фрагменты vip и способы их применения

Формула изобретения

1. Пептид, выбранный из группы, состоящей из: VIP (4-10) (SEQ ID NO:29), VIP (4-11) (SEQ ID NO:30), VIP (4-12) (SEQ ID NO:31), VIP (4-13) (SEQ ID NO:32), VIP (4-14) (SEQ ID NO:33), VIP (4-15) (SEQ ID NO:34), VIP (4-16) (SEQ ID NO:35), VIP (4-17) (SEQ ID NO:36), VIP (4-18) (SEQ ID NO:37), VIP (4-19) (SEQ ID NO:38), VIP (4-20) (SEQ ID NO:39), VIP (4-21) (SEQ ID NO:40), VIP (4-22) (SEQ ID NO:41), VIP (4-23) (SEQ ID NO:42), VIP (4-24) (SEQ ID NO:43), VIP (4-25) (SEQ ID NO:44), VIP (4-26) (SEQ ID NO:45), VIP (4-27) (SEQ ID NO:46), VIP (4-28) (SEQ ID NO:90), VIP (5-10) (SEQ ID NO:47), VIP (5-11) (SEQ ID NO:48), VIP (5-12) (SEQ ID NO:49), VIP (5-13) (SEQ ID NO:50), VIP (5-14) (SEQ ID NO:51), VIP (5-15) (SEQ ID NO:52), VIP (5-16) (SEQ ID NO:53), VIP (5-17) (SEQ ID NO:54), VIP (5-18) (SEQ ID NO:55), VIP (5-19) (SEQ ID NO:56), VIP (5-20) (SEQ ID NO:57), VIP (5-21) (SEQ ID NO:58), VIP (5-22) (SEQ ID NO:59), VIP (5-23) (SEQ ID NO:60), VIP (5-24) (SEQ ID NO:61), VIP (5-25) (SEQ ID NO:62), VIP (5-26) (SEQ ID NO:63), VIP (5-27) (SEQ ID NO:64), VIP (5-28) (SEQ ID NO:65), VIP (6-10) (SEQ ID NO:66), VIP (6-11) (SEQ ID NO:67), VIP (6-12) (SEQ ID NO:68), VIP (6-13) (SEQ ID NO:69), VIP (6-15) (SEQ ID NO:71), VIP (6-16) (SEQ ID NO:72), VIP (6-17) (SEQ ID NO:73), VIP (6-18) (SEQ ID NO:74), VIP (6-19) (SEQ ID NO:75), VIP (6-20) (SEQ ID NO:76), VIP (6-21) (SEQ ID NO:77), VIP (6-22) (SEQ ID NO:78), VIP (6-23) (SEQ ID NO:79), VIP (6-24) (SEQ ID NO:80), VIP (6-25) (SEQ ID NO:81), VIP (6-26) (SEQ ID NO:82), VIP (6-27) (SEQ ID NO:83), VIP (10-28) (SEQ ID NO:92), или их консервативных замен.

2. Композиция, содержащая пептид по п.1, для профилактического или терапевтического лечения фиброза миокарда и/или связанного с ним состояния.

3. Композиция по п.2, где связанное состояние представляет собой гипертонию.

4. Композиция по п.2 или 3, которую вводят в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем.

5. Композиция по п.2 или 3, которую вводят в сочетании с одним или несколькими активными агентами, используемыми для лечения сердечно-сосудистых заболеваний.

6. Композиция по п.2 или 3 для перорального, внутривенного, внутримышечного или подкожного путей введения.

7. Способ терапевтического или профилактического лечения фиброза миокарда и/или связанного с ним состояния у индивида, причем способ включает введение индивиду пептида по п.1.

8. Способ по п.7 для профилактики или замедления развития установленного фиброза миокарда.

9. Способ по п.7, где композиция используется для снижения степени развития установленного фиброза.

10. Способ по любому из пп.7-9, где связанное с ним состояние является гипертонией, диабетом, миокардитом, ишемической болезнью сердца, гипертрофией левого желудочка, диастолической дисфункцией, миокардитом, кардиомиопатией, дисфункцией левого желудочка, застойной сердечной недостаточностью (для которой фиброз миокарда может являться исходной патологией), приемом лекарственных препаратов, таких как даунорубицин и других препаратов, использующихся в противораковой химиотерапии, генетической предрасположенностью, другими заболеваниями, такими как синдром Конна или феохромоцитома или высокосолевой диетой.

11. Способ по любому из пп.7-9, где связанное состояние включает заболевания, которые вызывают образование профиброзных медиаторов, или состояния, которые предопределяют возникновение фиброза миокарда у индивида.

12. Способ по любому из пп.7-9, где профилактическое лечение используется для предупреждения или замедления развития фиброза в группе риска.

13. Способ по любому из пп.7-9, где связанное состояние представляет собой гипертонию и/или высокосолевую диету и/или диабет.

14. Способ по п.13, где связанное состояние представляет собой гипертонию.

15. Способ терапевтического или профилактического лечения фиброза миокарда путем снижения гипертонии у индивида, где способ включает введение индивиду пептида по п.1.

16. Способ по п.15 для профилактики или замедления прогрессирования установленного фиброза миокарда.

17. Способ по п.15 или 16 для снижения степени развития установленного фиброза миокарда.

18. Способ снижения кровяного давления у индивида, включающий введение индивиду пептида по п.1.

19. Способ лечения гипертонии у индивида, включающий введение индивиду пептида по п.1.

20. Способ по п.19, где у индивида имеется фиброз миокарда или связанное с ним состояние.

21. Способ снижения уровней, ингибирования или снижения продукции профиброзных медиаторов у индивида, причем способ включает введение индивиду пептида по п.1.

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к композициям и способам терапевтического или профилактического лечения фиброза миокарда или связанных с ним состояний. В частности, настоящее изобретение относится к композициям, содержащим определенные активные фрагменты VIP, и к их применению для лечения фиброза миокарда.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Любое обсуждение предшествующего уровня техники в настоящем описании не должно быть расценено как тот факт, что предшествующий уровень является широко известным или составляет часть общеизвестных сведений в данной области.

При фиброзе миокарда сердечная мышца замещается фиброзной тканью или шрамом. Это может снижать эластичность сердечной мышцы. Это может привести к снижению функции и, в конечном итоге, к выраженной сердечной недостаточности. Применение VIP и его некоторых фрагментов для терапевтического и профилактического лечения фиброза миокарда и связанных с ним состояний описано в PCT/AU2005/000835, приведенном в настоящем описании в качестве ссылки.

Общепринятая теория структурно-функционального взаимодействия в отношении активности VIP состоит в том, что N-концевые аминокислотные остатки (1-5) являются важными и необходимыми для передачи сигнала после связывания VIP с рецептором. Кроме того, существуют определенные ключевые аминокислотные остатки на всем протяжении молекулы VIP, расположенные в отдалении от N-конца, которые важны для связывания молекулы VIP с рецептором. Это позволяет предположить, что фрагменты VIP, которые лишены N-концевых остатков, или у которых отсутствует значительная часть белка, включающая остатки, вовлеченные в связывание с рецептором, не будут полностью функциональными. Более ранние исследования двух фрагментов VIP, описанных в PCT/AU2005/000835, указывают на то, что такие фрагменты VIP могут быть активными, по крайней мере, при лечении фиброза миокарда.

Предметом настоящего изобретения является идентификация дополнительных фрагментов VIP, активных при лечении заболеваний, таких как фиброз миокарда, которые могли быть лишены некоторых недостатков, связанных с использованием полноразмерной молекулы VIP или ее больших частей, или по крайней мере обеспечили бы эффективную альтернативу.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Несмотря на широко распространенную на сегодняшний момент теорию, неожиданно было обнаружено, что активность VIP и его фрагментов при лечении и/или профилактике фиброза миокарда не уменьшалась при удалении N-концевых остатков VIP или удалении большинства аминокислотных остатков, отвечающих за связывание с рецептором.

В целом изобретение относится к композициям для профилактического или терапевтического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния, такого как гипертония, содержащим фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP). Наиболее предпочтительно, фрагменты (VIP) имеют в качестве центральной последовательности аминокислотные остатки с 6 по 10 природного VIP или их консервативные замены. Однако они также могут иметь в качестве центральной последовательности остатки с 16 по 25 природного VIP или их консервативные замены.

Соответственно, в первом аспекте изобретение относится к композиции для профилактического или терапевтического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния, композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP), имеющих в качестве центральной последовательности аминокислотные остатки с 6 по 10 природного VIP или их консервативные замены.

Предпочтительными активными фрагментами VIP являются VIP(4-16), VIP(6-16), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-20) и VIP(6-24), при условии отсутствия фрагментов VIP (1-12) и VIP (6-28). Однако применение фрагментов VIP, содержащих VIP (1-12) и VIP (6-28), для лечения фиброза миокарда и других связанных с ним состояний, таких как гипертония, также охвачено настоящим изобретением.

Фармацевтически эффективное количество активного фрагмента VIP будет изменяться в зависимости от конкретного пациента и/или в соответствии с тяжестью заболевания или состояния. Эти переменные может установить специалист путем рутинного экспериментирования. Подходящий диапазон дозировок в качестве отправной точки можно вывести из дозировок, вводимых на животных моделях, описанных в настоящем документе, или из PCT/AU2005/000835.

Соответственно, второй аспект изобретения касается композиции для профилактического или терапевтического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния, композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP), имеющих в качестве центральной последовательности аминокислотные остатки с 16 по 25 из природного VIP или их консервативные замены.

Соответственно, в третьем аспекте изобретение относится к композиции для профилактического или терапевтического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния, композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP), выбранных из группы, состоящей из VIP(4-16), VIP(6-16), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(10-28), VIP(16-28), VIP(6-20) и VIP(6-24) или их консервативных замен.

Соответственно, в четвертом аспекте изобретение относится к композиции для профилактического или терапевтического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния, композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP), выбранных из группы, перечисленной в таблице 1, или их консервативных замен.

Композиции по изобретению можно вводить соединенные с фармацевтически приемлемым носителем, который может являться любым из известных в данной области или изобретенных в будущем, и подходящим для намеченного применения. Так же как и носители, фармацевтическая композиция изобретения может содержать другие ингредиенты, включая красители, консерванты, буферные агенты и антиоксиданты, например. В композиции по настоящему изобретению также можно включать другие активные агенты, подходящие для лечения сердечно-сосудистых заболеваний.

Фармацевтическая композиция по изобретению может находиться в любой приемлемой лекарственной форме, но, предпочтительно, она подходит для перорального, внутривенного, внутримышечного или подкожного введения. Другие способы введения, такие как пластыри, порошки для вдыхания через нос, назальные спреи и т.п., будут очевидны специалистам в данной области.

По пятому аспекту изобретение относится к способу терапевтического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния у индивида, способу, включающему введение индивиду с фиброзом миокарда или связанным с ним состоянием композиции по изобретению.

Композиции по изобретению можно использовать для профилактики или замедления прогрессирования установленного фиброза миокарда, а также для снижения степени развития установленного фиброза.

Шестой аспект изобретения относится к способу профилактического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния у индивида, способу, включающему введение индивиду с риском развития фиброза миокарда или связанного с ним состояния композиции по изобретению.

Что касается профилактического лечения, понятно, что такое лечение было бы в особенности эффективным для индивидов, имеющих риск развития фиброза миокарда или связанного с ним состояния. Примерами индивидов, находящихся в зоне риска, являются индивиды, страдающие гипертонией, диабетом, миокардитом, ишемической болезнью сердца, принимающие лекарственные препараты, такие как даунорубицин и другие препараты, которые используются в противораковой химиотерапии, имеющие генетическую предрасположенность и другие заболевания, такие как синдром Конна или феохромоцитому, находящиеся на диете с высоким содержанием соли и т.п. Профилактическое лечение можно применять для профилактики или снижения скорости развития фиброза у группы риска. Большая часть индивидов может уже иметь признаки начальной сердечной недостаточности на эхокардиограмме. Например, такие признаки присутствуют у примерно 80% пациентов с гипертонией. Еще чаще встречаемость этих признаков у пациентов с диабетом.

В соответствии с седьмым аспектом изобретение относится к способу профилактического или терапевтического лечения застойной сердечной недостаточности у индивида, к способу, включающему введение индивиду с риском развития застойной сердечной недостаточности фармацевтической композиции по изобретению.

В соответствии с восьмым аспектом изобретение относится к способу снижения уровня ингибирования или уменьшения продукции профиброзных медиаторов у индивида, к способу, включающему введение индивиду композиции по изобретению.

В соответствии с девятым аспектом изобретение относится к способу снижения образования коллагена или усиления разрушения коллагена в сердечной мышце индивида, к способу, включающему введение индивиду композиции по изобретению.

В соответствии с десятым аспектом изобретение относится к способу терапевтического или профилактического лечения гипертонии, к способу, включающему введение индивиду композиции по изобретению.

В соответствии с одиннадцатым аспектом изобретение относится к способу снижения кровяного давления у индивида, к способу, включающему введение индивиду композиции по изобретению.

Для специалиста будет очевидно, что возможно потребуется изменить схему применения композиций изобретения для оптимального эффекта. Возможно нужно будет принять в расчет природу заболевания или состояния, а также их тяжесть.

Связанные состояния, которые могут являться целью профилактики или лечения при помощи композиций по изобретению, могут включать гипертрофию левого желудочка, диастолическую дисфункцию, миокардит, кардиомиопатию, дисфункцию левого желудочка и застойную сердечную недостаточность (для которой фиброз миокарда может представлять собой исходную патологию). Связанное состояние может также включать состояния, которые вызывают образование профиброзных медиаторов, или состояния, которые определяют у индивида фиброз миокарда, такие как, например, гипертония и/или потребление большого количества соли, болезни, такие как диабет и т.п.

Дополнительный аспект изобретения относится к применению композиции по изобретению для производства лекарственного препарата для профилактического или терапевтического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния.

Еще один аспект изобретения относится к применению композиции по изобретению для получения лекарственного препарата для профилактического или терапевтического лечения застойной сердечной недостаточности.

В другом аспекте изобретение относится к композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP), при условии, что фрагменты VIP (1-12) и VIP (6-28) не включены.

В другом аспекте изобретение относится к композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP), имеющих в качестве центральной последовательности аминокислотные остатки 6-10 или 16-25 из природного VIP или его консервативные замены. Предпочтительно, чтобы фрагменты VIP (1-12) и VIP (6-28) не были включены.

Предпочтительно фрагмент VIP представляет собой один или несколько фрагментов, выбранных из группы, состоящей из:

или их консервативных замен.

В другом аспекте изобретение относится к композиции для профилактического или терапевтического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния, к композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP), где фрагмент VIP представляет собой один или несколько фрагментов, выбранных из группы, состоящей из:

или их консервативных замен.

В другом аспекте изобретение относится к композиции для профилактического или терапевтического лечения гипертонии, композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP), где фрагмент VIP представляет собой один или несколько фрагментов, выбранных из группы, состоящей из:

или их консервативных замен.

Предпочтительно композиции по настоящему изобретению вводят в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем. Их предпочтительно вводить в сочетании с одним или несколькими активными агентами, подходящими для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Их можно, в зависимости от предпочтений, ввести в фармацевтическую композицию для перорального, внутривенного, внутримышечного или подкожного введения.

В другом аспекте изобретение относится к способу терапевтического или профилактического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния у индивида, к способу, включающему введение индивиду композиции, включающей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP), имеющих в качестве центральной последовательности аминокислоты 6-10 или 16-25 из природного VIP или их консервативные замены.

В другом аспекте изобретение относится к способу терапевтического или профилактического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния у индивида, к способу, включающему введение индивиду композиции по настоящему изобретению.

В другом аспекте изобретение относится к способу терапевтического или профилактического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния у индивида, к способу, включающему введение индивиду композиции, включающей один или несколько фрагментов VIP, выбранных из группы, состоящей из:

или их консервативных замен.

Предпочтительно способ используется для профилактики или замедления прогрессирования установленного фиброза миокарда или, в качестве альтернативы, для снижения степени развития установленного фиброза.

Предпочтительно связанное состояние является гипертонией, диабетом, миокардитом, ишемической болезнью сердца, гипертрофией левого желудочка, диастолической дисфунцией, миокардитом, кардиомиопатией, дисфункцией левого желудочка, застойной сердечной недостаточностью (для которой фиброз миокарда может являться исходной патологией), лечение лекарственными препаратами, такими как даунорубицин и другие препараты, которые используются в противораковой химиотерапии, при генетической предрасположенности, других заболеваниях, таких как синдром Конна или феохромоцитома, диетой с высоким содержанием соли и т.п.

Предпочтительно связанное состояние включает состояния, которые вызывают образование профиброзных медиаторов, или состояния, которые предопределяют возникновение фиброза миокарда у индивида.

Предпочтительно профилактическое лечение применяется для профилактики или замедления развития фиброза в группе риска.

Предпочтительно состояние представляет собой гипертонию и/или высокое потребление соли, заболевания, такие как диабет и т.п. Наиболее предпочтительно состояние представляет собой гипертонию.

В другом аспекте изобретение относится к способу терапевтического или профилактического лечения фиброза миокарда путем снижения гипертонии, к способу, включающему введение пациенту или индивиду из группы риска композиции, содержащей фрагмент VIP.

В другом аспекте изобретение относится к способу терапевтического или профилактического лечения фиброза миокарда путем снижения гипертонии, к способу, включающему введение при связанном состоянии композиции, включающей один или несколько фрагментов VIP, выбранных из группы, состоящей из

или их консервативных замен.

Предпочтительно способ используется для профилактики или замедления развития установленного фиброза миокарда.

Предпочтительно способ используется для снижения развития установленного фиброза миокарда.

В другом аспекте изобретение относится к способу снижения кровяного давления, содержащему введение индивиду композиции, включающей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких из вазоактивного интестинального пептида (VIP) и/или его активного фрагмента с фармацевтически приемлемым носителем.

В другом аспекте изобретение относится к способу снижения кровяного давления, содержащему введение нуждающемуся в этом индивиду композиции, включающей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP), имеющих в качестве центральной последовательности аминокислотные остатки 6-10 или 16-25 природного VIP или их консервативные замены.

В другом аспекте изобретение относится к способу снижения кровяного давления, содержащему введение индивиду композиции, включающей один или несколько фрагментов VIP, выбранных из группы, состоящей из

или их консервативных замен.

В другом аспекте изобретение относится к способу лечения гипертонии, содержащему введение индивиду композиции, включающей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP), имеющих в качестве центральной последовательности аминокислотные остатки 6-10 или 16-25 природного VIP или их консервативные замены.

В другом аспекте изобретение относится к способу лечения гипертонии, содержащему введение индивиду композиции, включающей фармацевтически эффективное количество одного или нескольких функциональных фрагментов вазоактивного интестинального пептида (VIP), имеющих в качестве центральной последовательности аминокислотные остатки 6-10 или 16-25 природного VIP или их консервативные замены.

В другом аспекте изобретение относится к способу терапевтического или профилактического лечения гипертонии, способу, включающему введение индивиду композиции, включающей один или несколько фрагментов VIP, выбранных из группы, состоящей из

или их консервативных замен.

Предпочтительно индивид страдает фиброзом миокарда или связанным состоянием.

В другом аспекте изобретение относится к способу снижения уровней ингибирования или снижения продукции профиброзных медиаторов у индивида, к способу, включающему введение индивиду композиции по настоящему изобретению.

В другом аспекте изобретение относится к способу снижения образования коллагена или усиления разрушения коллагена в сердечной мышце индивида, к способу, включающему введение индивиду композиции по изобретению.

В другом аспекте изобретение относится к применению композиции по изобретению при изготовлении лекарственного препарата для лечения или профилактики фиброза миокарда или связанного с ним состояния.

Предпочтительно применение представляет собой профилактику или замедление развития установленного фиброза миокарда. В качестве альтернативы, применение представляет собой профилактику или замедление развития фиброза в группе риска. Также предпочтительным является применение для снижения степени развития установленного фиброза.

Предпочтительно связанное состояние является гипертонией, диабетом, миокардитом, ишемической болезнью сердца, гипертрофией левого желудочка, диастолической дисфункцией, миокардитом, кардиомиопатией, дисфункцией левого желудочка, застойной сердечной недостаточностью (для которой фиброз миокарда может являться исходной патологией), приемом лекарственных препаратов, таких как даунорубицин и другие препараты, которые используются в противораковой химиотерапии, генетической предрасположенностью, другими заболеваниями, такими как синдром Конна или феохромоцитома, диетой с высоким содержанием соли и т.п.

Предпочтительно связанное состояние включает состояния, которые вызывают образование профиброзных медиаторов, или состояния, которые предопределяют возникновение фиброза миокарда у индивида. Предпочтительное состояние представляет собой гипертонию и/или высокое потребление соли, болезни, такие как диабет, и т.п.

В другом аспекте изобретение относится к применению композиции, включающей один или несколько фрагментов VIP, выбранных из группы, состоящей из

или их консервативных замен, в производстве лекарственного препарата для терапевтического или профилактического лечения фиброза миокарда или связанного с ним состояния.

В другом аспекте изобретение относится к применению композиции, включающей один или несколько фрагментов VIP, выбранных из группы, состоящей из

или их консервативных замен, в производстве лекарственного препарата для терапевтического или профилактического лечения фиброза миокарда посредством снижения гипертонии.

В другом аспекте изобретение относится к применению VIP или его фрагмента в производстве лекарственного препарата для снижения кровяного давления у индивида. Предпочтительно, чтобы фрагмент VIP представлял собой один или несколько фрагментов VIP, выбранных из группы, состоящей из

В другом аспекте изобретение относится к применению VIP для получения лекарственного препарата для терапевтического или профилактического лечения гипертонии. Предпочтительно фрагмент VIP представляет собой один или несколько фрагментов VIP, выбранных из группы, состоящей из

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг.1: Сравнение степени развития фиброза миокарда у крыс WKY на высокосолевой диете после 4 недель инфузии носителя, VIP(6-16) или VIP(4-16).

Фиг.2: Сравнение фиброза миокарда у крыс в возрасте 14 недель (нулевая точка), затем находящихся на высокосолевой диете в течение 4 недель, которые получали инфузионно или носитель, или VIP(6-16) (5 пмоль/кг/мин) в течение 4 недель.

Фиг.3: Фиброз миокарда у 18-недельных крыс WKY после 4 недель на высокосолевой диете и получавших VIP(6-16), VIP(10-28), VIP(16-28), VIP(4-16) и VIP(1-12) или контроль (носитель). Все пептиды вводились инфузией при 5 пмоль/кг/мин в течение 4 недель.

Фиг.4: Фиброз миокарда у 18-недельных крыс WKY после 4 недель высокосолевой диеты и получавших природный VIP, VIP(6-28), VIP(6-16) или контроль (носитель). Все пептиды вводились инфузией при 5 пмоль/кг/мин в течение 4 недель.

Фиг.5: Фиброз миокарда у 18-недельных крыс WKY после 4 недель высокосолевой диеты и получавших природный VIP, VIP(6-28), VIP(10-28), VIP(16-28), VIP(4-16) и VIP(1-12) или контроль (носитель). Все пептиды вводились инфузией при 5 пмоль/кг/мин в течение 4 недель.

Фиг.6: Систолическое кровяное давление (СКД) у крыс SHR после 4 недель на высокосолевой диете и получавших VIP(l-28), VIP(4-10), VIP(4-12), VIP(4-16), VIP(4-20), VIP(4-24) и VIP(4-28) или контроль. Все пептиды вводились инфузией при 5 пмоль/кг/мин в течение 4 недель.

Фиг.7: Систолическое кровяное давление (СКД) у крыс SHR после 4 недель на высокосолевой диете и получавших VIP(l-28), VIP(6-10), VIP(6-12), VIP(6-16), VIP(6-20), VIP(6-24) и VIP(6-28) или контроль. Все пептиды вводились инфузией при 5 пмоль/кг/мин в течение 4 недель.

Фиг.8: Систолическое кровяное давление (СКД) у крыс SHR после 4 недель на высокосолевой диете и получавших VIP(l-28), VIP(16-20), VIP(16-24) и VIP(16-28) или контроль. Все пептиды вводились инфузией при 5 пмоль/кг/мин в течение 4 недель.

Фиг.9: Систолическое кровяное давление (СКД) у крыс SHR после 4 недель на высокосолевой диете и получавших VIP(1-28), VIP(1-12) и VIP(10-28) или контроль. Все пептиды вводились инфузией при 5 пмоль/кг/мин в течение 4 недель.

ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОГО ВАРИАНТА ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

На сегодняшний момент довольно неожиданно с точки зрения общепринятых теорий в данной области было обнаружено, что фрагменты VIP, у которых отсутствуют аминокислоты и мотивы, которые, как полагают, являются важными для функции VIP, тем не менее являются полезными терапевтическими агентами для реверсии или задержки начала фиброза миокарда, или для профилактики начала фиброза у индивидов, имеющих риск его развития. Следовательно, фрагменты VIP также могут использоваться для лечения застойной сердечной недостаточности.

Применение фармацевтических композиций по изобретению в лечении фиброза миокарда или связанных с ним состояний представляет новый класс терапевтических агентов для этих состояний. Существующие методы лечения фиброза миокарда или связанных с ним состояний обычно нацелены на один или, самое большее, два из известных механизмов, являющихся причиной фиброза миокарда. Без желания быть связанными любым конкретным механизмом действия полагают, что фармацевтические препараты изобретения могут иметь своей мишенью практически все известные на сегодняшний день факторы, способствующие возникновению фиброза миокарда.

На основании данных исследований и не желая быть связанными теорией постулируется, что фрагменты VIP действуют в качестве основных регуляторов предотвращения развития фиброза, и что истощение VIP может высвобождать синтез ряда профиброзных медиаторов, таким образом, вызывая поражение миокарда. Возможно, что фрагменты VIP настоящего изобретения способны действовать во многом по тому же пути, что и природный VIP, и больше подходят для терапевтического применения благодаря меньшему размеру и, следовательно, увеличенной стабильности и легкости их промышленного изготовления.

Кроме этого, неожиданно, для ряда фрагментов, у которых отсутствовали определенные аминокислотные остатки и домены, которые считались важными для их функций, было показано, что они являются активными в настоящих исследованиях. Особенно полезными фрагментами являются VIP(6-16), VIP(16-28), VIP(10-28), VIP(6-12), VIP(6-10), VIP(6-20), VIP(6-24) и VIP(4-16). Кроме того, также ожидается, что фрагменты, перечисленные в таблице 1, также будут применимы в способах настоящего изобретения. Фрагменты VIP(1-12) и VIP(6-28) были описаны ранее и не включены в настоящее изобретение. Ясно, что настоящее изобретение также охватывает в своем объеме определенные аналоги фрагментов VIP, которые основаны на консервативных заменах одной или нескольких аминокислот из фрагментов VIP аминокислотами, которые не меняют биологическую активность фрагментов VIP. Такие замены были бы хорошо известны специалистам в данной области и не потребовали бы больше, чем простой метод проб и ошибок с использованием хорошо устоявшихся методик. Следовательно, термин «фрагмент VIP», применяемый в контексте настоящего изобретения, подразумевает включение таких аналогов.

Другие используемые фрагменты VIP перечислены в таблице 1. Все последовательности относятся к VIP и фрагментам VIP человека, но благодаря высокому уровню консервативности белка VIP и его фрагменты из других видов млекопитающих также предусмотрены и охвачены настоящим изобретением.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, которые включают активные фрагменты VIP. Такие композиции могут включать любой тип лекарственной формы, такой как таблетки, капсулы, порошки, жидкие рецептуры, рецептуры с отложенным или продолжительным временем высвобождения, пластыри, лекарственные порошки для вдыхания через нос, спреи для носа и т.п. Композиции могут также включать другие ингредиенты, такие как красители, консерванты, буферные агенты и антиоксиданты, например. Предлагаемые физическая форма и содержание фармацевтических композиций представляют собой обычные препараты, рецептура которых может быть составлена специалистом в области фармацевтики и основана на повсеместно принятых принципах и композициях, описанных, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19^th Edition, 1995; British Pharmacopoeia 2000 и аналогичных учебниках и руководствах по фармацевтике. Композиции по настоящему изобретению могут также включать другие активные агенты, полезные при лечении сердечно-сосудистых состояний.

Путь и частота введения композиций по настоящему изобретению будут зависеть от требований способа лечения и природы вводимой молекулы. Поэтому рецептуры могут соответственно приготавливаться для введения при помощи внутривенной, внутримышечной или подкожной инъекций. Фрагменты VIP также подходят для введения через слизистую таким путем, как пероральный, сублингвальный, через слизистую носа и т.п. Специалист в данной области легко установит эти параметры.

Было показано, что фармацевтические композиции изобретения являются эффективными для профилактики или замедления прогресса установленного фиброза миокарда, а также для снижения степени тяжести (регрессии) установленного фиброза, и, поэтому, важны для терапии. Композиции по настоящему изобретению также являются эффективными для профилактического или терапевтического лечения застойной сердечной недостаточности. Это является важными сведениями в отношении диапазона и тяжести состояний, которые можно лечить композициями настоящего изобретения.

Кроме этого, композиции настоящего изобретения можно применять профилактически у индивидов, имеющих риск развития фиброза миокарда или связанного с ним состояния. Примерами индивидов в категории риска являются те, кто страдает гипертонией, диабетом, миокардитом, ишемической болезнью сердца, принимает лекарства, такие как даунорубицин, и другие, которые используются в противораковой химиотерапии, имеет генетическую предрасположенность, другие состояния, такие как синдром Конна или феохромоцитому, находятся на диете с высоким содержанием соли и т.п. Термин «профилактический», используемый в контексте настоящего изобретения, подразумевает inter alta охват методов лечения, применяемых для профилактики или замедления развития фиброза в группе риска. Большая часть индивидов, которые могут получать профилактическое лечение, могут уже иметь признаки начальной стадии сердечной недостаточности на эхокардиографии.

Термин «связанное с ним состояние», используемый в контексте настоящего изобретения и в связи с фиброзом миокарда, подразумевает включение без ограничений гипертрофии левого желудочка, диастолической дисфункции, миокардита, кардиомиопатии, дисфункции левого желудочка и застойной сердечной недостаточности (при которой фиброз миокарда может являться исходной патологией). Ассоциированное состояние может также включать состояния, которые вызывают образование профиброзных медиаторов, такие как, например, гипертония и/или высокое потребление соли, болезни, такие как диабет и т.п.

Посредством сохранения содержания VIP в сердечной мышце индивида с фиброзом миокарда или ассоциированным состоянием, или имеющего риск их развития, при применении композиций настоящего изобретения, можно добиться значительного успеха в терапии этих болезней, включая уменьшение фиброза, снижение уровня, продукции или активности профиброзных медиаторов, снижение прогрессирования фиброза, снижение образования коллагена или усиления деградации коллагена в сердечной мышце.

Далее изобретение описано более подробно на неограничивающих примерах.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Все основные методологии и методики были подробно описаны в PCT/AU2005/000835, включенном полностью в настоящее описание посредством ссылки.

Пример 1 - Эффект инфузии фрагмента VIP на фиброз у животных моделей фиброза

Использовали четыре животных модели фиброза миокарда (животные были получены от Australian Animal Resources, Perth, Western Australia, Australia)

i) крысы WKY, находящиеся на высокосолевой диете;

ii) крысы WKY, находящиеся на высокосолевой диете, которые получали L-NAME ( -монометил-нитро-L-аргинин, Sigma Chemical Co.) в количестве 10 мг/кг/день в питьевой воде;

iii) крысы WKY с диабетом, вызванным инъекцией стрептозотоцина 60 мг/кг;

iv) крысы SHR, находящие на диете с содержанием соли 2,2% в течение 4 недель.

В каждой модели крыс отбирали случайным образом для инфузии

(все пептиды получены от или синтезированы в Auspep, Australia) или носителя в качестве контроля (раствор Хартмана, Baxter) в течение 4 недель через мининасос Alzet (n=6-8 для каждой экспериментальной группы). Дозировка каждого пептида была равна 5 пмоль/кг/мин.

В моделях i) и ii) крыс WKY в возрасте 14 недель переводили на высокосолевую диету или высокосолевую диету плюс L-NAME. Они подвергались оперативному вмешательству для того, чтобы вставить мининасос Alzet для инфузии VIP или носителя. После 4 недель крыс анестезировали и проводили забор сердец. Уровень прогресса фиброза миокарда оценивали количественно.

В модели iii) крысам вводили при помощи инъекции стрептозотоцин в количестве 60 мг/кг в возрасте 14 недель. После 8 недель крыс с диабетом отбирали случайным образом для инфузии пептида (5 пмоль/кг/мин) или без воздействия. Пептиды вводили, как указано выше. После дополнительных 4 недель крыс анестезировали и забирали сердца, как указано выше.

В модели iv) крыс SHR в возрасте 14 недель переводили на диету с содержанием соли 2,2%. Им вводили при помощи оперативного вмешательства мининасос Alzet для инфузии пептида или носителя. После 4 недель крыс анестезировали и забирали сердца. Уровень прогресса фиброза миокарда количественно оценивали, как указано выше.

Степень прогресса фиброза миокарда количественно оценивали при помощи двух методов известным образом (смотри Ye VZC, Hodge G, Yong JLC & Duggan KA (2002) Early myocardial fibrosis is associated with depletion of vasoactive intestinal peptide in the heart Exp. Physiol 87:539-546 Ye VZC, Hodge G, Yong JLC & Duggan KA (2003) Myocardial VIP and myocardial fibrosis induced by nitric oxide synthase inhibition in the rat Acta Physiol. Scand. 179:353-360. Ye VZC, Hodge G, Yong JLC & Duggan KA (2004) Vasopeptidase inhibition reverses myocardial VIP depletion and decreases myocardial fibrosis in salt sensitive hypertension Europ. J. Pharmacol. 485:235-242).

Значительное улучшение было найдено в сердцах крыс, получавших лечение, так как показатели фиброза миокарда были существенно ниже у крыс, получавших лечение по сравнению с контрольными группами (фиг. 1).

Пример 2 - Эффект воздействия фрагмента VIP на регрессию фиброза у животных моделей фиброза

Для того чтобы определить вызывает ли инфузия VIP (6-16), VIP(6-20) и VIP(6-24) регрессию существующего фиброза, также как предотвращает ли прогрессирование фиброза, провели две группы исследований. Степень развития фиброза миокарда у 14-недельных крыс, не получавших лечение, сравнили с степенью развития фиброза у 18-недельных крыс WKY после 4 недель воздействия высокосолевой диеты или высокосолевой диеты плюс L-NAME (10 мг/кг/день) и инфузии или VIP (6-16), VIP(6-20) и VIP(6-24) (5 пмоль/кг/мин) или контроля носителя (смотри фиг. 2).

Предварительные результаты показаны на фиг. 2. Из данных ясно видно регрессию фиброза миокарда после инфузии VIP(6-16). Регрессия фиброза может происходить благодаря или уменьшению образования коллагена, или усилению его разрушения. Несмотря на нежелание быть связанными любым конкретным механизмом действия, весьма вероятно, что регрессия фиброза миокарда происходит благодаря действию коллагеназ, которые играют роль в резорбции коллагена.

Важность настоящего изобретения для здравоохранения будет сразу очевидна для специалиста по прочтении этого описания. Хотя возможности терапии сердечной недостаточности были значительно улучшены с приходом ингибиторов ангиотензин-конвертирующего фермента (АСЕ) и блокаторов ангиотензинового рецептора, а также с получением информации о том, что альдостероновые антагонисты и бета-блокаторы улучшают исход на поздних стадиях заболевания, добавление фармацевтических препаратов изобретения, которые действуют, предотвращая развитие исходного патологического изменения (фиброза), или даже обращая вспять развитие фиброза, дают способность предотвратить обострение болезни из слабо выраженного состояния до тяжелого, и, следовательно, значительно снизить нагрузку на систему здравоохранения. Общий размер отдельных фрагментов VIP и их активность делают их идеально подходящими в качестве мишеней для разработки лекарственного препарата.

ПРИМЕР 3 - Эффект воздействия фрагмента VIP на кровяное давление у животной модели гипертонии

Для того чтобы определить, являются ли VIP и его фрагменты эффективными для контроля кровяного давления, крыс с самопроизвольным повышенным давлением (SHR) приучили к измерению кровяного давления плетизмографом с рукавом, накладывающимся на хвост, и затем их поместили на диету с содержанием соли, равным 2,2%.

Крыс отбирали случайным образом для инфузии контроля-носителя (раствора Хартмана),

Проводили инфузию каждого пептида при 5 пмоль/кг/мин.

Кровяное давление измеряли при помощи плетизмографии с рукавом, накладывающимся на хвост, дважды в неделю в течение 4 недель.

Полученные измерения систолического кровяного давления (СКД) показаны на фиг. 6-9. Некоторые из фрагментов показывали снижение СКД относительно контрольного раствора. Не наблюдалось, чтобы VIP сам по себе обладал сколько-нибудь значительным эффектом на снижение СКД, но ряд фрагментов, особенно VIP(6-28), VIP(4-24), VIP(4-28) и, более детально, VIP(4-16), VIP(4-12), VIP(4-20), VIP(6-20) и VIP(6-24) давали существенное снижение СКД. Фиг.6 в некоторой степени является иллюстрацией сложности предсказания активности фрагмента VIP, исходя из структуры. VIP(4-16) является менее эффективным, чем либо VIP(4-12), который имеет на 4 аминокислоты меньше, либо VIP(4-20), который длиннее на 4 аминокислоты.

VIP(6-28) был описан в PCT/AU2005/000835, как эффективный для профилактики фиброза миокарда.

Понятно, что другие варианты осуществления и варианты композиций, способов и применений изобретения с сохранением идеи и духа изобретения предусмотрены и находятся в объеме настоящего изобретения.