замещенные производные оксазола и их применение в качестве ингибиторов тирозинкиназы

Формула изобретения

1. Соединение формулы I



где заместители А, В, В', Q и R₁ -R₅ в формуле I определены следующим образом:

А и В' являются одной из нижеуказанных групп:

i) (R₆)N(CH₂)_n, где n является 0 или 1;

ii) (СН₂)_n, где n является 0, 1 или 2;

iii) C(O)(CH₂)_n, где n является 0 или 1;

или, если каждый из А и В' представляют собой азот, они вместе могут образовать бивалентный радикал формулы



где s и t каждый независимо является 1 или 2 и X¹ представляет собой (СН₂)_n , где n является 0 или 1;

В является одной из нижеуказанных групп:

i) (R₆)N;

ii) кислородом;

iii) C= , где представляет собой кислород или серу;

iv) C(R ₆)=C(R₇);

R₆ и R₇ каждый независимо являются водородом, C_1-4-алкилом;

R₁ выбирают из групп, указанных ниже:

i) фенильной группы, замещенной одним или более заместителем, таким как:

- галоген, выбираемый из F, Cl, Br или I, или

- алкильная¹ группа;

- арильная ¹ или гетероарильная группа¹;

- циано, NH-алкил¹, N(алкил¹)(алкил¹) и амино;

- NHCO-R, или NHCOO-R, или COO-R, или CONH-R, где R представляет собой водород или алкильную¹ группу, или

ii) пиридинильной группы, которая может быть замещена одним заместителем, таким как

- галоген, выбираемый из I, F, Cl или Br;

- алкильная¹ группа;

- арильная¹ группа;

- циано, NH-алкил ¹, N(алкил¹)(алкил¹) и амино;

- NHCO-R, или NHCOO-R, или COO-R, или CONH-R, где R представляет собой водород или алкильную¹ группу;

каждый R₂, R₃, R₄ и R₅ независимо выбирают из водорода или линейной или разветвленной алкильной группы, содержащей от 1 до 10 атомов углерода;

Q выбирают из нижеуказанных групп:

i) алкил¹;

ii) арил¹;

iii) гетероарил¹,

где

- алкильная¹ группа означает линейную или разветвленную группу, содержащую 1-10 атомов углерода, азот, последний необязательно в форме основной боковой азотсодержащей функциональной группы, представляющей собой пиперазин, пиперидин, замещенные С_1-4алкилом, морфолин;

- арильная ¹ группа представляет собой фенил или фенил, который может быть замещен в любом положении кольца любым сочетанием одного или нескольких заместителей, таких как

- галоген, выбираемый из I, F, Cl или Br;

- C_1-4алкильная группа;

- гетероарильная¹ группа;

- трифторметил, циано;

- гетероарильная¹ группа представляет собой пиридил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, фуранил, оксазолил, изоксазолил, бензимидазол, бензоксазол, бензотиазол, которые дополнительно могут быть замещены в любом положении кольца любым сочетанием одного или нескольких заместителей, таких как

- галоген, выбираемый из F, Cl, Br или I;

-алкильная ¹ группа;

-SO₂-R, где R соответствует С_1-4алкилу.

2. Соединение по п.1 формулы II



где Y представляет собой кислород или серу, Z представляет собой (СН₂)_n, где n является 0 или 1, L выбирают из алкила¹, арила¹ или гетероарила¹ и R₁, R₂, R ₃, R₄, R₅ и R₆ определены в п.1.

3. Соединение по п.1 формулы III



где n является целым числом 0, 1 или 2;

М представляет собой (СН₂)_n, где n является 0, 1 или 2;

Р выбирают из алкила¹, арила ¹ или гетероарила¹ и

R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ имеют значения, описанные выше.

4. Соединение по п.1 формулы IV



где G представляет собой N(R₁₁) или (CH₂)_n, где n является 1 или 2;

Н представляет собой кислород или N(R₁₁);

J выбирают из алкила¹, арила¹ или гетероарила ¹;

R₁₁ является водородом или С _1-4-алкилом;

R₁, R₂, R ₃, R₄ и R₅ имеют значения, описанные выше.

5. Соединение по п.1, выбираемое из:

- 4-{2-[5-(бензотиазол-2-иламино)-2-метил-фениламино]-оксазол-5-ил}-бензонитрил,

- 4-{2-[5-бензотиазол-2-имамино)-2-метил-фениламино]-оксазол-5-ил}бензонитрил,

- N1-бензооксазол-2-ил)-4-метил-N3-(5пиридин-3-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин,

- N1-(5-хлор-бензооксазол-2-ил)-4-метил-N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин,

- N1 -(6-хлор-бензооксазол-2-ил)-4-метил-N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин,

- N-(5-этансульфонил-бензооксазол-2-ил)-4-метил-N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин,

- 4-метил-N1-(5-метил-бензооксазол-2-ил)-N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин,

- N-(5-фтор-бензооксазол-2-ил)-4-метил-N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин,

- N1-(6-хлор-бензооксазол-2-ил)-4-метил-N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин,

- 4-(2-{5-[3-(3-фтор-фенил)-2-оксо-имидазолидин-1-ил]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрил,

- 4-(2-{5-[3-(3-циано-фенил)-2-оксо-имидазолидин-1-ил]-2-метил-фениламино}оксазол-5-ил)-бензонитрил,

- 4-(2-{5-[3-(3-фтор-фенил)-2-оксо-имидазолидин-1-ил]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензамид,

- 1-(4-фтор-фенил)-3-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]имидазолидин-2-он,

- 1-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-3-(3-трифторметил-фенил)-имидазолидин-2-он,

- 1-(4-фтор-фенил)-3-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-тетрагидро-пиримидин-2-он,

- 1-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-3-фенил-пропан-1-он,

- 4-[2-(5-ацетил-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-бензонитрил,

- 4-(2-{5-[3-(4-фтор-фенил)-пропионил]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрил,

- 4-{2-[2-метил-5-(3-фенил-пропионил)-фениламино]-оксазол-5-ил}-бензонитрил,

- 4-(2-{5-[3-(3-фтор-фенил)-пропионил]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрил,

- 4-[2-(5-ацетил-2-метил-фениламино)-оксазол-5 -ил] -бензамид,

- 1-(4-фтор-фенил)-2-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фениламино]-этанон,

- 1-(4-фтор-фенил)-2-{метил-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-амино}-этанон,

- 4-({метил-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-амино}-ацетил)-бензонитрил,

- 2-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фениламино]-1-фенил-этанон,

- 4-(2-{5-[2-(4-фтор-фенил)-2-оксо-этиламино]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрил,

- N-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-бензил]-бензамид,

- 2-{метил-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-амино}-1-фенил-этанон.

6. Соединение по одному из пп.1-4, где R₁ является пиридилом или бензонитрилом, которые могут быть дополнительно замещены в любом положении кольца любым сочетанием одного или нескольких заместителей, таких как

- галоген, выбираемый из F, Cl, Br или I;

- алкильная¹ группа;

- арильная¹ группа;

- циано, NH-алкил ¹, N(алкил¹)(алкил¹) и амино;

- NHCO-R, или NHCOO-R, или COO-R, или CONH-R, где R представляет собой водород, алкильную¹ группу.

7. Фармацевтическая композиция, обладающая свойствами ингибитора c-kit, содержащая соединение по одному из пп.1-6 и фармацевтически приемлемый носитель для лечения заболевания, выбираемого среди неопластических, аллергических, воспалительных и аутоиммунных заболеваний.

8. Фармацевтическая композиция по п.7, содержащая фармацевтически приемлемый носитель, пригодный для перорального или местного применения.

9. Применение соединения по одному из пп.1-6 для изготовления лекарственного средства, обладающего свойствами ингибитора c-kit и предназначенного для лечения заболевания, выбираемого среди неопластических, аллергических, воспалительных и аутоиммунных заболеваний.

10. Применение по п.9, при котором неопластическое заболевание выбрано среди таких, как мастоцитоз, мастоцитома собак и стромальная опухоль желудочно-кишечного тракта человека (GIST).

11. Применение по п.9, при котором аллергическое заболевание представляет собой астму.

12. Применение по п.9, при котором воспалительное заболевание представляет собой ревматоидный артрит.

13. Применение по п.9, при котором аутоиммунное заболевание представляет собой рассеянный склероз.

Описание изобретения к патенту

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение имеет отношение к замещенным производным оксазола, которые селективно модулируют, регулируют и/или ингибируют передачу сигнала, опосредованную определенными природными и/или мутантными тирозинкиназами, вовлеченными во множество болезней человека и животных, таких как нарушения клеточной пролиферации, метаболические, аллергические и дегенеративные нарушения. Более конкретно, эти соединения являются мощными и избирательными ингибиторами с-kit, bcr-abl и Flt-3.

Уровень техники

Тирозинкиназы являются белками рецепторного типа или нерецепторного типа, которые переносят терминальный фосфат АТР на остатки тирозина белков, активируя или инактивируя, таким образом, пути передачи сигнала. Известно, что эти белки вовлечены во многие клеточные механизмы, которые в случае повреждения ведут к таким нарушениям, как аномальная клеточная пролиферация и миграция, а также воспаление.

В настоящее время известно около 58 рецепторов с тирозинкиназной активностью. К ним относятся хорошо известные VEGF-рецепторы (Kim et al., Nature 362, pp.841-844, 1993), рецепторы PDGP, c-kit, Flt-3 и семейство FLK. Эти рецепторы могут передавать сигналы к другим тирозинкиназам, включая Src, Raf, Frk, Btk, Csk, Abl, Fes/Fps, Fak, Jak, Ack и т.д.

Среди рецепторов с тирозинкиназной активностью особый интерес представляет с-kit. Действительно, c-kit является ключевым рецептором, активирующим тучные клетки, для которых показано, что они прямо или косвенно вовлечены в многочисленные патологии, для которых зарегистрированы заявки WO 03/004007, WO 03/004006, WO 03/003006, WO 03/003004, WO 03/002114, WO 03/002109, WO 03/002108, WO 03/002107, WO 03/002106, WO 03/002105, WO 03/039550, WO 03/035050, WO 03/035049, US 60/359.652, US 60/359651 и US 60/449861.

Обнаружено, что тучные клетки, присутствующие в тканях пациентов, вовлечены или способствуют возникновению болезней, таких как аутоиммунные заболевания (ревматоидный артрит, воспалительные заболевания кишечника (IBD)), аллергические заболевания, потеря костной массы, раковые образования, такие как солидные опухоли, лейкемия и GIST, ангиогенез опухоли, воспалительные заболевания, интерстициальный цистит, мастоцитоз, заболевания "трансплантат против хозяина", инфекционные заболевания, метаболические нарушения, фиброз, диабет и заболевания ЦНС. Было показано, что при этих заболеваниях тучные клетки участвуют в разрушении тканей путем высвобождения смеси различных протеаз и медиаторов, таких как гистамин, нейтральные протеазы, медиаторы липидного происхождения (простагландины, тромбоксаны и лейкотриены), и различные цитокины (IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, TNF- , GM-CSF, MIP-1a, MIP-1b, MIP-2 и IFN- ).

Рецептор c-kit также может быть конститутивно активирован с помощью мутаций, что приводит к аномальной клеточной пролиферации и развитию болезней, таких как мастоцитоз (мутация D816V) и различные раковые образования, такие как GIST (c-kit 27, делеция подмембранного домена).

От 60 до 70% пациентов с острым миелобластным лейкозом (AML) имеют бластные клетки, которые экспрессируют c-kit, рецептор для фактора стволовых клеток (SCF) (Broudy, 1997). SCF стимулирует рост гематопоэтических предшественников и действует как фактор выживания для бластных клеток AML. В некоторых случаях AML (от 1 до 2%) была описана мутация в консервативном остатке киназного домена (Kit816), приводящая к конститутивной активации c-kit (Beghini et al., 2000; Longley et al., 2001). Эта мутация, приводящая к усилению функции (замещение Asp на Val/Tyr), была идентифицирована в тучных клетках лейкозных клеточных линий и в образцах, полученных от пациентов, страдающих мастоцитозом (Longley et a., 1996). Предварительные результаты показывают, что эта мутация выражена в большинстве случаев системного мастоцитоза ([~60%], Р Dubreuil, AFIRMM, исследование, проводимое в настоящее время на 300 пациентах).

По этой причине, для того, чтобы ослабить тучные клетки, ответственные за эти нарушения, было предположено сделать мишенью c-kit.

Главная цель, лежащая в основе настоящего изобретения, таким образом, состоит в том, чтобы найти мощные и селективные соединения, способные ингибировать c-kit дикого типа и/или мутантный c-kit.

В качестве ингибиторов тирозинкиназы было описано много различных соединений, например, моноциклические, бициклические или гетероциклические арильные бис-соединения (WO 92/20642), винилен-азаиндольные производные (WO 94/14808), 1-циклопропил-4-пиридил-хинолоны (US 5 330 992), стирильные соединения (US 5 217 999), стирил-замещенные пиридильные соединения (US 5 302 606), селеноиндолы и селениды (WO 94/03427), трициклические полигидроксильные соединения (WO 92/21660), соединения бензилфосфоновой кислоты (WO 91/15495), производные пиримидина (US 5,521,184 и WO 99/03854), производные индолинона и пиррол-замещенные индолиноны (US 5792783, EP 934931, US 5834504, US 5883116, US 5883113, US 5886020, WO 96/40116 и WO 00/38519), а также моноциклические, бициклические арильные и гетероарильные бис-соединения (EP 584222, US 5656643 и WO 92/20642), производные хиназолина (EP 602851, EP 520722, US 3772295 и US 4343940) и арильный и гетероарильный хиназолин (US 5721237, US 5714493, US 5710158 и WO 95/15758).

Однако ни одно из этих соединений не было описано как эффективный и избирательный ингибитор c-kit или ингибитор путей превращения c-kit.

Применительно к настоящему изобретению мы обнаружили, что соединения, демонстрирующие специфические замещения в производных оксазола, являются мощными и избирательными ингибиторами c-kit, bcr-abl, Flt-3 или путей превращения с-kit. Эти соединения являются хорошими кандидатами для лечения заболеваний, таких как аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания, раковые образования и мастоцитоз.

Раскрытие изобретения

Таким образом, настоящее изобретение имеет отношение к соединениям, принадлежащим к замещенным производным оксазола. Эти соединения способны селективно ингибировать передачу сигнала, включающую тирозин фосфокиназу c-kit, bcr-abl, Flt-3 и их мутантные формы.

В первом воплощении, изобретение направлено на соединения, имеющие формулу I, которые представляют собой либо соединения в форме свободных оснований, либо их фармацевтически приемлемые соли:

где заместители А, В, В', Q и R1-R5 в формуле I определены следующим образом:

А и В' являются одной из нижеуказанных групп:

i) (R6)N(CH2)_n, где n является 0 или 1

ii) O(CH2)_n, где n является 0 или 1

iii) S(CH2)_n, где n является 0 или 1

iv) (CH2)_n, где n является 0, 1 или 2

v) C(O)(CH2)_n, где n является 0 или 1

или, если каждый из А и В' представляют собой азот, они вместе могут образовывать бивалентный радикал, имеющий формулу:

где s и t каждый независимо является 1 или 2, и X1 представляет собой О, S, NR10, N[C(=O)R10] или (СН2) _n, где n является 0 или 1, и где каждый водород в указанной формуле (а) может быть замещен на галоген или C_1-4 -алкил.

В является одной из нижеуказанных групп:

i) (R6)N

ii) кислородом

iii) S(O)_n, где n является 0, 1 или 2

iv) CH(R6)(R7)

v) С= , где представляет собой кислород, серу, NH или N-CN

vi) C(R6)=C(R7)

vi) N=C(R6)

R6 и R7 каждый независимо являются водородом, C_1-4-алкилом, С_2-6-алкенилом, С_2-6-алкинилом, С_3-7 -циклоалкилом, C_1-4-галогеналкилом, С_1-4 -алкокси, C_1-4-гидроксиалкилом, С_1-4-алкиламином.

R1 выбирают из групп, указанных ниже:

i) водород, галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), или

ii) алкильная¹ группа, представляющая собой линейную, разветвленную или циклоалкильную группу, содержащую от 1 до 10 атомов углерода и необязательно замещенную одним или несколькими гетероатомами, такими как галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), кислород и азот, последний необязательно в форме пендантной функциональной группы, представленной азотистым основанием; а также трифторметил, карбоксил, циано, нитро, формил; а также CO-R, COO-R, CONH-R, SO2-R, и SO2NH-R, где R представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, содержащую от 1 до 10 атомов углерода и необязательно замещенную, по меньшей мере, одним гетероатомом, главным образом галогеном (выбираемым из F, Cl, Br или I), кислородом и азотом, последний необязательно в форме пендантной функциональной группы, представленной азотистым основанием; а также циклоалкильная, или арильная¹, или гетероарильная группа, необязательно замещенная пендантной функциональной группой азотистого основания, или

iii) арильная¹ группа, представляющая собой фенильную группу или замещенную фенильную группу, которые могут быть замещены в любом положении кольца любым сочетанием одного или нескольких заместителей, таких как

- галоген (выбираемый из I, F, Cl или Br);

- алкильная¹ группа;

- циклоалкильная, арильная или гетероарильная группа, необязательно замещенная пендантной функциональной группой азотистого основания;

- трифторметил, O-алкил¹ , карбоксил, циано, нитро, формил, гидрокси, NH-алкил¹ , N(алкил¹)(алкил¹), и амино, последние заместители азота необязательно в форме пендантной функциональной группы, представленной азотистым основанием;

- NHCO-R, или NHCOO-R, или NHCONH-R, или NHSO2-R, или NHSO2NH-R,

или CO-R, или COO-R, или CONH-R, или SO2-R, или SO2NH-R, где R соответствует водороду, алкилу¹, арилу или гетероарилу, или

iv) гетероарильная¹ группа, представляющая собой пиридил, пиримидинил, пиразинил, пиридазинил, тиенил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, пирролил, фуранил, оксазолил, изоксазолил, триазолил, тетразолил, индолил, бензимидазол, бензоксазол, бензотиазол, хинолинильную группу, которые дополнительно могут быть замещены в любом положении кольца любым сочетанием одного или нескольких заместителей, таких как

- галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I);

- алкильная¹ группа;

- циклоалкильная, арильная или гетероарильная группа, необязательно замещенная пендантной функциональной группой, представленной азотистым основанием,

- трифторметил, O-алкил ¹, карбоксил, циано, нитро, формил, гидрокси, NH-алкил ¹, N(алкил¹)(алкил¹), и амино, последние заместители атома азота необязательно в форме пендантной функциональной группы, представленной азотистым основанием;

- NHCO-R, или NHCOO-R, или NHCONH-R, или NHSO2-R, или NHSO2NH-R,

или CO-R, или COO-R, или CONH-R, или SO2-R, или SO2NH-R, где R соответствует водороду, алкилу¹, или

v) O-арильная¹, или NH-арильная¹, или O-гетероарильная ¹ или NH-гетероарильная¹ группа,

vi) трифторметил, O-алкил¹, карбоксил, циано, нитро, формил, гидрокси, NH-алкил¹, N(алкил¹)(алкил ¹), и амино, последние заместители атома азота необязательно в форме пендантной функциональной группы, представленной азотистым основанием, или

vii) NHCO-R, или NHCOO-R, или NHCONH-R, или NHSO2-R, или NHSO2NH-R, или CO-R, или COO-R, или CONH-R, или SO2-R, или SO2NH-R, где R соответствует водороду, алкилу¹, арилу¹ или гетероарилу¹ .

Каждый R2, R3, R4 и R5 независимо выбирают из водорода, галогена (выбираемого из F, Cl, Br или I), линейной или разветвленной алкильной группы, содержащей от 1 до 10 атомов углерода и необязательно замещенной одним или несколькими гетероатомами, такими как галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I), кислород и азот, последний необязательно в форме пендантной функциональной группы, представленной азотистым основанием; а также трифторметила, C_1-6-алкилокси, амино, C_1-6-алкиламино, ди(С_1-6-алкил)амино, карбоксила, циано, нитро, формила, гидрокси, и CO-R, COO-R, CONH-R, SO2-R, и SO2NH-R, где R соответствует водороду, алкилу¹, арилу или гетероарилу;

и где Q выбирают из нижеуказанных групп:

i) алкил ¹

ii) арил¹

iii) гетероарил¹,

как определено выше.

В одном из конкретных воплощений изобретения группа Q представляет собой замещенную алкильную, арильную или гетероарильную группу, несущую пендантную функциональную группу азотистого основания, представленную, например, структурами от а до m, показанными ниже, где волнистая линия и линия стрелка соответствуют точке присоединения к основной структуре, имеющей формулу I.

Также, для g-m стрелка может указывать на точку присоединения к основной структуре через фенильную группу.

Кроме того, помимо предпочтительных соединений, имеющих формулу I, II, III и IV, изобретение имеет отношение к соединениям, в которых R1 является пиридилом или бензонитрилом, которые могут быть дополнительно замещены в любом положении кольца любым сочетанием одного или нескольких заместителей, таких как

- водород;

- галоген (выбираемый из F, Cl, Br или I);

- алкильная¹ группа;

- арильная¹ группа;

- трифторметил, O-алкил¹, карбоксил, циано, нитро, формил, гидрокси, NH-алкил¹, N(алкил¹)(алкил¹) и амино, последние заместители атома необязательно в форме пендантной функциональной группы, представленной азотистым основанием;

- NHCO-R, или NHCOO-R, или NHCONH-R, или NHSO2-R, или NHSO2NH-R,

или CO-R, или COO-R, или CONH-R, или SO2-R, или SO2NH-R, где R соответствует водороду, алкильной ¹ или арильной¹ группе.

Если специально не оговорено, для целей настоящего изобретения термин "алкильная группа" означает любую линейную или разветвленную, замещенную или незамещенную, С1-С10 алкильную группу, такую как С1-С4 или С1-С6, в частности метил, этильную группу, пропильную группу, предпочтительно метил. Термин "алкенил", применяемый для целей настоящего изобретения, относится к С2-С6, в частности к С2-С4, линейной или разветвленной цепи замещенных или незамещенных алкенильных радикалов, содержащих от 2 до 30 атомов углерода, включая, без ограничения, этенил, пропенил, бутенил, пентенил, гексенил и т.п. Термин "алкоксигруппа" означает любую алкоксигруппу, имеющую от 1 до 6 линейных или разветвленных, замещенных или незамещенных атомов углерода, в частности группу ОСН3. Термин "арильная группа" означает одно или несколько ароматических колец, имеющих от 5 до 6 атомов углерода, которые могут быть сопряженными или сконденсированными и замещенными или незамещенными. В частности, арильные группы могут быть фенилом или пиридилом, и заместители могут быть атомами галогена, циано, амино, алкоксигруппами, как определено выше, алкильными группами, как определено выше, или нитрогруппой.

Пример предпочтительных соединений, имеющих указанную выше формулу, изображен ниже:

001: N-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-С-фенил-метан сульфонамид

т.пл.=258°С

002:4-{2-[5-(бензооксазол-2-иламино)-2-метил-фениламино]-оксазол-5-ил}-бензонитрил

т.пл.=236°С

003: 4-{2-[5-(бензотиазол-2-иламино)-2-метил-фениламино]-оксазол-5-ил}-бензонитрил

т.пл.=216-220°С

004: N1-бензооксазол-2-ил-4-метил-N3-(5-пиридин-3-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин

т.пл.=238°С

005: N1-(5-хлор-бензооксазол-2-ил)-4-метил-N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин

т.пл.=229°С

006: N1-(6-хлор-бензооксазол-2-ил)-4-метил-N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин

т.пл.>260°С

007: N1-(5-этансульфонил-бензооксазол-2-ил)-4-метил-N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин

т.пл.=252°С

008: 4-метил-N₁-(5-метил-бензооксазол-2-ил)N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин

¹Н ЯМР (DMSO-d⁶ , 300 МГц) =2,25 (s, 3Н); 2,50 (s, 3Н); 6,91 (d, J=8,1, 1H); 7,14 (s, 1H); 7,20 (d, J=8,4, 1H); 7,33 (d, J=8,1, 1H); 7,47-7,53 (m, 3Н); 7,79 (s, 1H); 8,13 (d, J=2,1, 1H); 8,53 (s, 1H); 8,55 (s, 1H); 9,60 (s, 1H); 10,53 (s, 1H),

009: N1-(5-фтор-бензооксазол-2-ил)-4-метил-N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин

т.пл.=170°С

010: N1-(6-фтор-бензооксазол-2-ил)-4-метил-N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензол-1,3-диамин

т.пл.=260°С

Помимо конкретных соединений, имеющих формулу I, изобретение направлено на соединения, имеющие формулу II, приведенную ниже:

где Y представляет собой кислород, серу, NH или N-CN, Z представляет собой кислород, серу, N(R6) или (СН2) _n, где n является 0, 1 или 2.

L выбирают из алкила¹, арила¹ или гетероарила ¹, как описано выше.

R1, R2, R3, R4, R5 и R6 имеют те же значения, что описаны выше.

Пример предпочтительных соединений, имеющих указанную выше формулу, представлен ниже:

011: 4-(2-{5-[3-(3-фтор-фенил)-2-оксо-имидазолидин-1-ил]-2-метил-фениламино}оксазол-5-ил)-бензонитрил

т.пл.=221°С

012: 4-(2-{5-[3-(3-циано-фенил)-2-оксо-имидазолидин-1-ил]-2-метил-фениламино}оксазол-5-ил)-бензонитрил

т.пл.>260°С

013: 4-(2-{5-[3-(3-фтор-фенил)-2-оксо-имидазолидин-1-ил]-2-метил-фениламино}оксазол-5-ил)-бензамид

т.пл.>260°С

014: 1-(4-фтор-фенил)-3-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-имидазолидин-2-он

015: 1-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-3-(3-трифторметил-фенил)-имидазолидин-2-он

т.пл.=138-200°С

016: 1-(4-фтор-фенил)-3-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-тетрагидро-пиримидин-2-он

Помимо конкретных соединений, имеющих формулу I, изобретение направлено на соединения, имеющие формулу III, приведенную ниже:

где n является целым числом 0, 1 или 2.

М представляет собой кислород, серу или (СН2) _n, где n является 0, 1 или 2.

Р выбирают из N(R8)(R9), алкила¹, арила¹ или гетероарила ¹.

Каждый R8 и R9 независимо является водородом, алкилом¹, арилом¹ или гетероарилом ¹.

R8 и R9 вместе могут образовывать бивалентный радикал, имеющий формулу:

где v и w каждый независимо является 1 или 2, и Х2 представляет собой СН2, О, S, NR10 или N[C(=O)R10], и где каждый водород в указанной выше формуле (b) может быть замещен на галоген или C_1-4-алкил.

R10 представляет собой водород, C_1-4-алкил, С _2-6-алкенил, С_2-6-алкинил, С_3-7-циклоалкил, С_1-4-галогеналкил, C_1-6-алкокси, C _1-4-гидроксиалкил.

R1, R2, R3, R4 и R5 имеют значения, описанные выше.

Примеры

017: 1-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-3-фенил-пропан-1-он

т.пл.=138°С

018: 4-[2-(5-ацетил-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-бензонитрил

т.пл.=240°С

019: 4-(2-{5-[3-(4-фтор-фенил)-пропионил]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрил

т.пл.=175°С

020: 4-{2-[2-метил-5-(3-фенил-пропионил)-фениламино]-оксазол-5-ил}-бензонитрил

т.пл.=138°С

021: 4-(2-{5-[3-(3-фтор-фенил)-пропионил]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрил

т.пл.=157°С

022: 4-[2-(5-ацетил-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-бензамид

т.пл.>260°С

Помимо конкретных соединений, имеющих формулу I, изобретение направлено на соединения, имеющие формулу IV, приведенную ниже:

G представляет собой кислород, серу, N(R11) или (СН2)_n, где n является 1 или 2.

H представляет собой кислород, N(R11) или (СН2)_n, где n является 1 или 2.

J выбирают из N(R12)(R13), алкила¹, арила¹ или гетероарила¹ .

Каждый R12 и R13 независимо является водородом, алкилом¹, арилом¹ или гетероарилом ¹.

R12 и R13 вместе могут образовывать бивалентный радикал, имеющий формулу:

где v и w каждый независимо является 1 или 2, и Х2 представляет собой СН2, О, S, NR14 или N[C(=O)R14], и где каждый водород в указанной выше формуле (с) может быть замещен на галоген или С_1-4-алкил.

Каждый R11 и R14 независимо является водородом, С_1-4 -алкилом, С_2-6-алкенилом, С_2-6-алкинилом, С_3-7-циклоалкилом, С_1-4-галогеналкилом, С_1-6-алкокси, С_1-4-гидроксиалкилом.

R1, R2, R3, R4 и R5 имеют значения, описанные выше.

Примеры

023: 1-(4-фтор-фенил)-2-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фениламино]-этанон

т.пл.=202°С

024: 1-(4-фтор-фенил)-2-{метил-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-амино}-этанон

т.пл.=230°С

025: 4-({метил-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-амино}-ацетил)-бензонитрил

т.пл.=218°С

026: 2-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фениламино]-1-фенил-этанон

т.пл.=152°С

027: 4-(2-{5-[2-(4-фтор-фенил)-2-оксо-этиламино]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрил

т.пл.=199°С

028: 4-(2-{5-[2-(4-циано-фенил)-2-оксо-этиламино]-2-хлор-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрил

029: N-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-бензил]-бензамид

¹Н ЯМР (DMSO-d⁶ , 300 МГц) =2,25 (s, 3Н); 4,45 (d, J=5,7, 2H); 6,99 (d, J=7,2, 1H); 7,17 (d, J=7,2, 1H); 7,45-7,52 (m, 5H); 7,72 (s, 2H); 7,88 (d, J=7,2, 2H); 8,49 (d, J=5,1, 2H); 9,05 (t, J=5,7, 1H); 9,54 (s, 1H).

030: 2-{метил-[4-метил-3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-иламино)-фенил]-амино}-1-фенил-этанон

¹Н ЯМР (DMSO-d⁶ , 300 МГц) =2,14 (s, 3Н); 3,00 (s, 3Н); 4,96 (s, 2H); 6,37 (d, J=9,2, 1H); 6,95 (d, J=8,4, 1H); 7,13 (s, 1H); 7,42 (d, J=5,4, 2H); 7,52-7,65 (m, 4H); 7,99 (d, J=7,2, 2H); 8,51 (d, J=5,7, 2H); 9,37 (s, 1H).

Соединения настоящего изобретения могут быть получены с помощью общего протокола, приведенного ниже.

Соединения, имеющие формулу 4, могут быть получены с помощью конденсации азида, имеющего общую формулу 1, с изоцианатом, относящимся к 2 типу, или с изотиоцианатом, относящимся к 3 типу.

Группа Е в формулах 2 и 3 соответствует нитро, циано, CH2OH, CO2CH3, CONH2, СОСН3 или группе A-B-B'-Q. Группа A-B-B'-Q та же, что описана в формуле I.

Реакция соединения 1 или с соединением 2, или с соединением 3 в растворителе, таком как метиленхлорид или диоксан, в присутствии трифенилфосфина, приводит к получению продукта оксазольного типа, имеющего формулу 4.

R1, R2, R3, R4 и R5 имеют значения, описанные выше.

Следующий пример предназначен, чтобы проиллюстрировать настоящее изобретение.

Пример синтеза соединений

Общая информация: Все используемые химические реактивы были коммерческими продуктами марки ЧДА. Растворители были безводными продуктами технической чистоты, и их применяли без дальнейшей очистки. Диоксан перед применением заново перегоняют в токе аргона. За ходом реакции следят с помощью тонкослойной хроматографии, используя тонкослойные хроматографические пластинки, покрытые силикагелем 60F 254 (Merck), которые рассматривали под УФ-светом. Мультиплеты в спектрах ЯМР обозначены как синглет (s), широкополосный синглет (br s), дуплет (d), триплет (t), квадруплет (q) и мультиплет (m), и спектры ЯМР были записаны на спектрометре фирмы "Bruker" 300 МГц.

Получение 4-азидоацетил-бензонитрила

К раствору коммерчески доступного 4-бромацетил-бензонитрила (5 г, 22,32 ммоль) в 150 мл метанола добавляли азид натрия (1,74 г, 26,78 ммоль) и содержимое перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После удаления растворителя осадок обрабатывали водой (50 мл) и экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO₄ и концентрировали, чтобы получить твердое вещество желтого цвета (3,90 г, 94%). Это соединение использовали для следующей стадии без какой-либо дальнейшей очистки.

Получение 4-[2-(2-метил-5-нитро-фениламино)-оксазол-5-ил]-бензонитрила

К 25 мл раствора 4-азидоацетил-бензонитрила (1,5 г, 8,06 ммоль) в диоксане добавляли 2-метил-5-нитрофенила изоцианат (1,43 мг, 8,06 ммоль) (коммерчески доступный) и трифенилфосфин (2,11 г, 8,06 ммоль). Реакционную смесь помещали на масляную баню, предварительно подогретую до 100°С, и перемешивали в течение 30 мин. После выпаривания растворителя при пониженном давлении, твердый осадок перекристаллизовывали из этанола, чтобы получить указанное в названии соединение в виде желтых микрокристаллов (1,16 г, 45%).

т.пл.>260°С

Получение 4-[2-(5-амино-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-бензонитрила

К раствору 4-[2-(2-метил-5-нитро-фениламино)-оксазол-5-ил]-бензонитрила (500 мг, 1,56 ммоль) в этаноле (15 мл) добавляли дигидрат хлорида олова(II) (677 мг, 3 ммоль). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч. Смесь затем концентрировали, добавляли насыщенный водный раствор NaHCO₃, и полученную в результате суспензию экстрагировали этилацетатом (3×15 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (30 мл), высушивали над безводным MgSO₄ и концентрировали. Осадок подвергали хроматографии на колонке с окисью алюминия (дихлорметан/этанол: 99/1). 4-[2-(5-Амино-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-бензонитрил был получен в виде порошка бледно-желтого цвета (172 мг, 38%).

т.пл.=236°С

¹Н ЯМР (DMSO-d⁶) =2,14 (s, 3Н); 4,91 (br s, 2H); 6,25 (dd, J=7,8-1,9, 1H); 6,82 (d, J=8,0, 1H); 7,01 (d, J=2,4, 1H); 7,68 (m, 3Н); 7,84 (d, J=8,5, 2H); 9,22 (s, 1H).

Получение 4-(2-{5-[2-(4-фтор-фенил)-2-оксо-этиламино]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрила

К раствору 4-[2-(5-амино-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-бензонитрила (60 мг, 0,207 ммоль) в диметилацетамиде (3 мл) добавляли 4-фторфенацила бромид (45 мг, 0,207 ммоль), NaHCO₃ (18 мг, 0,207 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После удаления растворителя, осадок обрабатывали насыщенным водным раствором NaHCO₃ (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×10 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (20 мл), высушивали над MgSO₄ и концентрировали. 4-(2-{5-[2-(4-Фтор-фенил)-2-оксо-этиламино]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрил был получен после хроматографии на колонке с силикагелем (дихлорметан/этанол: 98/2) (38 мг, 43%) в виде твердого вещества бежевого цвета.

т.пл.=199°С

¹Н ЯМР (DMSO-d⁶) =2,12 (s, 3Н); 4,62 (d, J=4,8, 2H); 5,81 (t, J=4,8, 1H); 6,37 (d, J=6,0, 1H); 6,91 (d, J=8,1, 1H); 7,08 (s, 1H); 7,37 (m, 2H); 7,67 (m, 3H); 7,83 (d, J=8,4, 2H); 8,14 (m, 2H); 9,30 (s, 1H).

Получение 4-[2-(5-ацетил-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-бензонитрила

Таким же способом, как описано для получения 4-[2-(2-метил-5-нитро-фениламино)-оксазол-5-ил]-бензонитрила, из 4-азидоацетил-бензонитрила (2,70 г, 14,5 ммоль) и 1-(3-изотиоцианато-4-метил-фенил)-этанона (2,22 г, 11,6 ммоль) было получено указанное в заголовке соединение (1,43, 31%) в виде твердого вещества желтого цвета.

¹Н ЯМР (DMSO-d⁶) =2,41 (s, 3Н); 2,59 (s, 3Н); 7,41 (d, J=7,8, 1H); 7,67 (dd, J=7,8-1,6, 1H); 7,75 (s, 1H); 7,79 (d, J=8,4, 2H); 7,72 (d, J=8,4, 2H); 8,51 (d, J=1,6, 1H); 9,73 (s, 1H).

Получение 4-{2-[2-метил-5-(3-фенил-пропионил)-фениламино]-оксазол-5-ил}-бензонитрила

К раствору 4-[2-(5-ацетил-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-бензонитрила (100 мг, 0,315 ммоль) и бензальдегида (0,035 мл, 0,35 ммоль) в этаноле при перемешивании по каплям добавляли 1 мл 30%-ного водного раствора NaOH при 0°С. После этого смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч и выливали в ледяную воду (приблизительно 10 мл). Осадок фильтровали, промывали диэтиловым эфиром и высушивали при пониженном давлении.

Полученное твердое вещество желтого цвета растворяли в этаноле (2 мл) и THF (2 мл), обрабатывали палладием на угле (10%, 20 мг) и гидрогенизировали. Катализатор удаляли фильтрацией через целитный фильтр. Фильтрат выпаривали при пониженном давлении, чтобы получить указанное в заголовке соединение (77 мг, 60%) в виде порошка желтого цвета.

¹Н ЯМР (DMSO-d⁶) =2,41 (s, 3Н); 2,98 (t, J=7,7, 2H); 3,36 (t, J=7,7, 2H); 7,23 (m, 1H); 7,32 (m, 4H); 7,40 (d, J=7,8, 1H); 7,69 (dd, J=7,8-1,6, 1H); 7,72 (s, 1H); 7,89 (d, J=8,4, 2H); 7,94 (d, J=8,4,2H); 8,52 (d, J=1,6, 1H); 9,73 (s, 1H).

Получение 4-бромацетилпиридина, соли HBr

Бром (24 г, 150 ммоль) в 4 мл 45%-ной HBr при энергичном перемешивании по каплям добавляли к раствору 4-ацетилпиридина (18 г, 148 ммоль) в уксусной кислоте, содержащей 45%-ную HBr (165 мл), при 70°С. Смесь при энергичном перемешивании оставляли при 70°С на 3 ч. Смесь охлаждали, и осадок собирали фильтрованием и промывали смесью петролейный эфир/метанол (1/1, 100 мл, 40-65°С), чтобы получить 35,8 г кристаллов белого цвета (85%).

Получение (2-метил-5-нитро-фенил)-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-амина

К раствору 4-бромоацетилпиридина гидробромида (5 г, 17,8 ммоль) в 80 мл воды добавляли азид натрия (1,16 г, 17,8 ммоль), и содержимое перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, медленно обрабатывали насыщенным водным раствором NaHCO₃ до pH 6-7, экстрагировали дихлорметаном (3×30 мл) и объединенные органические фазы высушивали над MgSO₄, концентрировали при комнатной температуре при пониженном давлении до конечного объема 25 мл и разбавляли диоксаном (30 мл). Полученный раствор концентрировали, чтобы удалить оставшийся дихлорметан (низко кипящий). К конечному объему (25 мл) при 0°С добавляли 2-метил-5-нитрофенилизоцианат (1,58 г, 8,9 ммоль) (коммерчески доступный препарат) и по порциям трифенилфосфин (2,62 г, 8,9 ммоль). Реакционную смесь затем перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре и нагревали в течение еще 2 ч при 100°С. После выпаривания растворителя при пониженном давлении осадок кристаллизовали в смеси дихлорметан/этанол (10 мл/5 мл), чтобы получить соединение, указанное в заголовке, в виде желтых кристаллов (0,9 г, 34%).

т.пл. >220°С

Получение (2-метил-5-амино-фенил)-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-амина

Раствор (2-метил-5-нитро-фенил)-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-амина (1 г, 3,39 ммоль) в этаноле (50 мл) обрабатывали 10%-ным Pd/C (120 мг), и по каплям добавляли гидразингидрат (3,50 мл, 112,5 ммоль) в течение 10 мин. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и затем нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч. Горячий раствор фильтровали через небольшой целитный фильтр, и катализатор промывали горячим этанолом. Фильтраты концентрировали при пониженном давлении, чтобы получить неочищенный продукт. Его очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (дихлорметан/этанол: 97/3). Получили 720 мг (80%) (2-метил-5-амино-фенил)-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-амина в виде бледно-желтого порошка.

т.пл.=158°С

¹Н ЯМР (DMSO-d⁶) =2,14 (s, 3Н); 4,96 (bs, 2H); 6,30 (dd, J=8,1-2,1, 1H); 6,87 (d, J=8,1, 1H); 7,04 (d, J=2,1, 1H); 7,50 (d, J=6,0, 2H); 8,58 (d, J=6,0, 2H); 7,76 (s, 1H); 9,28 (s, 1H).

Получение (5-изотиоцианат-2-метил-фенил)-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-амина

К раствору (2-метил-5-амино-фенил)-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-амина (500 мг, 1,88 ммоль) в дихлорметане (70 мл) добавляли 1,1-тиокарбонил-ди-2(1H)-пиридин (525 мг, 2,26 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После выпаривания растворителя при пониженном давлении осадок хроматографировали на колонке с силикагелем (этилацетат/гептан: 50/50), чтобы получить 528 мг (91%) твердого вещества бежевого цвета, указанного в заголовке.

¹Н ЯМР (DMSO-d⁶) =2,36 (s, 3Н); 7,10 (dd, J=8,1-2,1, 1H); 7,32 (d, J=8,1, 1H); 7,56 (d, J=6,0, 2H); 7,86 (s, 1H); 8,08 (d, J=2,1, 1H); 8,62 (d, J=6,0, 2H); 9,80 (s, 1H).

Получение N1-(5-хлор-6ензооксазол-2-ил)-4-метил-N3-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-бензил-1,3-диамина

К раствору (5-изотиоцианат-2-метил-фенил)-(5-пиридин-4-ил-оксазол-2-ил)-амина (120 мг, 0,39 ммоль) в DMF (8 мл) добавляли 2-амино-4-хлор-фенол (61 мг, 0,43 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и добавляли желтый оксид ртути (II) (72 мг, 0,39 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, осадок фильтровали через небольшой целитный фильтр. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, чтобы получить неочищенный продукт. Его хроматографировали на колонке с силикагелем (дихлорметан/этанол: 95/5), чтобы получить 112 мг (69%) твердого вещества желтого цвета, указанного в заголовке.

¹Н ЯМР (DMSO-d⁶) =2,26 (s, 3Н); 7,14 (dd, J=8,7-2,1, 1H); 7,22 (d, J=8,7, 1H); 7,40 (d, J=2,1, 1H); 7,47-7,53 (m, 4H); 7,79 (s, 1H); 8,12 (d, J=2,1, 1H); 8,53 (s, 1H); 8,55 (s, 1H); 9,61 (s, 1H); 10,77 (s, 1H).

Получение 4-(2-{5-[3-(3-фтор-фенил)-2-оксо-имидазолидин-1-ил]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрила

К раствору 4-[2-(5-амино-2-метил-фениламино)-оксазол-5-ил]-бензонитрила (558 мг, 2 ммоль) и хлорацетальдегида (50% масс./масс. в воде, 628 мг, 4 ммоль) в ацетонитриле (60 мл), добавляли при комнатной температуре NaBH₃CN (253 мг, 4 ммоль) и по каплям уксусную кислоту (0,4 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли этилацетат (50 мл) и насыщенный водный раствор NaHCO₃ (50 мл). Органический слой промывали солевым раствором (20 мл), высушивали над MgSO₄ и концентрировали, чтобы получить твердое вещество желтого цвета. Его растворяли в толуоле (40 мл) и обрабатывали при нагревании с обратным холодильником в течение 2 ч 1-фтор-3-изоцианатбензолом (274 мг, 2 ммоль). После выпаривания растворителя при пониженном давлении неочищенный продукт растворяли в изопропаноле (60 мл) и обрабатывали трет-бутоксидом калия (1,8 г, 16 ммоль) при комнатной температуре в течение 5 ч. Добавляли воду (20 мл), органический слой отделяли, высушивали над MgSO₄ и концентрировали. Неочищенный продукт хроматографировали на колонке с силикагелем (дихлорметан/этанол: 95/5), чтобы получить 408 мг (45%) твердого вещества бежевого цвета, указанного в заголовке.

¹Н ЯМР (DMSO-d⁶) =2,26 (s, 3Н); 3,98 (s, 4H); 6,90 (t, J=9,0, 1H); 7,20 (bs, 2H); 7,33-7,42 (m, 2H); 7,65-7,85 (m, 6H); 8,19 (s, 1H); 9,82 (s, 1H).

Получение 4-(2-{5-[3-(3-фтор-фенил)-2-оксо-имидазолидин-1-ил]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрила

Соединение 4-(2-{5-[3-(3-фтор-фенил)-2-оксо-имидазолидин-1-ил]-2-метил-фениламино}-оксазол-5-ил)-бензонитрил (30 мг, 0,066 ммоль) обрабатывали в EtOH (2 мл) 3 N раствором NaOH (1 мл). Полученную смесь перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли 1 N раствор HCl до pH 6-7 и осадок фильтровали, чтобы получить твердое вещество желтого цвета (9 мг, 29%), указанное в заголовке.

ES/MS: m/z=471[M-H]^-.

Во втором воплощении изобретение имеет отношение к фармацевтической композиции, включающей соединение, описанное выше.

Такое лекарственное средство может принимать форму фармацевтической композиции, пригодной для перорального введения, которая может быть составлена в подходящих дозировках с применением фармацевтически приемлемых носителей, хорошо известных в этой области техники. Такие носители позволяют составлять фармацевтическую композицию в виде таблеток, пилюль, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, кашиц, суспензий и т.п. для приема пациентом. В дополнение к активным ингредиентам, эти фармацевтические композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые носители, включающие эксипиенты и вспомогательные средства, которые облегчают переработку активных соединений в препараты, которые можно применять в фармацевтике. Дальнейшие детали относительно технологий изготовления и введения могут быть найдены в последнем издании Remington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co., Easton, Pa.).

Композиция настоящего изобретения может также принимать форму фармацевтической или косметической композиции для местного применения.

Такие композиции могут быть представлены в форме геля, пасты, мази, крема, лосьона, жидкой суспензии, водных, водно-спиртовых или масляных растворов, или дисперсионных систем, похожих на примочку или сыворотку, или безводных или липофильных гелей, или эмульсий жидкой или полутвердой консистенции молочного типа, полученных диспергированием жирной фазы в водной фазе или наоборот, или суспензий или эмульсий мягкой, полутвердой консистенции, похожих на крем или гель, или, альтернативно, в форме микроэмульсий, микрокапсул, микрочастиц или везикулярных дисперсионных систем ионного и/или неионного типа. Эти композиции получают согласно стандартным способам.

Композиция в соответствии с настоящим изобретением включает любой ингредиент, который обычно применяют в дерматологии и косметике. Она может включать, по меньшей мере, один ингредиент, выбираемый из гидрофильных или липофильных гелеобразующих средств, гидрофильных или липофильных активных средств, консервантов, смягчающих средств, полимеров, увеличивающих вязкость, увлажняющих средств, поверхностно-активных веществ, консервантов, антиоксидантов, растворителей, и наполнителей, антиоксидантов, растворителей, отдушек, наполнителей, защитных средств, бактерицидных агентов, поглотителей запахов и красителей.

В качестве масел, которые могут быть применены в настоящем изобретении, можно отметить минеральные масла (вазелиновое масло), растительные масла (жидкая фракция масла масляного дерева ши, подсолнечное масло), животные масла, синтетические масла, силиконовые масла (циклометикон) и фторированные масла. Жирные спирты, жирные кислоты (стеариновая кислота) и воски (парафин, карнаубский воск, пчелиный воск) также можно применять в качестве жирных веществ.

В качестве эмульгаторов, которые могут быть применены в настоящем изобретении, рассматривают глицеролстеарат, полисорбат 60 и смесь ПЭГ-6/ПЭГ-32/гликольстеарат.

В качестве гидрофильных гелеобразующих средств могут быть отмечены карбоксивиниловые полимеры (карбомер), акриловые сополимеры, такие как акрилатные/алкилакрилатные сополимеры, полиакриламиды, полисахариды, такие как гидроксипропилцеллюлоза, глины и природные камеди, а в качестве липофильных гелеобразующих средств могут быть отмечены модифицированные глины, такие как бентонит, металлические соли жирных кислот, такие как стеараты алюминия и гидрофобный диоксид кремния, или, альтернативно, этилцеллюлоза и полиэтилен.

В качестве гидрофильных активных средств могут быть использованы белки или гидролизаты белков, аминокислоты, многоатомные спирты, мочевина, аллантоин, сахара и производные сахаров, витамины, крахмал и растительные экстракты, в частности экстракты Алоэ вера.

В качестве липофильных активных средств могут быть использованы ретинол (витамин А) и его производные, токоферол (витамин Е) и его производные, незаменимые жирные кислоты, церамиды и эфирные масла. При использовании эти вещества придают коже дополнительные увлажняющие или смягчающие свойства.

Кроме того, в композицию может быть включено поверхностно-активное вещество, для того чтобы обеспечить более глубокое проникновение соединения, способного истощать тучные клетки, такого как ингибитор тирозинкиназы, предпочтительно ингибитор c-kit и/или bcr-abl.

Помимо предусмотренных ингредиентов изобретение включает вещества, повышающие проницаемость, выбираемые, например, из группы, состоящей из минерального масла, воды, этанола, триацетина, глицерина и пропиленгликоля; связующие средства, выбираемые, например, из группы, состоящей из полиизобутилена, поливинилацетата и поливинилового спирта и загустителей.

Химические способы улучшения местного всасывания лекарственных средств хорошо известны в этой области техники. Например, соединения, способные усиливать проницаемость, включают лаурилсульфат натрия (Dugard, P.H. and Sheuplein, R.J., "Effects of Ionic Surfactants on the Permeability of Human Epidermis: An Electrometric Study," J. Ivest. DermatoL, V.60, pp.263-69, 1973), оксид лауриламина (Johnson et al., US 4411893), азон (Rajadhyaksha, US 4405616 и 3989816) и децилметилсульфоксид (Sekura, D.L. and Scala, J., "The Percutaneous Absorption of Alkylmethyl Sulfides, "Pharmacology of the Skin, Advances In Biolocy of Skin, (Appleton-Century Craft) V.12, pp.257-69, 1972). Было обнаружено, что увеличение полярности головки в амфотерных молекулах усиливает их способность повышать проницаемость, но за счет усиления их способности раздражать кожу (Cooper, Е.R. and Berner, В., "Interaction of Surfactants with Epidermal Tissues: Physiochemical Aspects," Surfactant Science Series, V.16, Reiger, M.M. ed. (Marcel Dekker, Inc.) pp.195-210, 1987).

Второй класс химических усиливающих средств обычно называют сорастворителями. Эти вещества относительно легко местно всасываются и с помощью разнообразных механизмов обеспечивают повышение проницаемости для некоторых лекарственных средств. Этанол (Gale et. al., US 4615699 и Campbell et. al., US 4460372 и 4379454), диметилсульфоксид (US 3740420 и 3743727 и US 4575515) и производные глицерина (US 4,322,433) представляют собой несколько примеров соединений, которые продемонстрировали способность увеличивать всасывание различных соединений.

Фармацевтические композиции изобретения также могут быть предназначены для введения аэрозольных составов на целевые участки дыхательных путей пациента.

Устройства и методологии для осуществления аэрозольного распыления композиции лекарственного средства раскрыты в патенте US 5906202. Композиции предпочтительно представляют собой растворы, например водные растворы, спиртовые растворы, водно/спиртовые растворы, растворы солей, коллоидные суспензии и микрокристаллические суспензии. Например, распыляемые частицы включают активный ингредиент, указанный выше, и носитель (например, фармацевтически активное лекарственное средство, действующее на органы дыхания, и носитель), частицы формируются путем продавливания композиции через насадку, которая предпочтительно имеет форму гибкой пористой мембраны. Частицы имеют размер, который достаточно мал, так что когда частицы образуются, они остаются взвешенными в воздухе в течение времени, необходимого, например, для того чтобы пациент мог вдохнуть частицы в легкие.

Изобретение включает системы, описанные в патенте US 5556611:

- жидкостно-газовые системы (сжиженный газ используют как газ-вытеснитель (например, низкокипящий FCHC или пропан, бутан) в контейнере, находящемся под давлением,

- аэрозоль с взвешенным веществом (частицы активного вещества суспендированы в твердой форме в жидкой фазе газа-вытеснителя),

- газовая система, находящаяся под давлением (используют сжатый газ, такой как азот, углекислый газ, закись азота, воздух).

Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением создан фармацевтический препарат, в котором активное вещество растворено или диспергировано в подходящей нетоксичной среде, и указанный выше раствор или дисперсионную систему измельчают до аэрозольного состояния, то есть очень тщательно распределяют в газе-носителе. Это технически возможно сделать, например, в виде аэрозольных упаковок газа-вытеснителя, аэрозолей насосного типа или других устройств, известных, по сути, для разбрызгивания жидкостей и распыления твердых веществ, которые, в частности, позволяют осуществлять точное индивидуальное дозирование.

Поэтому изобретение также направлено на аэрозольные устройства, включающие соединения, описанные выше, и указанную композицию, предпочтительно с дозирующими распределителями.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения также могут быть предназначены для интраназального введения.

При этом обычному специалисту в этой области техники будут легко понятны фармацевтически приемлемые носители для введения соединения на носовую слизистую поверхность. Эти носители описаны в работе "Remington's Pharmaceutical Sciences" 16th edition, 1980, Ed. By Arthur Osol, подробное описание которой включено сюда путем отсылки.

Выбор подходящих носителей зависит от предполагаемого специфического типа введения. Для введения через верхние дыхательные пути композиция может быть составлена в виде раствора, например, водного или изотонического физиологического раствора, буферного или небуферного раствора или суспензии для интраназального введения в виде капель или распыляемого раствора. Предпочтительно такие растворы или суспензии являются изотоническими по отношению к секреции носа и имеют приблизительно такое же значение pH, например, в приблизительном диапазоне от pH 4.0 до pH 7.4 или от pH 6.0 до pH 7.0. Буферы должны быть физиологически совместимыми, и они включают, например, фосфатные буферы. Например, описано типичное средство, уменьшающее отек носовой полости, которое забуферено приблизительно до pH 6.2 (Remington's, Id., стр.1445). Ясно, что обычный специалист может легко определить подходящее содержание соли и pH для нетоксичного водного носителя для назального введения и/или для введения в верхние дыхательные пути.

Обычные интраназальные носители включают назальные гели, кремы, пасты или мази с вязкостью, составляющей, например, приблизительно от 10 до приблизительно 3000 сПз, или можно также применять носители с приблизительной вязкостью от 2500 до 6500 сПз или выше, чтобы обеспечить более длительный контакт с поверхностью слизистых носа. Такие композиции с вязкими носителями могут быть, например, получены на основе алкилцеллюлоз и/или других биологически совместимых носителей с высокой вязкостью, хорошо известных в этой области техники (смотри, например, работу Remington's, процитированную выше). Предпочтительной алкилцеллюлозой, например, является метилцеллюлоза в приблизительном диапазоне концентраций от 5 до 1000 или более мг на 100 мл носителя. Более предпочтительно концентрация метилцеллюлозы составляет, например, приблизительно от 25 до приблизительно мг на 100 мл носителя.

Также могут быть включены и другие ингредиенты, такие как известные в этой области техники консерванты, красители, смазывающие или вязкие минеральные или растительные масла, отдушки, природные или синтетические растительные экстракты, например ароматические масла, и увлажняющие средства и агенты, повышающие вязкость, такие как, глицерин, чтобы обеспечить дополнительную вязкость, сохранение влажности и приятную текстуру и запах композиции. Для назального введения растворов или суспензий в соответствии с настоящим изобретением в этой области техники в распоряжении имеются различные устройства, предназначенные для образования капель, капелек и водяной пыли.

Создан дозатор, отмеряющий единичные дозировки, который включает пипетку или распыляющее устройство, содержащее раствор или суспензию, предназначенную для доставки препарата в виде капель или в виде распыляемой жидкости, и который содержит одну или много доз принимаемого лекарственного средства, и этот дозатор является другой целью настоящего изобретения. Изобретение также включает набор, содержащий одну или несколько единичных безводных доз соединения вместе с любыми необходимыми солями и/или буферными веществами, консервантами, красителями и т.п., готовых для приготовления раствора или суспензии после добавления подходящего количества воды.

Другой аспект изобретения направлен на применение указанного выше соединения при изготовлении лекарственного средства. Другими словами, изобретение включает способ лечения заболевания, связанного с нерегулируемой трансдукцией c-kit, включающий введение эффективного количества соединения млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, как было определено выше.

В частности, изобретение направлено на способ лечения заболевания, выбираемого из аутоиммунных болезней, аллергических болезней, потери костной массы, раковых образований, таких как лейкемия и GIST, ангиогенеза опухолей, воспалительных заболеваний, воспалительных заболеваний кишечника (IBD), интерстициального цистита, мастоцитоза, инфекционных заболелеваний, метаболических нарушений, фиброза, диабета и нарушений ЦНС, включающий введение эффективного количества соединения, указанного выше, млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении.

Указанные выше соединения полезны при изготовлении лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с нерегулируемой трансдукцией c-kit, включая, без ограничения, следующие заболевания:

- неопластические заболевания, такие как мастоцитоз, мастоцитома собак, солидные опухоли, стромальная опухоль желудочно-кишечного тракта человека ("GIST"), мелкоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких, острая миелоцитарная лейкемия, острая лимфоцитарная лейкемия, миелодиспластический синдром, хроническая миелогенная лейкемия, колоректальные карциномы, карциномы желудка, стромальные опухоли желудочно-кишечнычного тракта, рак яичка, глиобластома, солидные опухоли и астроцитомы,

- ангиогенез опухолей,

- метаболические заболевания, такие как сахарный диабет и его хронические осложнения; ожирение, диабет II типа; гиперлипидемия и дислипидемия; атеросклероз; гипертония и сердечно-сосудистое заболевание,

- аллергические заболевания, такие как астма, аллергический ринит, аллергический синусит, анафилактический синдром, крапивница, ангионевротический отек, атопический дерматит, аллергический контактный дерматит, нодозная эритема, полиформная эритема, кожный некротизирующий васкулит и кожное воспаление, вызванное укусом насекомого, и инвазия кровососущими паразитами,

- интерстициальный цистит,

- потеря костной массы (остеопороз),

- воспалительные заболевания, такие как ревматоидный артрит, конъюнктивит, ревматоидный спондилит, остеоартрит, подагрический артрит и другие артритические состояния,

- аутоиммунные заболевания, такие как рассеянный склероз, псориаз, воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, болезнь Крона, ревматоидный артрит и полиартрит, очаговая и системная склеродерма, системная красная волчанка, дискоидная красная волчанка, вульгарная (туберкулезная) волчанка, дерматомиозит, полимиозит, синдром Шегрена, узелковый панартериит, аутоиммунная энтеропатия, так же как пролиферативный гломерулонефрит,

- заболевание "трансплантат против хозяина" или отторжение трансплантата при трансплантации любого органа, включая почку, поджелудочную железу, печень, сердце, легкое, и костный мозг,

- другие аутоиммунные заболевания, которые включает настоящее изобретение, хронический активный гепатит и синдром хронической усталости,

- нарушения, связанные с образованием субэпидермальных пузырьков, такие как пемфигус,

- васкулит,

- ВИЧ-инфекция,

- заболевания, связанные с дисфункцией меланоцитов, такие как гипермеланоз, возникающий из-за дисфункции меланоцитов и включающий лентигиноз, солнечную и старческую пигментацию кожи, меланоз Дюбрея, родинки, а также злокачественная меланома. В этом смысле изобретение охватывает применение соединений, описанных выше, для изготовления лекарственной или косметической композиции для отбеливания кожи человека,

- нарушения ЦНС, такие как психиатрические нарушения, мигрень, боль, потеря памяти и дегенерация нервных клеток. В частности, способ в соответствии с настоящим изобретением полезен для лечения следующих нарушений: депрессии, включающей дистимическое нарушение, циклотимическое нарушение, биполярную депрессию, тяжелую или "меланхолическую" депрессию, атипичную депрессию, резистентную депрессию, сезонную депрессию; анорексии, булимии, предменструального синдрома, постклимактерического синдрома, других синдромов, таких как задержка умственного развития и потеря концентрации, пессимистическое беспокойство, ажитация, самоуничижение, сниженное половое влечение; боли, включающей острую боль, послеоперационную боль, хроническую боль, ноцицептивную боль, боль при раковых заболеваниях, невропатическую боль, синдромы психогенной боли; тревожных нарушений, включающих тревожность, ассоциированную с гипервентиляцией и сердечной аритмией, фобические расстройства, обсессивно-компульсивные расстройства, посттравматическое стрессорное расстройство, острое стрессорное расстройство, генерализованное тревожное расстройство; психических угрожающих состояний, таких как острые тревожные состояния с реакцией паники, включающие психоз, бредовые растройства, фобии, манию, бред; диссоциативных эпизодов, включающих диссоциативную амнезию, диссоциативную фугу и синдром расщепления личности, деперсонализацию, кататонию, припадки; психических угрожающих состояний, включающих суицидальное поведение, неопрятность, буйное или агрессивное поведение, травму, пограничное состояние и острый психоз; шизофрении, включающей параноидальную шизофрению, спонтанную шизофрению, кататоническую шизофрению, и дезорганизованную шизофрению,

- нейродегенеративные заболевания, включающие болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, прионовые заболевания, заболевание двигательных нейронов (MND) и амиотрофический латеральный склероз (ALS),

- нарушения, связанные с злоупотреблением психоактивных веществ, названные здесь, которые включают, без ограничения, пристрастие к лекарственным средствам, злоупотребление лекарственными средствами, привыкание к лекарственным средствам, лекарственную зависимость, синдром отмены и передозировку,

- ишемия головного мозга,

- фиброз,

- мышечная дистрофия Дюшенна.

Что касается мастоцитоза, то изобретение предусматривает применение соединений, как указано выше, для лечения различных категорий, которые могут быть классифицированы следующим образом:

Категория I состоит из двух подкатегорий (IA и IB). Категорию IA составляют заболевания, в которых инфильтрация тучных клеток происходит только в коже. Эта категория представляет наиболее часто встречающуюся форму заболевания и включает: i) пигментную крапивницу, наиболее общую форму кожного мастоцитоза, которая особенно часто встречается у детей, ii) диффузный кожный мастоцитоз, iii) единичную мастоцитому и iv) некоторые редкие подтипы, такие как буллезный, эритродермический и телеангиэктатический мастоцитоз. Эти формы характеризуются очень хорошим прогнозом со спонтанными ремиссиями у детей и очень вялым течением у взрослых. Длительность выживания при этой форме заболевания обычно сравнима с продолжительностью жизни обычного населения, и переход в другую форму мастоцитоза наблюдают редко. Категория IB представлена вялотекущим системным заболеванием (SM) с вовлечением или без вовлечения кожи. Эти формы намного более обычны у взрослых, чем у детей. Течение заболевания часто медленное, но иногда могут встречаться симптомы мастоцитоза с агрессивным течением или симптомы злокачественного мастоцитоза, приводящие к прогрессивному повреждению функции органов.

Категория II включает мастоцитоз с ассоциированным гематологическим нарушением, таким как миелопролиферативный или миелодиспластический синдром, или острая лейкемия. Этот злокачественный мастоцитоз обычно не затрагивает кожу. Прогрессирование заболевания обычно зависит от типа ассоциированного гематологического нарушения, которое и определяет прогноз.

Категория III представлена системным мастоцитозом с агрессивным течением, при котором обычно встречается массивная инфильтрация многих органов аномальными тучными клетками. У пациентов с этим видом агрессивного течения заболевания наиболее заметны характерные для миелопролиферативных нарушений признаки периферической крови. Прогрессирование заболевания может быть очень быстрым, подобно острой лейкемии, или же некоторые пациенты могут демонстрировать более длительную выживаемость.

Наконец, категория IV мастоцитоза включает тучноклеточный лейкоз, характеризующийся присутствием циркулирующих тучных клеток и их предшественников, составляющих более 10% лейкоцитов крови. Эта форма представляет собой, вероятно, самый редкий тип лейкемии у людей, и имеет очень плохой прогноз, сходный с быстро прогрессирующим вариантом злокачественного мастоцитоза. Тучноклеточный лейкоз может встречаться или de novo, или как последняя стадия пигментной крапивницы или системного мастоцитоза.

Изобретение также предусматривает, как было проиллюстрировано, способ лечения рецидивирующих бактериальных инфекций, «проснувшихся» после бессимптомных периодов инфекций, таких как бактериальный цистит. В частности, изобретение может быть применено для лечения бактериальных инфекций, при которых происходит экспрессия FimH, с участием таких бактерий, как грамотрицательные кишечные бактерии, включающие E.coli, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens, Citrobactor freudii и Salmonella typhimurium. В этом способе лечения бактериальных инфекций представляет интерес самостоятельное, последовательное или сопутствующее введение, по меньшей мере, одного антибиотика, выбираемого из бацитрацина, цефалоспоринов, пенициллинов, аминогликозидов, тетрациклинов, стрептомицинов и макролидных антибиотиков, таких как эритромицин; фторхинолоны, актомицин, сульфаниламиды и триметоприм.

В одном предпочтительном воплощении изобретение направлено на способ лечения злокачественных болезней, таких как мастоцитоз, мастоцитома собак, солидные опухоли, стромальная опухоль желудочно-кишечного тракта человека ("GIST"), мелкоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких, острая миелоцитарная лейкемия, острая лимфоцитарная лейкемия, миелодиспластический синдром, хроническая миелогенная лейкемия, колоректальные карциномы, карциномы желудка, стромальные опухоли желудочно-кишечнычного тракта, рак яичка, глиобластомы и астроцитомы, включающий введение соединения, как описано здесь, человеку или млекопитающему, в особенности собакам и кошкам, нуждающимся в таком лечении.

В другом предпочтительном воплощении изобретение направлено на способ лечения аллергических болезней, таких как астма, аллергический ринит, аллергический синусит, анафилактический синдром, крапивница, ангионевротический отек, атонический дерматит, аллергический контактный дерматит, нодозная эритема, полиформная эритема, кожный некротизирующий васкулит и кожное воспаление, вызванное укусом насекомого, и инвазия кровососущими паразитами, включающий введение соединения, как описано здесь, человеку или млекопитающему, в особенности собакам и кошкам, нуждающимся в таком лечении.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретение направлено на способ лечения воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, коньюктивит, ревматоидный спондилит, остеоартрит, подагрический артрит и другие артритические состояния, включающий введение соединения, как описано здесь, человеку, нуждающемуся в таком лечении.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретение направлено на способ лечения аутоиммунных болезней, таких как рассеянный склероз, псориаз, воспалительное заболевание кишечника, язвенный колит, болезнь Крона, ревматоидный артрит и полиартрит, очаговая и системная склеродерма, системная красная волчанка, дискоидная красная волчанка, вульгарная (туберкулезная) волчанка, дерматомиозит, полимиозит, синдром Шегрена, узелковый панартериит, аутоиммунная энтеропатия, так же как пролиферативный гломерулонефрит, включающий введение соединения, как описано здесь, человеку, нуждающемуся в таком лечении.

В еще одном предпочтительном воплощении изобретение направлено на способ лечения заболевания "трансплантат против хозяина" или отторжение трансплантата при трансплантации любого органа, включая почку, поджелудочную железу, печень, сердце, легкое, и костный мозг, включающий введение соединения, как описано здесь, человеку, нуждающемуся в таком лечении.

Пример: анализ ингибирования ТК in vitro

Ход работы

Анализ C-Kit WT и мутантного C-Kit (JM и киназный домен 816)

Анализы пролиферации

Клетки промывали два раза в PBS перед посевом в количестве 5·10 ⁴ клеток на лунку 96-луночных планшетов в трех повторах и стимулировали или гематопоэтическими факторами роста (HGF), или в их отсутствие. После 2 дней культивирования добавляли 37 Бк (1,78 ТБк/ммоль) [³H] тимидина (Amersham Life Science, UK) в течение 6 часов. Клетки собирали и фильтровали через стекловолоконные фильтры и измеряли включение [³Н] тимидина с помощью сцинтилляционного счетчика.

Для анализа пролиферации все лекарственные средства получали в виде 20 мМ запасных растворов и хранили их при -80°С. Свежие разведения в PBS делали перед каждым экспериментом. Лекарственные средства, растворенные в DMSO, добавляли в начале культивирования. Контрольные культуры были обработаны соответствующими разведениями DMSO. Результаты представлены в процентах, где за 100% принимают пролиферацию в отсутствие ингибитора.

Клетки

Мышиный и человеческий Ba/F3 kit, Ba/F3 mkit 27 (делеция подмембранного домена) и hkitD816V были получены из мышиных IL-3-зависимых Ba/F3 proB лимфоидных клеток. Клеточные линии FMA3 и Р815 представляют собой клетки мастоцитомы, экспрессирующие эндогенные мутированные формы Kit, т.е. формы с делецией внутри рамки считывания на участке кодонов 573-579 рецептора, кодирующем мышиный подмембранный домен. Линия лейкозных МС-клеток НМС-1 человека экспрессирует двойную точечную мутацию (т.е. мутацию JM-V560G и мутацию киназного домена kitD816V), тогда как субклон 155 HMC1 экспрессирует только мутацию JM-V560G.

Анализ иммунопреципитации и вестернблот-анализ

Для каждого анализа лизировали и иммунопреципитировали 5·10 ⁶ клеток Ba/F3 и Ва/F3-клеток с различными мутациями c-kit, как описано в работе Beslu et al, 1996, за исключением того, что клетки стимулировали с помощью 250 нг/мл rmKL. Клеточные лизаты иммунопреципитировали с кроличьей иммунной сывороткой к цитоплазматическому домену KIT или с антителами к мышиному KIT (Rottapel et al., 1991), или с антителами к человеческому KIT (Santa Cruz). Гибридизацию в вестернблот-анализе проводили или с 4G10-антителом к фосфотирозину (UBI), или с подходящей кроличьей иммуносывороткой к KIT, или с другими антителами (описанными в параграфе антитела). Затем мембраны инкубировали либо с козьими антителами к мышиным IgG, конъюгированными с HRP, или с козьими антителами к кроличьим IgG, конъюгированными с HRP (Immunotech). Интересующие белки затем визуализировали после инкубации с реагентом ECL (Amersham).

Экспериментальные результаты

Экспериментальные результаты для различных соединений в соответствии с настоящим изобретением, полученные с помощью протоколов, описанных выше, представлены в таблице:

Ингибирование in vitro различными соединениями, направленными против c-Kit WT, c-Kit JM 27 и c-Kit D816V.
Мишень	IC50 (µM)	Соединения
c-Kit WT	IC50<1 µM	001; 002; 004; 011; 017; 021; 028; 030
c-Kit JM 27	IC50<1 µM	001; 017; 027; 028; 029; 030
c-Kit D816V	IC50 1 µM	001; 002; 011; 017; 021; 030