профилактика и лечение воспаления среднего уха с помощью непатогенных штаммов бактерий

Формула изобретения

1. Питательная композиция для профилактики или лечения воспаления среднего уха (отита), которая включает непатогенный бактериальный штамм, способный стимулировать системный иммунный ответ, непатогенный бактериальный штамм, способный оказывать бактериостатические эффекты на патогены, связанные с возникновением воспаления среднего уха, и непатогенный бактериальный штамм, способный оказывать бактерицидные эффекты на патогены, связанные с возникновением воспаления среднего уха, в которой бактериальный штамм, способный стимулировать системный иммунный ответ, представляет собой Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103 или Lactobacillus rhamnosus CGMCC 1.3724, бактерицидные и бактериостатические эффекты оказывает один и тот же бактериальный штамм, выбранный из Micrococcus varians MCV8 или Streptococcus salivarius DSM 13084, каждый в количестве от 10⁴ до 10¹² КОЕ/г композиции (сырого веса).

2. Композиция по п.1, которая дополнительно включает Streptococcus thermophilus.

3. Композиция по п.1 или 2, которая дополнительно включает, по меньшей мере, один пребиотик в количестве 0,3 до 6% от массы композиции.

4. Композиция по п.1 или 2, представляющая собой смесь для грудных детей.

5. Композиция по п.1 или 2, представляющая собой смесь для грудных детей старше 4 мес.

6. Композиция по п.1 или 2, представляющая собой молоко для детей младшего возраста.

7. Композиция по любому из пп.1 или 2, представляющая собой пищевую добавку.

Описание изобретения к патенту

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение касается профилактики и лечения воспаления среднего уха (отит), в частности, у грудных детей и маленьких детей.

Предшествующий уровень техники

Инфекции дыхательных путей встречаются очень часто, особенно у грудных детей и маленьких детей. Например, в первый год жизни ребенок подхватывает от трех до шести таких инфекций. Такие инфекции могут быть бактериальными или вирусными. Примеры вирусных инфекций дыхательных путей включают простуду, грипп и респираторно-синцитиальный вирус. Примеры бактериальных инфекций дыхательных путей включают пневмонию и воспаление среднего уха.

Частые инфекции дыхательных путей нередко связаны с воспалением среднего уха. Это инфекция среднего уха, при которой евстахиева труба, соединяющая полость среднего уха с внешней средой через рот, воспаляется, а затем забивается, задерживая бактерии в среднем ухе. Полость среднего уха тоже воспаляется, при этом накапливается жидкость, что ведет к повышению давления, которое больной воспринимает как боль вследствие неспособности уравнять давление между средним ухом и внешней средой через евстахиеву трубу, как у здоровых лиц. В тяжелых случаях барабанная перепонка может разорваться от давления и пропустить зараженную жидкость во внутреннее ухо. Это потенциально опасная ситуация, которая может вызвать перманентное нарушение слуха, если ее не лечить.

У 50% детей бывает хотя бы один эпизод острого воспаления среднего уха в первый год жизни, а у 35% детей в возрасте от одного до трех лет бывают рецидивы острого воспаления среднего уха. В свою очередь, это может привести к возникновению состояния, известного как экссудативный отит, при котором жидкость не полностью выходит из среднего уха между рецидивами инфекции. Если такое состояние установится надолго, то может потребоваться хирургическое вмешательство.

Острое воспаление среднего уха явно связано с активностью патогенных бактерий, обычно встречающихся среди микроорганизмов, обитающих в носоглоточной полости. В количественном отношении наиболее важными патогенами являются Streptococcus pneumoniae (35% случаев), не поддающийся типированию Haemophilus influenzae (30% случаев) и Moraxella catarrhalis (10% случаев). По этой причине острое воспаление среднего уха обычно лечат с применением антибиотиков, особенно у грудных детей. В самом деле, антибиотики назначаются для лечения воспаления среднего уха чаще, чем при любом другом заболевании в грудном возрасте. Это неизбежно привело к возникновению устойчивости к обычно назначаемым антибиотикам у бактериальных штаммов, связанных с воспалением среднего уха. Например, считается, что, по меньшей мере, 20% штаммов S. pneumoniae устойчивы к пенициллину и цефалоспоринам. Точно так же, по меньшей мере, у 30% штаммов Н. influenzae и большинства штаммов М. catarrhalis возникла устойчивость к антибиотикам. Такое частое назначение, по крайней мере, частично, вызвано тем, что грудные дети и маленькие дети испытывают боль, на которую они реагируют продолжительным криком, которого родители и медработники очень стараются избежать. Поэтому существует явная потребность в альтернативных способах снижения встречаемости этого болезненного и потенциально серьезного заболевания у грудных детей и маленьких детей.

Различные альтернативные способы лечения уже предлагались. Например, в WO 97/17089 для профилактики воспаления среднего уха предлагается использовать так называемый иммунный молочный препарат. Этот препарат содержит иммуноглобулины типа IgG против отита, полученные из коровьего молозива, в дополнение к пассивной иммунной защите.

Также предлагались различные бактериальные штаммы для профилактики/лечения воспаления среднего уха. В недавнем клиническом испытании детям с острым воспалением среднего уха распыляли в нос ингибиторные -гемолитические стрептококки. Использовали штаммы Streptococcus mitis, Streptococcus sanguis и Streptococcus oralis. После такой обработки у детей было меньше эпизодов острого воспаления среднего уха (Roos et al. Effect of recolonisation with interfering alpha streptococci on recurrences of acute and secretory otitis media in children: randomised placebo controlled trial. BMJ 322: 210-212). Однако бактериальные штаммы, использовавшиеся в этом испытании, являются и признанными патогенами человека, вовлеченными в такие заболевания, как эндокардит и легочные инфекции.

В WO 2004/072272 предлагается использовать специфический штамм Streptococcus salivarius при профилактике и лечении воспаления среднего уха. Утверждается, что этот штамм является продуцентом бактериоцина и не является патогенным. Его можно вводить в нос, путем ингаляции через рот либо в виде лепешек и капсул. Предпочтительно штамм применяется после первичного лечения с помощью антибиотика или иного противомикробного средства.

В WO 2006/007526 описано исследование 81 грудного ребенка в Финляндии, при котором сравнивали встречаемость воспаления среднего уха у грудных детей, получавших в молочной смеси комбинацию штаммов Lactobacillus rhamnosus и Bifidobacterium lactis, с контрольной группой, не получавшей пробиотиков. Оказалось, что добавление этих пробиотиков, имеющих длительную историю применения в пищевых продуктах для человека, снижало риск раннего острого воспаления среднего уха по сравнению с группой без такого добавления. Этот эффект был связан с общим снижением количества инфекций в получавшей добавку группе и предполагается, что этот эффект обусловлен системным иммуностимулирующим действием этих штаммов.

Из вышесказанного видно, что существует потребность в эффективном способе профилактики и лечения острого воспаления среднего уха, который не зависел бы от применения антибиотиков и который был бы удобным и безопасным в применении.

Сущность изобретения

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что при профилактике и лечении воспаления среднего уха особенно эффективным является совместное введение бактериальных штаммов с взаимно дополняющими свойствами.

Соответственно, в первом аспекте, настоящим изобретением предусмотрены композиции, пригодные для профилактики и лечения воспаления среднего уха, которые включают непатогенный бактериальный штамм, способный стимулировать системный иммунный ответ, непатогенный бактериальный штамм, способный оказывать бактериостатическое действие на патогены, связанные с возникновением воспаления среднего уха, и непатогенный бактериальный штамм, способный оказывать бактерицидное действие на патогены, связанные с возникновением воспаления среднего уха.

Во втором аспекте настоящим изобретением предусмотрено применение непатогенного бактериального штамма, способного стимулировать системный иммунный ответ, непатогенного бактериального штамма, способного оказывать бактериостатическое действие на патогены, связанные с возникновением воспаления среднего уха, и непатогенного бактериального штамма, способного оказывать бактерицидное действие на патогены, связанные с возникновением воспаления среднего уха, при изготовлении композиций для профилактики и лечения воспаления среднего уха.

Изобретение также распространяется на способ профилактики и лечения воспаления среднего уха, включающий введение нуждающемуся в этом индивидууму терапевтического количества непатогенного бактериального штамма, способного стимулировать системный иммунный ответ, непатогенного бактериального штамма, способного оказывать бактериостатическое действие на патогены, связанные с возникновением воспаления среднего уха, и непатогенного бактериального штамма, способного оказывать бактерицидное действие на патогены, связанные с возникновением воспаления среднего уха.

Не ограничиваясь какой-либо теорией, авторы изобретения полагают, что эффективность описанных выше бактериальных штаммов при профилактике и лечении воспаления среднего уха может быть связана с патологией заболевания. Полагаем, что простое присутствие патогенов S. pneumoniae, Н. influenzae и М. catarrhalis не обязательно ведет к возникновению острого воспаления среднего уха. Скорее сперва должна быть первичная вирусная инфекция верхнего отдела дыхательных путей, которая каким-то не совсем понятным образом, но, вероятно, связанным с системным иммунным ответом, нарушает микробиоту носоглотки, что позволяет патогенным бактериям колонизировать слизистую и вызвать наступление воспаления среднего уха. Возможно, что одновременное стимулирование системного иммунного ответа и количества непатогенных бактериостатических и бактерицидных бактерий в носоглоточной полости может эффективно воспрепятствовать колонизации слизистой носоглотки патогенными бактериями, связанными с возникновением воспаления среднего уха.

Раскрытие изобретения

В настоящем изобретении следующим словам даны определения, которые нужно принимать во внимание при чтении и интерпретировании описания, примеров и формулы изобретения.

Следующие определения приведены в статье 1.2 Директивы 91/321/ЕЕС Европейской комиссии от 14 мая 1991 г. по молочным смесям для грудных детей и смесям для продолжающих и приняты в настоящем описании.

"Грудной ребенок - ребенок в возрасте до 12 месяцев.

Смеси для грудных детей" - пищевые продукты, предназначенные для особого питания грудных детей в первые 4-6 месяцев жизни и сами по себе удовлетворяющие пищевые потребности этой категории лиц.

Смеси для грудных детей старше 4 месяцев - пищевые продукты, предназначенные для особого питания грудных детей в возрасте старше 4 месяцев и составляющие основной жидкий компонент в постепенно расширяющемся рационе этой категории лиц.

Молоко для детей младшего возраста - молочный напиток, приспособленный к специфическим пищевым потребностям детей младшего возраста.

Непатогенный бактериальный штамм - бактериальный штамм, который не признан патогенным для человека.

Патогены, связанные с возникновением воспаления среднего уха - один или несколько из числа Streptococcus pneumoniae, не поддающихся типированию Haemophilus influenzae и Moraxella catarrhalis.

Ребенок младшего возраста - ребенок в возрасте от 1 до 6 лет (маленький ребенок).

Все проценты приводятся по весу, если не указано иначе.

Следует иметь в виду, что используемые в настоящем изобретении бактериальные штаммы должны быть живыми в момент потребления. По этой причине количества штаммов выражены в колониеобразующих единицах (КОЕ).

Бактериальный штамм, способный стимулировать системный иммунный ответ, предпочтительно представлен Lactobacillus rhamnosus АТСС 53103 или Lactobacillus rhamnosus CGMCC 1.3724. Штамм L. rhamnosus АТСС 53103 может быть получен коммерческим путем от фирмы Valio Оу из Финляндии под торговой маркой LGG^®.

Бактериостатический эффект могут проявлять штаммы, являющиеся эффективными продуцентами молочной кислоты. При приеме внутрь этих бактерий они вырабатывают молочную кислоту в количестве, достаточном для оказания заметного местного бактериостатического эффекта вблизи от слизистой носоглотки, и тем самым препятствуют колонизации патогенными бактериями. Примером таких бактерий является Streptococcus thermophilus. Подходящим штаммом S. thermophilus является тот, который продается под торговой маркой ТН4 фирмой Christian Hansen из Дании.

Некоторые бактериальные штаммы могут обладать как бактериостатической, так и бактерицидной активностью. Такие штаммы предпочтительны для применения в настоящем изобретении, так как они могут служить и в качестве бактериального штамма, способного оказывать бактериостатические эффекты, и в качестве бактериального штамма, способного оказывать бактерицидные эффекты, тем самым упрощая сложность производства. Примеры таких штаммов включают Micrococcus varians MCV8 и Streptococcus salivarius DSM 13084 и DSM 13085. Штамм S. salivarius DSM 13084 может быть получен коммерческим путем от фирмы BLIS Technologies Limited из Новой Зеландии под маркой К12.

Штаммы могут вводиться с помощью одного и того же носителя либо могут вводиться по отдельности.

Предпочтительно композиция представляет собой пищевую композицию, которая потребляется в жидком виде и пригодна для потребления грудными детьми и маленькими детьми. Композиция может представлять собой полноценную формулу типа молочной смеси для грудных детей, смесь для продолжающих или молоко для подрастающих. В качестве альтернативы для старшей подгруппы грудных детей и маленьких детей композиция может представлять собой соковый напиток либо иной охлажденный или устойчивый при хранении напиток или суп, к примеру.

Предпочтительно пищевая композиция по изобретению содержит от 10⁴ до 10¹² КОЕ/г композиции (сырого веса) каждого штамма.

Пищевая композиция по изобретению предпочтительно дополнительно содержит, по меньшей мере, один пребиотик в количестве от 0,3 до 6%. Пребиотик представляет собой неперевариваемый ингредиент пищи, который благотворно влияет на организм хозяина путем избирательного стимулирования роста и/или активности одних бактерий или ограниченного числа бактерий в толстом кишечнике и тем самым улучшает состояние здоровья организма. Такие ингредиенты являются неперевариваемыми в том смысле, что они не расщепляются и не всасываются в желудке или тонком кишечнике и поэтому проходят в толстый кишечник, где они подвергаются избирательному сбраживанию полезными бактериями. Примеры пребиотиков включают определенные олигосахариды, как-то фруктоолигосахариды (ФОС) и галактоолигосахариды (ГОС). Можно использовать комбинации пребиотиков, к примеру, 90% ГОС и 10% короткоцепочечных ФОС, как у продукта, продаваемого под торговой маркой Raftilose^®, или 10% инулина, как у продукта, продаваемого под торговой маркой Raftiline^®. Особенно предпочтительная комбинация пребиотиков содержит 70% короткоцепочечных ФОС и 30% инулина.

Теперь для примера опишем общий состав смеси для грудных детей по изобретению. Смесь содержит источник белка. Полагаем, что тип белка не является решающим для настоящего изобретения при условии, что удовлетворяются минимальные потребности в содержании незаменимых аминокислот и обеспечивается удовлетворительный рост. Так, можно использовать источники белка, основанные на молочной сыворотке, казеине и их смесях, а также источники белка, основанные на сое. Что касается белка молочной сыворотки, то источник белка может основываться на кислой сыворотке или сладкой сыворотке либо на их смеси, и он может включать -лактальбумин и -лактоглобулин в любой желательной пропорции.

Белки могут быть интактными или гидролизованными или представлять собой смесь интактных и гидролизованных белков. Может оказаться желательным применение частично гидролизованных белков (со степенью гидролиза от 2 до 20%), к примеру, для грудных детей, подвергающихся риску возникновения аллергии на коровье молоко. Если нужны гидролизованные белки, то процесс гидролиза может проводиться желательным и известным в этой области способом. Например, можно получить гидролизат молочной сыворотки путем энзиматического гидролиза фракции сыворотки в одну или несколько стадий. Если фракция сыворотки, используемая в качестве исходного материала, практически свободна от лактозы, то оказывается, что белок подвергается значительно меньшей блокировке лизина в процессе гидролиза. Это позволяет уменьшить степень блокировки лизина с 15% от общего содержания лизина до менее 10% содержания лизина, например около 7% от содержания лизина, что сильно улучшает питательную ценность источника белка.

Смесь для грудных детей по настоящему изобретению содержит источник углеводородов. Можно использовать любые источники углеводородов, обычно входящие в состав смеси для грудных детей, как-то лактоза, сахароза, мальтодекстрин, крахмал и их смеси, хотя предпочтительным источником углеводородов является лактоза. Предпочтительно источники углеводородов составляют от 35 до 65% общего энергосодержания смеси.

Смесь для грудных детей по настоящему изобретению содержит источник липидов. Источником липидов может быть любой липид или жир, который подходит для применения в смесях для грудных детей. Предпочтительными источниками липидов являются пальмовый олеин, подсолнечное масло с высоким содержанием олеиновой кислоты и сафлоровое масло с высоким содержанием олеиновой кислоты. Также можно добавлять незаменимые жирные кислоты - линолевую и -линоленовую кислоту, а также небольшое количество масла, содержащего большое количество предобразованной арахидоновой кислоты и докозагексаеновой кислоты, как-то рыбьего жира или микробного масла. В целом содержание жира предпочтительно составляет от 30 до 55% общего энергосодержания смеси. Источник жира предпочтительно имеет соотношение жирных кислот n-6/n-3 от 5:1 до 15:1, к примеру от 8:1 до 10:1.

Смесь для грудных детей также должна содержать все витамины и минералы, которые считаются незаменимыми в повседневном рационе, причем в значительном с точки зрения питания количестве. Для некоторых витаминов и минералов установлены минимальные потребности. Примеры минералов, витаминов и других питательных веществ, необязательно входящих в состав смеси для грудных детей, включают витамин А, витамин В1, витамин В2, витамин В6, витамин В12, витамин Е, витамин К, витамин С, витамин D, фолиевую кислоту, инозитол, ниацин, биотин, пантотеновую кислоту, холин, кальций, фосфор, йод, железо, магний, медь, цинк, марганец, хлор, калий, натрий, селен, хром, молибден, таурин и L-карнитин. Минералы обычно добавляются в виде солей. Присутствие и количество конкретных минералов и других витаминов колеблется в зависимости от намеченной популяции грудных детей.

При необходимости смесь для грудных детей может содержать эмульгаторы и стабилизаторы, как-то соевый лецитин, сложные эфиры моно- и диглицеридов с лимонной кислотой и др.

Смесь для грудных детей может необязательно содержать и другие вещества, которые могут обладать благотворным действием, как-то лактоферрин, нуклеотиды, нуклеозиды и др.

Наконец, смесь должна содержать Lactobacillus rhamnosus АТСС 53103 или Lactobacillus rhamnosus CGMCC 1.3724, Streptococcus salivarius DSM 13084 и Streptococcus thermophilus TH4^® , каждый в количестве от 10⁴ до 10¹² КОЕ/г композиции (сырого веса), а также от 0,3 до 6% смеси 90% ГОС и 10% ФОС.

Смесь может быть получена любым подходящим способом. Например, она может быть получена путем смешивания белка, источника углеводов и источника жира в надлежащих пропорциях. Если нужно, на этой стадии можно включить и эмульгаторы. Витамины и минералы можно добавить на этой стадии, но обычно их добавляют позже, чтобы избежать термического разложения. Липофильные витамины, эмульгаторы и т.п. можно растворить в источнике жира перед смешиванием. Затем для получения жидкой смеси можно с перемешиванием добавить воду, предпочтительно подвергнутую обратному осмосу. Температура воды обычно составляет от 50°С до 80°С, что способствует диспергированию ингредиентов. Для получения жидкой смеси можно использовать коммерчески доступные разжижители. Затем жидкую смесь гомогенизируют, к примеру, в две стадии.

Жидкую смесь можно затем подвергнуть термической обработке для уменьшения бактериальной нагрузки путем быстрого нагревания ее до температуры в пределах от 80°С до 150°С в течение от 5 сек до 5 мин, к примеру. Это может осуществляться при помощи пара, автоклава или теплообменника, например пластинчатого теплообменника.

Затем жидкую смесь можно охладить до температуры от 60°С до 85°С, к примеру, методом импульсного охлаждения. Жидкую смесь можно затем опять гомогенизировать, к примеру, в две стадии при 10-30 МПа на первой стадии и 2-10 МПа на второй стадии. Гомогенизированную смесь затем можно еще больше охладить, чтобы добавить чувствительные к нагреванию компоненты, как-то витамины и минералы. На этой стадии будет удобно довести pH и содержание сухого вещества в гомогенизированной смеси.

Гомогенизированную смесь переносят в подходящую сушильную установку, как-то распылительную сушилку или лиофильную сушилку, и превращают в порошок. Порошок должен иметь влагосодержание менее 5%.

Бактериальные штаммы можно культивировать любым подходящим способом и подготовить к добавлению в сухую смесь для грудных детей методом лиофильной сушки или распылительной сушки, к примеру. В качестве альтернативы у специализированного поставщика можно купить готовые бактериальные препараты в соответствующей форме для добавления в такие продукты питания, как смесь для грудных детей. Бактериальные штаммы добавляют в смесь для грудных детей методом сухого смешения.

Если предпочтителен жидкий продукт, то гомогенизированную смесь можно подвергнуть стерилизации, а затем асептически заполнить ею подходящие емкости, либо сначала заполнить ею емкости, а затем автоклавировать. После этого бактериальные штаммы нужно поставлять отдельно, готовыми для смешивания с жидкостью во время употребления. Например, бактериальные штаммы можно поставлять в отдельном пакетике или в отдельном отсеке упаковки, содержащей жидкость.

В другом воплощении композиция может представлять собой добавку, включающую данные штаммы в количестве, достаточном для достижения требуемого эффекта у индивидуума. Такая форма применения более подходит для детей старшей подгруппы. Предпочтительно суточная доза бактериальных штаммов составляет от 10⁴ до 10¹² КОЕ. Количество бактерий, входящих в добавку, следует выбирать в зависимости от того, как эта добавка будет применяться. Например, если добавка будет применяться два раза в день, то каждая порция должна содержать от 10 ² до 10⁶ КОЕ каждого бактериального штамма. Добавка может иметь вид таблеток, капсул, пастилок или жидкости, к примеру. Добавка может дополнительно содержать защитные гидроколлоиды (как-то камеди, белки, модифицированный крахмал), связующие вещества, пленкообразующие вещества, инкапсулирующие вещества, материалы оболочки, соединения матрикса, покрытия, эмульгаторы, поверхностно-активные вещества, солюбилизаторы (масла, жиры, воск, лецитин и т.п.), адсорбенты, носители, заполнители, совместно действующие соединения, диспергирующие вещества, смачивающие вещества, технологические добавки (растворители), сыпучие вещества, вкусомаскирующие вещества, утяжелители, загустители и гелеобразующие вещества. Добавка также может содержать стандартные фармацевтические добавки и вспомогательные вещества, наполнители и разбавители, в том числе воду, желатин любого происхождения, растительные камеди, лигнинсульфонат, тальк, сахара, крахмал, гуммиарабик, растительное масло, полиалкиленгликоли, ароматизаторы, консерванты, стабилизаторы, эмульгаторы, буферы, смазывающие вещества, красители, смачивающие вещества, заполнители и др.

Кроме того, добавка может содержать органическое или неорганическое вещество-носитель, подходящее для перорального или энтерального применения, а также витамины, минералы, микроэлементы и другие питательные микрокомпоненты в соответствии с рекомендациями правительственных органов типа USRDA.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Пример 1

Пример состава смеси для грудных детей по настоящему изобретению представлен ниже. Этот состав приводится только в качестве иллюстрации.

Питательное вещество	на 100 ккал	на 1 литр
Калорийность (ккал)	100	670
Белок (г)	1,83	12,3
Жир (г)	5,3	35,7
Линолевая кислота (г)	0,79	5,3
-Линоленовая кислота (мг)	101	675
Лактоза (г)	11,2	74,7
Пребиотик (70% ФОС, 30% инулин)	0,64	4,3
Минералы (г)	0,37	2,5
Na (мг)	23	150
K (мг)	89	590
Cl (мг)	64	430
Са (мг)	62	410
Р (мг)	31	210
Mg (мг)	7	50
Mn (мкг)	8	50
Se (мкг)	2	13
Витамин А (мкг RE)	105	700
Витамин D (мкг)	1,5	10
Витамин Е (мг ТЕ)	0,8	5,4
Витамин K1 (мкг)	8	54
Витамин C (мг)	10	67
Витамин В1 (мг)	0,07	0,47
Витамин В2 (мг)	0,15	1,0
Ниацин (мг)	1	6,7
Витамин В6 (мг)	0,075	0,50
Фолиевая кислота (мкг)	9	60
Пантотеновая кислота (мг)	0,45	3
Витамин В12 (мкг)	0,3	2
Биотин (мкг)	2,2	15
Холин (мг)	10	67
Fe (мг)	1,2	8
I (мкг)	15	100
Cu (мг)	0,06	0,4
Zn (мг)	0,75	5
L. rhamnosus АТСС 53103	2·107 КОЕ/г порошка
S. salivarius DSM 13084	2·107 КОЕ/г порошка
S. thermophilus ТН4	2·107 КОЕ/г порошка

Пример 2

В этом примере ингибирующий эффект композиции по изобретению на некоторые патогены, обычно связанные с воспалением среднего уха, сравнивается с эффектом составных частей композиции самих по себе. Тестировали бактериальные штаммы Lactobacillus rhamnosus АТСС 53103 и Streptococcus salivarius DSM 13084, поодиночке и в сочетании. Патогенные штаммы, на которых оценивали ингибирующую активность бактериальных штаммов, были представлены тремя различными штаммами Streptococcus pneumoniae и одним штаммом Alloiococcus otitidis. Спектр ингибирования тестируемых штаммов определяли методом отсроченного антагонизма, как описано ранее (Tagg and Bannister, 1979). Вкратце, на соответствующий питательный агар инокулировали штриховые культуры тестируемого штамма диаметром 1 см. После инкубации макроскопические культуры бактерий удаляли с помощью предметного стекла, а оставшиеся на поверхности агара клетки уничтожали обработкой парами хлороформа в течение 30 мин. Затем поверхность агара продували воздухом в течение 30 мин. Под прямым углом к линии первоначальной штриховой культуры инокулировали культуры (18 ч, 37°С) патогенных штаммов из бульона Тодда-Хьюита (ТНВ, Difco). После инкубации в течение 24 ч при 37°С в атмосфере 5% CO₂ измеряли степень ингибирования каждого патогенного штамма. Результаты представлены ниже в таблице, из которой видно, что на все тестируемые патогенные штаммы комбинация Lactobacillus rhamnosus АТСС 53103 и Streptococcus salivarius DSM 13084 оказывала больший ингибирующий эффект, чем каждый из этих штаммов по отдельности.

Таблица
	Патоген	L. rhamnosus ATCC 53103	S. salivarius DSM 13084	S. pneumoniae RX1	S. pneumoniae D39	S. pneumoniae TIGR4	A. otitidis NZRCC 3648
Штамм	Источник	R	R	R	R	R	R
ингибитора	Среда
53103	BACA		0	0	0	0	0
13084	BACA	0		17	17	16
53103/13084	BACA			20	18	18
53103	CHOC						0
13084	CHOC						10
53103/13084	CHOC						15
BACA:	кровяной агар с кальцием
CHOC:	шоколадно-кровяной агар
Источник R	= контрольная культура