штамм бактерий bacillus thuringiensis для получения биоинсектицида для борьбы с большой восковой молью

Классы МПК:C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
A01N63/00 Биоциды, репелленты или аттрактанты или регуляторы роста растений, содержащие микроорганизмы, вирусы, плесневые грибы, ферменты, сбраживающие материалы или вещества, полученные или экстрагированные из микроорганизмов или животных материалов
C12R1/07 Bacillus
Автор(ы):, ,
Патентообладатель(и):Государственное научное учреждение Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ДальЗНИВИ Россельхозакадемии) (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2011-03-18
публикация патента:

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано для получения биоинсектицида для борьбы с большой восковой молью. Штамм бактерий Bacillus thuringiensis 846-Bt выделен из природного источника и депонирован в коллекции ВНИИСХМ под номером RCAM 00045. Штамм бактерий Bacillus thuringiensis RCAM 00045 обеспечивает гибель 100% личинок большой восковой моли 4-6 возрастов. 1 табл., 1 пр.

Формула изобретения

Штамм Bacillus thuringiensis ВНИИСХМ RCAM 00045 для получения биоинсектицида для борьбы с большой восковой молью.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано для получения биоинсектицида для борьбы с личинками большой восковой моли.

Большая восковая моль распространена повсеместно. Личинки большой восковой моли разрушают соты и восковое сырье, повреждают пчелиный расплод, портят мед, пергу, рамки, стенки улья, утеплительный материал и могут распространять гнильцовые болезни. Интенсивное размножение моли вызывает слет пчел из улья.

Применение для борьбы с большой восковой молью химических инсектицидов довольно часто оказывает отрицательное влияние на качество продукции и экологическое благополучие. Отдельные химические вещества, содержащиеся в инсектицидах, могут накапливаться в сельскохозяйственной продукции и оказывать отрицательное воздействие на здоровье человека.

Альтернативным методом борьбы с большой восковой молью является использование биоинсектицидов, содержащих микроорганизмы и продукты их жизнедеятельности. Биоинсектициды избирательно токсичны для личинок чешуекрылых, безвредны для людей и животных, экологически безопасны, не ухудшают качество продуктов пчеловодства.

Известен штамм Bacillus thuringiensis P-2, являющийся основой биопрепарата «энтобактерин» для борьбы с большой восковой молью (БВМ), обладающий выраженной энтомопатогенной активностью в отношении личинок БВМ 2-го возраста (100%-ная гибель).

Однако для личинок БВМ 4-6 возрастов энтомопатогенная активность данного штамма значительно менее выражена, в первые сутки после заражения погибает 30% личинок, на вторые сутки - 16,1% и на третьи сутки - 0,5% (Дзю Е.А. Механизм развития инфекции, вызываемой бациллой турингиензис и влияние бактериальных метаболитов на организм личинок большой восковой моли: автореф. дис. штамм бактерий bacillus thuringiensis для получения биоинсектицида   для борьбы с большой восковой молью, патент № 2453595 канд. биол. наукштамм бактерий bacillus thuringiensis для получения биоинсектицида   для борьбы с большой восковой молью, патент № 2453595 / Новосиб. ГАУ. - Новосибирск, 2007 - С.7. Прототип).

Задачей изобретения является получение штамма, обладающего более высокой энтомопатогенной активностью в отношении личинок большой восковой моли 4-6 возрастов, чем известный штамм.

Технический результат заключается в том, что штамм Bacillus thuringiensis ВНИИСХМ RCAM 00045 обладает более высокой энтомопатогенной активностью против личинок большой восковой моли, в том числе и личинок более поздних стадий развития (4-6 возрастов).

Технический результат достигается новым штаммом Bacillus thuringiensis ВНИИСХМ RCAM 00045, который выделен из природных источников.

Штамм Bacillus thuringiensis ВНИИСХМ RCAM 00045, продуцирующий штамм бактерий bacillus thuringiensis для получения биоинсектицида   для борьбы с большой восковой молью, патент № 2453595 -эндотоксин, высокоактивен против личинок большой восковой моли как ранних, так и более старших возрастов (4-6). Штамм может быть использован для производства биоинсектицида, эффективного против личинок большой восковой моли. Энтомопатогенное действие бактерий Bacillus thuringiensis ВНИИСХМ RCAM 00045, продуцирующих белковый кристалл, содержащий штамм бактерий bacillus thuringiensis для получения биоинсектицида   для борьбы с большой восковой молью, патент № 2453595 -эндотоксин, обусловлено именно штамм бактерий bacillus thuringiensis для получения биоинсектицида   для борьбы с большой восковой молью, патент № 2453595 -эндотоксином, который при попадании в кишечник насекомого растворяется под действием протеолитических ферментов, вызывая их гибель.

Штамм депонирован в Ведомственной коллекции полезных микроорганизмов сельскохозяйственного назначения Россельхозакадемии ГНУ ВНИИСХМ РАСХН (г. Санкт-Петербург) под регистрационным номером RCAM 00045 (авторский № 846-Bt в коллекции ДальЗНИВИ).

Сущность изобретения: штамм бактерий Bacillus thuringiensis ВНИИСХМ RCAM 00045 выделен из природных источников. Штамм характеризуется повышенной энтомопатогенной активностью в отношении личинок большой восковой моли всех возрастов.

Заявляемый штамм имеет следующие характеристики.

Культурально-морфологические признаки.

Вегетативные клетки - крупные, грамположительные палочки (1,8-2,6 мкм), располагаются одиночно, попарно или короткими цепочками, споры в спорангии располагаются субтерминально, на противоположном конце спорангия находятся белковые включения эндотоксина. После лизиса спорангия от спор отделяются белковые включения в виде кристаллов лимоновидной формы (штамм бактерий bacillus thuringiensis для получения биоинсектицида   для борьбы с большой восковой молью, патент № 2453595 -эндотоксин). На плотной питательной среде культура образует округлые колонии белого цвета, с возрастом культуры появляется сероватый оттенок, поверхность зернистая, край ворсинчатый. На МПБ растет без помутнения среды, образует тонкую пленку и пристеночное кольцо.

Физиолого-биохимические свойства штамма.

Аэроб. Оптимальные условия культивирования - в аэробных условиях при температуре 28-30°С. Оптимальный состав питательной среды для культивирования - 1,5% питательный агар.

Образует лецитиназу, слабо гидролизует крахмал, не обладает протеолитической активностью. Из углеводов усваивает сахарозу, глюкозу, лактозу, мальтозу, галактозу, ксилозу, образует мочевину и ацетилметилкарбинол (слабо).

Биотипирование штамма проведено с использованием схемы идентификации Bacillus thuringiensis Barjac и Bonnefoi (1968), Определителя зоопатогенных микроорганизмов (М.А.Сидоров, Д.И.Скородумов, В.Б.Федотов, М.: Колос, 1995).

Хранение культуры.

Культура хорошо хранится в холодильнике при температуре 4-6°С, в лиофилизированном состоянии - в стеклянных ампулах.

Энтомопатогенные свойства.

Энтомопатогенные свойства штамма оценивали в отношении тест-насекомых (личинки большой восковой моли): 100%-ная гибель личинок лабораторной популяции большой восковой моли 2-6 возрастов in vitro наступает на 3-4 сутки после заражения.

Пример.

Для определения энтомопатогенной активности штамма Bacillus thuringiensis ВНИИСХМ RCAM 00045 культуру выращивали на скошенном МПА в аэробных условиях при температуре 30°С в течение 5 суток. Бактериальную массу смывали с поверхности агара стерильным физиологическим раствором (0,85% NaCl), плотность суспензии доводили до 1·108 спор/мл, 1 мл полученной суспензии вносили в корм (3,5 г), полученную массу скармливали личинкам большой восковой моли 2-6 возрастов. Личинок выращивали в термостате в стеклянных емкостях, в качестве корма использовали кусочки сотов. Для проведения опыта личинок рассаживали в чашки Петри по 10 штук, в чашку помещали корм с добавлением суспензии Bacillus thuringiensis ВНИИСХМ RCAM 00045, опыт проводили в 5 повторностях. В контрольную чашку Петри помещали личинок и корм с добавлением 1 мл стерильного физиологического раствора. Ежедневно учитывали гибель личинок в процентах от общего количества, бывших в эксперименте.

В таблице представлены результаты определения энтомопатогенной активности штамма Bacillus thuringiensis ВНИИСХМ RCAM 00045 в отношении личинок лабораторной популяции большой восковой моли в сравнении со штаммом Bacillus thuringiensis P-2.

Таблица
Энтомопатогенная активность штаммов Bacillus thuringiensis в отношении личинок большой восковой моли 4-6 возрастов
Добавка в корм Концентрация Гибель личинок по суткам, % Суммарная гибель личинок за 3 суток, %
12 3
ВНИИСХМ RCAM 000451·10 8 спор/мл 25,062,5 12,5100
Р-2 1·108 спор/мл 30,016,1 0,546,6
Физиологический раствор0,85% 0 00 0

Таким образом, представленные данные убедительно доказывают, что энтомопатогенная активность штамма Bacillus thuringiensis ВНИИСХМ RCAM 00045 существенно выше, чем у прототипа (штамм Bacillus thuringiensis Р-2), обеспечивает гибель 100% личинок большой восковой моли 4-6 возрастов.

Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них

способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам -  патент 2529711 (27.09.2014)
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
штамм lactobacillus fermentum, обладающий широким спектром антагонистической активности и пробиотический консорциум лактобактерий для изготовления бактериальных препаратов -  патент 2528862 (20.09.2014)
изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным -  патент 2528859 (20.09.2014)
способ получения миллерита с использованием сульфатредуцирующих бактерий -  патент 2528777 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
питательная среда для культивирования легионелл -  патент 2528101 (10.09.2014)

Класс A01N63/00 Биоциды, репелленты или аттрактанты или регуляторы роста растений, содержащие микроорганизмы, вирусы, плесневые грибы, ферменты, сбраживающие материалы или вещества, полученные или экстрагированные из микроорганизмов или животных материалов

кремнегуминовый регулятор роста растений и его применение для обработки растений -  патент 2529151 (27.09.2014)
штамм бактерий bacillus amyloliquefaciens, обладающий фунгицидным и бактерицидным действием, и биологический препарат на его основе для защиты зерновых растений от заболеваний, вызываемых фитопатогенными грибами -  патент 2528058 (10.09.2014)
ингибитор андийского вируса крапчатости картофеля -  патент 2527899 (10.09.2014)
планктонный штамм водорослей parachlorella nurekis и его применение для уничтожения цианобактерий -  патент 2527895 (10.09.2014)
способ содержания почвы виноградников -  патент 2527538 (10.09.2014)
родентицидный состав "изорат-6" (варианты) -  патент 2527064 (27.08.2014)
способ подготовки симбиотических бактерий рода xenorhabdus, выделенных из нематод вида steinernema feltiae protense, к хранению -  патент 2522811 (20.07.2014)
родентицидный состав "изорат-4" (варианты) -  патент 2518342 (10.06.2014)
антидотная композиция биологического происхождения для использования в растениеводстве -  патент 2518252 (10.06.2014)
сельскохозяйственные композиции с низкими нормами использования и способы применения -  патент 2516991 (27.05.2014)

Класс C12R1/07 Bacillus

изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным -  патент 2528859 (20.09.2014)
штамм бактерий bacillus amyloliquefaciens, обладающий фунгицидным и бактерицидным действием, и биологический препарат на его основе для защиты зерновых растений от заболеваний, вызываемых фитопатогенными грибами -  патент 2528058 (10.09.2014)
способ очистки мерзлотных почв и водной среды от нефти и нефтепродуктов спорообразующими бактериями bacillus vallismortis -  патент 2525930 (20.08.2014)
способ дифференциации возбудителя сибирской язвы от других близкородственных видов рода bacillus на основе определения различий в структуре хромосомных генов -  патент 2514663 (27.04.2014)
штамм бактерий bacillus vallismortis - деструктор нефти и нефтепродуктов -  патент 2513702 (20.04.2014)
способ очистки мерзлотных почв и водной среды спорообразующими бактериями bacillus atrophaeus вкпм в-10592 -  патент 2513699 (20.04.2014)
ассоциация штаммов бактерий-нефтедеструкторов и способ ремедиации нефтезагрязненных объектов -  патент 2509150 (10.03.2014)
штамм bacillus amyloliquefaciens вкм в-2714d, обладающий выраженным антагонизмом по отношению к salmonella typhi, staphylococcus aureus, listeria monocytogenes и резистентностью к тетрациклину и триметоприму -  патент 2509148 (10.03.2014)
способ получения протективного антигена и белка s-слоя ea1 из аспорогенного рекомбинантного штамма b. anthracis 55 тпа-1spo- -  патент 2492241 (10.09.2013)
способ получения сыворотки для диагностики сибирской язвы и диагностический набор -  патент 2478647 (10.04.2013)
Наверх