новая композиция и ее применение, в частности косметическое, для лечения дегидратации кожи

Формула изобретения

1. Применение комбинации, содержащей гамма-линоленовую кислоту и по меньшей мере один полифенол зеленого чая, в которой соотношение между гамма-линоленовой кислотой и полифенолом зеленого чая варьирует от приблизительно 1 до приблизительно 10, предпочтительно варьирует от приблизительно 2 до приблизительно 8 и более предпочтительно от приблизительно 4 до приблизительно 6, для усиления дифференцировки кератиноцитов in vitro и ex vivo.

2. Применение комбинации по п.1, при котором полифенол зеленого чая выбран из флавоноидов класса флаван-3-олов.

3. Применение по п.1, при котором полифенол зеленого чая выбран из эпигаллокатехингаллата (EGCg), эпигаллокатехина (EGC), эпикатехина (ЕС), галлокатехина (GC), галлокатехингаллата (GCg), эпикатехингаллата (ECg) и катехина (С).

4. Применение комбинации по п.1, при котором полифенол зеленого чая содержится в растительном экстракте, таком, как экстракт зеленого чая.

5. Применение комбинации по п.1, при котором гамма-линоленовая кислота содержится в растительном масле, таком, как масло огуречной травы (бурачника), масло первоцвета весеннего (энотеры) или масло семян черной смородины.

6. Комбинация, содержащая гамма-линоленовую кислоту и по меньшей мере один полифенол зеленого чая, в которой соотношение между гамма-линоленовой кислотой и полифенолом зеленого чая варьирует от приблизительно 1 до приблизительно 10, предпочтительно варьирует от приблизительно 2 до приблизительно 8 и более предпочтительно от приблизительно 4 до приблизительно 6 для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи.

7. Комбинация для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи, содержащая гамма-линоленовую кислоту и по меньшей мере один полифенол зеленого чая, в которой соотношение между гамма-линоленовой кислотой и полифенолом зеленого чая варьирует от приблизительно 1 до приблизительно 10, предпочтительно варьирует от приблизительно 2 до приблизительно 8 и более предпочтительно от приблизительно 4 до приблизительно 6, и в которой общее количество гамма-линоленовой кислоты и полифенола составляет от приблизительно 100 до приблизительно 500 мг, предпочтительно от приблизительно 150 до приблизительно 400 мг и более предпочтительно составляет приблизительно 350 мг.

8. Композиция для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи, содержащая комбинацию по п.6 или 7, в которой:

концентрация гамма-линоленовой кислоты составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,5%, предпочтительно составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,3% и более предпочтительно от приблизительно 0,15 до приблизительно 0,3 мас.% по отношению к общей массе композиции;

концентрация полифенола зеленого чая составляет от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,1%, предпочтительно составляет от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,07% и более предпочтительно составляет приблизительно 0,045 мас.% по отношению к общей массе композиции.

9. Композиция для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи по п.8, в которой полифенол зеленого чая выбран из флавоноидов класса флаван-3-олов.

10. Композиция для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи по п.8, в которой полифенол зеленого чая выбран из эпигаллокатехингаллата (EGCg), эпигаллокатехина (EGC), эпикатехина (ЕС), галлокатехина (GC), галлокатехингаллата (GCg), эпикатехингаллата (ECg) и катехина (С).

11. Композиция для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи по п.8, в которой полифенол зеленого чая содержится в растительном экстракте, таком, как экстракт зеленого чая.

12. Композиция для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи по п.8, в которой гамма-линоленовая кислота содержится в растительном масле, таком, как масло огуречной травы (бурачника), масло первоцвета весеннего (энотеры) или масло семян черной смородины.

13. Композиция для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи по п.8, в которой концентрация гамма-линоленовой кислоты составляет от приблизительно 0,15 до приблизительно 0,3 мас.% по отношению к общей массе композиции.

14. Композиция для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи по п.8, в которой концентрация полифенола зеленого чая составляет приблизительно 0,045 мас.% по отношению к общей массе композиции.

15. Композиция для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи по п.8, в которой концентрация гамма-линоленовой кислоты составляет от приблизительно 0,15 до приблизительно 0,3 мас.% по отношению к общей массе композиции, а концентрация полифенола зеленого чая составляет приблизительно 0,045 мас.% по отношению к общей массе композиции.

16. Пероральная композиция для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи, содержащая комбинацию по п.6, находящаяся в виде пищевого продукта, или пищевой добавки.

17. Пероральная композиция по п.16, отличающаяся тем, что пищевой продукт выбран из группы, включающей свежий молочный продукт, йогурт, творожный сыр, ферментированный молочный продукт, десертный продукт, напиток, жидкий продукт, крем, плодовое и/или овощное пюре.

18. Пероральная композиция по п.16, отличающаяся тем, что пищевая добавка выбрана из группы, которую составляют драже, пилюли, желатиновые капсулы, сироп, гель, порошок для разбавления, паста, жевательная резинка.

19. Пероральная композиция по п.16, содержащая комбинацию, в которой концентрация гамма-линоленовой кислоты составляет от приблизительно 0,15 до приблизительно 0,3 мас.% по отношению к общей массе композиции, а концентрация полифенола зеленого чая составляет приблизительно 0,045 мас.% по отношению к общей массе композиции.

20. Фармацевтическая композиция для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи, содержащая в качестве активного вещества комбинацию по п.6 или 7 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.

21. Применение комбинации по п.6 или 7 для получения лекарственного средства, предназначенного для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи.

22. Применение комбинации по п.6 или 7 для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения патологий, вызывающих ухудшение, в частности уменьшение, дифференцировки кератиноцитов.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новой композиции и ее применению, в частности косметическому, для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи.

Композиции по настоящему изобретению предпочтительно служат для лечения дегидратации кожи.

Главные функции кожи предпочтительно состоят в обеспечении защиты от механических, химических, радиационных и патогенных воздействий окружающей среды и предупреждении потери воды. Такая "барьерная функция" кожи обеспечивается верхним слоем эпидермиса Stratum Corneum (SC), соответствующего конечной стадии созревания кератиноцитов. Так, например, стимуляция дифференцировки кератиноцитов улучшает физиологию кожи и, в частности, гидратацию, ограничивая потери воды на уровне кожи.

Многие вещества, в частности гамма-линоленовая кислота (GLA) и полифенолы зеленого чая (GTP), известны своим благотворным действием на кожу.

Действие гамма-линоленовой кислоты (GLA) на кожу может быть рассмотрено в 3 аспектах. Во-первых, GLA может внедряться в клеточные мембраны и внеклеточный матрикс Stratum Corneum (SC), образуемый такими веществами, как жирные кислоты и керамиды, и может таким образом воздействовать на регуляцию гидратации кожи. В то же время, GLA участвует в регуляции баланса эйкозаноидов серии 1, которые играют роль противовоспалительного и антиаллергического плана. Наконец, за счет активации рецептора PPAR (рецептор, активируемый промоторами пероксисом), который благоприятствует экспрессии различных белков созревания и ингибированию синтеза ДНК (и, следовательно, пролиферации), GLA, вероятно, может стимулировать превращение базальных кератиноцитов в корнеоциты.

Полифенолы зеленого чая (GTP) улучшают "барьерную" функцию кожи путем стимуляции превращения базальных кератиноцитов в корнеоциты. В то же время GTP и особенно эпигаллокатехингаллат (EGCG) обеспечивают защиту от окислительного стресса и свободных радикалов и благоприятствуют стабилизации мембраны лизосомы, уменьшающей потерю провоспалительных медиаторов или ферментов.

Целью настоящего изобретения является разработка новых композиций, обладающих синергическим эффектом в отношении физиологии кожи, в частности в отношении дифференцировки кератиноцитов.

Настоящее изобретение относится к применению комбинации, содержащей гамма-линоленовую кислоту и по меньшей мере один полифенол зеленого чая, в которой соотношение между гамма-линоленовой кислотой и полифенолом зеленого чая варьирует приблизительно от 1 до приблизительно 10, предпочтительно варьирует приблизительно от 2 до приблизительно 8 и еще более предпочтительно варьирует приблизительно от 4 до приблизительно 6, для усиления дифференцировки кератиноцитов in vitro и ex vivo.

Неожиданно было отмечено, что комбинация гамма-линоленовой кислоты и полифенолов зеленого чая действует на физиологию кожи благоприятным образом и с синергическим эффектом, в частности в отношении дифференцировки кератиноцитов.

Под синергическим эффектом понимают эффект комбинации двух ингредиентов, превосходящий сумму эффектов, которые имели бы по отдельности каждый из таких ингредиентов.

Под "гамма-линоленовой кислотой" понимают изомер гамма-линоленовой кислоты, принадлежащей к группе омега-6 жирных кислот. Такие омега-6 жирные кислоты называют "незаменимыми", поскольку они необходимы нашим организмам, но не могут быть синтезированы организмом и, следовательно, должны быть получены с пищей. Гамма-линоленовая кислота может быть получена из линолевой кислоты в результате последовательности ферментативных реакций, вызываемых десатуразами и элонгазами, и представляет собой существенный промежуточный продукт метаболизма полиненасыщенных жирных кислот. 6-десатураза, представляющая собой фермент, необходимый для получения GLA, является ферментом, отсутствующим в клетках кожи (в частности, в кератиноцитах и корнеоцитах).

Под "полифенолами зеленого чая" понимают катехины, среди которых наиболее важным в зеленом чае является эпигаллокатехингаллат (40%), далее эпигаллокатехин (18%) и затем эпикатехин (8%). Прочими второстепенными катехинами, содержащимися в экстрактах чая, являются галлокатехин (GC), эпикатехингаллат (ECG), галлокатехингаллат (GCg) и катехин (C).

Выражение "для усиления дифференцировки кератиноцитов in vitro и ex vivo " означает, что композиция позволяет развиваться кератиноцитам в процессе их созревания, обеспечивая наилучшее исполнение ими их специфических функций.

Выражение "дифференцировка кератиноцитов" используют для отличия от "пролиферации", которая соответствует обновлению клеток-штаммов базального слоя. Базальные клетки за счет асимметрического митоза обеспечивают одновременно обновление (сохранение предельного числа недифференцированных клеток-штаммов) и формирование других базальных клеток, предназначенных для процесса дифференцировки.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенному ранее применению комбинации, в которой полифенол зеленого чая выбран из флавоноидов класса флаван-3-олов.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенному ранее применению комбинации, в которой полифенол зеленого чая выбран из эпигаллокатехингаллата (EGCg), эпигаллокатехина (EGC), эпикатехина (EC), галлокатехина (GC), галлокатехингаллата (GCg), эпикатехингаллата (ECg) и катехина (C).

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенному ранее применению комбинации, в которой полифенол зеленого чая содержится в растительном экстракте, таком как экстракт зеленого чая (GTE).

Экстракт зеленого чая получают способами, хорошо известными специалистам в данной области техники (см., в частности, стандарт NF ISO 6079 от сентября 1991 г.).

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенному ранее применению комбинации, в которой гамма-линоленовая кислота содержится в растительном масле, таком как масло огуречной травы, масло первоцвета весеннего или масло семян черной смородины.

GLA, вносимые с маслом огуречной травы, находятся в форме, обладающей большей биодоступностью, чем GLA, вносимые с маслом ослинника. В масле огуречной травы преобладают GLA в положении sn-2 триглицеридов, тогда как в масле ослинника преобладают GLA в положении sn-1 и sn-3 триглицеридов. Таким образом, ферменты имеют более благоприятные условия расщеплять GLA масла огуречной травы, находящиеся в форме, обладающей большей биодоступностью.

Настоящее изобретение относится также к комбинации, содержащей гамма-линоленовую кислоту и по меньшей мере один полифенол зеленого чая, в которой соотношение между гамма-линоленовой кислотой и полифенолом зеленого чая варьирует приблизительно от 1 до приблизительно 10, предпочтительно варьирует приблизительно от 2 до приблизительно 8 и еще более предпочтительно варьирует приблизительно от 4 до приблизительно 6.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к комбинации, содержащей гамма-линоленовую кислоту и по меньшей мере один полифенол зеленого чая, в которой соотношение между гамма-линоленовой кислотой и полифенолом зеленого чая варьирует приблизительно от 1 до приблизительно 10, предпочтительно варьирует приблизительно от 2 до приблизительно 8 и еще более предпочтительно варьирует от приблизительно 4 до приблизительно 6 и в которой общее количество гамма-линоленовой кислоты и полифенола составляет приблизительно от 100 до приблизительно 500 мг, предпочтительно составляет от приблизительно 150 до приблизительно 400 мг и более предпочтительно составляет приблизительно 350 мг.

Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей определенную ранее комбинацию, в которой:

- концентрация гамма-линоленовой кислоты составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,5%, более предпочтительно составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 0,3% и еще более предпочтительно составляет от приблизительно 0,15 до приблизительно 0,3% мас. по отношению к общей массе композиции;

- концентрация полифенола зеленого чая составляет от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,1%, более предпочтительно составляет от приблизительно 0,02 до приблизительно 0,07% и еще более предпочтительно составляет приблизительно 0,045% мас. по отношению к общей массе композиции.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенной ранее композиции, в которой полифенол зеленого чая выбран из флавоноидов класса флаван-3-олов.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенной ранее композиции, в которой полифенол зеленого чая выбран из эпигаллокатехингаллата (EGCg), эпигаллокатехина (EGC), эпикатехина (EC), галлокатехина (GC), галлокатехингаллата (GCg), эпикатехингаллата (ECg) и катехина (C).

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенной ранее композиции, в которой полифенол зеленого чая содержится в растительном экстракте, таком как экстракт зеленого чая.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенной ранее композиции, в которой гамма-линоленовая кислота содержится в растительном масле, таком как масло огуречной травы, масло первоцвета весеннего или масло семян черной смородины.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенной ранее композиции, в которой концентрация гамма-линоленовой кислоты составляет от приблизительно 0,15 до приблизительно 0,3% мас. по отношению к общей массе композиции.

Вне упомянутых интервалов какое-либо действие или отсутствовало (для концентраций меньше 0,15%), или появлялись проблемы, связанные с пищевым и органолептическим равновесием соединений.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенной ранее композиции, в которой концентрация полифенола зеленого чая составляет приблизительно 0,045% мас. по отношению к общей массе композиции.

Такое значение позволяет получить предпочтительный эффект.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенной ранее композиции, в которой концентрация гамма-линоленовой кислоты составляет от приблизительно 0,15 до приблизительно 0,3% мас. по отношению к общей массе композиции, а концентрация полифенола зеленого чая составляет приблизительно 0,045% мас. по отношению к общей массе композиции.

Настоящее изобретение относится также к пероральной композиции, содержащей определенную ранее комбинацию, причем указанная композиция находится в виде пищевого продукта, пищевой добавки или косметической композиции.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенной ранее пероральной композиции, отличающейся тем, что пищевой продукт выбран из группы, которую составляют свежий молочный продукт, йогурт, творожный сыр, ферментированный молочный продукт, десертный продукт, напиток, жидкий продукт, крем, плодовое и/или овощное пюре.

Выражение "ферментированный молочный продукт" или "йогурт" следует понимать как согласованное, в частности с официальными нормами сборника Codex alimentarius (в частности, с нормами тома 12 и нормами "Codex Stan 1-11 (a)-1975)" или с французским постановлением № 88-1203 от 31 декабря 1988 г.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенной ранее пероральной композиции, отличающейся тем, что пищевая добавка выбрана из группы, которую составляют драже, пилюли, желатиновые капсулы, сироп, гель, порошок для восстановления.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенной ранее пероральной композиции, отличающейся тем, что косметическая композиция выбрана из группы, которую составляют кремы, эмульсии, лосьоны, паста, жевательная резинка.

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенной ранее пероральной композиции, в которой концентрация гамма-линоленовой кислоты составляет приблизительно от 0,15 до приблизительно 0,3% мас. по отношению к общей массе композиции, а концентрация полифенола зеленого чая составляет приблизительно 0,045% мас. по отношению к общей массе композиции.

Рекомендуемые суточные дозы такой пероральной композиции составляют от 1 до 2 порций, т.е. соответствуют интервалу от 150 до 300 мг GLA и от 45 до 90 мг GTP.

Настоящее изобретение относится также к косметическому средству, содержащему определенную ранее комбинацию в сочетании с эксципиентом, приемлемым для топического применения.

Под "эксципиентом, приемлемым для топического применения" понимают эксципиенты, позволяющие активному ингредиенту достигать Stratum Corneum .

В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенному ранее косметическому средству, в котором концентрация гамма-линоленовой кислоты составляет от приблизительно 0,15 до приблизительно 0,3% мас. по отношению к общей массе композиции, а концентрация полифенола зеленого чая составляет приблизительно 0,045% мас. по отношению к общей массе композиции.

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей определенную ранее комбинацию в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.

Под "фармацевтически приемлемым носителем" понимают эксципиенты, позволяющие доставлять активный ингредиент к его мишени.

Объектом настоящего изобретения является также способ косметической терапии, включающий в себя пероральное введение определенной ранее косметической композиции.

Объектом настоящего изобретения является также способ косметической терапии, включающий в себя топическое нанесение определенного ранее косметического средства.

Настоящее изобретение относится к применению определенной ранее комбинации для получения лекарственного средства, предназначенного для улучшения состояния кожи воздействием на "барьерную" функцию кожи.

Настоящее изобретение относится к применению определенной ранее комбинации для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения патологий, вызывающих ухудшение, в частности уменьшение дифференцировки кератиноцитов.

Патологии, вызывающие ухудшение, в частности уменьшение дифференцировки кератиноцитов, могут представлять собой, например, атопический дерматит или псориаз.

На Фиг.1 показана в процентном отношении экспрессия трансглутаминазы K (TGK) в кератиноцитах, предварительно обработанных GLA и GTP по отдельности и в комбинации. Столбец A соответствует обработке кератиноцитов GLA с концентрацией 1,25 мкг/мл. Столбец B соответствует обработке кератиноцитов GLA с концентрацией 3,75 мкг/мл. Столбец C соответствует обработке кератиноцитов GTP с концентрацией 0,5 мкг/мл. Столбец D соответствует обработке кератиноцитов GLA с концентрацией 2,5 мкг/мл и GTP с концентрацией 0,5 мкг/мл. Столбец E соответствует обработке кератиноцитов кальцием с концентрацией 1,5 мМ, хорошо известной для стимулирования дифференциации кератиноцитов.

На Фиг.2 показана в процентном отношении экспрессия инволюкрина в кератиноцитах (NHEK) участников-женщин, полученных из эпителия кожи живота (группа 1) или эпителия кожи груди (группа 2) и предварительно обработанных Ca²⁺ с низкой концентрацией (A и C) или с высокой концентрацией (B и D) и GLA и экстрактами зеленого чая (GTE) по отдельности и в комбинации. Заштрихованный столбец соответствует положительному контролю. Столбцы черного цвета соответствуют обработке кератиноцитов только GLA с различными концентрациями (1, 3 и 10 мг/мл). Столбцы белого цвета соответствуют обработке кератиноцитов только GTE с различными концентрациями (1, 3 и 10 мг/мл). Столбцы серого цвета соответствуют обработке кератиноцитов смесью GLA и GTE с различными концентрациями (в мг/мл) (на каждом столбце серого цвета цифра слева показывает концентрацию GTE, а цифра справа показывает концентрацию GLA). Ось абсцисс соответствует концентрации GLA, GTE и смеси GLA/GTE в мг/мл. Ось ординат соответствует процентному отношению экспрессии по сравнению с контрольным испытанием с Ca²⁺ при низкой (A и C) или при высокой (B и D) концентрации.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Получение молочного продукта, содержащего комбинацию гамма-линоленовой кислоты и полифенолов зеленого чая

Молочный продукт изготавливают традиционным способом получения смешанного йогурта.

На первой стадии обезжиренное молоко, предварительно обогащенное белками за счет прибавления порошкового или сгущенного молока, предварительно нагревают (95°C, 4-8 мин) для устранения микробиального заражения. Затем перед гомогенизацией (50-300 бар, 40-95°C) осуществляют введение масла огуречной травы. Далее последовательно осуществляют тепловую обработку, тепловую выдержку и охлаждение. Затем прибавляют ферменты и осуществляют ферментацию в емкости (30-45°C, 5-10 ч). Далее осуществляют измельчение сгустка с последующим охлаждением.

На этой стадии прибавляют экстракт зеленого чая, витамин E и при необходимости фруктово-ягодные композиции. Затем полученную смесь расфасовывают и хранят в холодном помещении.

Пример 2. Исследование биодоступности

Если GLA или катехины вводят перорально, то свое действие на кожу они могут оказывать только через кровь, которая представляет собой единственный транспорт, позволяющий подводить такие ингредиенты ко всем тканям, представляющим объект воздействия (в данном случае, к коже).

В этом исследовании оценивается биодоступность комбинации катехинов с GLA и, в частности, биодоступность такой комбинации в йогурте, содержащем пробиотики (см. таблицу 1).

Для оценки биодоступности плазматические концентрации GLA и катехинов определяли в различные моменты времени после потребления продуктов 1, 2, 3 или 4.

Согласно литературным данным действие обеспечивает доза GLA, равная приблизительно 300 мг/сутки. С целью оценки всасывания GLA и ее соответствующей сывороточной концентрации были использованы две дозы GLA: 300 и 150 мг/сутки.

Испытуемые продукты

Были разработаны и испытаны три типа продуктов, соответственно представленные в таблице 1.

Таблица 1 Композиция испытуемых продуктов в исследовании биодоступности
	Свежий молочный продукт + активные ингредиенты	Масло огуречной травы отдельно	Экстракт зеленого чая отдельно
	Продукт 1	Продукт 2	Продукт 3	Продукт 4
Основа	Молочный продукт, ферментированный с S. thermophilus, L. bulgaricus, L. casei*	Отдельные ингредиенты: масло огуречной травы	Отдельные ингредиенты: экстракт зеленого чая в водном растворе
Масло огуречной травы	1,5 г (эквивалент 300 мг GLA)	0,75 г (эквивалент 150 мг GLA)	1,5 г (эквивалент 300 мг GLA)
Экстракт зеленого чая	50 мг (эквивалент 45 мг катехинов)	50 мг (эквивалент 45 мг катехинов)		50 мг (эквивалент 45 мг катехинов)
*Продукты 1 и 2 были изготовлены способом, описанным в примере 1

Методика исследования

Это исследование является нормоцентровым рандомизированным открытым исследованием. Исследование было осуществлено с участием 12 женщин-добровольцев (средний возраст - 30,8 лет; средний индекс массы тела (BMI) - 21,4).

Исследование с каждым участником проводилось в течение от 2 до 3 недель.

Каждый участник делал четыре визита в клинику продолжительностью 24 ч, причем первый визит был стартовым (V1) (за 1 неделю до первого оценочного визита), а три оставшихся визита были оценочными J0 (V2), J+4 (V3) и J+8 (V4).

Во время каждого визита осуществлялся клинический осмотр и производился отбор крови с целью определения концентраций GLA и катехинов в крови и контроля кинетики всасывания.

После первого стартового визита (V1) участники в течение первой недели на практике следовали рекомендациям по питанию, акцентировавшим их внимание на уменьшении потребления продуктов питания, содержащих много испытуемых ингредиентов (для ограничения любого влияния на вводимые дозы). Интервал времени, отделявший три оценки, составлял по меньшей мере 4 дня и максимально 7 дней.

Методика оценочных визитов

Во время каждого оценочного визита (V2, V3, V4) участники потребляли продукт, выбранный случайно (из 4 продуктов). Таким образом, по завершении третьего оценочного визита они употребили каждый из трех испытуемых продуктов.

После потребления продукта в течение 6 последующих часов отбирали семь проб крови. В 6 моментов времени определяли плазматическую концентрацию активных ингредиентов (T0, T1h, T2h, T3h, T4h, T6h) для определения кинетики содержания в плазме GLA и катехинов.

Кроме этого, отбирали две пробы с целью лучшего учета различий в отношении всасывания активных ингредиентов:

- пробу T0,5h использовали для определения биодоступности в плазме катехинов;

- пробу T5h использовали для определения биодоступности в плазме GLA.

Анализы плазмы

Плазматические концентрации катехинов и конкретно эпикатехина (EC), эпигаллокатехина (EGC) и эпигаллокатехингаллата (EGCG) определяли способом ВЭЖХ соответственно описанному Lee и соавт. (Lee M.J., Prabhu S., Meng X., Li C., Yang C.S. An improved method for the determination of green and black tea polyphenols in biomatrices by high-performance liquid chromatography with coulometric array detection. Anal. Biochem. 2000; 279:164-9) и соответственно общим сведениям, известным специалистам в данной области техники. Результаты выражали в мкмоль/мл.

Концентрации GLA определяли во фракции хиломикронов, полученной отделением ультрацентрифугированием. Экстракцию липидов в хиломикронах осуществляли по методике Moilanen и соавт. (Moilanen T., Nikkari T. The effect of storage on the fatty acid composition of human serum. Clin. Chim. Acta. 1981; 114:111-6). Измерения производили способом газофазной хроматографии. Идентификацию GLA осуществляли способами, известными специалистам в данной области техники, в частности способом газофазной хроматографии. Результаты выражали в мкг/мл.

Статистический анализ

Для оценки биодоступности GLA и катехинов определяли следующие параметры:

- площадь под кривой (AUC), которая представляет собой информацию о кинетике биодоступности (г/(мл·ч));

- максимальную концентрацию в ходе анализа кинетики (C_max, мкг/мл);

- время, за которое концентрация становится максимальной (T_max, ч).

Был использован t-критерий Стьюдента. Анализ осуществляли для совокупности участников per protocol (PP) (n = 11), так как один из 12 включенных участников не сделал все визиты.

Результаты

- Результаты по биодоступности GLA

Биодоступность GLA, введенной в йогурт (продукт 1 или 2), или в виде простого ингредиента, принимаемого в составе масла (продукт 3), была измерена двумя способами:

- по AUC, C_max и T_max;

- по кинетике GLA в течение 6 последующих часов после потребления 11 участниками.

Результаты анализа AUC, C _max и T_max для GLA приведены в таблице 2.

Таблица 2 AUC, Cmax и Tmax для GLA, определенные для каждого продукта
	AUC0-6h (мкг/(мл·ч))	Cmax (мкг/мл)	Tmax (ч)
Продукт 1
(300 мг GLA+45 мг катехинов в ферментированном молочном продукте)	27,9±9,1*	12,1±7,03 **	2,00±1,00 ***
Продукт 2
(150 мг GLA+45 мг катехинов в ферментированном молочном продукте)	12,3±3,1	6,5±2,7	1,91+1,58 ***
Продукт 3
Масло огуречной травы отдельно (эквивалент 300 мг GLA)	15,2±10,5	9,4±5,2	4,55±1,29
Результаты: среднее ± SD (стандартное отклонение). *Статистически отличается от продуктов 2 и 3 (p<0,001). **Статистически отличается от продукта 2 (p<0,01). **Статистически отличается от продукта 3 (p<0,01).

Эти результаты показывают увеличение биодоступности GLA, всасываемой из ферментированного молочного продукта, изготовленного способом, использованным авторами настоящего изобретения.

Также можно отметить, что имеется соответствие типа "эффект-доза": количество всасываемой GLA было приблизительно в два раза больше в случае потребления 300 мг GLA по сравнению со случаем потребления 150 мг.

Из этих результатов можно сделать вывод, что при потреблении от 150 до 300 мг GLA концентрация в хиломикронах находится в интервале приблизительно от 6 до приблизительно 12 мкг/мл, что эквивалентно концентрации в сыворотке в интервале приблизительно от 3 до приблизительно 6 мкг/мл.

Разделение осадка, который составляют хиломикроны, и надосадочной жидкости, содержащей остальную часть сыворотки, осуществляли посредством ультрацентрифугирования сыворотки. Соотношение осадка и остальной части сыворотки составляет 50/50. Таким образом, между концентрацией GLA в хиломикронах и концентрацией GLA в сыворотке может быть применен коэффициент 1/2.

- Результаты по биодоступности катехинов

Плазматические концентрации трех главных катехинов измеряли в различные моменты времени. Можно напомнить, что такими катехинами являются эпикатехин (EC), эпигаллокатехин (EGC) и эпигаллокатехингаллат (EGCG).

Статистический анализ показал значимые различия плазматических концентраций EGC в момент времени T1h между продуктами 1 и 2 и продуктом 4. Для двух других катехинов какой-либо значимой разницы обнаружено не было. Это доказывает, что катехины имеют такую же биодоступность в молочной основе, как и по отдельности в воде.

Из этих результатов можно сделать вывод, что при потреблении 45 мг катехинов (EC, EGC, EGCG) они обнаруживаются в сыворотке с концентрацией приблизительно от 0,5 до приблизительно 2 мкмоль/л (EGCG: 0,04-0,33 мкмоль/л или 0,018-0,152 мкг/мл, EGC: 0,05-0,14 мкмоль/л или 0,022-0,061 мкг/мл, EC: 0,02-0,05 мкмоль/л или 0,005-0,014 мкг/мл).

Полученные результаты были сопоставлены авторами настоящего изобретения с литературными данными (см., в частности, Navarro-Peran E. et al.: "The antifolate activity of tea catechins", Grupo de Investigacion de Enzimologia, Departamento de Bioquimica y Biologia Molecular A, Facultad de Biologia, Universidad de Murcia, Espagne). В этой публикации отмечено, что EGCG обнаруживается в интервале от 0,1 до 1 мкмоль/л (или приблизительно от 0,03 до приблизительно 0,5 мкг/мл GTP) в сыворотке и тканях людей, пьющих чай. Таким образом, потребление GTP с йогуртом, описанное ранее, почти эквивалентно потреблению человека, ежедневно пьющего чай.

Пример 3. Клиническое исследование

Процесс созревания (или процесс эпидермической дифференциации) является достаточно управляемым, а равновесие между эпидермической пролиферацией, дифференцировкой и десквамацией представляет собой ключевой элемент для функционирования кожи. Кожа защищает тело от излишней потери воды, при этом такая потеря выражается в виде трансэпидермальной потери воды (TEWL или TransEpidermal Water Loss).

TEWL может служить индикатором здоровья кожи. Ее значение зависит от места измерения и времени года (наиболее высокой она бывает в зимние месяцы). Но для данного человека и данного времени года это значение может очень хорошо коррелировать со здоровьем кожи этого человека.

Кожа может быть плохо ухоженной в силу неблагоприятных экологических условий или индивидуальных привычек (очистка и т.п.), что может приводить к ее высыханию и повышению ее чувствительности.

В этом исследовании оценивается действие на "барьерную" функцию кожи потребления двух порций в день в течение 6 месяцев продукта, содержащего комбинацию GLA и катехинов, по сравнению с контрольным продуктом (сквашенное молоко, не содержащее ни пробиотиков, ни GLA, ни катехинов).

Потеря воды вызывается испарением, которое может быть определено по измерению градиента давления в слое водяного пара над кожей. Методика измерения TEWL позволяет оценивать "барьерный" эффект Stratum corneum и гидролипидной пленки.

Методика

Это исследование является нормоцентровым рандомизированным двойным слепым исследованием и осуществляется параллельно с женщинами-добровольцами с хорошим здоровьем и сухой и чувствительной кожей. Участники (72) были разделены на две группы по 36 участников со средним возрастом 29,4±7,9 лет и средним индексом массы тела (BMI) 22,43±2,8.

Одна группа получала испытуемый продукт, в то время как другая группа получала контрольный продукт (без пробиотиков, без масла огуречной травы и без катехинов) с целью обеспечения сравнения действия таких ингредиентов на функциональность кожи.

Сведения по композициям продуктов обобщены в таблице 3.

Композиции продуктов в исследовании на эффективность

Таблица 3
Количество на порцию	Испытуемый продукт	Контрольный продукт
Масло огуречной травы (мг) с содержанием GLA (мг)	750 150	-
Общий экстракт зеленого чая (мг) с содержанием GTP (мг) и катехинов (мг)	55 54 44	-
L. casei по DN-114 001 (кое/г)	>5·10 7	-
Lactbbacillus bulgaricus и Streptococcus thermophilus (кое/г)	>107	-
Витамин E (мг)	2	0

Исследование проводилось в течение 7 месяцев. Оно было разделено на две части: стадию отбора (4 недели) и стадию потребления (24 недели). Участники делали 4 оценочных визита, отделенных 6 неделями, в течение периода потребления продукта. Период потребления в течение 6 месяцев позволяет произвести сравнение действия продукта в течение протяженного периода времени, что позволяет произвести сравнение действия в зависимости от времени года.

Первая цель этого исследования состояла в том, чтобы определить, позволяет ли потребление ферментированного молочного продукта в течение 12 недель улучшить "барьерную" функцию кожи на предплечье участника. Такую оценку осуществляли по TEWL с лаурилсульфатом натрия (SLS). TEWL измеряли на внутренний части предплечья эвапориметром EVAPORIMETER EP2^® и выражали в г/(м²·ч) (SERVOMED, Sweden).

Вторая цель этого исследования состояла в том, чтобы определить, позволяет ли потребление молочного продукта, содержащего комбинацию по настоящему изобретению, улучшить "барьерную" функцию кожи на предплечье с течением времени при измерении TEWL с SLS.

Также измеряли другие параметры, такие как гидратация, эластичность, кровяные маркеры воспаления и общее состояние кожи, по клинической оценке и по персональной анкете.

Исследование было начато осенью и продолжалось до весны с целью сравнения действия продукта в разные времена года. Можно напомнить, что предполагается, что "барьерная" функция кожи повреждается в зимние месяцы. Анализ осуществляли в отношении всех участников.

Статистический анализ

Данные анализировали двумя способами:

- сравнение между двумя группами в различные моменты времени (6, 12, 18 и 24 недели) с использованием непараметрического анализа ANOVA (дисперсионного анализа) (в силу особенностей распределения значения выражают через медианы, а не через среднее);

- сравнение развития действия во времени; этот анализ, являющийся более общим, чем кинетика отклика, позволяет учитывать различия между двумя продуктами и экологические изменения; был использован анализ ANOVA, основанный на измерениях, повторяемых в двух периодах времени (полное исследование в течение 24 недель и до 12 недель (первый показатель исследования)).

В этих анализах учитываются референтные уровни в каждом случае.

Результаты

- Совокупность участников испытаний (Intend to treat population или (ITT))

Анализ совокупности ITT (n=67) показал в численной форме улучшение "барьерной" функции кожи, оцененное по TEWL (без SLS), для участников, потреблявших испытуемый продукт, по сравнению с участниками, потреблявшими контрольный продукт, причем на протяжении всего исследования.

Имеется естественное изменение "барьерной" функции (например, небольшое ухудшение зимой дает повышенное значение TEWL), но активный продукт имеет тенденцию преобладать над контрольным через 6 недель, а через 8 недель различия становятся весьма значимыми статистически. В период от 12 до 24 недель между воздействием испытуемого продукта и контрольного продукта (средние значения) значимые различия отсутствуют.

Через 18 недель сравнение процентных отношений увеличения значений TEWL в двух группах показывает наиболее значительную разницу (27,5%).

Через 24 недели было замечено улучшение "барьерной" функции в испытуемой группе (отрицательное значение TEWL по сравнению с референтным уровнем), что наводит на мысль об общем кумулятивном эффекте потребления продукта.

Анализ эффектов во времени показывает, что испытуемый продукт значимо уменьшает TEWL в течение исследования (24 недели потребления [p=0,02]), а также на стадии до 12 недель потребления ([p=0,036]).

В среднем в течение полного периода исследования разница TEWL между двумя группами составила 14%, что указывает на то, что потребление продукта вызывает увеличение задерживания воды кожей на 14%.

- Подгруппа BMI<25

Для подгруппы с индексами массы тела BMI<25 (n=23) были замечены изменения TEWL, вызванные изменением времени года. Данные результаты подобны результатам, наблюдавшимся в совокупности ITT.

TEWL для испытуемого продукта сравнивали по значимости с показателями для контрольного продукта через 6, 12 и 18 недель. Положительная тенденция была отмечена также и через 24 недели потребления. Результаты, выраженные в процентном отношении TEWL, показывают увеличение от 15 до 25% "барьерной" функции в испытуемой группе по сравнению с контрольной группой через 6 и 18 недель потребления соответственно.

Анализ действия во времени показывает значимые различия в течение периода до 24 недель [p=0,0031] и также в течение периода до 12 недель [p=0,0039]. В среднем в течение полного периода исследования разница TEWL между двумя группами составила 22,3%, что указывает на то, что потребление продукта вызывает увеличение задерживания воды кожей на 22,3%.

- Вторичные параметры

Статистический анализ вторичных параметров (гидратации, эластичности, кровяных маркеров воспаления и т.п.) показывает улучшение общего состояния кожи, оцененного по анкетам самооценки упругости и здоровья кожи через 12 недель.

- упругость: 46,2% участников в испытуемой группе почувствовали, что их кожа стала более упругой, тогда как в контрольной группе только 11,5% участников;

- здоровье: 46,2% участников в испытуемой группе описали свою кожу как более здоровую, тогда как в контрольной группе только 7,7% участников.

Для отслеживания прямого действия таких доз GTP и GLA на клетки кожи авторами изобретения были испытаны in vitro активные ингредиенты в определенном интервале концентраций.

Пример 4. Исследование in vitro индукции дифференциации кератиноцитов

Действие GLA и GTP, а также их комбинации на дифференциацию кератиноцитов количественно определяли по протеиновым маркерам созревания:

- по трансглутаминазе K (TGK) (Lee Y.S. et al. "Differentiation of cultured human epidermal keratinocytes at high cell densities is mediated by endogenous activation of the protein kinase C signaling pathway". J. Invest. Dermatol. 1998, Nov; 111(5):762-6; Eckert R.L. et al. Transglutaminase function in epidermis. J. Invest. Dermatol. 124:481-492, 2005);

- по инволюкрину (Candi et al. "The Cornified envelope: a model of cell death in the skin", Nature Publishing Group, April 2005, vol. 6).

Трансглутаминаза K интенсивно экспрессируется в кератиноците в случае достижения им стадии углубленного созревания (соответствующей началу преобразования в корнеоцит). Трансглутаминаза K участвует в синтезе керамидов внеклеточного матрикса Stratum Corneum, участвуя таким образом в поддержании хорошей гидратации кожи.

Инволюкрин представляет собой белок, входящий в состав Stratum Corneum. Таким образом, он представляет собой структурный белок роговой оболочки.

GLA и GTP были испытаны по отдельности и в комбинации в модели in vitro с целью:

- подтверждения их благотворного действия на созревание кератиноцитов посредством экспрессии TGK и инволюкрина;

- оценки их потенциального синергического эффекта посредством экспрессии TGK и инволюкрина.

1. Действие гамма-линоленовой кислоты (GLA) и полифенолов зеленого чая (GTP), а также их комбинации на экспрессию трансглутаминазы K

Природа испытуемых активных веществ

Используемая GLA представляет собой продукт L2378 производства компании SIGMA.

4 вида главных катехинов, образующих полифенолы зеленого чая, смешаны в природной пропорции: EGCG, EGC, ECG и EC (позиции по каталогу SIGMA E4143, E3768, E3893 и E4018 соответственно).

Интервал испытуемых концентраций in vitro составлял для GLA от 1 до 4 мкг/мл, а для GTP от 0,3 до 0,7 мкг/мл.

Условия культивирования NHEK

Испытания осуществляли с нормальными человеческими кератиноцитами (NHEK) в монослое. NHEK засевали в количестве 10⁴ клеток на лунку в среде SFM (бессывороточная среда) без кальция при температуре 37°C, в атмосфере 5% CO₂ и относительной влажности RH>95%. NHEK инкубировали в течение 24 ч. Затем среду удаляли. Далее NHEK инкубировали в течение 48 ч в присутствии:

- среды SFM (бессывороточной среды), дополненной гамма-линоленовой кислотой и полифенолами зеленого чая с концентрациями 1,25, 2,5 или 3,75 мкг/мл для GLA и 0,5 мкг/мл для GTP;

- среды SFM (бессывороточной среды) без кальция, служившей негативным контролем;

- среды SFM (бессывороточной среды), дополненной кальцием (1,50 мМ) и служившей позитивным контролем.

Затем среды удаляли и осуществляли вторую инкубацию в присутствии 3 типов сред.

Испытание на цитотоксичность

В первую очередь, для того чтобы иметь возможность оценить максимальную концентрацию обоих действующих веществ, переносимую NHEK в этих условиях, осуществляли испытание на цитотоксичность.

Жизнеспособность клеток NHEK оценивали после маркировки 3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолийбромидом (MTT) (SIGMA).

Так, например, для GLA максимальная концентрация без потери жизнеспособности NHEK составляет 5,00 мкг/мл.

Для смеси GTP максимальная концентрация без потери жизнеспособности NHEK составляет 1,00 мкг/мл.

Количественное определение маркера клеточной дифференциации

Культуральную среду удаляли и затем промывали PBS. Затем клетки пермеабилизовали и фиксировали абсолютным метанолом в течение 10 мин при -20°C. После высушивания осуществляли неспецифическое насыщение смесью "PBS-Tween 20-молочные белки" с последующей промывкой PBS. Клетки NHEK маркировали моноклональным антителом anti-TGK (позиция по каталогу: TEBU 0175003), затем инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре и промывали PBS.

Обнаружение осуществляли с конъюгированным вторичным антителом GAM-FITC (позиция по каталогу: Life Technologie A 11001) и измеряли флюоресценцию с использованием программного обеспечения (позиция по каталогу: NIKKON; LICIA Software).

Маркировку и подсчет ядер осуществляли по методике Hoechst. Сначала удаляли культуральную среду и промывали PBS. Затем вводили маркер Hoechst (позиция по каталогу: бис-бензимид Sigma B1155) и осуществляли инкубацию в течение 1 ч при комнатной температуре. Далее промывали PBS, регистрировали изображение и количественно определяли флюоресценцию.

Результаты выражали в удельной флюоресценции TGK, т.е. результаты соотносили с числом ядер с целью устранения влияния изменения числа клеток.

Кроме того, все результаты соотносили также с результатами негативного контроля (которые представляли собой нормальную дифференциацию и принимались за 100%).

Статистический анализ результатов

Статистический анализ результатов осуществляли с использованием программы JUMP 6 SAS Institute.

Критерий Дуннета (специализированный критерий для многократного сравнения, например, при сравнениях контрольной группы, осуществляемых со всеми остальными группами) позволяет подтвердить значимость результатов по сравнению с холостыми контрольными условиями.

Результаты

Результаты представлены на Фиг.1.

	Экспрессия TGK (средняя)	р Дуннет для TGK
Холостой негативный контроль	0	-
GLA, 1,25 мкг/мл	250	0,012
GLA, 3,75 мкг/мл	220	0,026
GTP, 0,5 мкг/мл	29	0,98
GLA, 2,5 мкг/мл + GTP, 0,5 мкг/мл	605	<0,0001
Позитивный контроль с Ca++	1407	<0,0001

Средняя экспрессия TGK соответствует значению флюоресценции, отнесенной к числу ядер с маркером Hoechst.

Критерий "р _Дуннет для TGK" соответствует вероятности допустить ошибку, утверждая, что значение является значимо отличающимся от значения негативного контроля (если p<5%, то это означает, что имеется значимая разница; если 5<p<10%, то это означает, что имеется тенденция).

Значения, полученные in vitro, представляют собой значения, соответствующие интервалу концентраций, найденных для GLA и GTP в сыворотке.

Результаты представлены на Фиг.1.

Выводы

Отдельное применение GLA

Экспрессия TGK после применения GLA, по видимости, активируется.

Такая активация представляется сходной для обеих испытуемых концентраций.

Такое положительное действие GLA находится в согласии с литературными данными.

Отдельное применение GTP

Применение GTP, кажется, не увеличивает значимым образом естественное созревание в этой модели и при испытуемых концентрациях.

(Единственным фактом, упомянутым в литературе, является эффект активации промотора инволюкрина посредством EGCG с высокой дозой, равной 20 мкг/мл).

Применение комбинации GLA и GTP

Активация TGK при совместном применении GLA и GTP является более значительной, чем активация, вызываемая применением одной GLA. Таким образом, имеется синергический эффект в тех случаях, когда прибавление GTP в некоторой концентрации, априори без видимого влияния в этих условиях, сильно увеличивает активацию TGK посредством одной GLA.

Эти результаты следует коррелировать с результатами клинического исследования (с результатами по TEWL).

2. Действие гамма-линоленовой кислоты (GLA) и экстрактов зеленого чая (GTE), а также их комбинации на экспрессию инволюкрина

Природа испытуемых активных веществ

Используемая GLA представляет собой продукт L2378 производства компании SIGMA. GLA растворяли в ДМСО и БСА, очищенном от свободных жирных кислот (Fatty Free Acid).

Используемый экстракт зеленого чая представляет собой продукт компании Taiyo Chemicals. Экстракт растворяли в стерильной воде.

Условия культивирования NHEK

Испытания осуществляли с нормальными человеческими кератиноцитами (NHEK) в монослое.

Кератиноциты, отобранные у участников-женщин, имели происхождение как из эпителия кожи живота (группа 1), так и из эпителия кожи груди (группа 2).

NHEK обеих групп инкубировали в течение 48 ч при низкой (0,3 мкг/мл) или высокой (1,2 мкг/мл) концентрации кальция в присутствии:

- среды SFM (бессывороточной среды), дополненной гамма-линоленовой кислотой в концентрации 0, 1, 3 и 10 мкг/мл и/или экстрактами зеленого чая, в которых концентрация полифенолов зеленого чая составляла приблизительно 88% мас.;

- среды SFM (бессывороточной среды), дополненной кальцием и служившей позитивным контролем.

Динамика кальция в кератиноцитах представляет собой один из факторов, обуславливающих их дифференциацию из клеток-штаммов.

После культивирования в течение 48 ч клетки собирали и затем лизировали. Белки извлекали и затем анализировали по методике ELISA.

Испытание на цитотоксичность

Жизнеспособность клеток NHEK оценивали после маркировки 3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолийбромидом (MTT) (SIGMA).

Значения, полученные in vitro , представляют собой значения, соответствующие интервалу концентраций, найденных для GLA и GTP в сыворотке.

Результаты испытаний на цитотоксичность показывают, что концентрации GTE и GLA не являются токсичными для NHEK до 10 мкг/мл при любой концентрации кальция.

Количественное определение экспрессии инволюкрина

Описанные далее испытания были повторены 6 раз.

Экспрессию инволюкрина определяли по методике ELISA.

Интервал испытуемых концентраций in vitro составлял для GLA от 0 до 10 мкг/мл, а для GTE от 0 до 10 мкг/мл.

Эти интервалы были выбраны по тарировочной кривой (зависимость абсорбции от концентрации), которую предварительно строили с использованием внутреннего стандарта (титрованного инволюкрина), поставляемого с набором.

Результаты абсорбции клеточных лизатов, полученные ранее, следует коррелировать с концентрациями инволюкрина в зависимости от тарировочной кривой.

Результаты

Результаты представлены на Фиг.2.

Отдельное применение GLA

Экспрессия инволюкрина увеличивалась после обработки NHEK групп 1 и 2 только GLA (от 0 до 10 мкг/мл) в условиях высокой или низкой концентрации кальция, определенных ранее.

Отдельное применение GTE

Экспрессия инволюкрина увеличивалась после обработки NHEK групп 1 и 2 только GTE (от 0 до 10 мкг/мл) в условиях высокой или низкой концентрации кальция, определенных ранее.

Применение комбинации GLA и GTE

Комбинация GLA и GTE обладает синергетическим эффектом в отношении экспрессии инволюкрина.

Действительно, активация экспрессии инволюкрина при совместном применении GLA и GTE является более значительной, чем активация, вызываемая одной GLA или одного GTE.

Такой синергический эффект хорошо виден как в группе 1, так и в группе 2, что свидетельствует о правильности полученных результатов.