по отдельности при указанных концентрациях наблюдали для CsA и IFN- .

Все публикации и патентные заявки, цитируемые в данном описании, включены в настоящий документ в качестве ссылки так, как если каждая отдельная публикация или патентная заявка были конкретно и индивидуально указаны для включения в качестве ссылки. Хотя изобретение описано в отношении различных предпочтительных вариантов осуществления, специалисты в данной области поймут, что можно проводить различные модификации, замены, исключения и изменения без отклонения от его сущности. Таким образом, полагают, что объем настоящего изобретения ограничен исключительно объемом следующей далее формулы изобретения, включая его эквиваленты.