способ диагностики лямблиозной инвазии при хроническом дуодените у детей

Формула изобретения

Способ диагностики лямблиозной инвазии при хроническом дуодените у детей, включающий проведение фиброгастродуоденоскопии с взятием биоматериала путем осуществления биопсии слизистой двенадцатиперстной кишки, выполнение морфологического исследования биоптата, отличающийся тем, что при наличии в биоптате эозинофильных лейкоцитов и ретенционных кист пилорических желез диагностируют лямблиозную инвазию на фоне хронического дуоденита, при их отсутствии - хронический дуоденит без сопутствия лямблиозной инвазии.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к практической медицине, клинико-лабораторной диагностике и экспериментальной медицине. Способ предназначен для диагностики лямблиозной инвазии на фоне хронического дуоденита у детей.

Лямблиоз является актуальной проблемой как у детей, так и у взрослых. В Российской Федерации ежегодно регистрируется более 130 тысяч случаев лямблиоза, при этом зараженность детей в два раза превышает соответствующие показатели взрослых. Восприимчивость детей к лямблиям обусловлена высокой интенсивностью пристеночного пищеварения, что является важным условием паразитирования простейших, отсутствием навыков личной и общественной гигиены, а также преобладанием в рационе углеводов. В последние годы накапливаются данные, позволяющие отнести лямблионосительство к патологическому процессу, поскольку при хронических заболеваниях пищеварительного тракта инвазия регистрируется в 65-72% случаев. При этом диагностика патологии затруднена в связи с отсутствием патогномоничной клинической симптоматики: лямблиоз либо наслаивается на другие заболевания, либо его проявления объясняются разными причинами: избыточным ростом кишечной микрофлоры, мальабсорбцией, развитием аллергических заболеваний и др.

Для идентификации лямблиоза используются как неинвазивные - выявление цист в пробах фекалий, иммуноферментный анализ (ИФА) копрофильтрата на наличие лямблиозного антигена, так и инвазивные методы - обнаружение лямблий в дуоденальном содержимом, ИФА крови на антитела к лямблиям, микроскопия биоптатов тонкой кишки. Каждый из методов в силу тех или иных причин имеет ограниченную диагностическую ценность.

Максимальные клинические проявления хронического дуоденита у детей встречаются при сочетании с лямблиозной инвазией. Установлено, что хронический дуоденит, сочетанный с лямблиозной инвазией, характеризуется формированием выраженного активного воспаления.

Наиболее близким аналогом к заявляемому изобретению является способ диагностики лямблиозной инвазии при хроническом дуодените у детей. При осуществлении гистологического исследования биоптатов слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки больных с хроническим дуоденитом диагностируют лямблиозную инвазию при: окраске гематоксилином и эозином в виде попарно расположенных «голых» светлых ядер с крупными темными ядрышками между ворсинками тонкой кишки, наличии оксифильного «мусора» на щеточной кайме эпителия, обнаружении в устьях бокаловидных клеток слабоокрашенных мелких объектов, не дающих реакции на слизь, участков десквамации эпителия с одновременным преобладанием в инфильтрате эозинофилов и тучных клеток [Кротова Т.Ю. Клинико-эндоскопическая и морфологическая характеристика хронических гастродуоденитов у детей при сочетанной и изолированной геликобактерной инфекции и лямблиозной инвазии. Автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. 2008. Москва].

Недостатком данного способа является не точная характеристика так называемого оксифильного «мусора» на щеточной кайме эпителия, который другими исследователями может быть принят за артефакт, образующийся в результате технического приготовления препаратов.

Задачей заявляемого изобретения является повышение объективности способа диагностики лямблиозной инвазии на фоне хронического дуоденита у детей.

Сущность заявляемого изобретения заключается в том, что в способе диагностики лямблиозной инвазии при хроническом дуодените у детей, включающем проведение фиброгастродуоденоскопии с взятием биоматериала путем осуществления биопсии слизистой двенадцатиперстной кишки, выполнение морфологического исследования полученного биоптата, при наличии в последнем эозинофильных лейкоцитов и ретенционных кист пилорических желез диагностируют лямблиозную инвазию на фоне хронического дуоденита, при их отсутствии - хронический дуоденит без сопутствия лямблиозной инвазии.

Технический результат заявляемого изобретения заключается в решении поставленной ранее задачи. Сочетание выбранных для проведения диагностики параметров, а именно выявление ретенционных кист и воспалительной инфильтрации с обязательным присутствием эозинофильных лейкоцитов, которые по полученным результатам проведенных авторами при разработке заявляемого способа исследований являются маркерами наличия лямблиозной инвазии, позволяет повысить объективность способа и до настоящего времени не было известно. Определение данных параметров осуществляют при выполнении фиброгастродуоденоскопии, которая является стандартным проводимым при хроническом дуодените обследованием, то есть заявляемый способ не требует проведения каких-либо дополнительных исследований.

Способ техничен и технологичен с первой манипуляции до практически последней операции, - обработки полученных данных, поскольку все манипуляции: забор биоптата, выбор и приготовление исследуемого материала, порядок действий в заявляемом способе - признаки технически осуществляемого действия.

Способ диагностики лямблиозной инвазии при хроническом дуодените у детей осуществляют следующим образом.

Больным с диагнозом - хронический дуоденит проводят фиброгастродуоденоскопию с прицельной биопсией слизистой двенадцатиперстной кишки. Осуществляют морфологическое, а именно гистологическое, исследование биоптатов. Для этого сначала биоптат фиксируют в растворе 4% нейтрального формалина в течение суток с последующим промыванием под проточной водой в течение 1 часа. Затем биоптат проводят по спиртам восходящей крепости: 70% этиловый спирт в течение 10 минут, 80% этиловый спирт в течение 10 минут, 95% 1 этиловый спирт в течение 10 минут, 95% 2 этиловый спирт в течение 10 минут, 95% 3 этиловый спирт в течение 15 минут, 95% 4 этиловый спирт в течение 10 минут, 95% 5 этиловый спирт в течение 15 минут и далее в следующей последовательности - в смеси спирт + хлороформ в течение 10 минут, в хлороформе 1 в течение 10 минут, в хлороформе 2 в течение 15 минут, в «каше», а именно хлороформ 1 часть + парафин 1 часть, в течение 15 минут, в парафине 1 в течение 10 минут, в парафине 2 в течение 15 минут. Далее проводят заливку исследуемого материала - биоптата в парафин и приготавливают парафиновые блоки и срезы. Затем проводят депарафинизацию срезов в ксилоле в течение 10-15 минут с последующим окрашиванием срезов гематоксилином в течение 10 минут. Осуществляют дифференцировку ядер в соляно-кислом спирте в течение 1 минуты. Проводят промывку полученных срезов в проточной воде в течение 15-20 минут. Затем окрашивают срезы в эозине в течение 5 минут и просветляют их в ксилоле в течение 10-15 минут. Срезы заключают в канадский бальзам и исследуют в светооптическом микроскопе с объективами 10 и 40 (увеличение в 100 и 400). При наличии в исследуемом материале - биоптате эозинофильных лейкоцитов и ретенционных кист пилорических желез диагностируют лямблиозную инвазию на фоне хронического дуоденита, при их отсутствии - хронический дуоденит без сопутствия лямблиозной инвазии.

Пример.

Авторами заявляемого изобретения были обследованы в соответствии с вышеописанной методикой 100 больных с хроническим дуоденитом в возрасте от 3-х до 15-ти лет. У 50 больных в биоптате не были обнаружены ретенционные кисты и эозинофильные лейкоциты. Данным больным был поставлен диагноз: хронический дуоденит без сопутствия лямблиозной инвазии. У остальных 50 больных была отмечена умеренная лимфоцитарно-плазмоцитарная инфильтрация с наличием эозинофильных лейкоцитов до 10 в п/зр и выявлены единичные или множественные ретенционные кисты. У 35 из них отмечали укорочение высоты ворсин. По полученным данным 35 больным был поставлен диагноз: лямблиозная инвазия на фоне хронического субартрофического дуоденита 0-1 степени активности; 15 больным - лямблиозная инвазия на фоне хронического дуоденита 0-1 степени активности.

Всем больным провели исследование кала на выявление цист лямблий. Их обнаружение отмечали у 50 больных с поставленным диагнозом: лямблиозная инвазия. Вывод о наличии данного заболевания подтвердился.

Вышеизложенное свидетельствует об адекватности, достаточной чувствительности и пользе заявляемого способа для объективной диагностики наличия лямблиозной инвазии на фоне хронического дуоденита у детей. Разработанная технология по заявляемому способу расширяет арсенал средств диагностики данного заболевания.