способ диагностики атопического дерматита у детей

Формула изобретения

Способ диагностики атопического дерматита у детей, включающий забор крови и исследование эритроцитов, отличающийся тем, что кровь в количестве трех миллилитров забирают утром из вены ребенка в смоченные гепарином с фосфатным буфером (20 ед. на 1 мл крови) пластиковые пробирки, перемешивают и пробирки немедленно помещают в контейнер с тающим льдом, эритроциты осаждают на рефрижераторной центрифуге с вертикальным ротором при достижении 3000 g в течение 5 мин, далее плазму и эритроциты удаляют путем отсасывания, эритроциты дважды промывают трехкратным объемом холодной среды промывки (температура тающего льда), 0,25 мл упакованных эритроцитов помещают в 1,25 мл в следующую среду при температуре 37°С и прединкубируют 3 ч при той же температуре с периодическим встряхиванием автоматически каждые 15 мин по 15 с, суспензию осаждают и для удаления наружного лития эритроциты промывают 4 раза 4-кратным объемом среды промывки; в этот период происходит выход лития в натриевую и безнатриевую (магниевую) среды за счет обмена лития на натрий и магний, осуществляемого благодаря работе белка-переносчика в условиях ингибирования натрий-калиевой АТФ-азы уабином, упакованные эритроциты по 0,1 мл переносят в среду 1 мл, свободную от натрия, фактически это среда промывки, содержащая изоосмотическую смесь MgCl₂ и сахарозы, но с добавлением 0,1 мМ уабаина и в среду, богатую натрием, содержащая (мМ): 150 - NaCl; 10 - глюкоза; 10 - HEPES-трис (рН 7,4); 0,1 уабаин, инкубацию продолжают 60 мин при температуре 37°С с периодическим встряхиванием, на 60 мин инкубации отбирают 0,45 мл суспензии эритроцитов из обеих сред, производят центрифугирование в течение двух минут, надосадочную жидкость (супернатант) в количестве 0,3 мл осторожно набирают и разбавляют в 3 раза тридистилированной водой, измерение содержания лития в магниевой и натриевой средах проводят методом атомной абсорбционной спектрофотометрии в режиме эмиссии на спектрофотометре СА-455, калибровочные растворы готовят на средах инкубации с учетом разведения пробы, используют следующие параметры аппаратуры: длина волны 670,6 нм, состав пламени - ацетилен-воздух, стехиометрия пламени - окисляющая, чувствительность 10-7 моль/л; программа измерения концентрации элемента в исследуемом растворе в эмиссионном режиме состоит в сравнении интенсивности светового потока эталонного раствора известной концентрации с интенсивностью потока исследуемого раствора, информация со спектрофотометра поступает на специализированное вычислительное устройство «Электроника ДЗ-28», которое вычисляет концентрацию исследуемого элемента, а результаты выдает на цифровое табло, скорость натрий-литиевого противотранспорта (V) в микромолях лития на 1 л клеток в час определяют как разность между концентрацией лития в среде, богатой натрием, и в среде, свободной от натрия через 60 мин инкубации по формуле V=(ANa-AMg)·K, где К(коэффициент)=33, ANa - 468 mkM Li/л.кл./ч; AMg - 210 mkM Li/л.кл./ч, при этом при величине скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита, превышающей 258 mkM Li/л.кл./ч диагностируют атопический дерматит у детей.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, конкретно к дерматологии, и касается способа диагностики атопического дерматита у детей.

Структурно-функциональной единицей живого организма является клетка, основу функционирования которой определяет клеточная мембрана. Клеточная мембрана обеспечивает избирательное проникновение в клетку и из нее молекул и ионов, необходимых для выполнения специфических функций клетки, поддерживает трансмембранную разницу электрического потенциала, специфику межклеточных контактов. Перенос ионов через клеточную мембрану с помощью переносчиков белковой структуры, включающий активный транспорт и облегченную диффузию, является неотъемлемой частью жизнедеятельности всех клеток организма человека в норме и при патологии. Изменение ионного транспорта связано с патологией атопического дерматита у детей. Одной из ион-транспортных систем является натрий-литиевый противотранспорт (НЛПТ) через мембрану эритроцита.

Поиск патентной и научной литературы показал, что в настоящее время ближайших аналогов этому способу диагностики атопического дерматита у детей не имеется.

Известен способ определения гиперчувствительности фагоцитов к гистамину у больных атопическим дерматитом по заявке № 94036342. Однако данный способ как аналог отдаленный, близких обнаружить не удалось.

Техническим результатом является создание способа, позволяющего диагностировать атопический дерматит у детей по скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцитов.

Проницаемость мембраны эритроцитов для натрия оценивают по максимальной скорости натрий-литиевого противотранспорта в эритроцитах.

Способ диагностики осуществляется следующим образом.

Кровь в количестве трех миллилитров забирают утром из вены ребенка в смоченные гепарином с фосфатным буфером (20 ЕД на 1 мл крови) пластиковые пробирки. Содержимое перемешивают и пробирки немедленно помещают в контейнер с тающим льдом. Эритроциты осаждают на рефрижераторной центрифуге с вертикальным ротором при достижении 3000g в течение 5 минут, далее плазму и эритроциты удаляют путем отсасывания. Эритроциты дважды промывают трехкратным объемом холодной среды промывки (температура тающего льда), 0,25 мл упакованных эритроцитов помещают в 1,25 мл в следующую среду при 37°С и предынкубируют 3 часа при той же температуре с периодическим встряхиванием автоматически каждые 15 минут по 15 секунд, суспензию осаждают и для удаления наружного лития эритроциты промывают 4 раза 4-кратным объемом среды промывки; в этот период происходит выход лития в натриевую и безнатриевую (магниевую) среды за счет обмена лития на натрий и магний, осуществляемого благодаря работе белка-переносчика в условиях ингибирования натрий-калиевой АТФ-азы уабином. Упакованные эритроциты по 0,1 мл переносят в среду 1 мл, свободную от натрия, фактически это среда промывки, содержащая изоосмотическую смесь MgCl₂ и сахарозы, но с добавлением 0,1 мМ уабаина и в среду, богатую натрием, содержащая (мМ): 150 - NaCl; 10 - глюкоза; 10 - HEPES-трис (рН 7,4); 0,1 уабаин, инкубацию продолжают 60 минут при температуре 37 градусов Цельсия с периодическим встряхиванием. На 60 минуте инкубации отбирают 0,45 мл суспензии эритроцитов из обеих сред, производят центрифугирование в течение двух минут, надосадочную жидкость (супернатант) в количестве 0,3 мл осторожно набирают и разбавляют в 3 раза тридистилированной водой. Измерение содержания лития в магниевой и натриевой средах проводят методом атомной абсорбционной спектрофотометрии в режиме эмиссии на спектрофотометре СА-455. Калибровочные растворы готовят на средах инкубации с учетом разведения пробы. Используют следующие параметры аппаратуры: длина волны 670,6 нм, состав пламени - ацетилен-воздух, стехиометрия пламени - окисляющая, чувствительность 10-7 моль/литр. Программа измерения концентрации элемента в исследуемом растворе в эмиссионном режиме состоит в сравнении интенсивности светового потока эталонного раствора известной концентрации с интенсивностью потока исследуемого раствора. Информация со спектрофотометра поступает на специализированное вычислительное устройство «Электроника ДЗ-28», которое вычисляет концентрацию исследуемого элемента, а результаты выдает на цифровое табло. Скорость натрий-литиевого противотранспорта (V) в микромолях лития на 1 литр клеток в час определяют как разность между концентрацией лития в среде, богатой натрием, и в среде, свободной от натрия, через 60 минут инкубации по формуле V=(ANa-AMg)*К, где К (коэффициент) = 33. И при значении скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита, превышающем 258 mkM Li/л кл./час, диагностируют атопический дерматит у детей.

Клинические примеры

Пример 1. Больной Н. 13 лет. Обратился с жалобами на высыпания на коже. Диагноз при поступлении в стационар - псевдоаллергическая (неспецифическая) форма аллергии, стадия обострения. Скорость натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита на второй день госпитализации составила 347 микромоль лития на литр клеток в час. Через 97 дней, т.е. в условиях полной смены популяции эритроцитов, скорость натрий-литиевого противотранспорта составила 344 микромоль лития на литр клеток в час. Клинический диагноз - атопический дерматит.

Пример 2. Больной Т. 12 лет. Диагноз при поступлении в стационар - неинфекционно-аллергическая форма дерматита, стадия обострения. Скорость натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцита на второй день госпитализации составила 361 микромоль лития на литр клеток в час. Через 102 дня, т.е. в условиях полной смены популяции эритроцитов, скорость натрий-литиевого противотранспорта составила 363 микромоль лития на литр клеток в час. Диагноз - атопический дерматит.

Таким образом, предлагаемый способ увеличивает эффективность диагностики атонического дерматита путем повышения точности и объективности диагностики по скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритроцитов.

Способ апробирован в стационарном отделении клиники КГМУ и может найти широкое клиническое применение в медицинской практике и эффективно использоваться в дерматологии.

Источники информации

1. Мачарадзе Д.Ш. Роль пищевой аллергии при атопическом дерматите у детей. Педиатрия. № 4, 2004.

2. Заявка № 94036342.

3. Патент 2282857.

4. Патент 2239837.