способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений

Формула изобретения

Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений у экспериментального лабораторного животного с экспериментальной ишемией конечности, отличающийся тем, что в эксперименте лабораторному животному ежедневно, в течение 28 дней после моделирования ишемии, два раза в сутки, внутрижелудочно вводят смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200 в дозе 4,5 мл/кг (9 мл/кг/сут).

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии конечности.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции ишемии конечности (RU 2302239, опубл. 10.07.2007), который заключается в том, что в эксперименте лабораторному животному с экспериментальной ишемией конечности вводят внутрибрюшинно L-аргинин однократно с 7-го по 28-й день после моделирования ишемии в дозе от 30 до 200 мг/кг.

Недостатком известного решения является то, что прием L-аргинина вызывает побочные эффекты, а именно эмбриотоксичность, тератогенность и мутагенность.

Задачей изобретения является разработка эффективного способа коррекции ишемии конечности, позволяющего исключить наличие побочных эффектов.

Поставленная задача достигается тем, что в эксперименте лабораторному животному с экспериментальной ишемией конечности коррекцию ишемии конечности проводят путем ежедневного, в течение 28 дней после моделирования ишемии, введения внутрижелудочно смеси растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200, два раза в сутки в дозе 4,5 мл/кг (9 мл/кг/сут).

Основным преимуществом предлагаемого способа является отсутствие эмбриотоксичности, тератогенности и мутагенности фармакологического агента, так как он относится к новому классу препаратов сверхмалых доз (СМД) антител.

Междисциплинарные исследования, проводимые в течение более чем 6 лет в ряде научно-исследовательских и клинических учреждений России, позволили выявить основные механизмы, лежащие в основе биологических и клинических эффектов сверхмалых доз (СМД) антител, вводимых перорально. Потенцированные антитела к фактору роста эндотелия VEGF -С12, С30, С200 (действующее вещество в составе препарата разведено в 100¹², 100³⁰ и 100 ²⁰⁰ раз соответственно) проявляют противоишемическое действие вследствие активации ими по принципу «обратной связи» выработки VEGF. Данный фактор индуцирует экспрессию эндотелиальной NO-синтазы и образование оксида азота II (NO), который в свою очередь является регулятором функции эндотелия и медиатором неоваскулогенеза. Оксид азота II диффундирует в гладкомышечные клетки сосудов, что приводит к их расслаблению. Доклинические исследования подтвердили отсутствие эмбриотоксичности, тератогенности и мутагенности у препаратов сверхмалых доз антител (Эпштейн О.И. Фармакология сверхмалых доз антител к эндогенным регуляторам функций: дис.... д-ра мед. наук / О.И.Эпштейн. - Томск, 2003. - С.352).

Способ осуществляется следующим образом.

Опыты проводят на белых крысах линии Wistar массой 250-300 г. Моделирование ишемии конечности проводили под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) путем удаления участка магистрального сосуда, включающего бедренную артерию, подколенную артерию и начальные отделы артерии голени.

Оценка микроциркуляции в мышцах голени животного проводится при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-100 и датчика TSD-144 (США). Для этого под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) иссекают участок кожи в переднебоковом участке области голени. Запись уровня микроциркуляции осуществляют в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой).

Регистрация уровня микроциркуляции проводится в группах животных: интактные; ложнооперированные; с моделированием ишемии конечности (контроль); с коррекцией ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200.

Смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200 ежедневно вводили в дозе 4,5 мл/кг два раза в сутки в течение 28 дней после моделирования ишемии.

При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величина стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ СПОСОБА

Уровень микроциркуляции в правой и левой мышцах голени интактных животных не отличался друг от друга и составлял 525,7±9,8 п.е. (перфузионных единиц). Экспериментальные животные были разделены на следующие группы:

1. интактные (n=10);

2. ложнооперированные (n=10);

3. с моделированием ишемии мышцы голени (n=10);

4. с моделированием ишемии мышцы голени+смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200 (n=10).

Моделирование ишемии мышцы голени у крыс осуществляли под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) путем удаления участка магистрального сосуда, включающего бедренную артерию, подколенную артерию и начальные отделы артерий голени. Коррекцию ишемии конечности производили внутрижелудочным введением смеси растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200 в дозе 4,5 мл/кг два раза в сутки (9 мл/кг/сут) ежедневно с 1-го по 28-й день после моделирования ишемии.

Оценку микроциркуляции в мышцах голени животного проводили при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-100 и датчика TSD-144 (США) на 28 сутки. Для этого под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) иссекали участок кожи в переднебоковой области голени. Запись уровня микроциркуляции осуществляют в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой). Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 30 секунд в каждой точке. Из полученных пяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в мышцах голени у данного животного. Из 10 полученных значений выводили среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной группе животных на данном сроке исследования.

Результаты оценки уровня микроциркуляции у животных на 28 сутки при моделировании ишемии конечности и ее коррекции смесью растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200 в дозе 9 мл/кг/сут представлены в таблице (табл.1).

Таблица 1
Результаты оценки уровня микроциркуляции в мышцах голени на 28 сутки (M±m), п.е. (перфузионные единицы)
Интактные (n=10)	525,7±9,8
Ложнооперированные (n=10)	531,8±12,8
Ишемия конечности (n=10)	361,3±8,7*
Ишемия конечности+смесь р-ров гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF -С12, С30, С200(n=10)	486,1±18,8**
Примечание: * - p<0,05 в сравнении с интактной группой животных; ** - p<0,05 в сравнении с группой животных с ишемией конечности

Из таблицы видно, что уровень микроциркуляции после операции моделирования ишемии задней конечности составил на 28 сутки 361,3±8,7 п.е., что достоверно ниже значения в группе интактных (p<0,001) и ложнооперированных животных (p<0,001).

На фоне коррекции патологии смесью растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200 уровень микроциркуляции достоверно возрастает до 486,1±18,8 п.е. (p<0,05).

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать эффективность фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200, за счет стимуляции неоваскулогенеза. Кроме того, заявленный способ фармакологической коррекции ишемии конечности позволяет исключить побочные эффекты, так как применяемый фармакологический агент относится к классу препаратов сверхмалых доз антител.