композиция биологически активных препаратов для повышения выживаемости осетровых рыб при искусственном воспроизводстве

Формула изобретения

Композиция биологически активных препаратов для повышения выживаемости осетровых рыб при искусственном воспроизводстве, включающая следующие компоненты, мас.%:

Эпибрассинолид	22,73
Гидроксикоричные кислоты	23,86
Оротат калия	53,41

при следующих концентрациях компонентов, мг/л:

Эпибрассинолид	10 -15
Гидроксикоричные кислоты	10-13
Оротат калия	10 -14

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к рыбоводству, в частности к созданию многокомпонентного средства для повышения выживаемости посадочного материала при искусственном воспроизводстве и товарном выращивании осетровых рыб.

Известен биологически активный препарат "Эпин-экстра", действующей субстанцией которого является эпибрассинолид, повышающий жизнестойкость личинок и молоди осетровых рыб при воздействии неблагоприятных гидрохимических факторов (см. Егоров М.А., Витвицкая Л.В. Использование биологически активных веществ в искусственном воспроизводстве осетровых Волго-Каспийского региона: моногр. Астрахань: Изд-во АГТУ. - 2002. - 100 с.).

Однако механизм действия данного препарата узок, а для эффективной защиты организма осетровых рыб от неблагоприятных факторов окружающей среды необходим комплексный препарат с широким спектром действия.

Прототип заявленного решения не выявлен.

Техническая задача: создание многокомпонентной композиции биологически активных препаратов в качестве иммуномодулирующего и токсикопротекторного средства для осетровых рыб.

Технический результат: повышение выживаемости осетровых рыб на ранних стадиях онтогенеза.

Он достигается путем обработки посадочного материала осетровых рыб при искусственном воспроизводстве композицией биологически активных веществ состава: эпибрассинолид - 22.73 мас.%, гидроксикоричные кислоты - 23.86 мас.%, калиевая соль урацил-4-карбоновой (оротовой) кислоты (оротат калия) - 53.41 мас.%., при следующих концентрациях: эпибрассинолид - 10^-15 мг/л, гидроксикоричные кислоты - 10^-13 мг/л, оротат калия - 10^-14 мг/л.

Из современных биологически активных препаратов наиболее эффективными являются: эпибрассинолид, увеличивающий проницаемость мембран клеток; гидроксикоричные кислоты, обладающие антиоксидантными свойствами, а также выполняющие функции рострегуляторов и антистрессовых адаптогенов; оротат калия, стимулирующий рост клеток и, следовательно, активирующий скорость обменных процессов на ранних стадиях развития. Поэтому данные вещества были отобраны для создания многокомпонентной композиции биологически активных веществ.

Гидроксикоричные кислоты, а именно кофейная (3,4-дигидроксикоричная) и ее производные - цикориевая(2,3-дикофеоилвинная) и хлорогеновая (5-кофеоилхинная) кислоты (в равном количественном соотношении) обладают высокой биологической активностью, которую связывают также с иммуномодулирующей активностью.

Композиция получается известным способом путем смешивания исследованных биологически активных веществ в установленных концентрациях и составе.

Исследования, проведенные в течение ряда лет, показали, что оптимальными концентрациями данных веществ для спермы осетровых являются следующие значения: эпибрассинолид - 10^-15 мг/л, гидроксикоричные кислоты - 10^-13 мг/л и оротат калия - 10^-14 мг/л (см. Сидорова Л.А., Тихомиров A.M., Шавель И.И., Рябухин Ю.И. Исследование влияния биологически активных препаратов и оротата калия на сперму русского осетра и белуги. - Вестник АГТУ. - 2007. - № 6 (41). - С.31-33).

По результатам лабораторных исследований (табл.1) с использованием метода «крутое восхождение» по теории «Планирование экспериментов» удалось получить композицию биологически активных препаратов следующего состава: эпибрассинолид (X₁) - 22.73 масс.%, гидроксикоричные кислоты (X₂) - 23.86 масс.%, оротат калия (Х₃ ) - 53.41 масс.%.

Таблица 1
Матрица эксперимента и результаты определения оптимального состава композиции БАП
Опыт	Фактор	Значение у;	У сред.	y j
Х0	X 1	X2	Х3	К 1=5,27	K2=4,4	К3=6,36	5,34
1	+	-	-	-	4,53	4,48	5,15	4,72	-0,62
2	+	+	-	-	4,38	3,50	4,50	4,13	-1,21
3	+	-	+	-	5,35	4,42	6,45	5,40	+0,06
4	+	+	+	-	4.40	4,22	4,55	4,39	-0,95
5	+	-	-	+	5,23	4,10	4,21	4,51	-0,83
6	+	+	-	+	6,10	5,35	7,04	6,16	+0,82
7	+	-	+	+	4,14	4,31	6,38	4,94	-0,40
8	+	+	+	+	4,36	4,23	5,42	4,67	-0,67
b i	-0,47	-0,03	-0,02	+0,2
Шаг в область оптимального состава композиции
Шаг	Величина шага	Контроль (К)	Опыт (О)	Yi=K-O
1	5	11,26	12,71	+1,45
2	11,30	12,56	+1,26
3	10,16	11,36	+1,20
4	10,19	3,20	-6,99

Пошаговое определение состава композиции производили согласно условиям планирования эксперимента. Из данных табл.1 следует, что оптимальной по составу является композиция, соответствующая первому шагу (Y_i=+1,45), поскольку время подвижности сперматозоидов белуги в 3,1 раза превышает контрольное значение.

Также проведена полупроизводственная проверка действия композиции биологически активных препаратов на личинку и молодь осетровых в лаборатории и цехах Александровского рыбоводного завода Астраханской области.

На основании проведенных исследований можно отметить, что композиция биологически активных препаратов является иммуномодулятором и оказывает токсикопротекторную защиту от влияния на личинку севрюги растворов сульфата меди и фенола, увеличивая их выживаемость в 5,26 и 1,09 раза соответственно по сравнению с контролем (табл.2). Также данная композиция обладает токсипротекторными свойствами в отношении действия сульфата меди и синтетических поверхностно-активных веществ для личинок русского осетра (выживаемость личинок в 1,22 и 1,11 раза выше контроля соответственно) (табл.3).

Таблица 2
Влияние композиции ЭЦОК на выживаемость личинок севрюги при действии факторов
	Факторы
%	CuSO4	Фенол	«Sarma»
Контроль	4.38±0.47	0.42±0.21	28.70±0.73	19.25±0.63
Композиция	6.20±0.29**	2.21±0.63**	31.17±0.25**	19.19±0.19

Таблица 3
Влияние композиции ЭЦОК на выживаемость личинок русского осетра при действии факторов
	Факторы
%	CuSO4	Фенол	СПАВ
Контроль	15.14±1.30	1.22±0.48	3.56±0.38	7.54±0.92
Композиция	19.97±1.27**	1.49±0.27**	3.17±0.25	8.36±0.78**

Звездочками отмечены величины, достоверно отличающиеся по критерию Стъюдента от соответствующих значений в контроле, р<0,05.

По результатам других исследований в отношении молоди осетровых выявлено, что композиция биологически активных препаратов способна защитить молодь русского осетра от действия тяжелых металлов (снижая возбудимость ЦНС и общую двигательную активность молоди и ее реактивность на внешние раздражители) при искусственном содержании в случае залповых выбросов и падании их в технологическую воду рыбоводных предприятий (табл.4).

Таблица 4
Показатели поведения в тесте «Открытое поле» молоди русского осетра в норме и при действии сульфата меди
	ОА	ФА	РА-1	РА-2	РА-3
Контроль	29.83±1.38	30.26±1.36	25.40±1.05	22.70±0.78	12.50±0.97
Композиция	36.53±1.26*	25.30±1.31	20.00±0.84	20.10±1.02	17.30±0.85*
Контроль - CuSO4 (0.1 мг/л)	23.35±0.89	22.03±0.95	17.50±0.67	16.40±0.71	11.75±0.62
Композиция - CuSO4 (0.1 мг/л)	27.52±0.88*	19.42±0.62	14.60±0.83	16.95±0.63	14.40±0.56

Контроль - CuSO 4 (1.0 мг/л)	7.89±1.07	7.94±1.19	4.83±0.92	8.66±1.28	4.66±1.35
Композиция - CuSO4 (1.0 мг/л)	13.53±1.40*	12.53±1.43*	11.60±1.16*	14.80±1.10*	3.00±0.64*

ОА - ориентировочная активность, ФА - фоновая активность, РА 1 - реактивность на высокочастотный раздражитель, РА 2 - реактивность на низкочастотный раздражитель, РА 3 - реактивность на световой раздражитель. Звездочками отмечены величины, достоверно отличающиеся по критерию Стъюдента от соответствующих значений в контроле.

Положительный эффект: композиция биологически активных препаратов является перспективным иммуномодулятором для личинок и молоди осетровых. Использование ее в аквакультуре при существующих технологиях искусственного воспроизводства способствует более уравновешенному состоянию центральной нервной системы осетровых на ранних стадиях содержания, снижает отход и повышает качество рыбоводной продукции. Она может быть использована на рыбоводных заводах при подготовке производителей к искусственному нересту, при обработке икры и спермы в период оплодотворения, а также при обработке предличинок и молоди осетровых рыб. Преимущества предлагаемой композиции биологически активных препаратов: низкие рабочие дозы, требующие относительно небольших количеств препаратов; доступность.