способ определения активности лизоцима в слезной жидкости у детей раннего возраста

Формула изобретения

Способ определения состояния лизоцимной активности слезной жидкости путем забора слезы, отличающийся тем, что забор слезы проводят при помощи стерильных дисков, выполненных из пористого материала, с последующим формированием микробного газона и определением активности лизоцима диффузией лизоцима с диска в микробный газон, который затем инкубируют в термостате не менее 24 ч, а зону задержки роста микроорганизмов определяют измерением диаметра зоны задержки роста микроорганизмов, при этом диаметр зоны ограничения роста у здоровых детей 28-30 мм, у детей с воспалительными заболеваниями глаз диаметр зоны ограничения роста меньше - 20-24 мм.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и касается способов определения состояния местного иммунитета, применимо к детям первого года жизни, основано на определении активности лизоцима.

Способы определения активности лизоцима в слезе и других биологических жидкостях известны, однако они основаны либо на титровании предварительным забором слезы в количестве 0,1 мл [см., например, патент № 2115735, МПК C12Q 1/34, A61B 3/02, опубл. 20.07.1998], либо на лиофилизации тест-культуры Micrococcus Lysodeikticus с последующим впрыскиванием суспензии, приготовленной на основе лиофилизата, в биологический объект [см., например, патент РФ № 2294373, МПК C12Q 1/02, G01N 33/48, опубл. 27.02.2007].

Наиболее близким к изобретению, выбранным за прототип является способ диагностики кератоконуса, одно из составляющих которого - определение активности лизоцима путем забора слезы в количестве 0,1 мл с последующим ее смешиванием с взвесью Micrococcus Lysodecticus в фосфатном буфере, инкубированием и определением оптической плотности образца [см., например, патент РФ № 2115735, МПК C12Q 1/34, A61B 3/02, опубл. 20.07.1998].

Недостатком известного способа является невозможность его применения к детям раннего возраста, а, особенно, к детям первого года жизни, так как у них невозможно забрать слезу в количестве 0,1 мл.

Задачей заявленного изобретения является возможность определения активности лизоцима в слезе у детей, начиная с неонатального возраста.

Задача решается способом определения активности лизоцима в слезной жидкости, в котором забор слезы из глаз детей осуществляют при помощи дисков, выполненных из пористого материала, которые пропитываются слезой, с последующим определением активности лизоцима диффузионным методом.

В рамках исследования активность лизоцима в слезной жидкости определена у здоровых детей из группы контроля и больных детей, страдающих дакриоциститом новорожденных. Как показали результаты проведенных исследований, активность лизоцима в слезной жидкости у детей с дариоциститом новорожденных снижена по сравнению с группой контроля.

Предлагаемый способ определения активности лизоцима у детей раннего возраста осуществляют следующим образом.

Из 24-часовой агаровой культуры Micrococcus Lysodecticus (штамм № 2665, полученный из ГИСК им. Тарасевича) по оптическому стандарту мутности 0,5 по Макфарланду готовят суспензию тест-культуры в физиологическом растворе. На поверхность питательного шоколадного агара равномерно рассеивают эту суспензию с формированием микробного газона. Забор слезы осуществляют стерильными дисками из фильтровальной бумаги диаметром 5 мм, путем погружения диска в нижний свод конъюкнтивы. Пропитанный слезой диски укладывают на поверхность приготовленного микробного газона, который инкубируют в термостате 24 часа. Учет результатов проводят через 24 часа по диаметру зоны задержки роста.

У здоровых детей первого года жизни из группы контроля зона задержки роста составляет составляет 25-30 мм, большинство значений находится в промежутке 28-30 мм, у детей, страдающих воспалительной патологией глаз (в нашем случае - дакриоциститом новорожденных), зона ограничения роста составляет 19-26 мм, большинство значений находится в промежутке 20-24 мм.

Пример 1. Больной Г., 4 мес. С рождения отмечаются жалобы на слизисто-гнойное отделяемое из обоих глаз, на фоне лечения (закапывания сульфацил-натрия, закладывания тетрациклиновой мази и проведения массажа слезного мешка, улучшения не было).

С данными жалобами родители ребенка обратились в ДРКБ. При нажатии на область слезного мешка из нижней слезной точки входит слизисто-гнойное отделяемое. Ребенку выставлен диагноз: дакриоцистит новорожденного. В соответствиии с предлагаемым способом определена активность лизоцима в слезной жидкости. Зона задержки роста Micrococcus Lysodeikticus составляет 23 мм на обоих глазах, что свидетельствует о снижении лизоцимной активности слезной жидкости по сравнению со здоровыми детьми.

Пример 2. Больная Р., 12 дней. С рождения отмечались обильные гнойные выделения из обоих глаз, лечение не получала, затем появилось опухолевидное плотное образование и гиперемия кожи в проекции слезного мешка. С данными жалобами ребенок госпитализирован в отделение патологии новорожденных ДРКБ. Объективно отмечалась гиперемия кожи и плотные округлые опухолевидные образования в проекции слезного мешка, при надавливании на слезный мешок отделяемого не было, при бужировании нижнего слезного канальца получено обильное гнойное отделяемое в количестве 0,8 мл с каждой стороны. Ребенку выставлен диагноз: флегмона слезного мешка с обеих сторон. В соответствии с предлагаемым способом определена активность лизоцима в слезе. Зона задержки роста Micrococcus Lysodeikticus составляет 20 мм на обоих глазах, что свидетельствует о снижении лизоцимной активности слезы по сравнению со здоровыми детьми.

Таким образом, проведенные исследования показали снижение активности лизоцима у детей с воспалительными заболеваниями глаз по сравнению с группой контроля. Предлагаемый способ дает возможность оценить состояние местного иммунитета по состоянию лизоцимной активности слезы при различных заболеваниях глаз и найти пути более эффективного лечения этих заболеваний.

Преимуществом данного изобретения является возможность применения данного способа у детей, начиная с неонатального возраста, простота выполнения, возможность оценить состояние местного иммунитета глаз по состоянию лизоцимной активности слезы при различных заболеваниях глаз, получение результата в короткие сроки с минимальным количеством затрат на проведение данной методики.