способ определения новокаина, лидокаина в моче
Классы МПК: | G01N33/493 мочи |
Автор(ы): | Бобрешова Ольга Владимировна (RU), Полуместная Ксения Андреевна (RU), Паршина Анна Валерьевна (RU), Янкина Кристина Юрьевна (RU), Тимофеев Сергей Васильевич (RU), Попов Валерий Иванович (RU), Попова Татьяна Николаевна (RU), Семенихина Анастасия Владимировна (RU) |
Патентообладатель(и): | ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ "ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ" (ГОУ ВПО ВГУ) (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2011-05-03 публикация патента:
10.10.2012 |
Изобретение относится к области аналитической химии и клинической диагностики. Способ включает последовательное вымораживание при температуре 0÷4°С в течение часа, фильтрование через стекловолокно и центрифугирование при 3000 g в течение 15 минут образца мочи, полученной от пациента, разбавление водой в объемном соотношении 1:25, измерение в полученном тест-растворе мочи потенциала относительно электрода сравнения и определение с помощью градуировочного графика концентрации новокаина и лидокаина. Достигается ускорение и упрощение, а также повышение надежности и безопасности анализа. 1 пр., 3 ил.
Формула изобретения
Способ количественного определения новокаина и лидокаина в моче, включающий последовательное вымораживание при температуре 0÷-4°С в течение часа, фильтрование через стекловолокно и центрифугирование при 3000 g в течение 15 мин образца мочи, полученной от пациента, разбавление полученного супернатанта водой в объемном соотношении 1:25, измерение в полученном тест-растворе мочи потенциала относительно электрода сравнения и определение с помощью градуировочного графика концентрации новокаина и лидокаина.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к области аналитической химии и клинической диагностики. Оно может быть использовано для определения местных анестетиков (новокаина и лидокаина) в моче пациентов при назначении данных препаратов.
Известен способ количественного определения наркотических и лекарственных веществ в экстрактах мочи (Дикунец М.А., Апполонова С.А., Родченков Г.М. // ЖАХ. 2009. Т.64, № 8. С.854-864; патент РФ № 2384846, G01N 33/493, 2010; заявка РФ № 2008122386, G01N 3/50, 2009). Способ включает экстракцию наркотических и лекарственных веществ из физиологической жидкости, упаривание органического экстракта в токе азота, растворение сухого остатка в метаноле и анализ полученного раствора методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС). Недостатками данного способа являются использование токсичных органических растворителей; длительность и сложность анализа; дорогостоящая приборная база.
Заявляемое изобретение предназначено для прямого количественного in situ определения новокаина и лидокаина в моче.
Технический результат - снижение времени анализа; простота анализа; автоматизация анализа; возможность in situ анализа; исключение из анализа токсичных реактивов.
Технический результат достигается тем, что способ определения новокаина и лидокаина в моче включает последовательное вымораживание при температуре 0÷-4°С в течение часа, фильтрование через стекловолокно и центрифугирование при 3000 g в течение 15 минут образца мочи, полученного от пациента, разбавление полученного супернатанта водой в объемном соотношении 1:25, измерение с помощью сенсора в полученном тест-растворе мочи потенциала относительно электрода сравнения и определение по градуировочному графику концентрации новокаина и лидокаина в моче.
На фигуре 1 представлена блок-схема способа определения новокаина и лидокаина в моче; на фигуре 2 - фактические и определенные значения концентраций новокаина (NovHCl) в моче; на фигуре 3 - метрологические характеристики способа определения NovHCl в моче.
Способ может быть реализован с помощью следующей установки.
Конструкция установки включает биомедицинский холодильник с температурным режимом +5 -5°С, колонку для фильтрования, заполненную стекловолокном, центрифугу с ускорением 2000-4000 g, электрохимическую ячейку, состоящую из ПД-сенсора 1, хлоридсеребряного электрода сравнения 2, закрепленных в штативе 3, емкости с тест-раствором 4, высокоомного электронного вольтметра 5, блока управления 6, причем ПД-сенсор 1 и электрод 2 погружены в емкость 4, в которую наливается тест-раствор, и через вольтметр 5 подключены к блоку управления 6. Конструкция ПД-сенсора 1 включает два пластиковых корпуса 7 и 8, в одном из которых установлен электрод сравнения 9, в другом установлена перфторированная сульфокатионитовая полимерная (ПСП) трубка, или мембрана, или стержень 10 в калиевой форме так, что один их конец размещен в корпусе 7, а другой выступает за пределы корпуса 8. Корпус 7 заполнен 1М раствором КС1 (патент РФ № 2376591). Блок управления 6 включает персональный компьютер с программным обеспечением для автоматического расчета концентрации новокаина и лидокаина в моче по градуировочному графику.
Способ реализуется следующим образом. Образец мочи последовательно вымораживается в течение 1-го часа при температуре 0÷-4°С (для кристаллизации и выпадения в осадок избытка неорганических солей: хлоридов и сульфатов калия, натрия, аммония), фильтруется через стекловолокно, центрифугируется в течение 15 минут при 3000 g (для снижения концентрации органических метаболитов (белков, сахаров, «кетоновых тел»)). Полученный супернатант разбавляется в мерной колбе водой в объемном соотношении 1:25. Аликвота 5 мл полученного тест-раствора мочи помещается в емкость 4. ПД-сенсор 1 и хлоридсеребряный электрод сравнения 2 опускаются в емкость с тест-раствором мочи 4 и с помощью высокоомного вольтметра 5 определяется ЭДС электрохимической цепи. Значения ЭДС фиксируются через 2-5 минут. Вольтметр 5 подключен к блоку управления 6, включающему персональный компьютер с программным обеспечением, для автоматического расчета концентрации новокаина и лидокаина в моче по градуировочному графику зависимости ЭДС от концентрации новокаина и лидокаина в моче. Рассчитанное значение концентрации выводится на экране компьютера.
ПРИМЕР
Образцы мочи (10 мл), полученные от пациентов, принимающих препараты «Новокаин», последовательно подвергли вымораживанию в течение 1-го часа при температуре 0÷-4°С, фильтрованию через стекловолокно, центрифугированию в течение 15 минут при 3000 g. Полученный супернатант разбавляли в мерной колбе водой в объемном соотношении 1:25. Аликвота 5 мл полученного тест-раствора мочи помещалась в емкость 4. ПД-сенсор 1 и хлоридсеребряный электрод сравнения 2 опускали в емкость с тест-раствором мочи 4 и с помощью высокоомного вольтметра 5 определяли ЭДС электрохимической цепи. Значения ЭДС фиксировали через 2-5 минут. Вольтметр 5 подключали к блоку управления 6, включающему персональный компьютер с программным обеспечением, для автоматического расчета концентрации новокаина в моче по градуировочному графику зависимости ЭДС от концентрации новокаина и лидокаина в моче (градуировочная зависимость является линейной в диапазоне концентраций новокаина 5·10-5 -7,3·10-2 М с достоверностью аппроксимации 0,98 и позволяет фиксировать изменение концентрации новокаина гидрохлорида на 3·10-5 М при изменении отклика ПД-сенсора на 10 мВ). Рассчитанное значение концентрации выводилось на экране компьютера.
Предел обнаружения NovHCl в моче с помощью данного способа составил 5·10-5 М. Проверку правильности определения NovHCl в моче проводили способом «введено-найдено». Относительная погрешность определения NovHCl в моче не превышала 7% (фигура 2). Основные метрологические характеристики способа определения NovHCl в моче представлены в таблице на фигуре 3.