комбинация ингибитора гда и антиметаболита

Формула изобретения

1. Применение ингибитора гистондеацетилазы (ГДА) N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамида или его фармацевтически приемлемой соли и антиметаболита 5-азацитидина или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства, для замедления развития или лечения пролиферативного заболевания, выбранного из миелодиспластического синдрома (МДС) или острого миелобластного лейкоза (ОМЛ).

2. Применение по п.1, где пролиферативное заболевание представляет собой миелодиспластический синдром.

3. Применение по п.1, где пролиферативное заболевание представляет собой острый миелобластный лейкоз.

Описание изобретения к патенту

Область, к которой относится изобретение

Изобретение относится к комбинации, включающей:

(a) ингибитор гистондеацетилазы (ГДА), и

(b) антиметаболит,

для одновременного, совместного, раздельного или последовательного применения, прежде всего, для применения при лечении пролиферативных заболеваний, более подробно, миелодиспластического синдрома (МДС) или острого миелобластного лейкоза (ОМЛ). Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, включающим указанную комбинацию, а также способу лечения млекопитающих, прежде всего, человека, страдающих от МДС или ОМЛ, с использованием указанной комбинации. В настоящем изобретении также предлагается коммерческая упаковка или продукт, включающий указанную комбинацию.

Предпосылки создания изобретения

Обратимое ацетилирование гистонов является главным регулятором генной экспрессии, который изменяет доступность ДНК для факторов транскрипции. В нормальных клетках гистондеацетилаза (ГДА) и гистон-ацетилтрансфераза совместно контролируют степень ацетилирования гистонов и таким образом поддерживают равновесие. Ингибирование ГДА приводит к накоплению сверхацетилированных гистонов, что в свою очередь инициирует ряд ответных реакций в клетках. В ряде работ исследовали терапевтическое действие ингибиторов ГДА на раковые клетки. В результате последних исследований были выявлены высокоэффективные и стабильные активные соединения, которые пригодны для лечения опухолей.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что эффективность применения ингибиторов ГДА существенно возрастает при использовании указанных соединений в комбинации с другими химиотерапевтическими агентами, при этом наблюдаются синергетические и аддитивные эффекты, как в отношении эффективности, так и в отношении безопасности. Терапевтическое действие комбинаций хемотерапевтических агентов с ингибитором ГДА позволяет вводить каждый компонент комбинации в более низком безопасном диапазоне доз.

Краткое изложение сущности изобретения

Настоящее изобретение относится к органическим соединениям, прежде всего, фармацевтическим композициям для применения в комбинации с антиметаболитом для замедления развития или лечения пролиферативного заболевания, прежде всего, солидной опухоли.

Неожиданно было установлено, что определенные ингибиторы ГДА в комбинации с антиметаболитом проявляют эффективность при замедлении развития или лечении пролиферативного заболевания, прежде всего, МДС или ОМЛ.

Подробное описание фигур

На фиг.1 представлены данные, свидетельствующие о том, что при введении LBH589 в комбинации с продуктом 5-AzaC наблюдаются более высокие уровни р21 и расщепление PARP, по сравнению с каждым из указанных соединений в отдельности.

На фиг.2 представлены данные об индуцировании апоптоза при введении LBH589, 5-азацитидина или комбинации LBH589 + 5-азацитидин в клетках ОМЛ линии U937.

Подробное описание вариантов осуществления изобретения

В настоящем изобретении предлагается способ замедления развития или лечения субъекта, страдающего от МДС или ОМЛ, который заключается в том, что субъекту, нуждающемуся в таком лечении, вводят эффективное количество ингибитора ГДА формулы (I),

где

R₁ обозначает Н, галоген или C₁-С₆алкил с прямой цепью, прежде всего, метил, этил или н-пропил, при этом метил, этил и н-пропил незамещены или замещены одним или более заместителями, значения которых описаны ниже для алкильных заместителей,

R₂ выбран из Н, C₁-С₁₀ алкила, предпочтительно С₁-С₆алкила, например, метила, этила или -СН₂СН₂-ОН, С₄ -С₉циклоалкила, С₄-С₉гетероциклоалкила, С₄-С₉гетероциклоалкилалкила, циклоалкилалкила, например, циклопропилметила, арила, гетероарила, арилалкила, например, бензила, гетероарилалкила, например, пиридилметила, -(СН₂)_nC(O)R₆, -(СН₂ )_nOC(O)R₆, аминоацила, HON-С(O)-СН=С(R ₁)арилалкила- и -(СН₂)_nR₇ ,

R₃ и R₄ являются одинаковыми или различными, и независимо обозначают Н, C₁-С ₆алкил, ацил или ациламиногруппу, или

R ₃ и R₄ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С=O, C=S или C=NR₈, или

R₂ вместе с атомом азота, к которому он присоединен, и R₃, вместе с атомом углерода, к которому он присоединен, образуют С₄-С₉ гетероциклоалкил, гетероарил, полигетероарил, неароматический полигетероцикл, или смешанный арильный и неарильный полигетероциклический цикл,

R₅ выбран из Н, C₁-С₆ алкила, С₄-С₉циклоалкила, С₄ -С₉гетероциклоалкила, ацила, арила, гетероарила, арилалкила, например, бензила, гетероарилалкила, например, пиридилметила, ароматических полициклов, неароматических полициклов, смешанных арильных и неарильных полициклов, полигетероарила, неароматических полигетероциклов, и смешанных арильных и неарильных полигетероциклов,

n, n₁, n₂ и n₃ являются одинаковыми или различными и независимо равны 0-6, если n ₁ равно 1-6, то каждый атом углерода необязательно и независимо замещен группами R₃ и/или R₄,

X и Y являются одинаковыми или различными заместителями, и независимо выбраны из Н, галогена, С₁-С₄алкила, таких как СН₃ и CF₃, NO₂, C(O)R ₁, OR₉, SR₉, CN и NR₁₀ R₁₁.

R₆ выбран из Н, С ₁-С₆алкила, С₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉гетероциклоалкила, циклоалкилалкила, например, циклопропилметила, арила, гетероарила, арилалкила, например, бензила и 2-фенилэтенила, гетероарилалкила, например, пиридилметила, OR₁₂ и NR₁₃R₁₄ ,

R₇ выбран из OR₁₅, SR ₁₅, S(O)R₁₆, SO₂R₁₇, NR ₁₃R₁₄ и NR₁₂SO₂R₆ ,

R₈ выбран из H, OR₁₅, NR₁₃R₁₄, C₁-С₆алкила, С₄-С₉циклоалкила, C₄-С₉ гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила, например, бензила и гетероарилалкила, например, пиридилметила,

R₉ выбран из С₁-С₄алкила, например, СН₃ и CF₃, С(O)алкила, например, С(O)СН ₃ и C(O)CF₃,

R₁₀ и R₁₁ являются одинаковыми или различными заместителями, которые независимо выбраны из Н, С₁-С₄алкила и -С(O)алкила,

R₁₂ выбран из Н, C ₁-С₆алкила, С₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉гетероциклоалкила, С₄-С ₉гетероциклоалкилалкила, арила, смешанного арильного и неарильного полицикла, гетероарила, арилалкила, например, бензила и гетероарилалкила, например, пиридилметила,

R ₁₃ и R₁₄ являются одинаковыми или различными заместителями, которые независимо выбраны из Н, C₁ -С₆алкила, С₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила, например, бензила, гетероарилалкила, например, пиридилметила, аминоацила или

R₁₃ и R₁₄ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют С₄-С₉гетероциклоалкил, гетероарил, полигетероарил, неароматический полигетероцикл или смешанный арильный и неарильный полигетероцикл,

R₁₅ выбран из Н, С ₁-С₆алкила, С₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила и (СН₂)_mZR ₁₂,

R₁₆ выбран из C₁ -С₆алкила, С₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉гетероциклоалкила, арила, гетероарила, полигетероарила, арилалкила, гетероарилалкила и (СН₂ )_mZR₁₂,

R₁₇ выбран из C₁-С₆алкила, С₄-С₉ циклоалкила, С₄-С₉гетероциклоалкила, арила, ароматических полициклов, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила, полигетероарила и NR₁₃R₁₄,

m равно целому числу от 0 до 6, а

Z выбран из О, NR₁₃, S и S(O),

или его фармацевтически приемлемой соли в комбинации с антиметаболитом.

Термин "незамещенный" обозначает отсутствие заместителя или, что единственными заместителями являются атомы водорода.

Галогеновые заместители выбирают из фтора, хлора, брома и иода, предпочтительными являются фтор или хлор.

Алкильные заместители включают C₁-С₆алкил с прямой или разветвленной цепью, если не указано иное. Примеры пригодных заместителей C₁-С₆алкил с прямой или разветвленной цепью включают метил, этил, н-пропил, 2-пропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил и т.п. Если не указано иное, алкильная группа включает незамещенные алкильные группы и алкильные группы, замещенные одним или более пригодными заместителями, включающими ненасыщенные группы (т.е. группы, содержащие одну или более двойных или тройных С-С связей), ацил, циклоалкил, галоген, оксиалкил, алкиламиногруппу, аминоалкил, ациламиногруппу и OR₁₅, например, алкоксигруппу. Предпочтительные заместители алкильной группы включают галоген, гидроксигруппу, алкоксигруппу, оксиалкил, алкиламиногруппу и аминоалкил.

Циклоалкильные заместители включают С₃-С₉ циклоалкильные группы, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и т.п., если не указано иное. Если не указано иное, циклоалкильные заместители включают незамещенные циклоалкильные группы и циклоалкильные группы, замещенные одним или более пригодными заместителями, включающими C₁-С₆алкил, галоген, гидроксигруппу, аминоалкил, оксиалкил, алкиламиногруппу и ОR₁₅, такой как алкоксигруппа. Предпочтительными заместителями циклоалкильных групп являются галоген, гидроксигруппа, алкоксигруппа, оксиалкил, алкиламиногруппа и аминоалкил.

Все вышеизложенное относительно алкильных и циклоалкильных заместителей относится также к алкильным группам в составе других заместителей, таких как (не ограничиваясь ими) алкоксигруппа, алкиламины, алкилкетоны, арилалкил, гетероарилалкил, алкилсульфонил, а также алкиловые сложноэфирные группы и т.п.

Гетероциклоалкильные заместители включают 3-9-членные алифатические циклы, такие как 4-7-членные алифатические циклы, содержащие 1-3 гетероатома, которые выбирают из азота, серы, кислорода. Примеры пригодных гетероциклоалкильных заместителей включают пирролидил, тетрагидрофурил, тетрагидротиофуранил, пиперидил, пиперазил, тетрагидропиранил, морфилиногруппу, 1,3-диазепин, 1,4-диазепин, 1,4-оксазепан и 1,4-оксатиапан. Если не указано иное, циклы являются незамещенными или замещенными по атомам углерода одним или более пригодными заместителями, включающими C₁-С₆алкил, С₄-С₉циклоалкил, арил, гетероарил, арилалкил, например, бензил, гетероарилалкил, например, пиридилметил, галоген, аминогруппу, алкиламиногруппу и OR₁₅, например, алкоксигруппу. Если не указано иное, гетероатомы азота являются незамещенными или замещенными водородом, C₁-С₄алкилом, арилалкилом, например, бензилом, гетероарилалкилом, например, пиридилметилом, ацилом, аминоацилом, алкилсульфонилом и арилсульфонилом.

Циклоалкилалкильные заместители включают соединения формулы -(СН₂)_n5-циклоалкил, где n5 равно 1-6. Пригодные алкилциклоалкильные заместители включают циклопентилметил, циклопентилэтил, циклогексилметил и т.п. Такие заместители являются незамещенными или замещенными в алкильном или циклоалкильном фрагменте пригодным заместителем, включающим группы, указанные выше для заместителей для алкила и циклоалкила.

Арильные заместители включают незамещенный фенил и фенил, замещенный одним или более пригодными заместителями, включающими С₁ -С₆алкил, циклоалкилалкил, например, циклопропилметил, O(СО)алкил, оксиалкил, галоген, нитрогруппу, аминогруппу, алкиламиногруппу, аминоалкил, алкилкетоны, нитрил, карбоксиалкил, алкилсульфонил, аминосульфонил, арилсульфонил и OR₁₅, такой как алкоксигруппа. Предпочтительные заместители включают C₁-С₆ алкил, циклоалкил, например, циклопропилметил, алкоксигруппу, оксиалкил, галоген, нитрогруппу, аминогруппу, алкиламиногруппу, аминоалкил, алкилкетоны, нитрил, карбоксиалкил, алкилсульфонил, арилсульфонил и аминосульфонил. Примеры пригодных арильных групп включают С₁-С₄алкилфенил, С₁ -С₄алкоксифенил, трифторметилфенил, метоксифенил, гидроксиэтилфенил, диметиламинофенил, аминопропилфенил, карбэтоксифенил, метансульфонилфенил и толилсульфонилфенил.

Ароматические полициклы включают нафтил, а также нафтил, замещенный одним или более пригодными заместителями, включающими C₁-С ₆алкил, алкилциклоалкил, например, циклопропилметил, оксиалкил, галоген, нитрогруппу, аминогруппу, алкиламиногруппу, аминоалкил, алкилкетоны, нитрил, карбоксиалкил, алкилсульфонил, арилсульфонил, аминосульфонил и OR₁₅, такой как алкоксигруппа.

Гетероарильные заместители включают соединения, содержащие 5-7-членный ароматический цикл, включающий один или более гетероатомов, например, 1-4 гетероатома, которые выбирают из N, О и S. Типичные гетероарильные заместители включают фурил, тиенил, пиррол, пиразол, триазол, тиазол, оксазол, пиридин, пиримидин, изоксазолил, пиразин и т.п. Если не указано иное, гетероарильные заместители являются незамещенными или замещенными по атому углерода одним или более пригодными заместителями, включающими алкил, алкильные заместители, описанные выше, а также другой гетероарильный заместитель. Атомы азота являются незамещенными или замещенными, например, группой R₁₃, прежде всего, пригодные заместители по атому азота включают Н, С₁-С₄алкил, ацил, аминоацил и сульфонил.

Арилалкильные заместители включают группы формулы -(СН₂)_n5арил, -(СН₂ )_n5-1(СН-арил)(СН₂)_n5арил или -(СН₂)_n5-1СН(арил)(арил), где арил и n ₅ имеют значения, как указано выше. Указанные арилалкильные заместители включают бензил, 2-фенилэтил, 1-фенилэтил, толил-3-пропил, 2-фенилпропил, дифенилметил, 2-дифенилэтил, 5,5-диметил-3-фенилпентил и т.п. Арилалкильные заместители являются незамещенными или замещенными в алкильном или арильном фрагменте или обоих фрагментах, как описано выше для алкила и арила.

Гетероарилалкильные заместители включают группы формулы -(СН₂)_n5 гетероарил, где гетероарил и n₅ имеют значения, указанные выше, а мостиковая группа соединена с атомом углерода или атомом азота в составе гетероарильного фрагмента, такого как 2-, 3- или 4-пиридилметил, имидазолилметил, хинолилэтил и пирролилбутил. Гетероарильные заместители являются незамещенными или замещенными, как описано выше для гетероарила и алкила.

Аминоацильные заместители включают группы формулы -С(O)-(СН₂) _n-C(H)(NR₁₃R₁₄)-(СН₂) _n-R₅, где n, R₁₃, R₁₄ и R₅ имеют значения, указанные выше. Пригодные аминоацильные заместители включают природные и синтетические аминокислоты, такие, как глицил, D-триптофанил, L-лизил, D- или L-гомосерил, 4-аминобутироил и ±-3-амино-4-гексеноил.

Неароматические полициклические заместители включают бициклические и трициклические конденсированные циклические системы, где каждый цикл включает 4-9 атомов и может содержать 0, 1 или более двойных и/или тройных связей. Пригодные примеры неароматических полициклических систем включают декалин, октагидроинден, пергидробензоциклогептен и пергидробензо[f]азулен. Указанные заместители являются незамещенными или замещенными, как описано выше для циклоалкила.

Смешанные арильные и неарильные полициклические заместители включают бициклические и трициклические конденсированные циклические системы, где каждый цикл включает 4-9 атомов и, по крайней мере, один цикл является ароматическим. Пригодные примеры смешанных арильных и неарильных полициклических систем включают метилендиоксифенил, бис-метилендиоксифенил, 1,2,3,4-тетрагидронафталин, дибензосуберан, дигидроантрацен и 9Н-флуорен. Указанные заместители являются незамещенными или замещенными нитрогруппой или, как описано выше для циклоалкила.

Полигетероарильные заместители включают бициклические и трициклические конденсированные циклические системы, где каждый цикл независимо включает 5 или 6 атомов и содержит один или более гетероатомов, например, 1, 2, 3 или 4 гетероатома, которые выбирают из группы, включающей О, N или S, а конденсированная циклическая система является ароматической. Пригодные примеры полигетероарильных циклических систем включают хинолин, изохинолин, пиридопиразин, пирролопиридин, фуропиридин, индол, бензофуран, бензотиофуран, бензиндол, бензоксазол, пирролохинолин и т.п. Если не указано иное, полигетероарильные заместители являются незамещенными или замещенными по атому углерода одним или более пригодными заместителями, включающими алкил, алкильные заместители, описанные выше и заместитель формулы -O-(СН₂СН=СН(СН ₃)(СН₂))_1-3Н. Атомы азота являются незамещенными или замещенными, например, группой R₁₃ , прежде всего, пригодные заместители по атому азота включают Н, С₁-С₄алкил, ацил, аминоацил и сульфонил.

Неароматические полигетероциклические заместители включают бициклические и трициклические конденсированные циклические системы, где каждый цикл включает 4-9 атомов и содержит один или более гетероатомов, например, 1, 2, 3 или 4 гетероатома, которые выбирают из О, N или S, и содержит 0 или 1 или более двойных или тройных С-С связей. Пригодные примеры неароматических полигетероциклических систем включают гекситол, цис-пергидроциклогепта[b]пиридинил, декагидробензо[f][1,4]оксазепинил, 2,8-диоксабицикло[3.3.0]октан, гексагидротиено[3,2-b]тиофен, пергидропирроло[3,2-b]пиррол, пергидронафтиридин, пергидро-1Н-дициклопента[b,е]пиран. Если не указано иное, неароматические полигетероциклические заместители являются незамещенными или замещенными по атому углерода одним или более заместителями, включающими алкил и алкильные заместители, описанные выше. Атомы азота являются незамещенными или замещенными, например, группой R₁₃, прежде всего, предпочтительные заместители по атому азота включают Н, С₁-С₄алкил, ацил, аминоацил и сульфонил.

Смешанные арильные и неарильные полигетероциклические заместители включают бициклические и трициклические конденсированные циклические системы, где каждый цикл включает 4-9 атомов и содержит один или более гетероатомов, которые выбирают из О, N или S, при этом, по крайней мере, один из циклов является ароматическим циклом. Пригодные примеры смешанных арильных и неарильных полигетероциклических систем включают 2,3-дигидроиндол, 1,2,3,4-тетрагидрохинолин, 5,11-дигидро-10Н-дибензо[b,е][1,4]диазепин, 5Н-дибензо[b,е][1,4]диазепин, 1,2-дигидропирроло[3,4-b][1,5]бензодиазепин, 1,5-дигидропиридо[2,3-b][1,4]диазепин-4-он, 1,2,3,4,6,11-гексагидробензо[b]пиридо[2,3-е][1,4]диазепин-5-он. Если не указано иное, смешанные арильные и неарильные полигетероциклические системы являются незамещенными или замещенными по атому углерода одним или более пригодными заместителями, включающими -N-ОН,=N-OH, алкил, а также алкильные заместители, описанные выше. Атомы азота являются незамещенными или замещенными, например, группой R ₁₃, прежде всего, предпочтительные заместители по атому азота включают Н, C₁-С₄алкил, ацил, аминоацил и сульфонил.

Аминозаместители включают первичные, вторичные и третичные амины и солевую форму четвертичных аминов. Примеры аминозаместителей включают моно- и диалкиламиногруппы, моно- и диариламиногруппы, моно- и диарилалкиламиногруппы, ариларилалкиламиногруппы, алкилариламиногруппы, алкиларилалкиламиногруппы и т.п.

Сульфонильные заместители включают алкилсульфонил и арилсульфонил, например, метансульфонил, бензенсульфонил, тозил и т.п.

Ацильные заместители включают группы формулы -C(O)-W, -OC(O)-W, -C(O)-O-W или -C(O)NR₁₃R₁₄, где W обозначает R₁₆, Н или циклоалкилалкил.

Ациламинозаместители включают группы формулы -N(R₁₂)C(O)-W, -N(R₁₂ )C(O)-O-W и -N(R₁₂)C(O)-NHOH, где R₁₂ и W имеют значения, указанные выше.

Заместитель R₂, НОN-С(O)-СН=С(R₁)арилалкил-, обозначает группу формулы

Предпочтительными в каждом случае являются следующие заместители:

R₁ обозначает Н, галоген или С₁-С₄алкил с прямой цепью,

R₂ выбран из Н, C₁-С₆ алкила, С₄-С₉циклоалкила, С₄ -С₉гетероциклоалкила, циклоалкилалкила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкил, -(СН₂)_nC(O)R ₆, аминоацила и -(СН₂)_nR₇ ,

R₃ и R₄ являются одинаковыми или различными заместителями, независимо выбранными из Н и С ₁-С₆алкила, или

R₃ и R₄ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют C=О, C=S или C=NR₈,

R ₅ выбран из Н, С₁-С₆алкила, С ₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉ гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила, ароматического полицикла, неароматического полицикла, смешанного арильного и неарильного полицикла, полигетероарила, неароматического полигетероцикла, а также смешанного арильного и неарильного полигетероцикла,

n, n₁, n₂ и n₃ являются одинаковыми или различными, и независимо равны 0-6, если n равно 1-6, каждый атом углерода незамещен или независимо замещен группами R₃ и/или R₄,

X и Y являются одинаковыми или различными и независимо выбраны из Н, галогена, С₁-С₄алкила, CF₃, NO₂ , C(O)R₁, OR₉, SR₉, CN и NR ₁₀R₁₁,

R₆ выбран из Н, C₁-С₆алкила, С₄-С₉ циклоалкила, С₄-С₉ гетероциклоалкила, алкилциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила, OR₁₂ и NR₁₃R₁₄,

R₇ выбран из OR₁₅, SR₁₅, S(O)R₁₆ , SO₂R₁₇, NR₁₃R₁₄ и NR₁₂SO₂R₆,

R₈ выбран из H, OR₁₅, NR₁₃R ₁₄, C₁-С₆алкила, С₄-С ₉циклоалкила, С₄-С₉ гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила и гетероарилалкила,

R₉ выбран из С₁-С₄алкила и С(O)алкила,

R₁₀ и R₁₁ являются одинаковыми или различными заместителями, которые независимо выбраны из Н, С₁-С₄алкила и -С(O)алкила,

R₁₂ выбран из Н, C₁-С₆алкила, С₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉ гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила и гетероарилалкила,

R₁₃ и R₁₄ являются одинаковыми или различными заместителями, независимо выбраны из Н, C ₁-С₆алкила, С₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила и аминоацила,

R ₁₅ выбран из Н, C₁-С₆алкила, С ₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉ гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила и (СН₂)_mZR₁₂,

R₁₆ выбран из C₁-С₆алкила, С ₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉ гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила и (СН₂)_mZR₁₂,

R₁₇ выбран из C₁-С₆алкила, С ₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉ гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила и NR₁₃R₁₄,

m равно целому числу от 0 до 6, а

Z выбран из О, NR₁₃ , S и S(O),

или их фармацевтически приемлемая соль.

Предпочтительные соединения формулы (I) включают соединения, где каждый R₁, X, Y, R₃ и R₄ обозначает Н, включая соединения, где один n ₂ и n₃ равен 0, а другой равен 1, прежде всего, где R₂ обозначает Н или -СН₂-СН₂ -ОН.

Один пригодный класс соединений гидроксамата включает соединения формулы (Iа),

где

n₄ равно 0-3,

R₂ выбран из Н, С₁-С ₆алкил, С₄-С₉циклоалкила, С₄ -С₉гетероциклоалкила, циклоалкилалкила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила, -(СН₂)_nC(O)R ₆, аминоацила и -(СН₂)_nR₇ , а

R₅ обозначает гетероарил, гетероарилалкил, например, пиридилметил, ароматические полициклы, неароматические полициклы, смешанные арильные и неарильные полициклы, полигетероарильные или смешанные арильные и неарильные полигетероциклы,

или их фармацевтически приемлемую соль.

Другой пригодный класс соединений гидроксамата включает соединения формулы (Iа),

где

n₄ равно 0-3,

R₂ выбран из Н, С₁-С ₆алкила, С₄-С₉циклоалкила, С ₄-С₉гетероциклоалкила, циклоалкилалкила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила, -(СН₂) _nC(O)R₆, аминоацила и -(СН₂) _nR₇,

R₅ обозначает арил, арилалкил, ароматические полициклы, неароматические полициклы и смешанные арильные и неарильные полициклы, прежде всего, арил, такой как пара-фторфенил, пара-хлорфенил, пара-О-С₁ -С₄алкилфенил, такой как пара-метоксифенил, и пара-С ₁-С₄алкилфенил, а также арилалкил, такой как бензил, орто-, мета- или пара-фторбензил, орто-, мета- или пара-хлорбензил, орто-, мета- или пара- моно-, ди- или три-O-С₁-С ₄алкилбензил, такой как орто-, мета- или пара-метоксибензил, мета,пара-диэтоксибензил, орто, мета,пара-триметоксибензил и орто-, мета- или пара- моно-, ди- или три-C₁-С ₄алкилфенил, такой как пара-метил, мета,мета-диэтилфенил, или их фармацевтически приемлемую соль.

Другим, представляющим интерес классом, являются соединения формулы (Ib),

где

R₂ выбран из Н, C₁-С₆алкила, С₄ -С₆циклоалкила, циклоалкилалкила, например, циклопропилметила, (СН₂)_2-4ОR₂₁ где R₂₁ обозначает Н, метил, этил, пропил, изопропил, и

R₅ обозначает незамещенный 1Н-индол-3-ил, бензофуран-3-ил или хинолин-3-ил или замещенный 1H-индол-3-ил, такой как 5-фтор-1Н-индол-3-ил или 5-метокси-1H-индол-3-ил, бензофуран-3-ил или хинолин-3-ил,

или их фармацевтически приемлемую соль.

Другим, представляющим интерес классом соединений гидроксамата являются соединения формулы (Iс),

где

цикл, содержащий Z₁, является ароматическим или неароматическим, при этом неароматические циклы являются насыщенными или ненасыщенными,

Z₁ обозначает О, S или N-R₂₀ ,

R₁₈ обозначает Н, галоген, C ₁-С₆алкил (метил, этил, трет-бутил), С₃ -С₇циклоалкил, арил, например, незамещенный фенил или фенил, замещенный группами 4-ОСН₃ или 4-CF ₃, или гетероарил, такой как 2-фуранил, 2-тиофенил или 2-, 3- или 4-пиридил,

R₂₀ обозначает Н, С₁-С₆алкил, С₁-С₆ алкил(С₃-С₆)циклоалкил, например, циклопропилметил, арил, гетероарил, арилалкил, например, бензил, гетероарилалкил, например, пиридилметил, ацил, например, ацетил, пропионил и бензоил, или сульфонил, например, метансульфонил, этансульфонил, бензенсульфонил и толуолсульфонил,

A₁ обозначает 1, 2 или 3 заместителя, которые независимо обозначают Н, C₁ -С₆алкил, -OR₁₉, галоген, алкиламиногруппу, аминоалкил, галоген или гетероарилалкил, например, пиридилметил,

R₁₉ выбран из Н, C₁-С ₆алкила, С₄-С₉циклоалкила, С ₄-С₉гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила, например, бензила, гетероарилалкила, например, пиридилметила и -(СН₂СН=СН(СН₃)(СН₂)) _1-3Н,

R₂ выбран из Н, С ₁-С₆алкила, С₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉гетероциклоалкила, циклоалкилалкила, арила, гетероарила, арилалкила, гетероарилалкила, -(СН₂ )_nC(O)R₆, аминоацила и -(СН₂ )_nR₇,

v равно 0, 1 или 2,

р равно 0-3,

q равно 1-5, а r равно 0, или

q равно 0, а r равно 1-5,

или их фармацевтически приемлемую соль.

Другие заместители имеют значения, указанные выше.

Пригодными соединениями формулы (Iс) являются, прежде всего, соединения, где R₂ обозначает Н или -(СН₂ )рСН₂OН, где р равно 1-3, прежде всего, соединения, где R₁ обозначает Н, соединения, где R₁ обозначает Н, а каждый X и Y обозначают Н, и где q равно 1-3, а r равно 0 или где q равно 0, а r равно 1-3, прежде всего, соединения, где Z₁ обозначает N-R₂₀. Предпочтительными соединениями являются соединения, где R₂ обозначает Н или -СН₂-СН₂-ОН, а сумма q и r предпочтительно равна 1.

Другим, представляющим интерес классом соединений гидроксамата являются соединения формулы (Id),

где

Z₁ обозначает О, S или N-R₂₀,

R₁₈ обозначает Н, галоген, С₁-С₆алкил (метил, этил, трет-бутил), С₃-С₇циклоалкил, арил, например, незамещенный фенил или фенил, замещенный группами 4-ОСН ₃ или 4-СF₃, или гетероарил,

R₂₀ обозначает Н, С₁-С₆алкил, С₁-С₆алкил(С₃-С₉)циклоалкил, например, циклопропилметил, арил, гетероарил, арилалкил, например, бензил, гетероарилалкил, например, пиридилметил, ацил, например, ацетил, пропионил и бензоил или сульфонил, например, метансульфонил, этансульфонил, бензенсульфонил, толуолсульфонил,

А₁ обозначает 1, 2 или 3 заместителя, которые независимо обозначают Н, C₁-С₆алкил, -OR₁₉ или галоген,

R₁₉ выбран из Н, C ₁-С₆алкила, С₄-С₉циклоалкила, С₄-С₉гетероциклоалкила, арила, гетероарила, арилалкила, например, бензила, и гетероарилалкила, например, пиридилметила,

р равно 0-3, и

q равно 1-5, а r равно 0 или

q равно 0, а r равно 1-5,

или их фармацевтически приемлемая соль.

Другие заместители имеют значения, указанные выше.

Пригодными соединениями формулы (Id) являются, прежде всего, соединения, где R₂ обозначает Н или -(СН ₂)_pСН₂ОН, где р равно 1-3, прежде всего, соединения, где R₁ обозначает Н, соединения, где R₁ обозначает Н, и каждый X и Y обозначает Н, и где q равно 1-3, а r равно 0 или, где q равно 0, а r равно 1-3. Предпочтительными соединения являются соединения, где R ₂ обозначает Н или -СН₂-СН₂-ОН, а сумма q и r предпочтительно равна 1.

Настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (Iе):

или их фармацевтически приемлемой соли.

Другие заместители имеют значения, указанные выше.

Пригодными соединениями формулы (Iе) являются, прежде всего, соединения, где R₁₈ обозначает Н, фтор, хлор, бром, С₁-С₄алкил, замещенный С ₁-С₄алкил, С₃-С₇циклоалкил, незамещенный фенил, фенил, замещенный в пара-положении, или гетероарил, например, пиридил.

Другой группой пригодных соединений являются соединения формулы (Iе), где R₂ обозначает Н или -(СН₂)_рСН₂ОН, где р равно 1-3, прежде всего, соединения, где R₁ обозначает Н, соединения, где R₁ обозначает Н, и каждый X и Y обозначает Н, и где q равно 1-3, а r равно 0 или, где q равно 0, а r равно 1-3. Предпочтительными соединения являются соединения, где R ₂ обозначает Н или -СН₂-СН₂-ОН, а сумма q и r предпочтительно равна 1. Наиболее предпочтительными являются соединения, где р равно 1, a R₃ и R₄ предпочтительно обозначают Н.

Другой группой пригодных соединений формулы (Iе) являются соединения, где R ₁₈ обозначает Н, метил, этил, трет-бутил, трифторметил, циклогексил, фенил, 4-метоксифенил, 4-трифторметилфенил, 2-фуранил, 2-тиофенил или 2-, 3- или 4-пиридил, при этом 2-фуранил, 2-тиофенил и 2-, 3- или 4-пиридил являются незамещенными или замещенными, как описано для гетероарила, R₂ обозначает Н или -(СН ₂)_рСН₂ОН, где р равно 1-3, прежде всего, соединения, где R₁ обозначает Н, и каждый X и Y обозначает Н, и где q равно 1-3, а r равно 0 или, где q равно 0, а r равно 1-3. Предпочтительными соединениями являются соединения, где R₂ обозначает Н или -СН₂-СН₂ -ОН, а сумма q и r предпочтительно равна 1.

Указанные соединения формулы (Iе), где R₂₀ обозначает Н или C₁-С₆алкил, прежде всего Н, являются предпочтительным членами каждого из подклассов соединений формулы (Iе), описанных выше.

Наиболее предпочтительными соединениями формулы (Iе) являются N-гидрокси-3-[4-[[(2-гидроксиэтил)[2-(1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид, N-гидрокси-3-[4-[[[2-(1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид и N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид или их фармацевтически приемлемая соль.

В одном варианте осуществления изобретения ингибитором ГДА является N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-7Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид.

Настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (If),

или их фармацевтически приемлемой соли.

Другие заместители имеют значения, указанные выше.

Пригодными соединениями формулы (If) являются соединения, где R₂ обозначает Н или -(СН₂ )_рСН₂ОН, где р равно 1-3, прежде всего, соединения, где R₁ обозначает Н, соединения, где R ₁ обозначает Н, и каждый X и Y обозначает Н, и, где q равно 1-3, а r равно 0 или, где q равно 0, а r равно 1-3. Предпочтительными соединения являются соединения, где R₂ обозначает Н или -СН₂-СН₂-ОН, а сумма q и r предпочтительно равна 1.

Наиболее предпочтительным соединением формулы (If) является N-гидрокси-3-[4-[[[2-(бензофур-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид или его фармацевтически приемлемая соль.

Соединения, описанные выше, обычно используют в виде фармацевтически приемлемой соли. Фармацевтически приемлемые соли включают, если они образуются, фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли и кислотно-аддитивные соли, например, соли металлов, такие как соли щелочных и щелочноземельных металлов, соли аммония, аддитивные соли органических аминов и аминокислот, а также сульфонаты. Кислотно-аддитивные соли включают соли неорганических кислот, такие как гидрохлорид, сульфат и фосфат, а также кислотно-аддитивные соли органических кислот, такие как алкилсульфонат, арилсульфонат, ацетат, малеат, фумарат, тартрат, цитрат и лактат. Примеры солей металлов включают соли щелочных металлов, таких как натрий и калий, соли щелочноземельных металлов, таких как магний и кальций, соль алюминия и соль цинка. Примеры солей аммония включают соль аммония и соль тетраметиламмония. Примеры аддитивных солей органических аминов включают соли морфолина и пиперидина. Примеры аддитивных солей аминокислот включают соли глицина, фенилаланина, глутаминовой кислоты и лизина. Сульфонаты включают мезилаты, тозилаты и бензенсульфонаты.

Дополнительные соединения ингибиторов ГДА формулы формулы (I), а также способы их получения описаны в заявке WO 02/22577. Согласно заявке WO 02/22577 предпочтительными соединениями являются два соединения: N-гидрокси-3-[4-[(2-гидрокиэтил){2-(1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид формулы (II):

или его фармацевтически приемлемая соль, и N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид формулы (III):

или его фармацевтически приемлемая соль.

Термин "антиметаболит", использованный в данном контексте, обозначает соединение, ингибирующее или прерывающее синтез ДНК, что приводит к гибели клеток. Примеры антиметаболитов включают (не ограничиваясь ими) 6-меркаптопурин, цитарабин, флударабин, флексуридин, фторурацил, капецитабин, ралтитрексед, метотрексат, кладрибин, гемцитабин, гидрохлорид гемцитабина, тиогуанин, гидроксимочевина, агенты, деметилирующие ДНК, такие как 5-азацитидин и децитабин, эдатрексат, и антагонисты фолиевой кислоты, такие как (не ограничиваясь ими) пеметрексед. Капецитабин можно вводить, например, в виде коммерческого препарата, например, под торговым названием XELODA, а гемцитабин в виде препарата под торговым названием GEMZAR.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения антиметаболитом является 5-азацитидин.

Кроме того, в изобретении предлагается применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или пролекарства (в виде сложного эфира) для получения лекарственного средства, предназначенного для применения в комбинации с антиметаболитом при лечении пролиферативного заболевания.

В другом объекте изобретения предлагается применение ингибитора ГДА в комбинации с антиметаболитом для лечения пролиферативного заболевания, прежде всего МДС или ОМЛ.

В еще одном объекте изобретения предлагается ингибитор ГДА в качестве активного ингредиента для применения в комбинации с антиметаболитом, предназначенной для лечения пролиферативного заболевания, прежде всего МДС или ОМЛ.

В другом объекте изобретения предлагается упаковка, содержащая ингибитор ГДА и инструкцию по применению в комбинации с антиметаболитом для лечения пролиферативного заболевания, прежде всего МДС или ОМЛ.

Термин "замедление развития", использованный в данном контексте, обозначает введение комбинации пациентам с диагнозом ранней стадии пролиферативного заболевания, предназначенного для лечения.

Комбинация обозначает введение ингибитора ГДА в комбинации с антиметаболитом в таких количествах, при которых наблюдается синергетическое действие, которое не обеспечивается при введении одного ингибитора ГДА, без раздельного, одновременного или последовательного введения антиметаболита. Антиметаболит можно вводить непрерывно, последовательно или однократно. Указанное синергетическое действие также не наблюдается при непрерывном, последовательном или однократном введении антиметаболита, без раздельного, одновременного или последовательного введения ингибитора ГДА, при этом антиметаболит можно вводить непрерывно, последовательно или однократно.

Предпочтительно комбинация обозначает введение ингибитора ГДА в комбинации с антиметаболитом в таких количествах, при которых наблюдается антипролиферативное синергетическое действие и/или эффект гибели клоногенных клеток, которое не наблюдается если: а) ГДА вводят без предварительного, одновременного или последовательного введения антиметаболита, при этом ингибитор ГДА можно вводить непрерывно, последовательно или однократно, б) введение антиметаболита осуществляют без предварительного, одновременного или последовательного введения ингибитора ГДА, при этом антиметаболит можно вводить непрерывно, последовательно или однократно.

Термин "комбинация по изобретению" обозначает комбинацию, которая включает:

(а) ингибитор ГДА в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли и необязательно, по крайней мере, один фармацевтически приемлемый носитель, и

(б) антиметаболит.

В комбинации по изобретению ингибитор ГДА и фармацевтически приемлемые соли, а также пролекарства предпочтительно используют в виде фармацевтических препаратов, которые содержат соответствующее терапевтически эффективное количество активного ингредиента необязательно в смеси с неорганическим или органическим твердым или жидким фармацевтически приемлемым носителем, пригодным для введения.

В другом варианте осуществления изобретения антиметаболит используют для предварительного лечения, то есть перед началом лечения комбинацией по изобретению пациенту в течение определенного периода времени вводят только антиметаболит.

Фармацевтические композиции, содержащие ингибиторы ГДА, представлены, например, в виде энтеральных композиций, таких как пероральная композиция, ректальная композиция, композиция для аэрозольной ингаляции или для назального введения, в виде композиций для парентерального введения, такого как внутривенное или подкожное введение, или в виде композиций для чрескожного введения (например, пассивного или ионтофоретического введения), или композиций для местного введения.

Предпочтительными фармацевтическими композициями, содержащими ингибитор ГДА, являются композиции для перорального введения.

Фармацевтические композиции по изобретению можно получить известными способами, и такие композиции пригодны для энтерального введения, такого, как пероральное или ректальное введение, и парентерального введения млекопитающим (теплокровным животным), включая человека, и такие композиции включают терапевтически эффективное количество, по крайней мере, одного фармакологически активного компонента комбинации или в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, прежде всего, пригодными для энтерального или парентерального введения.

Новая фармацевтическая композиция содержит, например, приблизительно от 10% до приблизительно 100%, предпочтительно приблизительно от 20% до приблизительно 60%, активных ингредиентов. Фармацевтические препараты для комбинированной терапии для энтерального или парентерального введения представлены в виде стандартных лекарственных форм, таких как таблетки с сахарным покрытием, таблетки, капсулы или суппозитории или ампулы. Если не указано иное, такие составы получают известными методами, например, при обычном смешивании, грануляции, нанесении сахарного покрытия, растворении или лиофилизации. Следует понимать, что доза каждого компонента комбинации в составе лекарственной формы не обязательно составляет эффективное количество, поскольку необходимое эффективное количество достигается за счет введения множества стандартных лекарственных доз.

При получении композиций для пероральных лекарственных средств можно использовать любую фармацевтическую среду, например, воду, гликоли, масла, спирты, ароматизаторы, консерванты, красители или носители, такие как, крахмалы, сахара, микрокристаллическая целлюлоза, разбавители, агенты для грануляции, замасливатели, связующие вещества, дезинтегрирующие агенты и т.п. в случае получения твердых лекарственных средств, таких как, например, порошки, капсулы и таблетки, при этом твердые лекарственные средства являются предпочтительными по сравнению с жидкими лекарственными средствами. В связи с простотой введения таблетки и капсулы являются наиболее предпочтительными лекарственными формами, для получения которых используют твердые фармацевтические носители.

Прежде всего, терапевтически эффективное количество каждого компонента в составе комбинации по изобретению можно вводить одновременно или последовательно в любом порядке, при этом компоненты можно вводить раздельно или в виде фиксированной комбинации. Например, в настоящем изобретении предлагается способ замедления развития или лечения пролиферативного заболевания, который заключается в том, что:

(1) вводят первый компонент комбинации, и

(2) вводят второй компонент комбинации, при этом указанные компоненты комбинации можно вводить одновременно или последовательно в любом порядке, в совместных терапевтически эффективных количествах, предпочтительно в синергетически эффективных количествах, например, в суточных или недельных дозах, соответствующих количествам, указанным в данном контексте. Индивидуальные компоненты комбинации по изобретению можно вводить раздельно в различное время в течение курса лечения или одновременно. Термин введение включает также применение пролекарства ингибитора ГДА, которое превращается in vivo в компонент комбинации. Следовательно, следует понимать, что настоящее изобретение включает все такие курсы одновременного или поочередного лечения и термин "введение" следует интерпретировать соответственно.

Антиметаболит и ингибитор ГДА предпочтительно вводят в дозах, при которых указанные соединения оказывают синергетическое действие.

Если теплокровным животным является человек, то доза соединения формулы (I) предпочтительно соответствует суточной дозе в диапазоне 100-1500 мг/сут, например, 200-1000 мг/сут, например, составляет 200, 400, 500, 600, 800, 900 или 1000 мг/сут, которую вводят один или два раза в сутки. Соответствующие дозы и частота введения лиганда рецептора гибели зависят от факторов, таких как природа и тяжесть состояния, предназначенного для лечения, требуемой ответной реакции, состояния пациента и т.п.

Лечащий врач может выбрать конкретный способ введения и дозу ингибитора ГДА с учетом особенностей пациента, прежде всего, возраста, массы тела, образа жизни, активности и т.п.

Доза ингибитора ГДА может изменяться в зависимости от различных факторов, таких как эффективность и продолжительность действия активного ингредиента, способ введения, эффективность и продолжительность ионизирующего облучения и/или пол, возраст, масса тела и индивидуальное состояние субъекта, нуждающегося в лечении.

Доза ионизирующего излучения зависит от различных факторов, таких как эффективность и продолжительность воздействия ионизирующего излучения, способ введения, участок введения, эффективность и продолжительность действия ингибитора ГДА и/или пол, возраст, масса тела и индивидуальное состояние субъекта, нуждающегося в лечении. Основные физические величины, определяющие степень ионизирующего облучения, включают поглощенную дозу ионизирующего излучения, время и фракцию облучения, при этом доза облучения тщательно подбирается лечащим врачом.

В одном предпочтительном варианте осуществления изобретения комбинация включает антиметаболит и N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид формулы (III) или его фармацевтически приемлемую соль.

В другом варианте композиция включает 5-азацитидин и N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид формулы (III) или его фармацевтически приемлемую соль.

Кроме того, в настоящем изобретении предлагается способ лечения теплокровного животного, страдающего от пролиферативного заболевания, который заключается в том, что животному вводят комбинацию по изобретению, которая оказывает лечебное действие на пролиферативное заболевание, и где компоненты комбинации также могут присутствовать в виде их фармацевтически приемлемых солей.

Кроме того, в настоящем изобретении предлагается применение комбинации по изобретению для замедления развития или лечения пролиферативного заболевания, а также для получения лекарственного средства, предназначенного для замедления развития или лечения пролиферативного заболевания.

Примеры, описанные ниже, приводятся в качестве иллюстрации и не ограничивают объем настоящего изобретения.

Пример 1

Комбинация LBH589 и 5-Aza в качестве деметилирующего агента, которая в большей степени индуцирует апоптоз раковых клеток, по сравнению с каждым указанным агентом в отдельности

Главным признаком онкогенеза являются наличие генов-супрессоров опухолевого роста в "молчащем" состоянии на уровне хроматина. LBH589 и 5-азацитидин оба являются соединениями, которые усиливают экспрессию генов-супрессоров опухолевого роста за счет модуляции структуры хроматина. LBH589, ингибитор ГДА, вызывает увеличение степени ацетилирования гистона, что приводит к разрыхлению структуры хроматина, что оказывает благоприятное действие на связывание и активность транскрипционного фактора. Множество генов-супрессоров опухолевого роста также переходят в "молчащее" состояние при метилировании ДНК в островках CpG, а 5-азацитидин вызывает деметилирование островков CpG, что приводит к повторной экспрессии этих генов. По результатам ряда исследований было установлено, что существует взаимосвязь и синергизм между этими двумя основными эпигенетическими механизмами, и можно предположить, что комбинирование LBH589 с 5-азацитидином может усилить гибель раковых клеток по сравнению с каждым соединением в отдельности.

Материалы, методы и результаты

Клетки ОМЛ линии U937 инкубировали в присутствии LBH589 или 5-Aza, каждого в отдельности или их комбинации. Согласно данным, представленным на фиг.1, LBH589, но не 5-Aza, вызывает повышение степени ацетилирования -тубулина, и каждое соединение индуцирует экспрессию ингибитора роста клеток р21, однако применение комбинации обоих соединений приводит к более высокому уровню р21, по сравнению с каждым соединением в отдельности. Кроме того, в то время как каждое указанное соединение вызывает незначительное расщепление PARP (которое рассматривают как показатель гибели апоптозных клеток), применение комбинации обоих соединений индуцирует сверхаддитивный уровень расщепления PARP. Таким образом, применение LBH589 в комбинации с 5-Aza усиливает экспрессию супрессора р21, и оказывает синергетическое действие в отношении гибели клеток, в большей степени усиливая апоптоз, по сравнению с каждым соединением в отдельности.

Клетки линии U937 обрабатывали 5-Aza (2 мкМ), LBH589 (10 нМ) или комбинацией 5-Aza+LBH589 в течение 24 ч. Клетки лизировали, белки разделяли методом электрофореза ПААГ-ДСН и проявляли вестерн-иммуноблотингом в присутствии антител против ацетилированного тубулина, р21, PARP и -актина (контроль для определения нагрузки).

Индуцирование апоптоза в присутствии LBH589, 5-Aza или LBH589+5-Aza в клетках ОМЛ линии U937 и в первичных бластных клетках ОМЛ человека

Для дополнительной оценки способности комбинации LBH589+5-Aza вызывать гибель клеток ОМЛ, клетки ОМЛ линии U937 и первичные лейкозные бластные клетки, полученные от пациентов, страдающих от ОМЛ, инкубировали в присутствии указанных соединений в отдельности или их комбинации. Гибель клеток оценивали или по данным окрашивания клеток с использованием реагента Annexin V (определяли количество апоптозных клеток), или по числу жизнеспособных клеток, определенному методом исключения с использованием красителя трипановый голубой. Согласно данным, представленным на фиг.2, при обработке клеток линии U937 комбинацией LBH589+5-Aza наблюдается более высокий уровень апоптоза в указанных клетках (окрашивание реагентом Annexin V), по сравнению с указанными соединениями в отдельности. Согласно данным, представленным в таблице 1, применение комбинации LBH589+5-Aza также характеризуется более высоким процентом гибели первичных бластных клеток ОМЛ человека, полученных от пациентов, по сравнению с каждым соединением в отдельности. Важно отметить, что при применении двух указанных соединений не наблюдается никакого антагонизма.

Клетки линии U937 инкубировали в присутствии 5-Aza (в концентрации 1 мкМ, 2 мкМ или 5 мкМ), LBH589 (в концентрации 10 нМ или 20 нМ) или комбинации LBH589 и 5-Aza в течение 24 ч. Клетки окрашивали реагентом Annexin V, определяли процентное содержание клеток, окрашенных в зеленый цвет (апоптозные клетки) и строили диаграммы.

Таблица 1
Совместная обработка 5-Aza и LBH589 повышает опосредованное соединением LBH589 снижение жизнеспособности первичных клеток ОМЛ
	Гибель клеток (%)
		LBH-589	Aza	Aza (1 мкМ)+LBH-589	Aza (2 мкМ)+LBH-589
Пациент	Контроль	10 нМ	50 нМ	1 мкМ	2 мкМ	10 нМ	50 нМ	10 нМ	50 нМ
1	13,4	35,9	48,9	19,3	40,4	39,5	48,6	45,6	54
2	6,3	15,4	45,1	8,6	10,1	24,9	57,4	44,6	54,7
3	16,7	22,3	34,2	16,5	19,3	26,5	49,2	43	55
4	15,6	41,9	62,6	25,9	28,5	62,8	71,3	66,3	84,1
5	12,9	19,5	41,6	13,1	15,9	34	54,2	42,4	62,6
6	18,1	73,7	85,6	15	22,6	80,7	89,4	86,3	92

Первичные лейкозные бластные клетки, полученные от пациентов, страдающих от ОМЛ, инкубировали в присутствии LBH589 (в концентрации 10 нМ или 20 нМ), 5-Aza (в концентрации 1 мкМ или 2 мкМ) или комбинации LBH589+5-Aza. Число жизнеспособных клеток определяли методом исключения с использованием красителя трипановый голубой, для каждого указанного варианта обработки рассчитывали процентное содержание мертвых клеток, полученные данные вносили в таблицы.

Пример 2

Клинические испытания в нескольких медицинских центрах с открытой этикеткой с повышением дозы при пероральном введении N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамида совместно с 5-Aza, с участием взрослых пациентов, страдающих от МДС или ОМЛ, фаза I

В ходе испытаний с увеличением дозы (курс лечения 5-Aza в течение 4-6 недель) в обеих группах пациентам с диагнозом МДС (рефрактерная анемия с избытком бластов (РАИБ) или хронический миеломоноцитарный лейкоз), у которых наблюдался рецидив или у которых заболевание не поддавалось лечению 5-Aza, и которые не поддаются лечению стандартной терапией, или пациентам, страдающим от ОМЛ, у которых наблюдается рецидив или у которых заболевание не поддавалось лечению стандартным способом, или пациентам, которые ранее не проходили курс лечения в связи с возрастом, неблагоприятным прогнозом или в связи с сопутствующим патологическим состоянием, и которые не поддаются лечению с использованием стандартного способа или которые отказываются от курса стандартной индукционной терапии, 5-Aza вводили подкожно один раз в день в дозе 75 мг/м² в течение 7 дней. N-Гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид вводили согласно одной из двух схем лечения в зависимости от курса лечения.

5-Aza вводили согласно курсу лечения в течение 4-6 недель.

Курс лечения 1, испытания с повышением дозы

Для курса лечения 1 послеобеденная доза LBH589 составляла 15 мг (исходная доза), соединение вводили перорально, в понедельник, среду и пятницу в недели 1-3, в течение 4-6 недель. В дни 1-7 утренняя доза 5-Aza составляла 75 мг/м ² в течение 4-6 недель.

В понедельник, среду и пятницу в недели 1, 2 и 3 N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид вводили перорально в дозе 15 мг. Если наблюдалась приемлемая токсичность, то дозу N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамида повышали в соответствии с 3-параметрической моделью байевской логической регрессии с использованием контрольной сверхдозы. Для курса лечения 1 уровень максимально переносимой дозы (МПД) определяли при более низкой дозе N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамида по схеме в течение 3 недель. Оценку токсичности проводили в дополнительной группе из 6 пациентов, определяли дозолимитирующую токсичность (ДЛТ), вводя пациентам 3-недельную дозу N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамида в течение 2 недель.

Курс лечения 2, испытания с повышением дозы

N-Гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамид вводили перорально в понедельник, среду и пятницу в дозе 15 мг в неделю 2 и 3. Если наблюдалась приемлемая токсичность, то дозу N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамида повышали на 5-10 мг в расчете на группу пациентов. Для группы 2 уровень МПД определяли при более низкой дозе N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1H-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамида по схеме, в течение 2 недель. Оценку токсичности поводили в дополнительной группе из 6 пациентов, которым вводили однократную дозу ниже МПД N-гидрокси-3-[4-[[[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино]метил]фенил]-2Е-2-пропенамида в течение 3 недель.

Курсы лечения 1 и 2, испытания с увеличением числа пациентов

Для курса лечения 2 LBH589 вводили в дозе 15 мг (исходная доза), соединение вводили перорально в понедельник, среду и пятницу в недели 2-3, в течение 4-6 недель. В дни 1-7 доза 5-Aza составляла 75 мг/м² согласно схеме в течение 4-6 недель.

Для каждого курса фазу испытаний с увеличением числа пациентов начинали с введения МПД тем же пациентам, которые принимали участие в фазе испытаний с увеличением дозы, и кроме того, в испытания включали всех пациентов, страдающих от МДС и соответствующих требованиям, предъявляемым к пациентам для лечения 5-Aza, которые раньше не проходили курс лечения в связи с возрастом, неблагоприятным прогнозом или в связи с сопутствующим патологическим состоянием, которое не поддается лечению с использованием стандартного способа или которые отказываются от курса стандартной индукционной терапии.

Каждая схема лечения включала совместное введение комбинации двух лекарственных средств с перекрывающейся токсичностью (то есть миелосупрессией) и последовательностью введения.

Испытания с повышением дозы с использованием байевской логической регрессии

Для повышения дозы использовали 3-параметрическую модель байевской логической регрессии с использованием контрольной сверхдозы. Указанная модель включает угол наклона и параметры, определяемые при пересечении с осями координат для описания зависимости доза-токсичность для каждого агента, используемого в отдельности, плюс дополнительный параметр для описания любой дополнительной токсичности, которая наблюдается при испытаниях с использованием более высоких доз (курс лечения 1). Распределение включает вероятность, что каждая доза комбинации удовлетворяет следующим категориям:

1) Приемлемая дозировка: ДЛТ менее 20%

2) Допустимая токсичность: ДЛТ в диапазоне от 20% до <35% (не включая верхний предел)

3) Избыточная токсичность: ДЛТ в диапазоне от 35% до <60% (не включая верхний предел)

4) Неприемлемая токсичность: ДЛТ 60% или более.

При оценке сверхдозы обязательное условие заключается в том, что при введении любой дозы LBH589, которая превышает более чем на 25% дозу в каждом курсе лечения с увеличением дозы, то испытания завершаются, если в испытаниях по данному курсу лечения зарегистрировано по крайней мере 12 пациентов для оценки МПД.