средство, обладающее нейропротективной, антиамнестической, противогипоксической, антиоксидантной и противоишемической активностью, и способ профилактики и лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения

Формула изобретения

1. Фармацевтическая композиция в твердом дозированном виде, обладающая нейропротективной, антиамнестической, противогипоксической, антиоксидантной и противоишемической активностью в сочетании с противорвотной активностью, включающая в качестве активных компонентов метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин и этилметилгидроксипиридин сукцинат, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-
пролил-глицил-пролин	0,02-2,00
этилметилгидроксипиридин сукцинат	98,00-99,98

2. Применение фармацевтической композиции по п.1 для изготовления средства, обладающего нейропротективной, антиамнестической, противогипоксической, антиоксидантной и противоишемической активностью в сочетании с противорвотной активностью для профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения.

3. Средство, обладающее нейропротективной, антиамнестической, противогипоксической, антиоксидантной и противоишемической активностью в сочетании с противорвотной активностью для профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, содержащее фармацевтическую композицию по п.1.

4. Средство по п.3, отличающееся тем, что оно выполнено в форме, приемлемой для перорального применения.

5. Средство по п.4, отличающееся тем, что оно выполнено в виде таблеток.

6. Средство по п.4, отличающееся тем, что оно выполнено в виде капсул.

7. Способ профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, характеризующийся тем, что включает введение пациенту фармацевтически эффективного количества средства по п.3.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что пациенту перорально вводят средство по п.3 в дозе 100-210 мг 1-2 раза в сутки с постепенным повышением дозы до получения терапевтического эффекта в течение 2-5 недель.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, а именно к средствам, обладающим нейропротективной, антиамнестической, противогипоксической-антиоксидантной и противоишемической активностью, предназначенным, в частности, для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе мозгового инсульта и его последствий.

Одной из актуальных проблем современной неврологии является разработка средств защиты центральной нервной системы за счет активизации различных метаболических процессов мозга. Актуальность разработки новых лекарственных средств, обладающих нейропротективной активностью, определяется высокой смертностью от инсульта.

Известен препарат этилметилгидроксипиридин сукцинат, обладающий нейропротективной активностью [2].

Известен гептапептид метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин, который обладает аналогичной активностью [1].

В настоящее время этилметилгидроксипиридин сукцинат и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин широко применяют в различных областях медицины. Так, например, оба препарата используют в неврологии при острой и хронической недостаточности мозгового кровообращения и связанных с ней заболеваний, в том числе при мозговом инсульте и его последствиях [1-4]. Однако в клинике эти препараты не всегда эффективны, имеют побочные эффекты.

Техническим результатом изобретения является расширение арсенала лекарственных средств и создание нового лекарственного средства, обладающего наряду с высокой нейропротекторной, антиамнестической, противогипоксической, антиоксидантной и противоишемической активностью и противорвотной активностью, и способа профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения с минимальными побочными эффектами. Совместное использование препаратов позволяет сократить количество принимаемого средства при профилактике и лечении, поскольку при совместном использовании проявляется более высокая активность средства, не характерная и более высокая, чем у отдельных веществ.

Указанный технический результат достигается за счет того, что фармацевтическая композиция в твердом дозированном виде, обладающая нейропротективной, антиамнестической, противогипоксической, антиоксидантной и противоишемической активностью в сочетании с противорвотной активностью, включает в качестве активных компонентов метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин и этилметил-гидроксипиридин сукцинат, в мас.%:

метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-

пролил-глицил-пролин	0,02-2,00
этилметилгидроксипиридин сукцинат	98,00-99,98

Технический результат достигается также применением указанной фармацевтической композиции для изготовления средства, обладающего нейропротективной, антиамнестической, противогипоксической, антиоксидантной и противоишемической активностью в сочетании с противорвотной активностью для профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения.

Технический результат достигается также средством, обладающим нейропротективной, антиамнестической, противогипоксической, антиоксидантной и противоишемической активностью в сочетании с противорвотной активностью для профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, содержащим указанную фармацевтическую композицию.

Кроме того, средство может быть выполнено в форме, приемлемой для перорального применения.

Кроме того, средство может быть выполнено в виде таблеток.

Кроме того, средство может быть выполнено в виде капсул. Технический результат достигается также в способе профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, который включает введение пациенту фармацевтически эффективного количества средства, содержащего указанную фармацевтическую композицию.

Кроме того, пациенту перорально вводят средство, содержащее указанную фармацевтическую композицию в дозе 100-210 мг 1-2 раза в сутки с постепенным повышением дозы до получения терапевтического эффекта в течение 2-5 недель.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1

В реактор, снабженный якорной мешалкой, наливают 8 л воды для инъекций. Затем открывают вентиль для подачи в реактор стерильного азота и барботируют воду в течение 5 минут. После этого в реактор последовательно загружают 4 г субстанции этилметил-гидроксипиридин сукцината и 5 мг субстанции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин при постоянном перемешивании и барботаже раствора азотом. Перемешивание ведут до полного растворения. Затем доводят pH раствора до значения 4,5-5,5 добавлением 1 М раствора уксусной кислоты. Полученный раствор доводят до объема 10 л водой для инъекций и пропускают через стерилизующий фильтр. В асептических условиях осуществляют розлив в ампулы емкостью 2 мл по 1 мл в ампулу. Кассеты с ампулами помещают в сублимационную камеру, где замораживают до температуры минус 40°С со скоростью замораживания 10°С/ч, а затем подвергают высушиванию путем вакуумирования. Ампулы с полученной сухой лиофилизированной формой препарата запаивают под азотом.

Пример 2

6 г субстанции и 40 мг субстанции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина растворяют при перемешивании и барботаже азотом в 8 л воды для инъекций, в которой предварительно растворено 0,71 г ацетата аммония, pH полученного раствора доводят до значения 4,5-5,0 с помощью 1 М раствора уксусной кислоты и добавляют воду для инъекций до общего объема 10 л. Проводят стерилизующую фильтрацию полученного раствора и в асептических условиях осуществляют под азотом его розлив в ампулы емкостью 2 мл по 1 мл в ампулу. Заполненные ампулы запаивают под азотом.

Фармакологическая активность описываемой фармкомпозиции была изучена экспериментально по известным методикам /5/.

Пример 3

Противогипоксическое действие композиции с содержанием в качестве активных компонентов этилметилгидроксипиридин сукцинат и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин на модели острой нормобарической гипоксической гипоксии с гиперкапнией (в гермокамере) (табл. 1)

Исследования выполнены на белых нелинейных мышах-самцах со средней массой 22±1 г по известной методике [5].

Острую нормобарическую гипоксическую гипоксию с гиперкапнией воспроизводили путем помещения мышей (поодиночке) в гермокамеру: животных сажали в стеклянные банки одинакового объема (250 см³), которые герметично закрывали. По мере потребления кислорода концентрация его в воздухе сосуда и в организме снижалась, а количество углекислого газа, наоборот, возрастало. В результате у животных развивалась острая гипоксическая гипоксия с гиперкапнией. Регистрировали с помощью секундомера продолжительность жизни мышей (до остановки дыхания) в гермокамере в минутах (с точностью до 0,1 минуты) и по ее увеличению судили об эффективности испытанных фармакологических веществ. Исследуемые вещества и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили внутрибрюшинно до помещения животных в камеру.

Полученные результаты представлены в табл.1.

Установлено, что этилметилгидроксипиридин сукцинат в дозах 30 и 50 мг/кг существенно не влиял, а в дозе 100 мг/кг значимо (p<0,05) увеличивал продолжительность жизни животных в условиях острой нормобарической гипоксии с гиперкапнией на 27%. Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин в дозах 0,025 и 0,2 мг/кг практически не изменял продолжительность жизни мышей в гермокамере. При применении композиции с этилметилгидроксипиридин сукцинатом и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролином они в трех случаях вызывали тенденцию (этилметилгидроксипиридин сукцинат 30 мг/кг+метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин 0,025 мг/кг, этилметилгидроксипиридин сукцинат 30 мг/кг + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин 0,2 мг/кг и этилметилгидроксипиридин сукцинат 50 мг/кг + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин 0,025 мг/кг) или в других испытанных дозах значимо (p<0,05) увеличивали продолжительность жизни животных на 22% (этилметилгидроксипиридин сукцинат 50 мг/кг + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин 0,2 мг/кг) и 33% (этилметилгидроксипиридин сукцинат 50 мг/кг + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин 0,025 мг/кг).

Из табл.1 видно, что применение композиции с содержанием в ее составе этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина приводит к увеличению продолжительности жизни, более значительному, чем при раздельном применении этих препаратов в тех же дозах. Резкое повышение эффективности воздействия композиции при совместном применении этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина в качестве активных компонентов не происходит за счет увеличения дозировок этих активных компонентов с минимальным отрицательным воздействием этих препаратов.

Пример 4

Противоишемическое действие композиции с содержанием в качестве активных компонентов этилметилгидроксипиридин сукцината и метионилглутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин на модели циркуляторной гипоксии мозга (табл. 2)

Исследования выполнены на белых нелинейных мышах-самцах массой 31-38 г (возраст 11-13 месяцев).

Циркуляторную гипоксию мозга (ишемию головного мозга) воспроизводили путем одномоментной перевязки (под эфирным наркозом) обеих общих сонных артерий. У ложнооперированных животных (контрольная группа) операция была ограничена этапом доступа к общим сонным артериям. Животных после операции наблюдали в течение нескольких недель. Исследуемые вещества (этилметилгидроксипиридин сукцинат, метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин) и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили внутрибрюшинно в течение 7 дней: в первый день - после перевязки и через 3 часа после операции, в остальные 6 дней - 1 раз в сутки.

После двусторонней перевязки общих сонных артерий мыши погибали в течение первых 6 суток.

Из табл.2 видно, что выживаемость животных контрольной группы через 6 суток после двусторонней перевязки общих сонных артерий составила 78% (из 117 погибли 26 мышей). Этилметилгидроксипиридин сукцинат в дозе 100 мг/кг значимо (p<0,05) увеличивал количество выживших мышей до 97%, т.е. оказывал практически полное защитное действие. Этилметилгидроксипиридин сукцинат в дозе 30 мг/кг и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025 и 0,2 мг/кг) выживаемость животных достоверно не изменяли. Однако при использовании композиции с активными компонентами (этилметилгидроксипиридин сукцинат + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин) в указанных дозах они значимо (p<0,05) увеличивали количество выживших мышей до 96-97% (табл. 2).

Пример 5

Антиамнестическое действие композиции с содержанием в качестве активных компонентов этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина на модели амнезии, вызванной электросудорожным шоком (табл.3)

Влияние композиции этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина на процессы обучения и памяти исследовали на белых нелинейных мышах-самцах (массой 20-24 г), используя условную реакцию пассивного избегания (УРПИ) электрокожного раздражения [6]. В настоящее время тест УРПИ является базисной моделью для оценки влияния веществ на формирование и воспроизведение памятного следа в норме и в условиях его нарушения (амнезия), а также наиболее информативным из применяемых сегодня методов оценки эффективности веществ с ноотропной активностью [5]. Установка для мышей представляла собой экспериментальную камеру черного цвета размером 30×40×30 см с электродным полом и белой пластиковой платформой (7,5×7,5×0,5 см), которую располагали на полу в центре камеры. Мышей (поодиночке) помещали на пластиковую платформу. Обычно животные спускались (или спрыгивали) с платформы на электродный пол, где они получали «наказание» - удар электрическим током (в это время на пол камеры подавали постоянный электрический ток силой 0,8 мА). Электрический ток включали только тогда, когда мышь касалась пола всеми четырьмя конечностями. Обычной реакцией животных было возвращение на безопасную платформу. После 5 мин обучения у мышей вырабатывалась УРПИ - они оставались на платформе. Тестирование на сохранность УРПИ проводили через 24 часа после амнезирующего воздействия. При этом если животное покидало платформу в течение 1 минуты, у него отмечали ретроградную амнезию навыка пассивного избегания.

В качестве амнезирующего воздействия использовали электросудорожный шок (параметры электрического тока: 50 Гц, 50 мА, 0,3 с), который наносили мышам с помощью электродов в виде клипс, фиксируемых на ушных раковинах (транспиннеально), сразу после обучения УРПИ [5]. У животных контрольной группы вызывали псевдоэлектросудорожный шок: накладывали пиннеальные электроды для нанесения электросудорожным шоком без подачи электрического тока. Фармакологические вещества вводили внутрибрюшинно в период генерализованных судорог, вызванных электросудорожным шоком, т.е. непосредственно после электросудорожного шока. Тестирование мышей на сохранение УРПИ производили через 24 часа после электросудорожного шока.

Установлено, что электросудорожный шок вызывал у большинства мышей ретроградную амнезию навыка пассивного избегания: у 82% животных (p<0,001) через 24 часа наблюдалась амнезия УРПИ. Этилметилгидроксипиридин сукцинат в дозе 30 мг/кг и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин в дозе 0,2 мг/кг существенно не изменяли амнестическое действие. Однако при применении композиции (с активными компонентами - этилметилгидроксипиридин сукцинат+метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин) они в указанных дозах значимо (p<0,05) ослабляли амнестический эффект в 2 раза (табл.3).

Из табл.3 видно, что применение композиции, содержащей в качестве активных компонентов этилметилгидроксипиридин сукцинат и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин, приводит к уменьшению амнестического эффекта, более значительному, чем при раздельном применении этих препаратов в тех же дозах. Резкое повышение эффективности воздействия при совместном применении в составе композиции этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина не происходит за счет увеличения дозировок этих активных компонентов с минимальным отрицательным воздействием этих препаратов.

Пример 6

Антиамнестическое действие композиции, содержащей в качестве активных компонентов этилметилгидроксипиридин сукцинат и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин, на модели амнезии, вызванной плаванием мышей в холодной воде с одновременным вращением колеса до изнеможения (табл.4)

Исследования выполнены на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-24 г с применением выработки у животных УРПИ (описанной в примере 5).

Животных (поодиночке) помещали в заполненный водой пластиковый ящик размером 17×9×19 см с вращающимся ребристым колесом. Плавание мышей в холодной воде с одновременным вращением колеса до изнеможения (ПМХВ) применяли сразу после обучения УРПИ. Сохранность УРПИ проверяли через 24 часа после окончания ПМХВ. При этом наиболее выраженные мнестические нарушения отмечались у мышей, когда они плавали в воде (в среднем 10,6 мин), имеющей температуру 12-14°С, а температура воздуха в помещении была 16-20°С. В качестве ложного ПМХВ использовали помещение животных в мокрые холодные опилки.

Установлено, что ПМХВ вызывало у большей части мышей ретроградную амнезию навыка пассивного избегания: у 62% животных (p<0,001) через 24 часа наблюдалась амнезия УРПИ. Этилметилгидроксипиридин сукцинат в дозе 10 мг/кг и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин в дозе 0,025 мг/кг существенно не влияли на амнезию УРПИ. Однако при применении композиции (с активными компонентами - этилметилгидроксипиридин сукцинат + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин) они в указанных дозах значимо (p<0,05) ослабляли амнестический эффект в 2,1 раза (табл. 4).

Из табл.4 видно, что применение композиции, содержащей в качестве активных компонентов этилметилгидроксипиридин сукцинат и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин, приводит к ослаблению амнестического эффекта, более значительному, чем при раздельном применении этих препаратов в тех же дозах. Резкое повышение эффективности воздействия при применении в составе композиции в качестве активных компонентов этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина не происходит за счет увеличения дозировок отдельных активных компонентов с минимальным отрицательным воздействием этих препаратов.

Пример 7

Антиамнестическое действие композиции с активными компонентами этилметилгидроксипиридин сукцинатом и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролином на модели амнезии, вызванной плаванием мышей с перевязанными общими сонными артериями в холодной воде с одновременным вращением колеса до изнеможения (табл.5)

На модели амнезии, вызванной ПМХВ, оценивали эффективность препаратов у мышей с перевязанными общими сонными артериями (см. пример 4). Через 6-10 суток после операции выжившие животные по ориентировочно-исследовательской реакции и эмоциональному статусу (тест открытое поле) практически не отличались от контрольных (ложнооперированных, n=20). В связи с этим их использовали в тесте УРПИ (описанном в примере 5). Тестирование на сохранность УРПИ проводили через 24 часа после амнезирующего воздействия (ПМХВ). Исследуемые вещества и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили внутрибрюшинно (см. выше; в последний раз метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин вводили за 10 мин, этилметилгидроксипиридин сукцинат - за 60 мин до обучения мышей).

Установлено, что ПМХВ вызывало у большей части мышей с перевязанными общими сонными артериями ретроградную амнезию навыка пассивного избегания: у 65% животных (p<0,001) через 24 часа наблюдалась амнезия УРПИ. Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025 мг/кг) и этилметилгидроксипиридин сукцинат (30 мг/кг) незначительно влияли на амнезию УРПИ. Однако при их совместном применении (этилметилгидроксипиридин сукцинат+метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин) они значимо (p<0,05) оказывали отчетливое антиамнестическое действие, уменьшая выраженность амнезии в 1,8 раза (табл.5).

Из табл.5 видно, что применение композиции, содержащей в качестве активных компонентов этилметилгидроксипиридин сукцинат и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин, приводит к увеличению антиамнестического воздействия, более значительному, чем при раздельном применении этих компонентов в тех же дозах. Резкое повышение эффективности воздействия при совместном применении в составе композиции этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина не происходит за счет увеличения дозировок отдельных компонентов с минимальным отрицательным воздействием этих препаратов.

Пример 8

Антиамнестическое действие композиции на модели амнезии, вызванной острой нормобарической гипоксической гипоксии с гиперкапнией (в гермокамере) (табл.6)

Исследования выполнены на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-24 г с применением выработки у животных УРПИ (описанной в примере 5).

Описанную в примере 3 модель острой нормобарической гипоксической гипоксии с гиперкапнией также использовали для вызывания у животных ретроградной амнезии навыка пассивного избегания. Для этого мышей сразу после обучения УРПИ помещали (поодиночке) в гермокамеру на 16-18 минут в зависимости от выраженности симптомов кислородной недостаточности и массы (чем больше масса, тем обычно меньше время их пребывания в гермокамере). В контрольной группе животных подвергали ложной гипоксии - сажали мышей в стеклянные банки одинакового объема, которые не закрывали. Проверку сохранения УРПИ проводили через 24 часа после окончания воздействия гипоксии с гиперкапнией. Вещества вводили орально через зонд (этилметилгидроксипиридин сукцинат - за 60 минут, метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин - за 10 минут) до обучения мышей.

Было обнаружено, что через 24 часа после 16-18-минутного пребывания мышей в гермокамере у большей части из них наблюдалась ретроградная амнезия: у 64% животных (p<0,001). Этилметилгидроксипиридин сукцинат в дозе 30 мг/кг и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин в дозах 0,025 и 0,2 мг/кг существенно не влияли на амнезию УРПИ. Однако при их совместном применении (этилметилгидроксипиридин сукцинат + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин) они значимо (p<0,05) оказывали отчетливое антиамнестическое действие, уменьшая выраженность амнезии в 1,7-2,1 раза (табл.6).

Из табл.6 видно, что применение композиции с содержанием в качестве активных компонентов этилметилгидроксипиридин сукцинат и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин приводит к увеличению антиамнестического воздействия, более значительному, чем при раздельном применении этих препаратов в тех же дозах. Резкое повышение эффективности воздействия при совместном применении в составе композиции этилметилгидроксипиридина и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина не происходит за счет увеличения дозировок этих компонентов с минимальным отрицательным воздействием этих препаратов.

Таблица 1
Влияние композиции этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина на продолжительность жизни мышей в гермокамере (M±m)
Вещество (доза, мг/кг)	Число мышей	Продолжительность жизни, минуты
Изотонический раствор натрия хлорида (контроль)	16	28,1±1,0
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30)	10	29,0±1,5
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (50)	10	30,9±1,6
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (100)	16	35,6±3,1*
Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025)	10	28,9±1,1
Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,2)	10	29,8±1,2
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30) + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025)	12	31,7±2,1
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30) + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,2)	10	32,9±2,4
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (50) + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025)	12	33,1±2,3
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (50) + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,2)	14	34,2±2,0*
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (100) + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025)	14	37,3±3,2*
Примечание. * - p<0,05 - различия статистически значимы по сравнению с контролем (критерий Стьюдента).

Таблица 2
Влияние композиции этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина на выживаемость мышей через 6 суток после двусторонней перевязки общих сонных артерий
Вещество (доза, мг/кг)	Число мышей	Число выживших мышей (%)
Изотонический раствор натрия хлорида (контроль)	117	91 (78)
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (100)	29	28 (97)*
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30)	20	18 (90)
Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025)	23	20 (87)
Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,2)	25	23 (92)
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30) + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025)	28	27 (96)*
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30) + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,2)	31	30 (97)*
Примечание. * - p<0,05 - достоверность различий по сравнению с контролем (точный метод Фишера).

Таблица 3
Влияние композиции этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина на амнезию у мышей, вызванную электросудорожным шоком (ЭСШ)
Условия опытов и вещество (доза, мг/кг)	Общее число мышей	Число мышей, обучившихся УРПИ (%)	Число мышей с амнезией УРПИ через 24 часа после амнезирующего воздействия (%)
Изотонический раствор натрия хлорида + псевдоЭСШ (контроль 1)	30	27 (90)	5(19)
Изотонический раствор натрия хлорида + ЭСШ (контроль 2)	30	28 (93)	23 (82)°°°
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30) + ЭСШ	11	10 (91)	5 (50)
Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,2) + ЭСШ	11	10 (91)	7 (70)
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30) + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,2) + ЭСШ	24	22 (92)	9 (41)*
Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно (точный метод Фишера):° или * - p<0,05, °°° или *** - p<0,001.

Таблица 4
Влияние композиции этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина на амнестический эффект, вызванный плаванием мышей в холодной воде с одновременным вращением колеса до изнеможения (ПМХВ)
Условия опытов и вещество (доза, мг/кг)	Общее число мышей	Число мышей, обучившихся УРПИ (%)	Число мышей с амнезией УРПИ через 24 часа после ПМХВ (%)
Изотонический раствор натрия хлорида + ложное ПМХВ (контроль 1)	52	48 (92)	8 (17)
Изотонический раствор натрия хлорида + ПМХВ (контроль 2)	55	52 (94)	32 (62)°°°
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (10) + ПМХВ	19	17 (89)	8 (47)°
Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025) + ПМХВ	22	20 (91)	8 (40)
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (10) + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025) + ПМХВ	22	21 (95)	6 (29)*
Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно (точный метод Фишера): ° - или * - p<0,05, °°° или *** - p<0,001.

Таблица 5
Влияние композиции этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина на амнестический эффект, вызванный у мышей с перевязанными общими сонными артериями плаванием в холодной воде с одновременным вращением колеса до изнеможения (ПМХВ)
Условия опытов и вещество (доза, мг/кг)	Общее число мышей	Число мышей, обучившихся УРПИ (%)	Число мышей с амнезией УРПИ через 24 часа после ПМХВ (%)
Изотонический раствор натрия хлорида + ложное ПМХВ (контроль 1)	34	29 (85)	6 (21)
Изотонический раствор натрия хлорида + ПМХВ (контроль 2)	47	40 (85)	26 (65)°°°
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30) + ПМХВ	19	17 (89)	8 (47)
Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025) + ПМХВ	15	13 (87)	7 (54)
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30) + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025) + ПМХВ	24	22 (92)	8 (36)*
Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно (точный метод Фишера): ° или * - p<0,05, °°° или *** - p<0,001.

Таблица 6
Влияние композиции этилметилгидроксипиридин сукцината и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина на амнезию у мышей, вызванную острой нормобарической гипоксической гипоксией с гиперкапнией
Условия опытов и вещество (доза, мг/кг)	Общее число мышей	Число мышей, обучившихся УРПИ (%)	Число мышей с амнезией УРПИ через 24 часа после амнезирующего воздействия (%)
Изотонический раствор натрия хлорида + ложная гипоксия (контроль 1)	30	28 (93)	5(18)
Изотонический раствор натрия хлорида + гипоксия (контроль 2)	48	44 (92)	28 (64)°°°
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30) + гипоксия	12	11 (92)	5 (45)
Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025) + гипоксия	11	10 (91)	6 (60)
Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,2) + гипоксия	11	10 (91)	5 (50)
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30) + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025) + гипоксия	26	24 (92)	9 (38)*
Этилметилгидроксипиридин сукцинат (30) + метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,2) + гипоксия	21	20 (95)	6 (30)*
Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно (точный метод Фишера): ° или * - p<0,05, °° или ** - p<0,01, °°° или *** - p<0,001.

Пример 9

Противорвотное действие композиции (табл.7)

Исследования выполнены на 13 кошках-самцах массой 3,1-4,2 кг, находившихся в условиях свободного поведения. В качестве эметического агента использовали ксилазин, который традиционно применяют для вызывания рвоты у кошек [7]. Ксилазин вводили животным внутримышечно (в/м) в дозе 0,66 мг/кг [7]. Регистрировали в течение 1 часа после в/м введения ксилазина латентный период (ЛП) рвотной реакции и количество рвотных актов (так как у животных обычно возникала многократная рвота). Этилметилгидроксипиридин сукцинат, метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина, их композицию и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили (дважды) животным подкожно за 4 часа и 45 минут до введения ксилазина.

В I серии экспериментов, проведенных на 6 кошках-самцах, было установлено, что по отдельности ни этилметилгидроксипиридин сукцинат в дозе 100 мг/кг (2 раза по 50 мг/кг), ни метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин в дозе 0,4 мг/кг (2 раза по 0,2 мг/кг) противорвотной активностью не обладают (табл.7).

В II серии опытов, проведенных на 7 животных, было обнаружено, что композиция с этилметилгидроксипиридин сукцинатом и метионил-глутамил-гистидид-фенилаланил-пролил-глицил-пролином (2 раза по 50 и 0,2 мг/кг соответственно) по сравнению с контролем значимо (p<0,05) увеличивает в 2 раза ЛП рвотной реакции и на 43% уменьшает количество рвотных актов (табл.7). Следовательно, указанная композиция в отличие от ее активных компонентов обладает противорвотной активностью.

В результате проведенных исследований установлено, что предлагаемая композиция обладает выраженной высокой нейропротективной, антиамнестической, противогипоксической, антиоксидантной и противоишемической активностью в сочетании с противорвотной активностью и может найти применение при создании новых лекарственных средств для лечения патологий центральной нервной системы. При этом имеет место эффект синергизма, проявляющийся при совместном использовании в составе композиции в качестве активных компонентов этилметилгидроксипиридин сукцинат и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин, который значительно выше эффективности раздельного использования этих компонентов.

Примеры лекарственных средств

Пример 1

Капсулы получали общеизвестным способом (Чуешов В.И. и др. Промышленная технология лекарств, Т.2, МТК - Книга; Изд-во НФАУ, 2002 г., стр.400-413).

Для приготовления капсул смешивают ингредиенты из расчета состава одной капсулы: этилметилгидроксипиридин 100 мг; метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин 0,5 мг; лактоза 83,3 мг; крахмал прежелатиновый 18,9 мг; аэросил 2,5 мг; магния стеарат 2,6 мг; натрия лаурилсульфат 2,3 мг

Состав твердой желатиновой капсулы: желатин, титана диоксид, вода, краситель.

Пример 2

Таблетки получали общеизвестным способом (там же, стр.335-368).

Для приготовления таблеток смешивают ингредиенты из расчета состава одной таблетки: этилметилгидроксипиридин 100 мг; метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин 0,5 мг; лактозы моногидрат 122 мг; натрия карбоксиметилцеллюлозы (кармеллоза натрия) 25 мг, магния стеарат 2,6 мг; оболочка - поливиниловый спирт, тальк, титана диоксид.

Состав оболочки для таблетки: опадрай II белый, макрогол (полиэтиленгликоль), поливиниловый спирт, тальк, титана диоксид.

Способ профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения предусматривает введение пациенту фармацевтически эффективного количества средства - пациенту перорально вводят средство в дозе 100-210 мг 1-2 раза в сутки с постепенным повышением дозы до получения терапевтического эффекта в течение 2-5 недель. Максимальная суточная доза 1260 мг.

Изобретение позволит расширить арсенал лекарственных средств и создать новые лекарственные средства, обладающие наряду с высокой нейропротекторной, антиамнестической, противогипоксической, антиоксидантной и противоишемической активностью и противорвотной активностью, предназначенных для профилактики и лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения с минимальными побочными эффектами, сократить количество принимаемого средства за счет его высокой эффективности.

Литература

1. Патент РФ № 2251429 (2005).

2. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств - 14 вып. - М., РЛС - 2006 - с.488-489.

3. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. - М.: Медицина, 2001.

4. Федин А.И., Румянцева С.А., Миронова О.П., Евсеев В.П. Применение антиоксиданта мексидола у больных с острыми нарушениями мозгового кровообращения. Методические рекомендации. - М., 2002. - 16 с.

5. Воронина Т.А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропной активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под ред. Фисенко В.П. - М., 2000. - С.153-158.

6. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон П.Д. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. - М., Высшая шк., 1991. - 399 с.

7. Но C.M., Но S.T., Wang J.J. et al. Effects of dexamethasone on emesis in cats sedated with xylazine hydrochloride // Am J Vet Res. - 2001. - Vol.62, N 8. - P.1218-1221.