местное нанесение и препараты эритропоэтина для заживления кожных ран

Формула изобретения

1. Гелеобразная или вязкая композиция, пригодная для местного и локального заживления ран на травмированной коже, содержащая эритропоэтин (ЭПО) и по меньшей мере один гелеобразующий полисахарид, поддающийся разбуханию, в концентрации 0,4-4% мас./мас., выбранный из одного или более чем одного члена группы, состоящей из:

- гидроксиэтилцеллюлозы

- гидроксиметилцеллюлозы

- карбоксиэтилцеллюлозы

- карбоксиметилцеллюлозы,

которая может быть получена путем смешивания ЭПО в лиофилизированной, растворенной или суспендированной форме с предварительно разбухшим полисахаридом, имеющим вязкость менее 5000 мПа·с, и инициации полного разбухания, где полностью разбухший полисахарид имеет вязкость 20000-60000 мПа·с, и ЭПО присутствует в концентрации 100-500 МЕ/г гелеобразной композиции, где указанное смешивание ЭПО достигается путем диффузии ЭПО в геле в течение по меньшей мере 24 ч.

2. Композиция по п.1, где указанное смешивание ЭПО достигается путем диффузии ЭПО в геле в течение по меньшей мере 24 ч и переворачивания геля дважды на 180° в течение этого периода.

3. Композиция по п.1 или 2, характеризующаяся тем, что концентрация полисахарида(ов) составляет 2-3% мас./мас.

4. Композиция по п.1 или 2, характеризующаяся тем, что гелеобразующее вещество представляет собой карбоксиметилцеллюлозу, содержащую 150 ME ЭПО/г гелеобразной композиции, и применяют 1 г геля/см ² площади раны.

5. Композиция по любому из пп.1-4, характеризующаяся тем, что она включена в твердый матрикс или на твердый матрикс носителя, который вызывает равномерное высвобождение ЭПО в области раны травмированной кожи.

6. Композиция по п.5, характеризующаяся тем, что твердый матрикс носителя представляет собой пластырь трехмерной структуры.

7. Применение композиции по любому из пп.1-6 для получения лекарства для местного и локального лечения больной или травмированной кожи ожоговых ран, ожогов горячей жидкостью или паром, хронических ишемических ран и в области стоматологии.

8. Применение по п.7, характеризующееся тем, что применяют 50-1500 ME ЭПО/см² площади раны.

9. Применение по п.8, характеризующееся тем, что применяют 75-450 ME ЭПО/см² площади раны.

10. Способ получения стабильной гелеобразной композиции по п.1, содержащей стабильный эритропоэтин (ЭПО), включающий диффузию ЭПО в предварительно разбухшем геле в течение по меньшей мере 24 ч, где гель содержит полисахарид, выбранный из одного или более чем одного члена группы, состоящей из гидроксиэтилцеллюлозы, гидроксиметилцеллюлозы, карбоксиэтилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы и карбоксипропилцеллюлозы, в концентрации 0,4-4% мас./мас.

11. Способ по п.10, характеризующийся тем, что гель переворачивают на 180° в течение периода диффузии.

12. Способ по п.11, характеризующийся тем, что гель переворачивают дважды.

13. Способ по пп.10-12, характеризующийся тем, что концентрация полисахарида составляет 1,5-3,5% мас./мас.

Описание изобретения к патенту

ТЕХНИЧЕСКАЯ ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к применению эритропоэтина (ЭПО), в частности ЭПО в фармацевтическом препарате, который стабилизирует активное соединение, для местного лечения травмированной кожи, в частности, для заживления раны в случае механических или патологических повреждений или в случае ожогов. В частности изобретение направлено на применение ЭПО в стабилизированной форме согласно изобретению, основанной на гидрофильных полимерах, для стимуляции дифференциации и роста определенных типов клеток, например тканеспецифических клеток-предшественников, которые не являются клетками-предшественниками кровеносных сосудов, или взрослых тканеспецифических клеток, которые не являются эндотелиальными клетками, которые в любом случае встречаются в прилегающей зоне раны в случае повреждений кожи данного типа.

В частности, изобретение также относится к специальным вязким или желатиновым препаратам на основе полисахаридов, в частности производных целлюлозы, которые содержат ЭПО и которые способны к стабилизации последнего и его медленного и равномерного высвобождения в ране.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Эритропоэтин (ЭПО) представляет собой гликопротеиновый гормон, который контролирует образование эритроцитов из клеток-предшественников в костном мозге (эритропоэз). ЭПО связывается с его рецептором (ЭПО-Р), который экспрессируется во всех гемопоэтических клетках.

У взрослых эритропоэтин образуется, главным образом, в почках, более точно в эндотелиальных клетках околоканальцевых капилляров. Относительно небольшие количества также синтезируются в клетках печени (гепатоцитах).

Основное действие ЭПО, таким образом, состоит в увеличении числа красных кровяных телец в крови, что приводит в результате к повышенному поглощению кислорода.

В последние годы различные авторы сообщили, что ЭПО также проявляет негемопоэтическое действие, и ЭПО-Р, соответственно, также экспрессируется некоторыми негемопоэтическими клетками. Таким образом, сообщают о стимуляции ЭПО нервных клеток, нейрональных клеток головного мозга и эндотелиальных клеток, в некоторых случаях вместе с непосредственной экспрессией рецептора гемопоэтического ЭПО. В других случаях прогнозируют присутствие дополнительного, негемопоэтического, рецептора, но это еще не доказано.

Возрастающая значимость представлена, в частности, негемопоэтическим действием эритропоэтина (ЭПО), в течение длительного времени неизвестным, в связи, например, со стимулируемым образованием и регенерацией эндотелиальных и тканевых клеток, таких как соединительная ткань, мышечная ткань, эпителиальная ткань и нервная ткань.

Так, в WO 2004/001023 описано среди прочего применение ЭПО и ТПО для стимуляции неоваскуляризации и регенерации ткани и улучшения заживления раны, например, после операций или повреждений.

В WO 2005/063965 заявлено применение ЭПО для направленной, структурно регулируемой регенерации травмированной ткани, при которой стимулирован не только рост эндотелиальных клеток, но также стимулирована регенерация паренхимы и образование структур стенок, что означает, что для конструирования функционирующей ткани, органа или его частей наблюдается координированный трехмерный рост.

Haroon et al. (American J. Pathol. 2003, 163, 993) обсуждают новую роль ЭПО в контексте процессов заживления ран, индуцированных фибрином.

В обзорной статье Brines and Cerami (Kidney International, 2006) обсуждают роль ЭПО в защите ткани.

Эритропоэтин и производные ЭПО или также миметики ЭПО, таким образом, оказываются высокопригодными при системном применении для специфичной инициации и регуляции новообразования и регенерации пораженной ткани в случае повреждений кожи, слизистой оболочки, в случае открытых кожных и поверхностных ран, или также в случае раздражения кожи, вызванного ожогами или ожогами горячей жидкостью или паром и, в конечном счете, способными к инициации и ускорению заживления.

В WO 2005/070450 и дополнительных статьях авторов обсуждаемого изобретения описано применение ЭПО при регенерации кровеносных сосудов и ткани слабой дозой менее чем 90 МЕ/кг массы тела (=МТ), включая область ухода за раной. Хотя возможное местное применение теоретически упомянуто в данной заявке, тем не менее, обнаружено, что предпочтительно системное применение.

Таким образом, постулировано введение ЭПО в случае системного применения в субполицитемической слабой дозе менее чем 90 ME (международных единиц)/кг массы тела (МТ) вместо 150-300 МЕ/кг МТ, как до сих пор было обычно для применений ЭПО. Цель, таким образом, состоит в достижении меньшей стимуляции кроветворения в области костного мозга, но, согласно более недавней теории, как отмечено, в обеспечении активации предшественников эндотелиальных клеток в крови. Активация клеток-предшественников эндотелиальных клеток в крови, а также в ткани и развитие эндотелиальных клеток, которые образуют самый внутренний клеточный слой кровеносных сосудов, связана с улучшением васкуляризации, и предполагают, что посредством этого также облегчается регенерация ткани. Между тем, это подтверждено в клинических испытаниях в случае ожоговых ран.

Хотя в некоторых из указанных статей упомянуто местное применение ЭПО для регенерации ткани, системное применение активного соединения, однако, явно помещено на первый план, поскольку на основании результатов обнаруженный негемопоэтический эффект ЭПО может быть свойственен, по мнению большинства недавних статей, прежде всего, вновь открытой стимуляции соответствующих эндотелиальных, сосудистых или CD31-положительных клеток-предшественников, которые циркулируют, главным образом, в кровообращении и только вторичны в отношении роста паренхимных тканевых структур, стимулируемых посредством этого.

Однако в случае ЭПО при системном применении для защиты тканей или регенерации тканей это связано со значительными рисками вследствие потенциальных побочных эффектов в отношении гемопоэтических эффектов.

При местном применении ЭПО, в соответствии с современными теориями, только неадекватное распределение и доступность системно встречающихся клеток или клеток-предшественников для ЭПО подразумевает, что должен наблюдаться лишь неудовлетворительный эффект или вообще никакого эффекта на регенерацию ткани.

В случае регенерации тканей после, например, ожоговой травмы, либо ожога горячей жидкостью или паром, либо также в случае ишемических ран необходимо достижение быстрого закрытия дефекта. Это может происходить только в том случае, если паренхимные компоненты кожи также стимулированы насколько возможно быстро. Сдвинутая по времени стимуляция одного компонента (CD31) с целью последующего облегчения образования другого компонента (паренхимы) соответствует теории авторов WO 2005/070450 и других публикаций.

Хотя образование сосудистой сети может обладать косвенным поддерживающим действием, как таковое оно не представляет конечный результат, пока отсутствует паренхима, и при некоторых обстоятельствах она может быть образована только вторично и, следовательно, с задержкой во времени.

Образование сосудистых клеток, таким образом, должно быть координировано одновременно с локализованным образованием ткани. В данном случае, в соответствии с общепринятой теорией, встречается дилемма, поскольку дозы, вводимые подкожно или внутривенно, направлены на предшественники эндотелиальных клеток благодаря принципу системного распределения и субполицитемические дозы необходимо дополнительно вводить с целью ограничения побочных эффектов. В данном случае введение ЭПО может, таким образом, сочетаться только с затруднением с локализованной фармакокинетикой, ограниченной местно областью травмы кожи.

В соответствии с общепринятой теорией, таким образом, должны быть выбраны предполагаемые биохимические пути стимуляции, где необходимо вводить либо субполицитемические дозы, либо повторные инъекции, либо также необходимы изменения во времени полужизни исходного вещества.

В каждом случае, однако, ЭПО должен попадать в действительно необходимый сайт через кровоток, системно распределяться в организме и даже претерпевать дополнительное разведение.

Кроме того, в случае ран происходят процессы, которые делают местное применение ЭПО более затруднительным: заживление раны, например, поврежденной кожи или слизистой оболочки обычно протекает в три фазы: фаза воспаления, фаза пролиферации и фаза восстановления/ремоделирования. В случае свежей раны или кожного повреждения, которое нужно лечить, в течение первых 24 часов протекают воспалительные процессы, которые включают, в частности, иммиграцию различных воспалительных факторов (таких как, например, фибронектин) и клеток различных типов, таких как, например, моноциты, фагоциты, полиморфные клетки и макрофаги, и, в конечном счете, приводят в результате к образованию фибринового матрикса и эндотелиальных клеток кровеносных сосудов. Секреция раны, образующаяся в этом процессе, включает среди прочего ряд протеолитических ферментов, а также бактерии, которые проникли в рану, и содержит вещества, которые действуют в этой связи.

Протеолитические ферменты, некоторые из которых обладают высокой активностью, являются причиной, по которой лекарства, содержащие белки или пептиды, такие как ЭПО, которые наносят на рану и которые способствуют заживлению раны, часто обладают малой или не обладают никакой эффективностью, поскольку обсуждаемый белок или полипептид вследствие его химической и биологической природы инактивируется, расщепляется и претерпевает распад указанными ферментами прежде, чем он способен развить действительную фармацевтическую эффективность. Эта проблема дополнительно обостряется вследствие инфекции раны бактериями или попадания клеточного детрита.

Не в самую последнюю очередь по этой причине фармацевтические белки обычно применяют системно, что обеспечивает их значительно пролонгированное время полужизни, а также обеспечивает их более быстрый транспорт к сайтам в организме, в которых должна развиваться их терапевтическая эффективность. Однако дозы активного соединения, содержащего белок, должны быть существенно выше при данном способе применения в целях достижения желаемого терапевтического эффекта, что часто неизбежно приводит в результате к нежелательным побочным реакциям.

В случае терапевтического лечения повреждений кожи системное применение активного соединения, кроме того, в принципе оказывается менее пригодным, поскольку заживляющее действие лекарства в действительности необходимо только местно. Поэтому существует общая проблема, если активные соединения, содержащие белок, следует применять для лечения повреждений кожи и открытых поверхностных и кожных ран.

Применение белков или полипептидов в местной форме, таких как, например, ЭПО, которые даже в плазме имеют время полужизни только 48 часов, для лечения повреждений кожи данного типа, что может происходить в случае острой механической травмы и раздражения и в случае ожогов и ожогов горячей жидкостью или паром, однако, было бы весьма желательно несмотря на известные затруднения.

Таким образом, цель состоит в разработке ЭПО или его биологически эквивалентных производных, фрагментов, миметиков и тому подобного для заживления кожных ран в форме местного применения, с одной стороны, как только что описано, без резких потерь действия, встречающихся вследствие протеолиза ЭПО за счет ферментативных или других процессов в ране, но, с другой стороны, как также подробно объяснено выше, по возможности облегчающего стимуляцию клеток или клеток-предшественников, которые способны к заживлению раны в прилегающей зоне раны и, если возможно, также в более глубоких слоях ткани в окружающей зоне раны путем местно применяемого ЭПО, что в конечном счете должно привести к более быстрому закрытию раны, и в том, чтобы сделать местное применение ЭПО целесообразным для первого периода и обеспечить его значительное преимущество перед системным введением.

Следующая цель изобретения состоит в создании формы введения, при которой не приходится учитывать риски и ограничения системной, в частности субполицитемической, дозировки ЭПО и которая в то же время может действовать специфично на релевантные клетки актуальной ткани без исключения, в то же время, локализованных взрослых эндотелиальных клеток.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ:

Неожиданно в настоящее время обнаружено, что при местном применении, предпочтительно в подходящем препарате, который стабилизирует активное соединение и равномерно высвобождает его, ЭПО эффективен в случае травм или патологически индуцированного повреждения кожи, где его эффективность, как также показано, в частности, гистологическими исследованиями, не является или практически не является свойством известной прогностической активации эндотелиальных или других клеток-предшественников, которые циркулируют в крови и могут транспортироваться в рану, что было бы недостаточно для целевого эффекта, но вместо этого, по-видимому, основана на индуцированной ЭПО стимуляции клеток, которые аккумулированы локально, то есть в прилегающей зоне раны или в расширенной окружающей зоне раны, где, что удивительно, клетками в ткани кожи, которые вносят функциональный вклад в заживление раны, преимущественно являются те клетки, которые составляют паренхиму, то есть они не являются клетками сосудов или их клетками-предшественниками, а также преимущественно не являются эндотелиальными клетками или их клетками-предшественниками, которые локализованы в ткани раны.

В целом обнаружено, что, в частности, ЭПО, применяемый местным путем, непосредственно и локально стимулирует дифференциацию и рост клеток в области раны, которые не несут или не экспрессируют поверхностный маркер эндотелиальных клеток CD31 либо несут или экспрессируют его только в небольшой степени.

CD31 обычно обнаруживают на эндотелиальных клетках или клетках кровеносных сосудов, тромбоцитах, макрофагах, гранулоцитах, Т-клетках, NK-клетках, лимфоцитах и фибробластах. Клетки, экспрессирующие CD31, считают факторами неоангиогенеза. В тканях кровеносные сосуды являются структурами, которые проходят через ткань подобно рекам, но никоим образом не представляют собой саму ткань. Эти клетки кровеносных сосудов и их клетки-предшественники имеют поверхностные маркеры, такие как CD31, обеспечивающие их точную дифференциацию и ограничение от других типов клеток. Паренхимные компоненты кожи представляют собой CD31-отрицательные типы клеток, такие как кератиноциты, клетки корней волос и дермальные клетки, такие как клетки соединительной ткани. Таким образом, ЭПО, применяемый местно, преимущественно стимулирует CD31-отрицательные клетки, в частности кератиноциты, клетки корней волос и дермальные клетки, или клетки, которые экспрессируют CD31 только в слабой степени. Этот дополнительный эффект действия является новым и отличается от известного гемопоэтического эффекта ЭПО, а также от негемопоэтического механизма, который был недавно открыт и продемонстрирован системно (см. выше).

В этой связи следует подчеркнуть, что, в частности, системное применение эритропоэтина и его производных и аналогов в случае подкожного или внутривенного введения вызывает только неадекватный или исключительно короткий эффект в сайте повреждения кожи, особенно поскольку данный системный принцип пренебрегает важностью тканеспецифичных стволовых клеток, которые полностью независимы от клеток сосудов.

В соответствии с изобретением локализованные клетки-предшественники в кожных придатках и углублениях стволовых клеток кожи могут быть, таким образом, стимулированы непосредственно местным введением ЭПО в первое время. Кроме того, обнаружено, что CD90-положительные клетки и нестин-положительные клетки в области раны кожи также стимулированы посредством ЭПО-индуцированной стимуляции указанных по существу CD31-отрицательных клеток. CD90 является маркерным белком для стволовых клеток и клеток-предшественников нейронов, тогда как нестин является маркером для нервных клеток. CD73-положительные клетки в области раны также совместно стимулируются ЭПО. Применяемый местно, ЭПО, таким образом, способен к стимуляции практически всех важных клеток в прилегающей зоне раны, рост которых существенен для заживления кожной раны.

В соответствии с изобретением, полностью независимо от указаний и ограничений субполицитемических режимов дозировки предшествующего уровня техники непосредственная стимуляция первичных клеток и клеток-предшественников, которые специфичны для заживления раны в коже, осуществляется при применении ЭПО, наносимого местным путем, предпочтительно в подходящем препарате на основе полимеров, в частности гидрофильных полимеров, а также его производных и аналогов, обладающих таким же действием или подобным действием. Это происходит независимо от действия на предшественники эндотелиальных клеток во всем организме, которое неизбежно имеет место в случае общепринятой системной формы применения. Системное действие данного типа в целом нежелательно вследствие встречающихся гемопоэтических эффектов (увеличение числа эритроцитов, повышенное кроветворение в костном мозге, повышенный риск тромбоза и т.д.).

Местно и локально применяемый ЭПО в соответствии с изобретением, кроме того, не вызывает или по существу не вызывает стимуляцию сосудистых и эндотелиальных клеток-предшественников, системно циркулирующих в кровотоке. Непосредственная стимуляция клеток вблизи раны обладает тем преимуществом, что окружающая область кожи и раны, с одной стороны, ограничивает системную резорбцию, например, протеазами, что уменьшает распад ЭПО до поступления в область системного кровообращения, и, тем не менее, способствует высокой локальной концентрации активного соединения. Количества ЭПО, которые должны подразумевать концентрацию 250 ME ЭПО/МТ или более в случае общепринятой формы системного применения, можно легко вводить без соответствующих встречающихся нежелательных эффектов ЭПО, как упомянуто выше. Это значительно расширяет терапевтическое окно для области регенерации ткани. Кроме того, за счет местного введения ЭПО могут быть инициированы эффекты совместной стимуляции травматическими цитокинами, которые присутствуют только локально в высоких концентрациях.

Изобретение, таким образом, относится к:

- применению эритропоэтина или одного из его производных или аналогов, обладающих таким же биологическим действием (ЭПО), предпочтительно в форме фармацевтического препарата, который стабилизирует активное соединение и равномерно высвобождает его, предпочтительно основанного на полимерах, обладающих, по меньшей мере частично, гидрофильными свойствами, для получения лекарства, которое нужно наносить местно или локально, для закрытия дефекта и/или для реэпителизации травмированной кожи путем направленной стимуляции тканеспецифичных клеток-предшественников, которые не являются клетками-предшественниками кровеносных сосудов, и взрослых тканеспецифичных клеток, которые не являются эндотелиальными клетками и которые в любом случае аккумулированы в специфичной локализации в прилегающей зоне раны травмированной кожи,

- к соответствующему применению, где местно и локально нанесенный ЭПО не вызывает или по существу не вызывает стимуляцию клеток-предшественников кровеносных сосудов или эндотелиальных клеток-предшественников, системно циркулирующих в кровотоке,

- к соответствующему применению, где клетки, стимулированные местно нанесенным ЭПО, не экспрессируют или экспрессируют только небольшое количество антигена CD31,

- к соответствующему применению, где реэпителизация кожи происходит на 20-70%, предпочтительно на 20-50%, в частности на 30-40% быстрее, чем за счет ЭПО в нестабилизированной форме при прочих идентичных условиях,

- к соответствующему применению, где реэпителизация кожи происходит на 20-50%, предпочтительно на 30-40% быстрее, чем за счет соответствующего фармацевтического препарата без ЭПО при прочих идентичных условиях,

- к соответствующему применению, где местно и локально нанесенный ЭПО стимулирует дифференциацию и рост кератиноцитов и/или клеток корней волос и/или соединительнотканных клеток,

- к соответствующему применению, где местно и локально нанесенный ЭПО дополнительно стимулирует дифференциацию и рост CDQO-положительных и/или нестин-положительных клеток в прилегающей зоне раны,

- к соответствующему применению, где местно и локально нанесенный ЭПО стимулирует дифференциацию и рост предшественников нервных клеток и/или нейрональных клеток,

- к соответствующему применению, где местно и локально нанесенный ЭПО стимулирует соответствующие клетки-предшественники в более глубоких слоях ткани в локальном окружении раны.

Одной из основных проблем при системном введении ЭПО является достижение достаточно высокого тканепротективного действия в региональных областях, при этом учитывая, с одной стороны, системные побочные эффекты и, с другой стороны, необходимость в установлении высокой концентрации активного соединения.

Цель изобретения, таким образом, также состояла в создании способа применения и вещества-носителя, посредством которых ЭПО и его аналоги можно особенно эффективно применять местно.

Неожиданно обнаружено, что описанный эффект действия местно применяемого ЭПО и его производных и аналогов, обладающих таким же биологическим действием, является особенно выраженным, если активное соединение предложено для местного применения в фармацевтическом препарате или композиции, которая стабилизирует его, где композиция или препарат должны обладать дополнительным свойством, чтобы активное соединение могло высвобождаться в ране по возможности равномерно и относительно медленно (медленное высвобождение).

Неожиданно обнаружено, что гелеобразующие гидрофильные полимеры относительно высокой вязкости, такие как производные целлюлозы, карбомеры, жирные спирты или макроголы (полиэтиленгликоли) или их смеси, предпочтительно гелеобразующие полисахариды, в частности, из группы простых эфиров целлюлозы и сложных эфиров целлюлозы в качестве вещества-носителя или основы композиции проявляют стабилизирующее действие на ЭПО и его производные в соответствующих ЭПО-содержащих препаратах для местного применения, таких как мази, кремы, пасты или гели. В этих препаратах активное соединение равномерно распределено в вязком, поддающемся разбуханию, полимеризованном или гелеобразном матриксе, предпочтительно в полисахаридном матриксе, который защищает его и из которого он, кроме того, высвобождается равномерно и медленно в рану, в которой он способен развивать свое действие непосредственно и сразу без значительного разложения протеолитическими ферментами.

Интересно, что ЭПО-содержащие гели, обладающие относительно высокой вязкостью более чем 20000 мПа·с, предпочтительно более чем 30000 мПа·с, в частности, между 20000 и 100000 мПа·с, предпочтительно между 40000 и 60000 мПа·с, проявляют более предпочтительные результаты, чем гели низкой вязкости, имеющие значение вязкости ниже 20000 мПа·с, в частности ниже 10000 мПа·с. Такие значения вязкости могут быть достигнуты в гелях, в которых гелеобразующий полимер, предпочтительно полисахаридное гелеобразующее вещество, имеет долю 2-4% мас./мас., предпочтительно 2-3%, но не существенно ниже.

Доказано, что гелевые композиции, которые содержат в качестве гелеобразующего вещества по меньшей мере один полисахарид, поддающийся разбуханию, выбранный из группы, состоящей из гидроксиметилцеллюлозы, гидроксиэтилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы и карбоксиэтилцеллюлозы, обладают особыми преимуществами. Предпочтение дано композициям, которые содержат карбоксиметилцеллюлозу и/или гидроксиэтилцеллюлозу или состоят из нее.

Кроме гелеобразных композиций на основе полисахаридов, таких как целлюлозы или также альгинаты, в принципе также пригодны другие полимеры, поддающиеся разбуханию, обладающие общим гидрофильным действием и требуемыми свойствами вязкости, которые используют во многих имеющихся в продаже препаратах, например гелях, пастах, мазях.

Возможно также использование гидрофобных полимерных матриксов, как правило, высокой вязкости, например, на основе полиакрилатов или полиуретанов, в которых заключены гидроколлоидные частицы, содержащие полисахариды, такие как карбоксиметил/этилцеллюлозы, желатин или пектины, которые включают активное соединение.

ЭПО стабилен в течение длительного периода более 30 суток в предпочтительных гелевых композициях согласно изобретению (фиг.1), тогда как содержание ЭПО в водном растворе ЭПО сравнимой концентрации (в 0,9% NaCl) уже падает до 80% после 20 суток.

Напротив, рана, которая пролечена ЭПО-содержащей композицией согласно изобретению, заживает примерно на 10-50%, предпочтительно на 20-40% быстрее по сравнению с композицией согласно изобретению без ЭПО. Так, например, заживление раны между 92 и 99% может быть достигнуто в результате реэпителизации после 4-8 суток ЭПО-содержащей композицией согласно изобретению, тогда как заживление раны композицией согласно изобретению без ЭПО составляет максимально только до 85-87% при прочих идентичных условиях.

Изобретение, таким образом, относится к:

- вязкой композиции, основанной по меньшей мере на одном гелеобразующем гидрофильном полимере, имеющим вязкость по меньшей мере 20000 мПа·с, который включает эритропоэтин или одно из его производных или аналогов, обладающих таким же биологическим действием (ЭПО), и способной к равномерному высвобождению последнего в гидрофильной окружающей среде,

- соответствующей вязкой композиции, которая имеет вязкость по меньшей мере 30000 мПа·с, предпочтительно 40000-60000 мПа·с,

- соответствующей вязкой композиции, которая предпочтительно содержит в качестве гидрофильного полимера производное целлюлозы, в частности полисахарид, выбранный из группы гидроксиалкилцеллюлоз и/или карбоксиалкилцеллюлоз, и гидрофобный полимерный матрикс на основе полиакрилата или полиуретана,

- гелеобразной или вязкой композиции, основанной по меньшей мере на одном полисахариде, поддающемся разбуханию, выбранном из группы гидроксиалкилцеллюлоз и/или карбоксиалкилцеллюлоз, который включает эритропоэтин или одно из его производных или аналогов, обладающих таким же биологическим действием (ЭПО),

- соответствующей композиции, которая может быть получена путем смешивания ЭПО в лиофилизированной, растворенной или суспендированной форме с полисахаридом, предварительно подвергнутым разбуханию,

- соответствующей композиции, в которой полностью разбухший полисахарид имеет вязкость 5000-100000 мПа·с, в частности 20000-50000 мПа·с,

- соответствующей композиции, в которой полисахарид(ы) используют в концентрации от 0,4 до 4% мас./мас., в частности, 2-3% мас./мас.,

- соответствующей композиции, в которой полисахарид представляет собой простой эфир целлюлозы и/или сложный эфир целлюлозы и выбран из одного или более чем одного члена группы, состоящей из:

- гидроксиэтилцеллюлозы,

- гидроксиметилцеллюлозы,

- карбоксиэтилцеллюлозы,

- карбоксиметилцеллюлозы.

- предпочтительной композиции, содержащей в качестве гелеобразующего вещества полимеризуемую гидроксиэтилцеллюлозу и/или карбоксиметилцеллюлозу,

- соответствующей композиции, которая содержит ЭПО в концентрации от 100 до 500 МЕ/г гелевой композиции, в частности от 150 до 300 МЕ/г гелевой композиции, предпочтительно 150 МЕ/г гелевой композиции,

- соответствующей композиции, которая содержит от 0,5 г до 5 г гелевой композиции/см² площади раны, предпочтительно от 1 г до 3 г гелевой композиции/см ² площади раны, в частности 1,0 г/см² площади раны,

- соответствующей композиции, которая в зависимости от количества используемого геля содержит количество ЭПО, которое должно соответствовать для площади раны примерно 100 см² системному введению примерно 50-2200 МЕ/кг массы тела (МТ, для стандартной массы 70 кг) или примерно 100-4500 МЕ/МТ для площади раны примерно 200 см², и примерно 150-6000 МЕ/МТ для площади раны примерно 300 см²,

- соответствующей композиции, которая содержит в зависимости от размера раны или площади раны (от 1 см² до 300 см²) количество ЭПО от примерно 50 до примерно 450000 ME, в среднем от примерно 500 до 300000 ME, предпочтительно от 1500 до 60000 ME, в частности от 3000 до 10000 ME,

- соответствующей композиции, которая дополнительно содержит по меньшей мере одно дополнительное активное соединение, которое предпочтительно обладает антибактериальным, антивирусным, фунгицидным или противовоспалительным действием, действует как ингибитор протеаз или иной необходимостью для заживления раны,

- соответствующей композиции, которая дополнительно содержит по меньшей мере один синтетический сополимер,

- соответствующей композиции, которая дополнительно содержит один или более чем один адъювант,

- соответствующей композиции, которая включена в твердый матрикс или на твердый матрикс носителя, который модулирует высвобождение активного соединения и, в частности, высвобождает ЭПО равномерно в раневой области травмированной кожи,

- соответствующей композиции, в которой твердый матрикс носителя представляет собой пластырь, фольгу, пленку, повязку, марлю, но, в частности, пластырь трехмерной структуры, который способен к стабилизации и защите самой композиции,

- фармацевтическому набору из частей, включающему по меньшей мере два упаковочных устройства, где первое устройство содержит по меньшей мере один полимер, поддающийся разбуханию, а второе устройство содержит лиофилизированный ЭПО или его соответствующее производное.

Композиции согласно изобретению можно применять для местного и локального лечения поврежденной кожи и кожных заболеваний различной этиологии у людей и животных. Композиции согласно изобретению можно, в частности, также применять в стоматологии и/или для улучшения заживления раны в общей медицине или ветеринарии. Композиции согласно изобретению можно также применять в местных и локальных терапиях послеоперационных или посттравматических раневых инфекций и ожогов, при послеоперационном сепсисе, при воспаленных и/или инфицированных язвах, при хронических ишемических ранах, при острых и хронических кожных инфекциях или дерматозах, при акне, розацеа, псориазе или при изъязвлениях слизистой оболочки или повреждениях слизистой оболочки, таких как раны слизистой оболочки и кости, в частности, в области челюстей и зубов.

Изобретение, таким образом, также относится к применению композиции, описанной выше и ниже, для получения лекарства для местного и локального лечения и заживления ран посредством реэпителизации кожи, в частности для лечения и заживления ожоговых ран, ран слизистой оболочки и кости и ран в области зубов.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ:

Фиг.1: Исследование стабильности ЭПО-содержащих препаратов

Как видно на фиг.1, содержание ЭПО варьирует в диапазоне 90-100% номинального содержания (150 Е/мл) в течение исследования, что означает, что препарат, а также соответствующий гидрогель можно принять как стабильный в течение периода 4 недели после приготовления.

Напротив, значительное разложение ЭПО было очевидно в растворе, содержащем хлорид натрия (0,9% мас./мас. NaCl в воде, содержащей 40 Е/мл ЭПО), за период эксперимента, что означает, что только от 20 до 30% номинального содержания было обнаружено после трех и четырех недель.

Фиг.2:

На этой фигуре показана реэпителизация кожи в % у травмированных крыс, которые были обработаны препаратом согласно изобретению (3% карбоксиметилцеллюлозы) без ЭПО (контроль/плацебо, гель F - левый столбец) и с ЭПО (примерно 0,3 г геля: 150 МЕ/г геля = примерно 200 МЕ/МТ, гель Е - правый столбец) в течение 4 суток.

Результаты представлены в табличной форме (верхняя картинка) и графически (нижняя картинка).

Фиг.3:

На этой фигуре показана реэпителизация кожи в % у травмированных крыс, которые были обработаны препаратом согласно изобретению (3% карбоксиметилцеллюлозы) без ЭПО (контроль/плацебо, гель F - левый столбец) и с ЭПО (примерно 0,3 г геля: 150 МЕ/г геля = примерно 200 МЕ/МТ, гель Е - правый столбец) в течение 8 суток. Повязку/пластырь меняли после четырех суток и рану обрабатывали свежим гелем. После обработки композицией согласно изобретению в течение 8 суток кожа практически на 100% восстановлена.

Результаты представлены в табличной форме (верхняя картинка) и графически (нижняя картинка).

Фиг.4:

На фиг.4 изображено гистологическое исследование заживления раны после обработки гелем, как описано в примере 8, в течение 8 суток. Клетки, которые экспрессируют белок CD31 и нестин, визуализированы соответствующим окрашиванием.

Результаты показывают, что толщина слоя эпителия значительно увеличивается при обработке ЭПО по сравнению с контрольной композицией. Кроме того, видно, что новообразование эпителия по существу не коррелирует с увеличением числа CD31-положительных (окрашенных) клеток, но в определенной степени коррелирует с нестин-положительными клетками.

Фиг.5:

Фиг.5 представляет собой фотографическое доказательство заживления хронической ишемической язвы третьей степени наружной лодыжки у пациента с диабетом после локальной обработки три раза композицией согласно изобретению, содержащей 3000 ME ЭПО (суммарно 9000 ME). На нижней картинке показан курс после 15 суток (Пример 16).

Фиг.6:

На фиг.6 представлена фотография процесса заживления термической раны после удаления расщепленного кожного трансплантата у пациента в результате лечения однократным введением 3000 ME ЭПО в гидрогеле согласно изобретению (Пример 17).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Обнаружено, что быстрое закрытие дефекта может быть достигнуто в случае регенерации кожи, например, после ожоговой травмы, ожога горячей жидкостью или паром или ран, индуцированных заболеванием, путем местно применяемого ЭПО, в частности, в форме гелеобразной композиции, более подробно описанной выше и ниже, в частности гидрогеля на основе целлюлозы. Кроме того, реэпителизация области раны существенно стимулирована посредством местно вводимого ЭПО. Об этом свидетельствует большая толщина слоя эпителия (фиг.4). Это может происходить только в том случае, если образование паренхимных компонентов кожи также стимулировано по возможности быстро.

Кроме того, можно наблюдать, что образование сосудистой сети также инициировано ЭПО, применяемым местно, но это связано с локальным образованием паренхимы, в противоположность известной теории, что заживление раны, вызванное ЭПО, прежде всего приводится в движение в результате стимуляции клеток, образующих кровеносные сосуды, то есть ЭПО исключительно вызывает образование кровеносных сосудов, и образование паренхимной ткани начинается косвенно, и в лучшем случае с задержкой во времени, как следствие стимуляции ЭПО эндотелиальных клеток и их клеток-предшественников.

Однако результаты настоящего изобретения ясно показывают, что образование клеток кровеносных сосудов координировано по меньшей мере одновременно с локализованным образованием ткани.

Кроме того, в соответствии с изобретением можно наблюдать, что местное применение ЭПО вызывает обнаружение в повышенной степени тканеспецифичных клеток-предшественников, которые являются нестин-положительными, в пограничной области нового эпидермиса. Таким образом, в этой области стимулированы нейрональные стволовые клетки, что объясняет улучшенную чувствительность кожи в процессе заживления раны.

Для композиций согласно изобретению предпочтительно применяют рекомбинантный эритропоэтин, который имеется в продаже. Однако в соответствии с изобретением также возможно применение производных ЭПО, которые разработаны в целях продления времени полужизни активного соединения в крови или в сыворотке по сравнению с нативным ЭПО. Производные ЭПО данного типа можно также применять для местного нанесения, хотя это не является абсолютно необходимым, поскольку гелеобразные композиции согласно изобретению проявляют их собственное специфичное защитное действие по сравнению с нормальным ЭПО. Они включают, например, пэгилированный ЭПО, ЭПО с модифицированным паттерном гликозилирования (например, Aranesp®), силилированный ЭПО или ЭПО, который гибридизован с другими полипептидами или фрагментами иммуноглобулинов (например, с Fc участком антитела) (известный, например, из WO 02/49673 или WO 01/02017). Кроме того, можно также применять биологически активные синтетические пептидные миметики ЭПО (как показано, например, в WO 96/40749, WO 96/40772, WO 01/38342, WO 01/091780, WO 2004/101611, WO 2004/100997, WO 2004/101600, WO 2004/101606 и WO 2006/050959). Поскольку эти миметики обычно имеют значительно более короткие аминокислотные цепи и, следовательно, как правило, претерпевают более быстрый распад, они претерпевают необходимую и соответствующую стабилизацию композициями согласно изобретению.

В случае известного системного применения ЭПО обычно применяют между 150 и 300 МЕ/кг массы тела (МТ) активного соединения на дозу. При значительно более высоких дозах нежелательные побочные эффекты становятся преобладающими. В случае взрослого человека (70 кг) это соответствует между 10500 и 31500 ME ЭПО/доза. Это, в свою очередь, соответствует примерно от 80 до 250 мкг ЭПО/доза (13000 ME ~ 100 мкг ЭПО).

В случае местного применения согласно изобретению для повреждений кожи можно применять значительно более высокие количества ЭПО на дозу посредством композиций или гелей в соответствии с изобретением без значительных встречающихся побочных эффектов. Таким образом, для ран соответствующего размера (например, 300 см²) можно применять количества ЭПО, которые соответствовали бы примерно 6500 МЕ/кг массы тела (МТ) в случае системного введения. Такое количество ЭПО, применяемого системно, было бы уже не переносимо. Необходимые суммарные количества ЭПО значительно варьируют в зависимости от размера раны и количества геля на площадь раны и содержания ЭПО/г геля.

Как правило, доза может быть рассмотрена в соответствии с изобретением как количество ЭПО, которое необходимо для однократного лечения раны (различного размера). Поскольку рана определяется не только ее площадью, но также, где пригодно, ее глубиной, доза необходимого активного соединения может варьировать очень значительно, поскольку рану предпочтительно заполняют композицией согласно изобретению.

Если массу тела взрослого человека принимают за 70 кг, получают, например, приведенные ниже значения для заживления раны:

50-500 МЕ/МТ 3500-35000 ME ЭПО на дозу или рану и размер раны;

50-150 МЕ/МТ 3500-10500 ME ЭПО на дозу или рану и размер раны;

100-500 МЕ/МТ 7500-35000 ME ЭПО на дозу или рану и размер раны;

150-300 МЕ/МТ 10500-21000 ME ЭПО на дозу или рану и размер раны.

Размеры раны и концентрации геля, которые соответствуют этим значениям, представлены в таблице 1.

Низкие единицы ЭПО предпочтительно применяют для небольших ран, имеющих площадь раны примерно 5-20 см², хотя верхние значения используют для больших ран, имеющих площадь примерно 100 см ² или более. В случае ран, имеющих площадь, например, 10 см², можно применять количества ЭПО между примерно 500 и 15000 ME в соответствии с изобретением. В случае ран, имеющих площадь, например, 100 см², необходимо примерно 5000-150000 ME ЭПО. Это означает, что в среднем примерно 50-1500 ME ЭПО/см ² площади раны, предпочтительно 75-450 ME ЭПО/см² следует наносить на рану в соответствии с изобретением для реэпителизации и закрытия дефекта раны. Применяемые количества могут быть, конечно, выше или ниже указанных значений в определенных условиях.

Вышеупомянутые значения основаны на содержании ЭПО 100-500 МЕ/г гелевой композиции, в частности 100-300 МЕ/г гелевой композиции, предпочтительно 150-200 МЕ/г гелевой композиции. В подробностях приведенные ниже интервалы количеств ЭПО применяют в соответствии с изобретением на грамм основы композиции:

100 МЕ/г геля - 300 МЕ/г геля, 100 МЕ/г геля - 150 МЕ/г геля, 100 МЕ/г геля - 200 МЕ/г геля, 100 МЕ/г геля - 250 МЕ/г геля, 150 МЕ/г геля - 200 МЕ/г геля, 150 МЕ/г геля - 250 МЕ/г геля, 150 МЕ/г геля - 300 МЕ/г геля, 200 МЕ/г геля - 250 МЕ/г геля, 250 МЕ/г геля - 300 МЕ/г геля.

Как правило, от примерно 0,5 до примерно 5 г, предпочтительно 1-3 г, в частности 1 г геля согласно изобретению применяют на квадратный сантиметр (см²) площади раны у взрослого человека в зависимости от повреждения. Однако применяемые количества могут быть выше или ниже этих концентраций. В частности, применяют приведенные ниже интервалы концентрации геля: 0,5 г геля/см ² - 2,0 г геля/см², 0,5 г геля/см² - 1,0 г геля/см², 1,0 г геля/см² - 2,0 г геля/см².

Композиции согласно изобретению, таким образом, содержат, например, примерно приведенные ниже количества ЭПО (ME) или количества ЭПО, указанные в таблице 1, на дозу, в соответствии с размером раны и количеством ЭПО на грамм основы композиции: 2000 ME, 3000 ME, 4000 ME, 5000 ME, 6000 ME, 7000 ME, 8000 ME, 9000 ME, 10000 ME, 12000 ME, 15000 ME, 20000 ME, 25000 ME, 30000 ME, 35000 ME, 40000 ME, 45000 ME, 55000 ME, 60000 ME, 70000 ME, 80000 ME, 90000 ME, 100000 ME, 120000 ME, 135000 ME, 150000 ME и 180000 ME.

Таблица 1
(А) 0,5 г геля/см2 площади раны
		ME ЭПО	ME ЭПО	ME ЭПО	ME ЭПО	ME ЭПО
см2 площади раны	Количество геля (г)	(100 МЕ/г геля)	(150 МЕ/г геля)	(200 МЕ/г геля)	(300 МЕ/г геля)	(500 МЕ/г геля)
1	0,5	50	75	100	150	250
10	5	500	750	1000	1500	2500
100	50	5000	7500	10000	15000	25000
200	100	10000	15000	20000	30000	50000
300	150	15000	22500	30000	45000	75000
(В) 1 г геля/см2 площади раны
		МЕ ЭПО	МЕ ЭПО	МЕ ЭПО	МЕ ЭПО	МЕ ЭПО
см2 площади раны	Количество геля (г)	(100 МЕ/г геля)	(150 МЕ/г геля)	(200 МЕ/г геля)	(300 МЕ/г геля)	(500 МЕ/г геля)
1	1	100	150	200	300	500
10	10	1000	1500	2000	3000	5000
100	100	10000	15000	20000	30000	50000
200	200	20000	30000	40000	60000	100000
300	300	30000	45000	60000	90000	150000
(С) 2 г геля/см2 площади раны
		МЕ ЭПО	МЕ ЭПО	МЕ ЭПО	МЕ ЭПО	МЕ ЭПО
см2 площади раны	Количество геля (г)	(100 МЕ/г геля)	(150 МЕ/г геля)	(200 МЕ/г геля)	(300 МЕ/г геля)	(500 МЕ/г геля)
1	2	200	300	400	600	1000
10	20	2000	3000	4000	6000	10000
100	200	20000	30000	40000	60000	100000
200	400	40000	60000	80000	120000	200000
300	600	60000	90000	120000	180000	300000
(D) 3 г геля/см2 площади раны
		МЕ ЭПО	МЕ ЭПО	МЕ ЭПО	МЕ ЭПО	МЕ ЭПО
см2 площади раны	Количество геля (г)	(100 МЕ/г геля)	(150 МЕ/г геля)	(200 МЕ/г геля)	(300 МЕ/г геля)	(500 МЕ/г геля)
1	3	300	450	600	900	1500
10	30	3000	4500	6000	9000	15,000
100	300	30000	45000	60000	90000	150000
200	600	60000	90000	120000	180000	300000
300	900	90000	135000	180000	270000	450000

В соответствии с изобретением новые композиции содержат по меньшей мере один гелеобразующий вязкий гидрофильный полимер, предпочтительно производное целлюлозы, предпочтительно полисахарид, либо альгинаты или их производные, хитин или его производные или его соли, либо крахмал. Происхождение гелеобразующих полисахаридов при этом не имеет значения, то есть эти гелеобразующие полисахариды могут иметь растительное или животное происхождение либо получены синтетическим путем. Возможно также использование полисахаридов, которые имеют растительное или животное происхождение и, кроме того, модифицированы путем химического синтеза.

Производные целлюлозы предпочтительно используют для гелей или композиций согласно изобретению. Группа производных целлюлозы в связи с настоящим изобретением включает, в частности, простые эфиры целлюлозы и сложные эфиры целлюлозы и их соли. Простые эфиры целлюлозы, используемые в данном изобретении, представляют собой, в частности, гидроксиалкилцеллюлозы, такие как, например, гидроксиметилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза или гидроксибутилцеллюлоза, в частности гидроксиметилцеллюлоза или гидроксиэтилцеллюлоза. Сложные эфиры целлюлозы, используемые в данном изобретении, представляют собой, в частности, карбоксиалкилцеллюлозу, в частности, карбоксиметилцеллюлозу, карбоксиэтилцеллюлозу, карбоксипропилцеллюлозу или карбоксибутилцеллюлозу, но предпочтительно карбоксиметилцеллюлозу или карбоксиэтилцеллюлозу, где наиболее предпочтительна карбоксиметилцеллюлоза.

Согласно следующей форме осуществления композиция в соответствии с изобретением может также содержать по меньшей мере два различных гелеобразующих полисахарида из упомянутых выше, в частности производные целлюлозы, упомянутые выше. Доказано, что особенно предпочтительно использование в данном изобретении по меньшей мере одного соединения из класса простых эфиров целлюлозы и по меньшей мере одного соединения из класса сложных эфиров целлюлозы. Особое предпочтение в данном случае отдано композиции/гидрогелю, который содержит в качестве гелеобразующих полисахаридов гидроксиалкилцеллюлозу и карбоксиалкилцеллюлозу, в частности гидроксиэтилцеллюлозу и карбоксиметилцеллюлозу.

Кроме того, гель согласно изобретению может, в частности, содержать в качестве гелеобразующего полисахарида по меньшей мере одно водорастворимое производное целлюлозы. Эти производные отличаются тем фактом, что не образуют частиц, поддающихся разбуханию, внутри геля, что, в свою очередь, образует в результате гель очень высокой гомогенности. Кроме того, гель, содержащий водорастворимый полисахарид, проявляет особенно хорошее распределение при нанесении на рану, кроме того, образуя особенно гладкую поверхность, и может быть особенно хорошо моделируемым. Водорастворимые производные целлюлозы, которые не являются сшитыми, особенно пригодны в данном изобретении.

Композиции согласно изобретению могут, кроме того, содержать структурообразователь или соединение, моделирующее вязкость. Полиакриловая кислота и ее соли и, в частности, сшитые полиакрилаты особенно пригодны для этой цели. Примерами пригодных акрилатов данного типа являются: (поли)метакрилат, (поли)метилметакрилат, полиакриламид, (поли)этоксиэтилметакрилат. Эти производные полиакриловой кислоты обладают тем дополнительным преимуществом, что они способны принимать значительную долю их собственной массы в воде. Комбинация этих производных акриловой кислоты по меньшей мере с одним гелеобразующим полисахаридом, таким образом, обеспечивает специфичный препарат геля, способность которого к поглощению воды и к высвобождению воды можно регулировать. Соотношение между производным целлюлозы и производным акриловой кислоты в композиции может составлять между 20:1 и 1:1, но предпочтительно между 10:1 и 2:1.

Кроме того, композиция согласно изобретению может быть основана на вязком полимере, который в целом обладает гидрофильным действием и который имеет гидрофобный носитель или поддерживающий матрикс, например, содержащий полиуретан или полиакрилат, в котором заключены указанные полисахариды, включающие активное соединение, такие как, например, карбоксиалкилцеллюлозы. Гидрогели данного типа особенно пригодны для заживления раны, поскольку они поддерживают рану влажной, создают оптимальную окружающую среду для аутолитической обработки раны и накапливают секреции раны во вторичной повязке. Их примером является гидрогель Varihesive®.

Как правило, также возможно включение других гидрофобных полимерных главных цепей или поддерживающих структур, в которых заключены гидроколлоидные частицы полисахаридов, как указано выше.

В принципе, все основы гелей и мазей, основанные на полимерах, в частности, построенных на основе полисахаридов, которые, как доказано, особенно пригодны для заживления раны и имеются в продаже, пригодны для композиции согласно изобретению, насколько обеспечено однородное медленное высвобождение ЭПО за счет поддержания значений вязкости, как описано выше и ниже.

Композиции согласно изобретению могут, кроме того, дополнительно содержать электролиты. Пригодными электролитами в связи с настоящим изобретением являются соединения, которые способны к диссоциации на ионы, в частности, при растворении в воде и построены из одно-, двух- и/или трехвалентных ионов. Эти электролиты могут находиться, например, в форме неорганических или органических солей и отличаются от любых полимеров, имеющих ионный характер, которые могут присутствовать в композиции, особенно пригодны в этой связи хлориды, йодиды, сульфаты, гидросульфаты, карбонаты, гидрокарбонаты, фосфаты, дигидрофосфаты или гидрофосфаты щелочных и щелочноземельных металлов, в частности хлорид натрия, хлорид калия и хлорид кальция. Эти смеси электролитов особенно хорошо имитируют смесь электролитов в сыворотке раны, высвобождаемой раной. Эти композиции согласно изобретению, содержащие электролиты, таким образом, обеспечивают рану средой, которая до определенной степени способствует заживлению раны.

В следующей альтернативной форме осуществления изобретения композиция согласно изобретению дополнительно содержит полиол. Этот полиол в высокой степени пригоден в качестве донора влаги и, таким образом, представляет собой компонент ухода за кожей, окружающей рану. особенно пригодны для этой цели полиолы, которые могут быть выбраны, например, из группы, состоящей из: глицерина (глицерола), гликоля, пропиленгликоля, полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, полиэтилен-пропиленгликоля или их смесей. В частности, полиол, используемый в настоящем гидрогеле, может представлять собой глицерин или полиэтиленгликоль и их смеси в количествах между 0,5% и 10% (мас./мас.) на основе всего геля.

Композиции или гели, в частности гидрогели, согласно изобретению должны обладать вязкостью, которая пригодна для оптимальной защиты ЭПО, но в то же время обеспечивать возможность высвобождения активного соединения в ране в достаточном количестве и достаточно быстро, чтобы оно прежде не повергалось метаболизму.

Неожиданно обнаружено, что это оптимально обеспечено только композициями, которые обладают относительно высокой вязкостью, которая достигается массовой долей полимера, поддающегося разбуханию, в геле в целом, предпочтительно производных целлюлозы, по меньшей мере 1,5%, но предпочтительно 2-4%, особенно предпочтительно 2,5-3,5%, в частности 3% или примерно 3%. Гели, обладающие такой вязкостью, обычно редко используют для медицинских целей, поскольку их обычно невозможно обработать настолько хорошо, чтобы иметь содержание гелеобразователя 1-2%. Как упомянуто выше, использование, например, акрилатов обеспечивает обрабатываемость гелей, подлежащих улучшению.

Гели или композиции согласно изобретению на основе гидрофильных полимеров, таких как, например, простые эфиры целлюлозы и/или сложные эфиры целлюлозы, например карбоксиалкилцеллюлозы, таким образом, обладают динамической вязкостью от 5000 до 100000 мПа·с, предпочтительно более чем 20000 мПа·с, в частности от 20000 до 70000 мПа·с и очень конкретно от 40000 до 60000 мПа·с (измеренной в модели Болина, реометр CSR-10, конический шпиндель 4°/0,40 мм, осциллометрическое измерение, Т=22-25°С). Гидрогель данного типа может распределяться достаточно хорошо и однородно на ране и в ране, обладает хорошей когерентностью даже при поглощении экссудата раны и не вытекает из раны, подлежащей лечению.

Предложено, что предпочтительные ЭПО-содержащие композиции или гели согласно изобретению имеют приведенную ниже композицию: по меньшей мере 70% мас./мас. воды и 1,5-6,0% мас./мас. гелеобразующего полисахарида, предпочтительно по меньшей мере одного производного целлюлозы, в частности карбоксиметилцеллюлозы и/или гидроксиэтилцеллюлозы, и необязательно 0,1-10% мас./мас. производного акриловой кислоты и/или 1-20% полиола, предпочтительно 1-5% мас./мас. глицерина, и/или 0,1-5% мас./мас. электролита.

Композиции согласно изобретению могут необязательно содержать адъюванты, которые как таковые известны для получения гелей, включая пригодные консерванты.

Композиции или гели согласно изобретению могут также содержать другие активные соединения, которые необходимы как таковые для заживления раны. Это особенно целесообразно, если, например, произошла бактериальная, вирусная или грибковая инфекция либо нужна профилактика против таких инфекций. Соответствующие антибиотики, противогрибковые средства или также противовоспалительные средства, которые пригодны для этой цели, описаны на предшествующем уровне техники. В частности, здесь пригодны активные соединения, которые можно применять местно. Примерами антибиотиков, которые можно применять местно, являются тетрациклины или пенициллины, или также эритромицин, бацитрацин, тиротрицин, колистин и полимиксин В или аминогликозиды, такие как неомицин, канамицин и паромицин или мупироцин.

В конкретной форме осуществления по меньшей мере один ингибитор протеаз, который предназначен для ингибирования протеиназ, которые в огромной степени встречаются в секреции раны, добавляют в композицию согласно изобретению. Особенно пригодным ингибитором протеаз в соответствии с изобретением является апротинин, который способен к ингибированию секреции провоспалительных цитокинов, которая происходит в ране. Неожиданно обнаружено, что ЭПО особенно эффективен для заживления раны при местном введении в присутствии апротинина.

Кроме того, гели или композиции согласно изобретению могут также содержать дезинфицирующие средства, такие как, например, повидон-йод или тому подобное.

Кроме ЭПО-содержащей композиции согласно изобретению как таковой настоящее изобретение также относится к повязке на рану, которая содержит медицинский материал носителя и композицию или гель описанного типа. Например, материал носителя, используемый здесь, включает нетканые или трикотажные или тканые текстильные изделия, изготовленные из натуральных или синтетических волокнистых материалов, но также пленочные покрытия, например, в форме пластыря, покрытого методом распыления. Здесь медицинский материал носителя покрыт или пропитан гелем или гидрогелем с одной или более чем одной стороны.

Весьма пригодная, в частности, повязка на рану может быть предложена в форме специального пластыря, который включает активное соединение ЭПО в особенно оптимизированной форме и высвобождает его в рану.

Пластырь этого типа подробно описан в ЕР 080119852 и включает матрикс-носитель, который содержит активное соединение (соединения), где матрикс-носитель имеет приведенную ниже структуру:

(i) области или структуры в форме одного или более чем одного углубления, служащего в качестве контейнера для лекарства, и (ii) области или структуры в форме одного или более чем одного углубления, служащего в качестве структуры в виде каналов, которые служат для поглощения и дренажа секреций раны и/или аэрации и/или местного введения дополнительных активных соединений и/или клеток, которые способствуют заживлению кожи, где (а) по меньшей мере одна область в соответствии с (i) примыкает по меньшей мере к одной области в соответствии с (ii), (б) области (i) и (ii) герметично закрыты на стороне, обращенной кнаружи от раны, (в) области (i) и (ii) открыты или по меньшей мере проницаемы для активных соединений, секреций раны, дополнительных активных соединений/клеток на стороне, обращенной к ране, (г) области (i) и (ii) в форме углублений устроены на плоскости поверхности пластыря, и (д) углубления в областях (ii) имеют по меньшей мере одно отверстие или соединение для шприца или всасывающего/подающего устройства, которое обеспечивает либо дренаж секреций раны, которые накапливаются в углублениях, с образованием пониженного давления в пластыре, и/или необязательно нанесение дополнительных активных соединений.

Соответствующий ЭПО-содержащий пластырь может быть, кроме того, сконструирован таким образом, что в случае мокнущей кожи или ран либо кожи или ран, которые дают секреции раны (е) углубления в областях (ii) дополнительно имеют средства дренажа, которые обеспечивают дренаж секреций раны, которые накопились в углублениях. В этом случае углубления в областях (ii) могут представлять собой каналы, которые соединены друг с другом. Углубления в областях (i) могут иметь желобообразную форму, где открытая сторона желоба обращена к ране, и желоба имеют прямоугольную, квадратную, шестиугольную/в форме сот или округлую площадь основания. Углубления в областях (i) отделены друг от друга мостиками материала матрикса-носителя. Сами эти мостики могут иметь структуры в виде каналов, где по меньшей мере некоторые из них соединены друг с другом, и которые служат для дренажа секреций раны, и/или аэрации, и/или подачи дополнительных активных соединений/клеток.

Кроме того, углубления в областях (i), служащие в качестве депо для лекарства, представляют собой субструктуры, организованные в группы, которые отделены друг от друга мостиками материала матрикса-носителя. Эти группы доменов имеют любую желаемую прямоугольную, квадратную, шестиугольную/в форме сот или округлую форму площади основания, в частности квадратную или прямоугольную форму площади основания, где форма площади основания может быть, если желательно, идентичной или отличной от формы площади основания субструктур областей (i). Здесь может быть предложено, чтобы группа доменов области (i) примыкала по меньшей мере к одному углублению области (ii) и чтобы, если желательно, две группы доменов областей (i) были отделены друг от друга углублением области (ii).

Композиции/гели согласно изобретению, которые необязательно наносят на повязку для раны, которая в принципе известна и имеется в продаже или, например, подобна пластырю, описанному выше, можно менять каждые 12, 24, 48 или 72 часа, предпочтительно каждые 48 часов, что может быть, в основном, необходимо вследствие других факторов и обстоятельств, таких как, например, образование секреций раны, возникающее кровотечение или инфекции, которые нужно лечить. Однако исключительно из соображений стабильности и активности активного соединения ЭПО внутри основы композиции согласно изобретению нет необходимости менять повязку или пластырь до полного заживления раны.

Гели согласно изобретению можно готовить способами, которые сами по себе известны. Один из этих способов более подробно описан в примерах.

ЭПО-содержащие гели согласно изобретению можно, как указано выше, применять, в частности, при лечении ран, в частности, кожи, слизистой оболочки, в области зубов, в случае повреждений слизистой оболочки/челюсти в полости рта или в случае ожогов кожи или ожогов кожи горячей жидкостью или паром, либо кожных заболеваний, сопровождающихся хроническими ранами. Раны кожи могут быть вызваны, например, порезами, проколами, сдавливанием, укусами или огнестрельными ранениями либо могут возникать как неизбежное последствие операций или удаления зубов. Кроме того, различные заболевания могут вызывать раны на коже или поверхностные раны либо образование открытых язв. Относительно широкие раны также возникают в случае трансплантатов органов или ампутаций, и необходимо обеспечивать терапевтическую помощь местно и локально.

В области зубов относительно небольшие раны могут также возникать в случае кариозного воспаления и периодонтита, и их можно успешно лечить композициями/гелями согласно изобретению. Если поверхность эмали зуба повреждена, бактерии проникают дальше в нижележащий дентин. Отростки пульпы присутствуют в радиальных трубочках дентина, что означает, что затем происходит частичное или полное инфицирование и, следовательно, воспаление пульпы. Если не осуществлять лечение, последствием является отмирание ткани пульпы (некроз) и бактериальный распад (гангрена). Если гангренозные массы не удалить, последствием является воспаление снаружи верхушки корня. Могут развиваться гранулемы, кисты, образование фистул или абсцессы. ЭПО или ЭПО-содержащий гель можно успешно применять на каждой из этих стадий, предпочтительно после соответствующего антибактериального лечения.

Композиции или ЭПО-содержащие гели согласно изобретению особенно пригодны для лечения сравнительно глубоких ран, и их можно в высшей степени хорошо применять в качестве заполнителей раны. Так, например, глубокие кожные язвы, которые очень часто сильно мокнут, можно лечить гелями согласно изобретению. Относительно высокая вязкость геля предотвращает вытекание жидкости из раны или по меньшей мере уменьшает его. Кроме того, однако, сухие раны, такие как, например, сухие трофические язвы, можно также лечить настоящим гелем. В данном случае настоящий гель проявляет свою способность к снабжению раны жидкостью и к обеспечению удаления нежелательных веществ, отложений и некрозов путем мягкой обработки раны. Другие типы раны, для которых можно применять композицию согласно изобретению, включают, но не ограничены ими, пролежни стадии I, II, III (намины), трофические язвы (язву голени, поражение голени), синдром диабетической стопы, кожные язвы, кровоточащие язвы, ожоги первой и второй степени, царапины и хронические раны.

Наконец, изобретение относится к набору из частей, который включает по меньшей мере две отдельных упаковки, где первая упаковка включает материалы гидрогеля или ингредиенты гидрогеля, такие как полисахаридный и/или полимерный (гидрофобный) поддерживающий матрикс, а вторая упаковка включает активное соединение ЭПО в виде стабильного лиофилизата. Набор из частей может также включать ингредиенты основы композиции, если целесообразно, в различных упаковках. Упаковка, содержащая водный ингредиент, соответствующая количеству, в котором можно растворять или суспендировать твердые ингредиенты, может, подобным образом, составлять дополнительный компонент набора из частей согласно изобретению, то есть фармацевтический набор может включать дополнительное упаковочное устройство, которое содержит растворитель, необходимый для разбухания/полимеризации (предпочтительно воду или агенты, содержащие воду). Набор согласно изобретению может включать полимер, поддающийся разбуханию, в форме порошка или в форме, предварительно подвергнутой разбуханию, где, в последнем случае, вязкость полимера, предварительно подвергнутого разбуханию, следует поддерживать достаточно низкой (предпочтительно ниже 5000 мПа·с), что обеспечивает однородное смешивание с активным соединением ЭПО из второго упаковочного устройства. После добавления ЭПО полимер-носитель/гель можно подвергать окончательному разбуханию для дополнения желаемой вязкости.

Индивидуальные отдельные упаковки могут быть также физически связаны друг с другом таким образом, что их содержимое можно смешивать друг с другом с помощью простых механизмов, таких как прокол, пробивание отверстия, продавливание, разрыв или тому подобное, например, в форме смешанной системы укупорки. Таким образом, возможно замедлить добавление, в частности, активного соединения ЭПО, которое имеет очень длительный срок хранения в лиофилизированной форме, с задержкой его активности, к еще не полностью полимеризованному гелю или основе композиции до приготовления свежего геля низкой вязкости, предварительно подвергнутого разбуханию, в соответствии с изобретением непосредственно перед нанесением на рану, что означает, что не может произойти потерь активности, как может быть в случае, при некоторых обстоятельствах, в композициях, содержащих активное соединение, которые с самого начала являются полностью готовыми.

Приведенные ниже примеры предназначены для более подробного описания изобретения, но никоим образом не ограничивают его. В частности, специалист в данной области техники должен быть способен при желании обобщить информацию из этих примеров с помощью своих общих познаний.

Кроме того, вещества, указанные в примерах, включая их параметры, свойства, физические количества, данные и конкретные описанные способы, специалист в данной области техники, если не указано иное и не запрещено смысловыми или техническими/научными соображениями, также должен быть способен обобщить и применить в другой связи, чем указано в примерах, которые следует рассматривать исключительно как иллюстративные.

ПРИМЕРЫ

Пример 1:

Эритропоэтин (ЭПО) используют в форме готового лекарства (NeoRecormon 10,000 ME, порошок и растворитель для приготовления инъекционного раствора в картриджах, партия МН68260 08, PZN 742 914 3, Roche Reg. Ltd., Welwyn Garden City, UK).

Активное соединение преобразуют в предварительно стерилизуемый препарат в асептических условиях, используя приведенные ниже гелеобразующие вещества:

- Гидроксиэтилцеллюлоза Ph. Eur. 5.1 (торговое название: Гидроксиэтилцеллюлоза 250 НХ Pharm, партия 06E29-N01, Fagron, D-Barsbüttel)

- Кармеллоза натрия/карбоксиметилцеллюлоза Ph. Eur. 5.0 (торговое название Tylopur C600, партия 516 762 65, Caelo, D-Hilden)

- Метилцеллюлоза/гидроксипропилметилцеллюлоза USP (торговое название Metolose 90 SH-100, партия 206314, Shin-Etsu, D-Mülheim)

- Повидон Ph. Eur. 5.0 (торговое название Kollidön 25, партия 74-0915, BASF, D-Ludwigshafen)

- Varihesive®, Convatec, Varihesive E® представляет собой гидроколлоидную повязку. Она состоит с внутренней стороны (лежащей на ране) из гидроколлоидного слоя на основе полисахарида, поддающегося разбуханию, который заключен в клеящем полимерном матриксе, а с наружной стороны из полиуретановой пены, покрытой пленкой.

Кроме воды для инъекционных целей в качестве наполнителя (Ph. Eur. 5.0), глицерин (85% или безводный, партия 058 006 2, Fisher Scientific, Loughborough, UK) используют в качестве адъюванта. Первая упаковка, используемая для размещения композиций, представляет собой инъекционные флаконы Fiolax, стекло типа I (Münnerstädter Glaswarenfabrik GmbH, D-Münnerstadt). Они закрыты 20 мм герметизирующей мембраной Pharma-Fix и укупорены 21 мм металлическими укупорочными крышками (то и другое от фирмы VWR, D-Hannover). Исследования высвобождения проводят, используя органотипические модели кожи, получение, культивирование и использование которых проводили в соответствии с приведенной ниже ссылкой: С.Hoffmann, С.С.Müller-Goymann, "Use of artificial skin constructs in permeation studies of clindamycin phosphate", Pharmazie 60 (2005) 350-353.

Пример 2: Композиция гидрогелей, не содержащих активное соединение

Исследуемое гелеобразующее вещество взвешивают в тарированную ступку в условиях низкого содержания микроорганизмов и измельчают с нужным количеством глицерина. После добавления воды для инъекционных целей в качестве наполнителя порциями препарату дают возможность разбухнуть в течение по меньшей мере 2 часов, после чего испарившуюся воду замещают и гидрогель гомогенизируют в ступке. Гидрогель переносят в инъекционный флакон, который стерилизован горячим воздухом, порциями по 3,3 г, которые можно переносить в зависимости от консистенции препарата путем вытягивания с помощью шприца или путем переноса в контейнер Unguator и последующего распределения с помощью присоединенного аппликатора Unguator (то и другое от фирмы Gako Konietzko GmbH, D-Bamberg). Затем герметично закрытый инъекционный флакон стерилизуют с помощью насыщенного горячего пара в стандартных условиях Европейской Фармакопеи.

Пример 3: Оценка реологических свойств гидрогелей, не содержащих активного соединения

Чтобы иметь возможность оценить термическое разложение гелеобразующих веществ в процессе автоклавирования, стерилизованные гидрогели оценивают визуально с нестерилизованными образцами и измеряют в вискозиметре с конусом-плитой (реометр GVO, Bohlin Instruments, Cirencester, GB) при температуре 20,0°С и углом верхушки конуса 1°. Конечное содержание гелеобразующего вещества определяют в соответствии с терапевтическими требованиями изготовления композиции.

Пример 4: Приготовление ЭПО-содержащей гелеобразной композиции

В каждом случае 500 ME ЭПО впрыскивают в охлажденный и предварительно стерилизованный гидрогель из восстановленного раствора ЭПО 10000 ME в боксе; с этой целью используют Reco-Pen (Roche Diagnostics GmbH, D-Mannheim), который выпускает требуемый раствор лекарства через присоединенную 12 мм универсальную иглу Clickfine (Ypsomed, D-Sulzbach). С учетом объема ЭПО 50 мкл, переносимого на 500 ME ЭПО, получают содержание активного соединения в препарате 150 МЕ/г. Чтобы иметь возможность обеспечить гомогенное распределение при исключении риска денатурации белка, раствору ЭПО давали возможность диффундировать в гидрогеле в течение 24 часов. Для улучшенного смешивания в этот период инъекционный флакон дважды переворачивали на 180°. Препараты хранили при температуре от +2 до +8°С в защищенном от света месте. Подробно используют нижеописанную методику приготовления препарата на примере гидрогеля, имеющего содержание эритропоэтина 150 МЕ/г геля:

- Приготовление геля, не содержащего активного соединения, в условиях низкого содержания микроорганизмов

- Измельчение карбоксиметилцеллюлозы 250 НХ с глицерином (2,4%) в ступке

- Включение воды порциями

- Предоставление возможности разбухания в течение по меньшей мере 2 часов

- Замещение испарившейся воды, гомогенизация. Альтернативно можно также использовать электронную систему перемешивания (например, Cito-Unguator 2000) для приготовления геля, не содержащего активного соединения

- Перенос гелей порциями по 3,3 г каждая в инъекционный флакон из стекла типа 1, который был предварительно вымыт и стерилизован горячим воздухом, и укупоривание, например, используя шприц или аппликатор Unguator®

- Автоклавирование укупоренного геля в стандартных условиях

- Перенос инъекционных флаконов в условия температуры от +2 до +8°С перед дальнейшей обработкой

- Перенос 500 ME ЭПО в каждый инъекционный флакон в боксе, например, из двухкамерных картриджей NeoRecormon 10000 Е с использованием Reco-Pen с выпуском 2 объемов шприца-ручки через универсальную иглу Clickfine

- Предоставление возможности ЭПО диффундировать в течение по меньшей мере 24 ч, переворачивание геля дважды на 180° в инъекционном флаконе за этот период для лучшего смешивания.

Гели готовят аналогично, используя гидроксиэтилцеллюлозу, карбоксиэтилцеллюлозу, карбоксипропилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу (между 1,5% и 3,5% (мас./мас.) содержания целлюлозы).

Пример 5: Испытание стабильности ЭПО-содержащих композиций

Для испытания стабильности эритропоэтина в препаратах берут образцы в моменты времени 0, 1, 2, 3 и 4 недели после приготовления соответствующих препаратов и посылают на анализ эритропоэтина. На протяжении всего эксперимента используют вышеупомянутые условия хранения. Кроме того, препарат, имеющий содержание эритропоэтина 40 МЕ/мл в 0,9% водном растворе хлорида натрия, также включают в исследование. Результаты представлены графически на фиг.1.

Пример 6: Эксперименты по высвобождению активного соединения через конструкции кожи

Эксперименты по высвобождению проводят, используя шесть ячеек Франца (объем: 5,68-8,88 см ³, площадь проницаемости: 0,14-0,34 см²), которые содержат изотонический раствор глицерина, поддерживаемый при 37°С, в акцепторном отсеке. Органотипическую конструкцию кожи, которая механически стабилизирована против акцепторного раствора в направлении вниз поликарбонатным фильтром и находится в контакте с препаратом, подлежащим тестированию, в направлении вверх, вводят между донорным и акцепторным отсеками. Образцы берут после 0; 0,5; 1; 1,5; 2; 3; 4; 5; 6 и 24 часов с замещением извлеченного акцепторного объема 1,0 мл и посылают на анализ эритропоэтина. Время контакта примерно 5 минут, которое используют для сборки ячейки, введения акцептора и взвешивания, должно быть установлено в течение периода между первым контактом кожной конструкции с препаратом, подлежащим тестированию, и первым взятием образца (0 ч). Четыре из ячеек для высвобождения, упомянутых выше, используют для тестирования композиции, которую на основании исследований композиции и стабильности можно считать наиболее перспективной композицией. С целью получения информации о том, следует ли ожидать разложения лекарства во время тестирования высвобождения вследствие повышенной температуры выше условий хранения, две дополнительные ячейки загружают вязким раствором (содержание эритропоэтина: 150 МЕ/г гидрогеля), чтобы иметь возможность определить содержание из этих растворов после завершения экспериментов по высвобождению.

Пример 7: Анализ ЭПО

Поскольку во всех случаях количество лекарства, которое нужно определить, слишком мало для проведения количественного определения содержания неденатурированного и неразложившегося эритропоэтина с помощью оптического кругового дихроизма, эритропоэтин определяют с помощью сэндвич-ЭЛАЙЗА с соблюдением инструкций изготовителя (EPO-ELISA, OSTEOmedical GmbH, D-Bünde). Измерение проявленного анализа ЭЛАЙЗА проводят, используя считывающее устройство для множества планшетов КС4 (Bio-Tek, D-Bad Friedrichshall) с программным обеспечением версии 3.4 Rev 21. Поскольку содержание приготовленных форм введения находится выше диапазона количественного определения анализа, соответствующие образцы разводят перед измерением с целью получения номинального содержания в области 400 мМЕ/мл. Образцы из исследований высвобождения можно измерять без промежуточной стадии разведения.

Пример 8: Регенерация кожи у травмированных крыс с применением геля карбоксиметилцеллюлозы

Травму путем касательного разреза создавали у четырех самок крыс, имеющих массу тела 200-250 г. Животных обрабатывают гелем, приготовленным в соответствии с вышеописанными подробностями, который содержит в качестве гелеобразующего вещества карбоксиметилцеллюлозу (3% (мас./мас.), 42000 мПа·с) (дополнительно 2,4% глицерина) и 150 ME ЭПО/МТ. Контроли (плацебо) не содержат активного соединения. После нанесения геля животным накладывают повязку или пластырь. Повязку/пластырь меняют каждые 48 ч. Образцы ткани берут из области раны через 4 и 8 суток и анализируют гистологически. В данном эксперименте тестирование проводят на CD31- и нестин-положительные или -отрицательные клетки с помощью методик окрашивания, известных на уровне техники. Результаты представлены на фиг.2, 3 и 4. Видно, что реэпителизация завершается значительно быстрее в ЭПО-содержащих гелях ("гель Е", фиг.2 и 3) (в среднем на 10-50%), чем в препаратах, не содержащих активного соединения ("гель F", фиг.2 и 3), в зависимости от продолжительности обработки. Кроме того, посредством клеточно-специфичного окрашивания видно, что новообразование эпителия по существу не создает новых CD31-положительных клеток (фиг.4).

Регенерацию кожи исследуют аналогично в геле, содержащем 1% карбоксиметилцеллюлозы. Результаты являются на 5-10% худшими в случае ЭПО-содержащей гелевой композиции, чем в случае сравнимого 3% геля, хотя в контролях существенных различий не наблюдают.

Регенерацию кожи исследуют аналогично в 1% геле и 3% геле на основе гидроксиэтилцеллюлозы при тех же концентрациях ЭПО. По сравнению с гелем карбоксиметилцеллюлозы получены сравнимые или несколько худшие результаты.

Пример 9:

Приведенную ниже гелевую композицию для лечения ожоговой раны (примерно 120 см²) у взрослого пациента готовили вышеупомянутым способом:

Ингредиент	% мас./мас.
Гидроксиэтилцеллюлоза 250 НХ Pharm	3
Глицерин (безводный)	2,4
Вода (для инъекционных целей)	94,6

Наносили 100 г геля данного типа, который содержал 12000 ME ЭПО и имел вязкость примерно 40000 мПа·с.

Пример 10:

Приведенную ниже гелевую композицию для лечения резаной раны (2 см²) у взрослого пациента готовили вышеупомянутым способом:

Ингредиент	% мас./мас.
Гидроксиэтилцеллюлоза 250 НХ Pharm	4
Глицерин (безводный)	2,5
Полиакрилат	1,5
Вода (для инъекционных целей)	92,0

Наносили 2 г геля данного типа, который содержал 1000 ME ЭПО. Вязкость примерно 68000 мПа·с.

Пример 11:

Приведенную ниже гелевую композицию для лечения ожоговой раны (примерно 300 см²) у взрослого пациента готовили вышеупомянутым способом:

Ингредиент	% мас./мас.
Гидроксиэтилцеллюлоза 250 НХ Pharm	2,5
Глицерин (безводный)	2,5
Полиакрилат	2,0
Вода (для инъекционных целей)	93,0

450 г геля данного типа содержали 50500 ME ЭПО, и его распределяли на ожоговой ране для лечения. Вязкость примерно 35000 мПа·с.

Пример 12:

Приведенную ниже гелевую композицию для лечения ожоговой раны (80 см²) у взрослого пациента готовили вышеупомянутым способом:

Ингредиент	% мас./мас.
Карбоксиметилцеллюлоза 250 НХ Pharm	3,5
Глицерин (безводный)	3,5
Вода (для инъекционных целей)	92,0

Наносили 50 г геля данного типа, и он содержал 35000 ME ЭПО. Вязкость примерно 55000 мПа·с.

Пример 13:

Приведенную ниже гелевую композицию для лечения открытой язвы голени (150 см²) у взрослого пациента готовили вышеупомянутым способом:

Ингредиент	% мас./мас.
Гидроксиэтилцеллюлоза 250 НХ Pharm	3,0
Глицерин (безводный)	2,5
Полиметакрилат	1,0
Вода (для инъекционных целей)	93,0

Наносили 150 геля данного типа, и он содержал 20100 ME ЭПО. Вязкость примерно 49000 мПа·с.

Пример 14:

Приведенную ниже гелевую композицию для лечения относительно большой раны слизистой оболочки/челюсти (1 см²) вследствие удаления зуба у взрослого пациента готовили вышеупомянутым способом:

Ингредиент	% мас./мас.
Карбоксиметилцеллюлоза А380 Aquasorb	3,0
Глицерин (безводный)	2,5
Вода (для инъекционных целей)	94,5

Наносили 1 г геля данного типа, и он содержал 1500 ME ЭПО.

Пример 15:

Приведенную ниже гелевую композицию для лечения относительно большой раны слизистой оболочки/челюсти (примерно 10 см²) вследствие удаления зуба у взрослого пациента готовили вышеупомянутым способом:

Ингредиент	% мас./мас.
Карбоксиметилцеллюлоза А380 Aquasorb	2,0
Гидроксиэтилцеллюлоза 250 НХ Pharm	1,0
Глицерин (безводный)	2,0
Вода (для инъекционных целей)	95,0

Наносили 30 г геля данного типа, и он содержал 20500 ME ЭПО. Вязкость примерно 23000 мПа·с.

Пример 16:

Хронические ишемические раны

Хронические ишемические раны находятся среди наиболее распространенных хирургических клинических картин только в Германии и требуют интенсивного междисциплинарного лечения. В Германии более 3 млн человек страдают хроническими ранами, которые в целом можно разделить на три типа раны: трофические язвы, диабетическая стопа и пролежни. Стоимость лечения хронических ран в этой стране в настоящее время достигает примерно 5 биллионов евро в год.

Сочетание артериальной язвы (окклюзионного поражения периферических артерий) и диабетической язвы считают особенно трудным для клинического лечения и, к сожалению, нередким.

69-летний пациент с диабетом с ОППА IV степени страдает хронической ишемической язвой наружной лодыжки III степени в течение более чем 12 месяцев (фиг.5, верхняя картинка). После трех местных терапий рекомбинантным ЭПО (в каждом случае 3000 ME) в гидрогеле Varihesive E®, обладающем, соответственно, высокой вязкостью, происходит очевидное образование грануляционной ткани (средняя картинка). Полное заживление раны можно наблюдать после 15 суток после последующего расщепленного кожного трансплантата (нижняя картинка).

Пример 17:

Кожные раны

Каждый человек страдает некоторым числом механических или термических повреждений кожи, которые требуют заживления, в течение всей его жизни. Рынок терапевтических агентов для локальных ран в форме жидкостей, мазей или перевязочных материалов, соответственно, обширен.

В научно обоснованном анализе пораженных пациентов тот факт, что каждая кожная рана имеет различную конфигурацию, проблематичен. Однако в хирургии существует в высокой степени стандартизованная кожная рана, которая образуется вследствие необходимости в удалении участка кожи определенной толщины (обычно от 0,2 до 0,3 мм) с использованием специального инструмента (дерматома) с целью его последующей пересадки в другой сайт организма. Сайты удаления расщепленного кожного лоскута (0,3 мм) обычно заживают без последствий в течение 10-14 суток.

25-летний пациент имел термическое повреждение, при лечении которого было необходимо удаление расщепленного кожного лоскута (фиг.6, левая картинка). Удаленные сайты обрабатывали 1×3000 ME ЭПО в гидрогеле в соответствии с одной из композиций, указанных выше (3% карбоксиметилцеллюлоза). Полное заживление наблюдали только после 7 суток (фиг.6, правая картинка).

Подобные результаты были достигнуты с четырьмя другими пациентами, которые страдали ожогами.

Испытание терапии удаленных сайтов расщепленного кожного лоскута локально нанесенным эритропоэтином проводили, как описано ниже, на указанных пяти пациентах: каждый расщепленный трансплантат был взят из бедра при его толщине 0,3 мм. Эритропоэтин смешивали интраоперационно с гидрогелем Varihesive®, который функционировал в качестве вещества-носителя, и наносили непосредственно на рану. Затем область раны покрывали полиуретановой пленкой с отверстиями и вторичной повязкой. Эту вторичную повязку удаляли только в случае дополнительных локальных нанесений эритропоэтина. Последние проводили стерильно в ряд точек через полиуретановую пленку. Полиуретановую пленку снимали только атравматично через семь суток после операции с целью оценки реэпителизации.