стабильная жировая эмульсия (варианты), способ ее получения, эмульгирующий агент и способы стабилизации простагландина и капель жира

Формула изобретения

1. Стабильная жировая эмульсия, включающая в себя простагландин в качестве активного ингредиента и фосфолипиды, содержащие фосфатидилхолин и фосфатидилглицерин в массовом соотношении от 85:15 до 99,7:0,3.

2. Эмульсия по п.1, в которой массовое соотношение фосфатидилхолина и фосфатидилглицерина составляет от 95:5 до 99,7:0,3.

3. Эмульсия по п.2, в которой массовое соотношение фосфатидилхолина и фосфатидилглицерина составляет от 97:3 до 99,5:0,5.

4. Эмульсия по п.1, в которой фосфолипиды, по существу, свободны от фосфатидилэтаноламина.

5. Эмульсия по п.1, в которой фосфатидилглицерин содержит линейный насыщенный или ненасыщенный остаток жирной кислоты с 12-18 атомами углерода.

6. Эмульсия по п.1, в которой фосфатидилглицерин происходит из яичного желтка.

7. Эмульсия по п.1, которая, по существу, свободна от высшей жирной кислоты или ее соли.

8. Эмульсия по п.7, которая, по существу, свободна от свободной олеиновой кислоты.

9. Эмульсия по п.1, которая содержит свободную высшую жирную кислоту или ее соль в количестве 0,15 мас. ч. относительно 1 мас. ч. фосфолипидов.

10. Эмульсия по п.9, в которой свободной высшей жирной кислотой является олеиновая кислота.

11. Эмульсия по п.1, в которой общее содержание ФХ и ФГ в фосфолипидах составляет, по меньшей мере, 95%.

12. Эмульсия по п.1, в которой простагландин представляет собой простагландин Е1 или его сложный алкиловый эфир.

13. Эмульсия по п.12, которая в качестве простагландина содержит простагландин Е1 и имеет средний диаметр частиц самое большее 300 нм, а остаточное содержание простагландина Е1 после хранения при 40°С в течение семи дней составляет, по меньшей мере, 70%.

14. Эмульсия по п.12, которая в качестве простагландина содержит простагландин Е1 и имеет средний диаметр частиц самое большее 300 нм, а остаточное содержание простагландина Е1 после хранения при 40°С в течение семи дней составляет, по меньшей мере, 80%.

15. Эмульсия по п.12, которая в качестве простагландина содержит простагландин Е1 и имеет средний диаметр частиц самое большее 300 нм, в которой остаточное содержание простагландина Е1 после хранения при 40°С в течение семи дней составляет, по меньшей мере, 85%.

16. Эмульсия по п.12, которая в качестве простагландина содержит простагландин Е1 и имеет средний диаметр частиц самое большее 300 нм, а остаточное содержание простагландина Е1 после хранения при 20°С в течение двух месяцев составляет, по меньшей мере, 80%.

17. Эмульсия по п.12, которая в качестве простагландина содержит простагландин Е1 и имеет средний диаметр частиц самое большее 300 нм, а остаточное содержание простагландина Е1 после хранения при 5°С в течение одного года составляет, по меньшей мере, 80%.

18. Стабильная жировая эмульсия, включающая в себя простагландин в качестве активного ингредиента и, по существу, свободные от фосфатидилэтаноламина и свободной олеиновой кислоты фосфолипиды, содержащие фосфатидилхолин и фосфатидилглицерин в массовом соотношении от 85:15 до 99,7:0,3.

19. Стабильная жировая эмульсия, включающая в себя простагландин в качестве активного ингредиента, по существу, свободные от фосфатидилэтаноламина фосфолипиды, содержащие фосфатидилхолин и фосфатидилглицерин в массовом соотношении от 85:15 до 99,7:0,3 и свободную высшую жирную кислоту или ее соль в количестве 0,15 мас. ч. относительно 1 мас. ч. упомянутого фосфолипида.

20. Способ получения жировой эмульсии по любому из пп.1-19, включающий в себя приготовление жировой эмульсии, которая включает в себя простагландин в качестве активного ингредиента и фосфолипиды, содержащие фосфатидилхолин и фосфатидилглицерин в массовом соотношении от 85:15 до 99,7:0,3.

21. Способ п.20, в котором рН жировой эмульсии регулируют на уровне от 4 до 7.

22. Способ стабилизации простагландина в жировой эмульсии, включающей в себя простагландин в качестве активного ингредиента, в котором используют, по существу, свободные от фосфатидилэтаноламина фосфолипиды, содержащие фосфатидилхолин и фосфатидилглицерин в массовом соотношении от 85:15 до 99,7:0,3.

23. Способ стабилизации капель жира в жировой эмульсии, включающей в себя простагландин в качестве активного ингредиента, в котором используют, по существу, свободные от фосфатидилэтаноламина фосфолипиды, содержащие фосфатидилхолин и фосфатидилглицерин в массовом соотношении от 85:15 до 99,7:0,3.

24. Эмульгирующий агент для жировой эмульсии, включающий в себя, по существу, свободную от фосфатидилэтаноламина смесь фосфолипидов, содержащую фосфатидилхолин и фосфатидилглицерин в массовом соотношении от 85:15 до 99,7:0,3, при этом жировая эмульсия содержит простагландин в качестве активного ингредиента.

25. Применение жировой эмульсии, включающей в себя простагландин в качестве активного ингредиента и фосфолипиды, содержащие фосфатидилхолин и фосфатидилглицерин в массовом соотношении от 85:15 до 99,7:0,3, в качестве лекарственного средства для внутривенного введения человеку или другому млекопитающему.

Описание изобретения к патенту

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к жировой эмульсии простагландина, которая проявляет отличную стойкость и содержит активный ингредиент с отличной устойчивостью, к способу получения и стабилизации жировой эмульсии простагландина и к эмульгирующему агенту, используемому для стабилизации.

Уровень техники

Простагландин - это физиологически активное вещество, синтезируемое из незаменимой жирной кислоты, содержащей от 3 до 5 двойных связей. Простагландин участвует в регуляции воспаления, боли и припухлости, в регуляции функции кровяного давления, сердечной деятельности и деятельности желудочно-кишечного тракта, в регуляции выделения пищеварительного фермента, в регуляции почечной функции, свертывании крови, в агрегации тромбоцитов и в аллергической реакции, в нейрональной передаче, в выработке различных гормонов и т.п.

Что касается получения простагландина Е1 (PGE1), то разработаны жировые эмульсии для внутривенной инъекции (см., например, JP-B-1-57094, JP-B-1-57096 и JP-A-2001-10958). Некоторые из этих эмульсий коммерчески доступны.

Однако коммерчески доступные жировые эмульсии PGE1 следует хранить при низкой температуре (например, при 5°С или ниже) в темноте.

Период, при котором гарантируется качество таких жировых эмульсий PGE1, короток (например, 5°С × 1 год) даже в том случае, если жировые эмульсии PGE1 хранятся при низкой температуре. Причиной тому является химическая нестабильность PGE1 (активного ингредиента). Поскольку жировые эмульсии PGE1 следует предохранять от замерзания при хранении, то необходимо вести строгий температурный контроль во время хранения жировых эмульсий при 5°С. Поскольку коммерчески доступные жировые эмульсии PGE1 следует хранить при строгом температурном контроле, то возникает трудность контроля качества жировых эмульсий PGE1 при хранении. Были предприняты различные попытки улучшить стойкость PGE1 (см., например, JP-B-8-18989 и JP-A-4-338333). Однако эти попытки не привели к получению существенного результата. В некоторых документах раскрываются меры по улучшению стойкости жировых эмульсий (см., например, JP-T-2005-500366 и WO 2004/52354). Однако в этих документах не упоминаются жировые эмульсии простагландина.

Ввиду сложившегося положения, остается необходимость в разработке жировой эмульсии простагландина, которая проявляет отличную стойкость и содержит активный ингредиент (простагландин) с отличной устойчивостью.

Раскрытие изобретения

Изобретение обеспечивает жировую эмульсию простагландина, которая содержит простагландин в качестве активного ингредиента и проявляет отличную стойкость активного ингредиента и отличную стойкость эмульсии, способ получения и стабилизации жировой эмульсии простагландина и эмульгирующий агент, используемый для стабилизации.

Жировая эмульсия, согласно одному аспекту изобретения, содержит простагландин в качестве активного ингредиента, при этом жировая эмульсия включает в себя фосфолипид, который содержит фосфатидилхолин (ФХ) и фосфатидилглицерин (ФГ) в соотношении (ФХ:ФГ) от 85:15 до 99,7:0,3.

В вышеуказанной жировой эмульсии соотношение ФХ к ФГ (ФХ:ФГ) может составлять от 95:5 до 99,7:0,3. В данном случае соотношение ФХ к ФГ (ФХ:ФГ) может составлять от 97:3 до 99,5:0,5.

Вышеуказанная жировая эмульсия, по существу, может не содержать фосфатидилэтаноламин (ФЭА).

В вышеуказанной жировой эмульсии ФГ может включать в себя линейный насыщенный или ненасыщенный остаток жирной кислоты с 12-18 атомами углерода.

В вышеуказанной жировой эмульсии ФГ может происходить из яичного желтка.

Вышеуказанная жировая эмульсия может, по существу, не содержать свободную высшую жирную кислоту или ее соль.

Вышеуказанная жировая эмульсия может, по существу, не содержать свободную олеиновую кислоту.

Вышеуказанная жировая эмульсия может содержать свободную высшую жирную кислоту или ее соль в количестве 0,015 масс. частей, или менее, относительно 1 масс. части фосфолипида. Вышеуказанная жировая эмульсия может содержать свободную высшую жирную кислоту или ее соль в количестве 0,15 масс. частей, или менее, относительно 1 масс. части фосфолипида. В данном случае свободной высшей жирной кислотой может являться свободная олеиновая кислота.

В вышеуказанной жировой эмульсии общее содержание ФХ и ФГ в фосфолипиде может составлять 95% или более.

Вышеуказанную жировую эмульсию можно использовать для внутривенной инъекции.

В вышеуказанной жировой эмульсии простагландином может являться простагландин Е1 или его производное.

В вышеуказанной жировой эмульсии простагландином может являться простагландин Е1.

В данном случае в жировой эмульсии средний диаметр частиц может составлять 300 нм или менее, а остаточное содержание простагландина Е1 после хранения при 40°С в течение семи дней - 70% или более.

В жировой эмульсии средний диаметр частиц может составлять 300 нм или менее, а остаточное содержание простагландина Е1 после хранения при 40°С в течение семи дней - 80% или более.

В жировой эмульсии средний диаметр частиц может составлять 300 нм или менее, а остаточное содержание простагландина Е1 после хранения при 40°С в течение семи дней - 85% или более.

В жировой эмульсии средний диаметр частиц может составлять 300 нм или менее, а остаточное содержание простагландина Е1 после хранения при 20°С в течение двух месяцев - 80% или более.

В жировой эмульсии средний диаметр частиц может составлять 300 нм или менее, а остаточное содержание простагландина Е1 после хранения при 5°С в течение одного года - 80% или более.

Способ получения жировой эмульсии согласно одному аспекту изобретения включает приготовление жировой эмульсии, содержащей простагландин в качестве активного ингредиента и фосфолипид, который содержит фосфатидилхолин (ФХ) и фосфэтидилглицерин (ФГ) в соотношении (ФХ:ФГ) от 85:15 до 99,7:0,3.

В вышеуказанном способе получения жировой эмульсии ее рН можно установить на уровне от 4 до 7.

В вышеуказанном способе получения жировой эмульсии ее рН можно установить на уровне от 4,5 до 6,5.

Способ стабилизации простагландина согласно одному аспекту изобретения включает использование фосфолипида с соотношением фофатидилхолина (ФХ) к фосфатидилглицерину (ФГ) (ФХ:ФГ) от 85:15 до 99,7:0,3 и, по существу, не содержит фосфатидилэтаноламин (ФЭА) в жировой эмульсии, которая содержит простагландин в качестве активного ингредиента.

Эмульгирующий агент, согласно дополнительному аспекту изобретения, содержит фосфолипид, в котором соотношение фосфатидилхолина (ФХ) к фосфатидилглицерину (ФГ) (ФХ:ФГ) составляет от 85:15 до 99,7:0,3 и, по существу, не содержит фосфатидилэтаноламин (ФЭА), при этом эмульгирующий агент используют для жировой эмульсии, которая содержит простагландин в качестве активного ингредиента.

Поскольку вышеуказанная жировая эмульсия включает фосфолипид, который содержит фосфатидилхолин (ФХ) и фосфатидилглицерин (ФГ) в соотношении (ФХ:ФГ) от 85:15 до 99,7:0,3, жировая эмульсия и ее активный ингредиент (простагландин) проявляют отличную стойкость. Поэтому срок хранения может быть увеличен и/или диапазон температуры хранения может быть расширен по сравнению с коммерчески доступной жировой эмульсией простагландина. Например, период (5°С × 1 год), в течение которого гарантируется качество жировой эмульсии PGE1, может быть продлен примерно до двух лет, или диапазон температуры хранения может быть расширен до 10°С (см. результаты примеров, описанных далее). Это облегчает контроль качества при хранении. Поскольку капли жира в вышеуказанной жировой эмульсии имеют небольшой и равномерный диаметр, то лекарственное средство может эффективно накапливаться в области поражения. Поэтому жировая эмульсия проявляет отличную эффективность даже при введении небольшого количества.

Осуществление изобретения

Ниже описываются жировая эмульсия, которая включает простагландин в качестве активного ингредиента (далее обозначается в этом документе как "жировая эмульсия простагландина" или "жировая эмульсия") согласно одному варианту осуществления, способ ее получения и стабилизации и эмульгирующий агент, используемый для стабилизации. В следующих вариантах осуществления под знаком "%" имеется ввиду "масс.%", а под выражением "часть(и)" имеется ввиду "часть(и) по массе".

1. Жировая эмульсия

Жировая эмульсия простагландина согласно данному варианту осуществления представляет собой эмульгированный продукт (эмульсия типа "масло в воде"), который включает простагландин (активный ингредиент), фосфолипид (эмульгирующий агент), базовое масло и воду. В частности, жировая эмульсия простагландина согласно данному варианту осуществления представляет собой эмульгированный продукт, в котором капли жира диспергированы в воде. В каждой капле жира простагландин и базовое масло главным образом включены в мембрану, которая содержит фосфолипид. Содержание каждого компонента в жировой эмульсии простагландина согласно данному варианту осуществления такое, как изложено ниже. В частности, содержание простагландина составляет от 0,2 до 100 мкг/мл, содержание базового масла - 5-50% относительно общего количества жировой эмульсии, а содержание фосфолипида - 1-50% относительно общего количества базового масла.

Жировая эмульсия простагландина согласно данному варианту осуществления может, кроме того, включать высшую жирную кислоту, изотонический агент, антиоксидант и агент, регулирующий рН, при необходимости.

рН жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления предпочтительно составляет от 4 до 7, и более предпочтительно от 4,5 до 6,5. Если рН жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления меньше 4, то стойкость эмульсии может уменьшаться. Если рН жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления больше 7, то устойчивость активного ингредиента может уменьшаться.

Каждый компонент жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления описан ниже.

1.1. Простагландин

Термин "Простагландин" является общим названием соединений, основной скелет которых составляет простановая кислота. По структуре цикла простагландины классифицируют на следующие виды: А, В, С, D, Е, F, G, Н, I и им подобные. Простагландин - это физиологически активное вещество, которое выполняет роль сигнального вещества клетки по отношению к стимуляции гладкой мышцы, воспалению, аллергии, секреции/агрегации/скапливанию клеток в одном месте, к клеточному росту, к нейрональной передаче и т.п. В частности, простагландин обладает физиологической активностью, такой как сократительная активность гладкой мышцы (например, мышцы матки и тонкой кишки), гипотензивная активность, сосудосуживающая активность, антилиполитическая активность, ингибирование желудочной секреции, действие на центральную нервную систему, уменьшение адгезии тромбоцитов, ингибирование агрегации тромбоцитов, ингибирование тромбогенеза, воздействие на эпидермальный рост и стимулирование кератинизации в зависимости от типа простагландина.

К примерам простагландина, включаемого в жировую эмульсию согласно данному варианту осуществления, относятся PGA1, PGB1, PGD2, PGE1, PGE2, PGF1-альфа, РСР2-альфа, PGI2 и их производные. Среди них PGE1 и его производные являются предпочтительными. В качестве производного простагландина предпочтителен его сложный алкиловый эфир (см., например, Японский патент № 2602964).

Например, PGE1 обладает сосудорасширяющей активностью, противогипертонической активностью, активностью по увеличению почечного кровотока, натрийурезной активностью, активностью по усилению секреции ренина, активностью по усилению секреции этритропоэтина, активностью по ингибированию агрегации тромбоцитов, бронхорасширяющей активностью, активностью по сокращению матки, активностью по ускорению перистальтики кишечника, активностью по сокращению продольной мышцы желудка/кишечника, активностью по релаксации кольцевой мышцы желудка/кишечника, активностью по ингибированию желудочной секреции, защитным действием к слизистой оболочке желудка, иммуносупрессивной активностью, активностью по подавлению выделения норадреналина из периферических симпатических нервный окончаний и т.п. Поэтому согласно данному варианту осуществления жировую эмульсию, которая содержит PGE1, можно использовать для лечения язвы конечностей и боли, возникающей в покое из-за хронической окклюзии артерии, лечения кожной язвы, возникшей вследствие прогрессирующего системного склероза или диффузной красной волчанки, лечения кожной язвы, возникшей вследствие диабета, улучшения когнитивных расстройств, вызванного болезнью периферических сосудов, и восстановления расстройства периферического кровообращения/нервного расстройства/расстройства движения вследствие вибрации, для лечения открытого артериального протока, возникшего вследствие врожденного порока сердца, зависящего от артериального протока, и для улучшения разрешающей способности изображения при проведении портографии через верхнюю брыжеечную артерию.

1.2. Фосфолипид

Фосфолипид, используемый в жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления, включает фосфатидилхолин (ФХ) и фосфатидилглицерин (ФГ). Фосфолипид может находиться в виде фармацевтически приемлемой соли, например в виде натриевой соли, калиевой соли или аммониевой соли.

К примерам ФХ относятся лецитин яичного желтка, соевый лецитин, лецитин, синтезированный полностью или частично по известному методу и т.п. Среди них лецитин яичного желтка является предпочтительным. В частности, очищенный лецитин яичного желтка с повышенным содержанием фосфолипида и высокоочищенный лецитин яичного желтка, который, по существу, не содержит ФЭА, являются предпочтительными.

Термин "очищенный лецитин яичного желтка" определен в Японских Фармацевтических Эксципиентов, а термин "высокоочищенный лецитин яичного желтка" определен в Японском Руководстве по Фармацевтическим Наполнителям (подготовленным к печати Японским советом по Фармацевтическим Наполнителям). Очищенный лецитин яичного желтка обычно содержит ФЭА в количестве около 12-18%.

Предпочтительно, чтобы жировая эмульсия согласно данному варианту осуществления, по существу не содержала ФЭА. Жировая эмульсия, которая, по существу, не содержит ФЭА, может быть получена путем использования высокоочищенного лецитина яичного желтка или лецитина, полученного синтетически или полусинтетически в виде фосфолипида.

Факт того, что фосфолипид содержит или, по существу, не содержит ФЭА, можно проверить, например, следующим способом.

А именно фосфолипиды растворяют в смеси хлороформа и метанола в количестве 10% (по отношению массы к объему). На нижнюю часть тонкослойной пластины из силикагеля наносят 10 мкл раствора. Раствор элюируют, используя смесь (хлороформ:метанол:вода = 65:25:4), с последующим высушиванием. После распыления нингидрина раствор нагревают при 120°С в течение 10 минут. По отсутствию окраски в области пятен, обнаруживаемых с помощью стандартного раствора ФЭА, который нанесен схожим образом, определяют, что фосфолипид, по существу, не содержит ФЭА.

ФГ может быть синтезирован химическим путем, экстрагирован из растения или бактерии или может быть получен путем воздействия фосфолипазы D на лецитин, исходным сырьем которого является соя или яичный желток, в присутствии глицерина по известному методу (Biochemistry Experiments 3, Lipid Chemistry, стр.294 и 295, Tokyo Kagaku Dojin, 1974). ФГ, как правило, содержит линейный либо разветвленный насыщенный или ненасыщенный остаток жирной кислоты с 12-22 атомами углерода. В жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления ФГ предпочтительно содержит линейный насыщенный или ненасыщенный остаток жирной кислоты с 12-18 атомами углерода, и более предпочтительно линейный насыщенный или ненасыщенный остаток жирной кислоты с 16-18 атомами углерода. При использовании ФГ, содержащего остаток жирной кислоты с количеством атомов углерода в пределах вышеупомянутого диапазона (в частности, при использовании ФХ, происходящего из лецитина яичного желтка), длина цепи жирной кислоты ФХ почти равна длине цепи жирной кислоты ФГ, так что получается более стойкая жировая эмульсия.

ФГ, полученный химическим синтезом, может представлять собой, по меньшей мере, одно из следующих веществ:

дипальмитоилфосфатидилглицерин, диолеилфосфатидилглицерин, дилауроилфосфатидилглицерин, димиристоилфосфатидилглицерин, дистеароилфосфатидилглицерин и пальмитоилолеилфосфатидилглицерин. В случае природного ФГ, можно использовать ФГ с остатком жирной кислоты, специфичным к веществу, из которого происходит ФГ. Среди упомянутых веществ предпочтительными являются дипальмитоилфосфатидилглицерин, ФГ, происходящий из соевого лецитина или ФГ, происходящий из лецитина яичного желтка, при этом ФГ, происходящий из лецитина яичного желтка, является более предпочтительным с точки зрения стойкости активного ингредиента и биосовместимости.

В жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления соотношение ФХ к ФГ (ФХ:ФГ) в фосфолипиде составляет от 85:15 до 99,7:0,3. В случае, когда соотношение ФХ к ФГ (ФХ:ФГ) находится в пределах вышеупомянутого диапазона, стойкость активного ингредиента и эмульсии может повышаться. Если количество ФГ выходит за пределы вышеупомянутого диапазона, то стойкость PGE1 при хранении ухудшается.

Соотношение ФХ к ФГ (ФХ:ФГ) предпочтительно составляет от 90:10 до 99,7:0,3, более предпочтительно - от 95:5 до 99,7:0.3, и еще более предпочтительно - от 97:3 до 99,5:0,5.

Для повышения химической стойкости активного ингредиента общее содержание ФХ и ФГ в фосфолипиде должно предпочтительно составлять 95% и более, и более предпочтительно 98% и более.

Фосфолипид может включать иной фосфолипид, помимо ФХ и ФГ (например, по меньшей мере, одно из следующих соединений:

сфингомиелин, фосфатидилинозит, фосфатидилглицерин, фосфатидилэтиленгликоль, фосфатидилполиэтиленгликоль, лизофосфолипиды или такие соединения, как лизо-ФХ и лизо-ФГ), в количестве не более 5%. Природный фосфолипид может включать триглицерид, холестерин и подобные им соединения в количестве не более 5%.

1.3. Базовое масло

К примерам базового масла, используемого в жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления, относятся растительное масло, такое как соевое масло, сезамовое масло, рапсовое масло, сафлоровое масло, оливковое масло, касторовое масло, кукурузное масло, хлопковое масло, рисовое масло, подсолнечное масло, виноградное масло и масло проростков пшеницы, триглицерид со средним размером цепи (МСТ) и т.п. Растительным масло предпочтительно является рафинированное растительное масло.

1.4. Высшая жирная кислота

В жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления свободная высшая жирная кислота выполняет роль эмульгирующей добавки.

Точнее, стойкость жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления можно улучшить путем использования свободной высшей жирной кислоты. Используемый в этом документе термин "свободная высшая жирная кислота" относится к карбоновой кислоте. Термин "соль свободной высшей жирной кислоты", используемый в этом документе, относится к фармацевтически приемлемой соли (например, соли щелочных металлов, такие как натриевая и калиевая соли, и соли щелочно-земельных металлов, такие как кальциевая соль) свободной высшей жирной кислоты. Термин "свободная высшая жирная кислота или ее соль" исключает сложный эфир жирной кислоты, который образуется из растительного масла (базового масла) и фосфолипида.

Высшая жирная кислота представляет собой линейную или разветвленную насыщенную либо ненасыщенную жирную кислоту с 6-22 (предпочтительно 12-20) атомами углерода. К примерам высшей жирной кислоты относятся олеиновая кислота, стеариновая кислота, линолевая кислота, пальмитиновая кислота, линоленовая кислота и миристиновая кислота. Среди них олеиновая кислота является предпочтительной.

Поскольку жировая эмульсия согласно данному варианту осуществления и ее активный ингредиент обладают отличной стойкостью, то жировая эмульсия может, по существу, не содержать свободную жирную кислоту или ее соль (например, свободную олеиновую кислоту). Когда жировая эмульсия содержит высшую жирную кислоту или ее соль, то количество высшей жирной кислоты или ее соли составляет предпочтительно 0,15 частей или менее, а более предпочтительно 0,015 частей или менее, в расчете на 1 часть фосфолипида. Если количество высшей жирной кислоты превышает 0,15 частей, в расчете на 1 часть фосфолипида, то устойчивость активного ингредиента может уменьшаться. Если количество высшей жирной кислоты составляет 0,015 частей или менее, в расчете на 1 часть фосфолипида, то можно получить эмульсию с отличной стойкостью, сохранив при этом устойчивость активного ингредиента. Используемая в этом документе формулировка "по существу не содержит свободную высшую жирную кислоту", означает, что свободную высшую жирную кислоту не добавляют преднамеренно, и исключает свободную высшую жирную кислоту, образующуюся при разложении растительного масла (базового масла) или фосфолипида, и свободную жирную кислоту, которая примешалась непреднамеренно.

Тот факт, что жировая эмульсия содержит или, по существу, не содержит свободную олеиновую кислоту, можно проверить, например, следующим способом.

А именно, к 1 мл жировой эмульсии добавляют 1 мл этанола, 0,5 мл диэтилового эфира и 0,5 мл петролейного эфира. Затем смесь перемешивают. После центрифугирования смеси собирают надосадочную жидкость. Затем упаривают растворитель, используя азот. Полученную в результате масляную фазу растворяют в смеси хлороформа и метанола в количестве 10% (по отношению массы к объему). На нижнюю часть тонкослойной пластинки из силикагеля наносят 2 мкл раствора. Раствор элюируют, используя смесь (хлороформ:метанол:вода = 65:25:4), с последующим высушиванием. После распыления 50% (по массе) серной кислоты раствор нагревают при 120°С в течение 30 минут. По отсутствию окраски в области пятен, обнаруживаемых с помощью стандартного раствора олеиновой кислоты, который нанесен схожим образом, определяют, что жировая эмульсия, по существу, не содержит свободную олеиновую кислоту. Поскольку жировая эмульсия согласно данному варианту осуществления, по существу, не содержит ФЭА и/или свободную высшую жирную кислоту (например, свободную олеиновую кислоту), то количество компонентов, содержащихся в жировой эмульсии может быть снижено. Более того, устойчивость активного ингредиента может быть дополнительно увеличена.

1.5. Другие компоненты

Жировая эмульсия согласно данному варианту осуществления может включать изотонический агент (например, глицерин, глюкозу и карбонат натрия), антиоксидант (например, аскорбиновую кислоту и ее соли, бензойную кислоту, лимонную кислоту и ее соли, дибутилгидроксианизол, дибутилгидрокситолуол, альфа-токоферол и D-сорбит) и агент, регулирующий рН (например, гидроксид натрия, соляная кислота и фосфат), при необходимости.

1.6. Способ получения

Способ получения жировой эмульсии простагландина согласно одному варианту осуществления изобретения включает приготовление жировой эмульсии с использованием фосфолипида, который включает фосфатидилхолин (ФХ) и фосфатидилглицерин (ФГ), при этом соотношение ФХ кФГ (ФХ:ФГ) составляет от 85:15 до 99,7:0,3, предпочтительно - от 90:10 до 99,7:0,3, более предпочтительно - от 95:5 до 99,7:0,3, и еще более предпочтительно - от 97:3 до 99,5:0,5. В частности, жировую эмульсию готовят путем эмульгирования простагландина (активного ингредиента), фосфолипида (эмульгирующий агент), базового масла и воды.

ФХ и ФГ можно смешивать в базовом масле или воде. После гомогенизации смеси воду или базовое масло можно добавлять к смеси для приготовления эмульсии. Предпочтительно проводить гомогенизацию ФХ и ФГ в базовом масле.

Например, фософолипид (ФХ и ФГ), простагландин (например, PGE1), добавки (например, глицерин) и им подобные соединения смешивают в определенном количестве базового масла (например, соевого масла), и смесь гомогенизируют, используя гомогенизатор. После добавления определенного количества воды, смесь гомогенизируют с помощью гомогенизатора для получения эмульсии типа "масло в воде". Таким образом может быть получена жировая эмульсия согласно данному варианту осуществления.

ФХ и ФГ можно добавлять по отдельности или одновременно. Можно использовать ФГ, полученный путем частичного превращения ФХ в ФГ под действием фермента. Можно использовать фосфолипид, полученный добавлением неочищенного или очищенного продукта, который содержит ФГ или ФХ, так чтобы соотношение ФХ к ФГ (ФХ:ФГ) составляло от 85:15 до 99,7:0,3 в процессе очистки ФХ или ФГ. При использовании ФХ, происходящего из яичного желтка, ФХ в яичном желтке может быть превращен в ФГ под действием фермента с целью получения яично-желточной жидкости, в которой соотношение ФХ к ФГ (ФХ:ФГ) составляет от 85:15 до 99,7:0,3. После этого фосфолипид, содержащийся в яично-желточной жидкости, можно очищать и использовать.

Добавки, такие как стабилизатор, изотонический агент и агент, регулирующий рН, можно добавлять в жировую эмульсию согласно данному варианту осуществления с целью удобства при получении. Полученную в результате жировую эмульсию можно отфильтровывать или нагревать (например, подвергнуть высокотемпературной термообработке).

Способ получения жировой эмульсии простагландина согласно данному варианту осуществления может, кроме того, включать регулировку рН жировой эмульсии предпочтительно на уровне от 4 до 7 (более предпочтительно - от 4,5 до 6,5). Если рН жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления меньше 4, то стойкость эмульсии может уменьшаться. Если рН жировой эмульсии больше 7, то стойкость активного ингредиента может уменьшаться.

Способ получения жировой эмульсии простагландина согласно данному варианту осуществления может, кроме того, включать помещение жировой эмульсии, рН которой отрегулирован на уровне от 4 до 7, в герметичную тару и проведение высокотемпературной термообработки жировой эмульсии при определенной температуре в течение определенного периода времени. Жировую эмульсию можно стерилизовать посредством высокотемпературной термообработки, подавляя при этом разложение активного ингредиента (простагландина). Высокотемпературная термическая обработка предпочтительно представляет собой термическую стерилизацию паром высокого давления или распылением.

Термическую стерилизацию паром высокого давления или распылением предпочтительно проводят при 110-140°С в течение 0,5-30 минут. Например, термическую обработку паром высокого давления можно проводить при 127°С в течение одной минуты. Условия - 127°С и 1-минутный период времени - соответствуют значению F0 около 9÷10, при котором происходит умерщвление микроорганизмов.

Жировая эмульсия, полученная по вышеупомянутому способу, и ее активный ингредиент (простагландин) проявляют отличную стойкость. Например, жировая эмульсия, подвергнутая высокотемпературной термообработке имеет остаточное содержание простагландина на уровне 70% или более, предпочтительно, 80% или более, и предпочтительнее 85% или более, по отношению к жировой эмульсии, не подвергнутой высокотемпературной термообработке.

1.7. Способ стабилизации и эмульгирующий агент

Способ стабилизации жировой эмульсии простагландина согласно одному варианту осуществления изобретения включает использование фосфолипида с соотношением ФХ к ФГ (ФХ:ФГ) от 85:15 до 99,7:0,3 и, по существу, не включает использование ФЭА в жировой эмульсии, которая содержит простагландин в качестве активного ингредиента. Эмульгирующий агент согласно одному варианту осуществления изобретения используют для жировой эмульсии простагландина, при этом эмульгирующий агент включает фосфолипид с соотношением ФХ к ФГ (ФХ:ФГ) от 85:15 до 99,7:0,3 и, по существу, не содержит ФЭА. К примерам такого эмульгирующего агента относится вышеупомянутый высокоочищенный лецитин яичного желтка, который содержит ФХ и ФГ в вышеупомянутом соотношении.

1.8. Применение и свойства

Поскольку жировая эмульсия согласно данному варианту осуществления содержит фосфолипид, который включает фосфатидилхолин (ФХ) и фосфатидилглицерин (ФГ) в соотношении ФХ к ФГ (ФХ:ФГ) от 85:15 до 99,7:0,3, то устойчивость активного ингредиента (простагландина) может быть повышена при сохранении стойкости эмульсии, даже если жировая эмульсия, по существу, не содержит свободную высшую жирную кислоту, такую как олеиновая кислота. Поскольку жировая эмульсия согласно данному варианту осуществления, по существу, не содержит ФЭА, то стойкость активного ингредиента (простагландина) может быть дополнительно увеличена.

Жировую эмульсию согласно данному варианту осуществления можно использовать для внутривенной инъекции. В данном случае, после регулировки рН жировой эмульсии, полученной согласно данному варианту осуществления, ее загружают в герметичную тару, такую как ампула, пузырек или предварительно заполненный шприцевой контейнер. После этого жировую эмульсию подвергают высокотемпературной термообработке или аналогичной обработке.

Средний диаметр [частиц] жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления предпочтительно составляет 300 нм или менее, и более предпочтительно - 150÷250 нм. Если средний диаметр превышает 300 нм, то система жировой эмульсии может стать неустойчивой. Если средний диаметр меньше 150 нм, то уровень накопления в воспаленном месте (в частности, на внутренней стенке периферических сосудов) или количество макрофагов уменьшается при введении жировой эмульсии внутривенно. В результате жировая эмульсия может проявлять недостаточную физиологическую активность после введения.

Жировая эмульсия согласно данному варианту осуществления предпочтительно имеет средний диаметр в 300 нм или менее, простагландином предпочтительно является PGE1, а остаточное содержание PGE1 в жировой эмульсии после хранения при 40°С в течение семи дней составляет 70% или более, предпочтительно - 80% или более, и более предпочтительно - 85% или более. Остаточное содержание простагландина Е1 в жировой эмульсии после хранения при 20°С в течение двух месяцев составляет 70% или более, предпочтительно - 80% или более, и более предпочтительно - 85% или более. Остаточное содержание простагландина Е1 в жировой эмульсии после хранения при 5°С в течение одного года составляет 80% или более, предпочтительно - 85% или более, и более предпочтительно - 90% или более. В изобретении испытание на хранение представляет собой тест по оценке стойкости жировой эмульсии при длительном хранении (см., например, JP-A-4-338333). Испытание на хранение при 20°С в течение двух месяцев - это тест по оценке стойкости жировой эмульсии при длительном хранении согласно данному варианту осуществления (см., например, рекомендации ICH Q1A).

Поскольку жировая эмульсия согласно данному варианту осуществления содержит фосфолипид, который включает ФХ и ФГ в соотношении (ФХ:ФГ) от 85:15 до 99,7:0,3, то PGE1 (активный ингредиент) жировой эмульсии обладает отличной устойчивостью, при этом отсутствует необходимость в ограничении других добавок к жировой эмульсии или в увеличении среднего диаметра капель жира, содержащихся в жировой эмульсии, или необходимость в изменении гранулометрического состава капель жира, содержащихся в жировой эмульсии. Поскольку капли жира, содержащиеся в жировой эмульсии согласно данному варианту осуществления, имеют небольшой и равномерный диаметр, обычный в данной области техники, то лекарственное средство эффективно накапливается в области поражения. Поэтому жировая эмульсия проявляет отличную эффективность даже при введении в небольшом количестве.

Остаточное содержание PGE1 (%) в жировой эмульсии после хранения рассчитывают по следующей формуле (1) на основе данных по содержанию PGE1 в жировой эмульсии сразу после высокотемпературной термической обработки и по содержанию PGE1 в жировой эмульсии после хранения, определенных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Подробности способа определения содержания PGE1 в жировой эмульсии методом ВЭЖХ приведены в примерах, описанных ниже.

Остаточное содержание PGE1 (%) = (Содержание PGE1 в жировой эмульсии после хранения / Содержание PGE1 в жировой эмульсии после высокотемпературной термообработки) × 100 (1)

1.9. Лекарственная форма

Жировую эмульсию согласно данному варианту осуществления предпочтительно вводят в организм человека или иного млекопитающего, помимо человека, парентеральным способом. Более предпочтительно вводить жировую эмульсию внутривенной инъекцией (включая внутривенную капельную инъекцию). Например, жировую эмульсию согласно данному варианту осуществления, которая содержит простагландин в концентрации 0,2-100 мкг/мл, можно вводить внутривенной инъекцией либо непосредственно, либо после подмешивания в инфузионный раствор.

2. Примеры

Изобретение описывается ниже с помощью примеров. Следует отметить, что изобретение не ограничивается следующими примерами.

2.1. Способ оценки

В примерах содержание PGE1 в жировой эмульсии определяют по следующим методам, а средний диаметр капель жира, содержащихся в жировой эмульсии, измеряют следующим способом.

2.1.1. Содержание PGE1

Жировую эмульсию предварительно обрабатывают, используя картридж SEP-PAKC₁₈ (производства компании Waters), а содержание PGE1 в жировой эмульсии определяют методом ВЭЖХ, используя пост-колоночный способ.

Рабочие условия следующие

Детектор - ультрафиолетовый абсорбциометр (измеряемая длина волны - 278 нм).

Колонка - октадецилсилилированный силикагель (внутренний диаметр - 4 мм, длина - 15 см).

Температура колонки - олоко 60°С.

Подвижная фаза - смесь фосфатного буфера с концентрацией 1/150 моль/л и ацетонитрила (3:1) (рН 6,3).

Скорость потока подвижной фазы - 1 мл/мин.

(Реакционные условия после выхода из колонки).

Реакционная жидкость - раствор гидроксида калия с концентрацией 1 моль/л.

Скорость потока - 0,5 мл/мин.

Реакционный виток - тефлоновая (торговое название) трубка (внутренний диаметр - около 0,5 мм, длина - около 10 м).

Температура реакции - около 60°С.

2.1.2. Средний диаметр капель жира

Средний диаметр капель жира, содержащихся в жировой эмульсии, измеряют с помощью устройства для субмикронного измерения гранулометрического состава N4PLUS (производства фирмы Beckman Coulter, Inc.).

2.1.3. Обнаружение ФЭД в жировой эмульсии

К 1 мл жировой эмульсии добавляют 1 мл этанола, 0,5 мл диэтилового эфира и 0,5 мл петролейного эфира. Затем смесь перемешивают. После центрифугирования смеси собирают надосадочную жидкость. Затем упаривают растворитель, используя азот. Полученную в результате масляную фазу растворяют в смеси хлороформа и метанола в количестве 10% (по отношению массы к объему). На нижнюю часть тонкослойной пластинки из силикагеля наносят 2 мкл раствора. Раствор элюируют, используя смесь (хлороформ:метанол:вода = 65:25:4), с последующим высушиванием. После распыления нингидрина пластину нагревают при 120°С в течение 30 минут. По отсутствию окраски в области пятен, обнаруживаемых с помощью стандартного раствора ФЭА, который нанесен схожим образом, определяют, что жировая эмульсия, по существу, не содержит ФЭА.

2.2. Пример 1

50 г соевого масла (базового масла), 8,82 г лецитина яичного желтка "PC-98N" (производства Q.P. Corporation, чистота фосфатидилхолина: 98,8%, ФЭА не обнаружен по вышеупомянутому способу обнаружения ФЭА) (фосфолипид) и 0,18 г дипальмитоилфосфатидилглицерина (производства NOF Corporation) диспергируют и гомогенизируют, используя смеситель-гомогенизатор. После добавления 3,5 мг простагландина Е1, к смеси добавляют воду для вливания, в которую добавлено 11,05 г концентрированного глицерина (описан в Японской фармакопее) для получения 500 г грубой эмульсированной жидкости. Грубую эмульгированную жидкость пропускают через гомогенизатор Мантона-Гаулина (производства APV) пятнадцать раз под давлением 600 кгс/см² для получения жировой эмульсии примера 1 (средний диаметр частиц - 193 и 213 нм). Измеряют средний диаметр капель жира, содержащихся в жировой эмульсии, и определяют содержание PGE1 в жировой эмульсии.

Содержание PGE1 в жировой эмульсии (содержание PGE1 в жировой эмульсии сразу после приготовления) показано в Таблицах 1 и 2, а средний диаметр капель жира, содержащихся в жировой эмульсии (средний диаметр капель жира, содержащихся в жировой эмульсии сразу после приготовления), показан в Таблицах 3 и 4.

Жировую эмульсию отфильтровывают через пористый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Затем рН жировой эмульсии доводят до 5,0, 5,5 (два образца) или до 6,0 водным раствором гидроксида натрия. После пипетирования жировой эмульсии в 2 мл ампулу ее подвергают термической стерилизации распылением (т.е. высокотемпературной термообработке) при 110°С в течение 5 минут. После вскрытия ампулы рассчитывают остаточное содержание PGE1 в жировой эмульсии (остаточное содержание PGE1 в жировой эмульсии сразу после нагревания) и измеряют средний диаметр капель жира, содержащихся в жировой эмульсии (средний диаметр капель жира, содержащихся в жировой эмульсии сразу после нагревания). Результаты представлены в Таблицах 1-4.

Остаточное содержание PGE1 в жировой эмульсии сразу после нагревания рассчитывают путем определения содержания PGE1 в жировой эмульсии сразу после высокотемпературной термообработки по вышеописанному способу количественного определения содержания PGE1 и рассчитывают отношение (%) содержания PGE1 в жировой эмульсии сразу после высокотемпературной термообработки к содержанию PGE1 в жировой эмульсии сразу после приготовления.

Ампулу, подвергнутую высокотемпературной термообработке, хранят при 40°С в течение семи дней. После вскрытия ампулы определяют содержание PGE1 в жировой эмульсии после хранения при 40°С в течение семи дней. Остаточное содержание PGE1 в жировой эмульсии после хранения при 40°С в течение семи дней рассчитывают по формуле (1). Также измеряют средний диаметр капель жира, содержащихся в жировой эмульсии после хранения при 40°С в течение семи дней. Результаты представлены в Таблицах 1-4. ФЭА не обнаружен в жировой эмульсии примера 1.

В примерах 1, 2 и 4-6 и в сравнительных примерах 2, 3 и 6 указаны результаты для случая, когда рН был доведен до 5,0. В примерах 1, 2, 4, 7, 9, 10 и 12 и в сравнительных примерах 1-4, 6 и 7 указаны результаты для случая, когда рН был доведен до 5,5, а в примерах 1, 3, 7, 8 и в сравнительных примерах 3 и 5 указаны результаты для случая, когда рН был доведен до 6,0 (см. Таблицы 1-4).

В примерах 1-12 и в сравнительных примерах 1-7 количество ФХ рассчитано путем умножения количества фосфолипида (лецитина яичного желтка) на чистоту (0,988=98,8%) ФХ.

В Таблицах 1 и 2 в столбце "олеиновая кислота (масс. части)" указано содержание олеиновой кислоты (в масс. частях) относительно 1 масс. части фосфолипида.

2.3. Пример 2

Жировую эмульсию примера 2 (средний диаметр частиц: 222 нм) получают таким же образом, как и в примере 1 за исключением того, что количество лецитина яичного желтка "PC-98N" изменяют на 8,55 г, а количество дипальмитоилфосфатидилглицерина изменяют на 0,45 г. рН жировой эмульсии доводят до 5,0 или 5,5 разбавленной соляной кислотой.

Жировые эмульсии примера 2, примеров 3-12 и сравнительных примеров 1-7, описываемых далее, подвергают высокотемпературной термообработке и хранят при 40°С в течение семи дней таким же образом, как и в примере 1. Определяют остаточное содержание PGE1 в каждой жировой эмульсии и средний диаметр капель жира, содержащихся в жировой эмульсии. Результаты представлены в Таблицах 1-4. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии примера 2.

2.4. Пример 3

Жировую эмульсию примера 3 (средний диаметр частиц: 229 нм) получают таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что количество лецитина яичного желтка "PC-98N" изменяют на 7,65 г, 1,65 г ФГ, приготовленного путем обработки ФХ, полученного очисткой фосфолипида яичного желтка, фосфолипазой D в присутствии глицерина (далее в этом документе обозначается как "яично-желточный ФГ") используют вместо дипальмитоилфосфатидилглицерина, и условия высокотемпературной термообработки изменены на 127°С и одну минуту. Что касается остатков жирной кислоты в яично-желточном ФГ, то вычисленное количество остатков жирной кислоты с 16 атомами углерода составляет 35%, а количество остатков жирной кислоты с 18 атомами углерода составляет 57%. рН жировой эмульсии доводят до 6,0 водным раствором гидроксида натрия. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии примера 3. Остаточное содержание активного ингредиента (PGE1) в жировой эмульсии примера 3 сразу после нагревания, например, ниже его содержания в жировых эмульсиях примеров 8 и 11, описанных далее. Поэтому считают, что увеличение количества ФГ неблагоприятно влияет на устойчивость активного ингредиента после нагревания.

2.5. Пример 4

Жировую эмульсию примера 4 (средний диаметр частиц: 226 нм) получают таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что к соевому маслу добавляют 0,6 г олеиновой кислоты. рН жировой эмульсии доводят до 5,0 разбавленной соляной кислотой или до 5,5 водным раствором гидроксида натрия. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии примера 4.

2.6. Пример 5

Жировую эмульсию примера 4 (средний диаметр частиц: 210 нм) получают таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что к соевому маслу добавляют 1,2 г олеиновой кислоты. рН жировой эмульсии равен 5,0. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии примера 5.

2.7. Пример 6

Жировую эмульсию примера 6 (средний диаметр частиц: 230 нм) получают таким же образом, как и в примере 2, за исключением того, что к соевому маслу добавляют 1,2 г олеиновой кислоты. рН жировой эмульсии доводят до 5,0 разбавленной соляной кислотой. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии примера 6.

2.8. Пример 7

Жировую эмульсию примера 7 (средний диаметр частиц: 218 нм) получают таким же образом, как и в примере 3, за исключением того, что количество лецитина яичного желтка "PC-98N" изменяют на 8,82 г, количество яично-желточного ФГ изменяют на 0,18 г, а условия высокотемпературной термообработки изменены на 110°С и пять минут. рН жировой эмульсии доводят до 5,5 разбавленной соляной кислотой или до 6,0 водным раствором гидроксида натрия. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии примера 7.

2.9. Пример 8

Жировую эмульсию примера 8 (средний диаметр частиц: 197 нм) получают таким же образом, как и в примере 3, за исключением того, что количество лецитина яичного желтка "PC-98N" изменяют на 8,91 г, количество яично-желточного ФГ изменяют на 0,09 г. рН жировой эмульсии доводят до 6,0 водным раствором гидроксида натрия. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии примера 8.

2.10. Пример 9

Жировую эмульсию примера 9 (средний диаметр частиц: 217 нм) получают таким же образом, как и в примере 8, за исключением того, что к соевому маслу добавляют 0,12 г олеиновой кислоты. рН жировой эмульсии доводят до 5,5 водным раствором гидроксида натрия. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии примера 9.

2.11. Пример 10

Жировую эмульсию примера 10 (средний диаметр частиц - 198 нм) получают таким же образом, как и в примере 8, за исключением того, что количество лецитина яичного желтка "PC-98N" изменяют на 8,955 г, а количество яично-желточного ФГ изменяют на 0,045 г. рН жировой эмульсии доводят до 5,5 разбавленной соляной кислотой. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии примера 10.

2.12. Пример 11

Жировую эмульсию примера 11 (средний диаметр частиц - 195 нм) получают таким же образом, как и в примере 8, за исключением того, что количество лецитина яичного желтка "PC-98N" изменяют на 8,973 г, а количество яично-желточного ФГ изменяют на 0,027 г. рН жировой эмульсии доводят до 6,0 водным раствором гидроксида натрия. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии примера 11. Поскольку средний диаметр частиц в жировой эмульсии примера 11 увеличивается после нагревания примерно на 50 нм, то считают, что термическая стойкость жировой эмульсии примера 11 в некоторой степени низковата. Однако не наблюдается отделение масляной фазы, а устойчивость активного ингредиента (PGE1) - отличная.

2.13. Пример 12

Жировую эмульсию примера 12 (средний диаметр частиц - 227 нм) получают таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что ФГ, приготовленный путем обработки соевого фосфолипида фосфолипазой D в присутствии глицерина (далее в этом документе обозначается как "соевый ФГ"), используют вместо дипальмитоилфосфатидилглицерина, а условия высокотемпературной термообработки изменены на 127°С и одну минуту. Что касается остатков жирной кислоты в соевом ФГ, то вычисленное количество остатков жирной кислоты с 16 атомами углерода составляет 14%, а количество остатков жирной кислоты с 18 атомами углерода составляет 78%. рН жировой эмульсии доводят до 5,5 разбавленной соляной кислотой. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии примера 12.

2.14. Сравнительный пример 1

Жировую эмульсию сравнительного примера 1 (средний диаметр частиц: 214 нм) получают таким же образом, как и в Примере 5, за исключением того, что количество лецитина яичного желтка "PC-98N" изменяют на 9,0 г, а количество дипальмитоилфосфатидилглицерина изменяют на 0 г. рН жировой эмульсии доводят до 5,5 водным раствором гидроксида натрия. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии сравнительного примера 1.

2.15. Сравнительный пример 2

Жировую эмульсию сравнительного примера 2 (средний диаметр частиц: 189 нм) получают таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что количество лецитина яичного желтка "PC-98N" изменяют на 9,0 г, а количество дипальмитоилфосфатидилглицерина изменяют на 0 г. рН жировой эмульсии доводят до 5,0 разбавленной соляной кислотой или до 5,5 водным раствором гидроксида натрия. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии сравнительного примера 2.

2.16. Сравнительный пример 3

Жировую эмульсию сравнительного примера 2 (средний диаметр частиц: 216 нм) получают таким же образом, как и в сравнительном примере 1, за исключением того, что условия высокотемпературной термообработки изменены на 127°С и одну минуту. рН жировой эмульсии доводят до 5,0 разбавленной соляной кислотой или до 5,0 разбавленной соляной кислотой либо до 5,5 или 6,0 водным раствором гидроксида натрия. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии сравнительного примера 3.

2.17. Сравнительный пример 4

Жировую эмульсию сравнительного примера 4 (средний диаметр частиц: 221 нм) получают таким же образом, как и в примере 12, за исключением того, что вместо соевого ФГ используют фосфатидилсерин (ФС), приготовленный путем обработки ФХ, полученного обработкой фосфолипидов яичного желтка, фосфолипазой D в присутствии L-серина ("яично-желточный ФС"). рН жировой эмульсии доводят до 5,5 водным раствором гидроксида натрия. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии сравнительного примера 4.

2.18. Сравнительный пример 5

Жировую эмульсию сравнительного примера 5 (средний диаметр частиц: 192 нм) получают таким же образом, как и в примере 8, за исключением того, что количество лецитина яичного желтка "PC-98N" изменяют на 8,991 г, а количество яично-желточного ФГ изменяют на 0,009 г. рН жировой эмульсии доводят до 6,0 водным раствором гидроксида натрия. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии сравнительного примера 5. Поскольку жировую эмульсию сравнительного примера 5 отделяют после нагревания, то определение PGE1 и испытание на хранение не проводят.

2.19. Сравнительный пример 6

Жировую эмульсию сравнительного примера 5 (средний диаметр частиц: 195 нм) получают таким же образом, как и в сравнительном примере 1, за исключением того, что количество лецитина яичного желтка "PC-98N" изменяют на 7 г и добавляют 2 г лецитина яичного желтка "PL-100M" (производства Q.P. Corporation, содержание ФЭА: 15,8%). рН жировой эмульсии доводят до 5,0 разбавленной соляной кислотой или до 5,5 водным раствором гидроксида натрия. Содержание ФЭА в фосфолипиде составляет 3,5% (т.е. ФЭА обнаруживают в жировой эмульсии сравнительного примера 6).

2.20. Сравнительный пример 7

Жировую эмульсию сравнительного примера 7 (средний диаметр частиц: 238 нм) получают таким же образом, как и в примере 12, за исключением того, что вместо соевого ФГ используют дипальмитоилфосфатидную кислоту. рН жировой эмульсии доводят до 5,5 водным раствором гидроксида натрия. ФЭА не обнаруживают в жировой эмульсии сравнительного примера 7.

Таблица 2
	Олеиновая кислота (масс. части)	ФХ:ФГ	рН	Сразу после приготовления	Сразу после нагревания	После хранения при 40°С в течение 7 дней
PGE1 (мкг/мл) (a)	PGE1 (мкг/мл) (b)	остаточное содержание PGE1 (%) (b/a)	PGE1 (мкг/мл) (с) (%) (с/b)	остаточное содержание PGE1
Сравнитель ный пример 1	0,133	100:0	5,5	7,20	6,32	87,8	4,21	66,7
Сравнитель ный пример 2	0	100:0	5.0	6,34	5,89	92,9	5,58	94,8
		5,5		5,84	92,1	5,59	95,8
Сравнитель ный пример 3	0,133	100:0	5,0	7,12	5,95	83,5	4,36	73,4
		5,5		5,76	80,9	4,07	70,6
		6,0		5,52	77,5	3,63	65,9
Сравнитель ный пример 4	0	(ФХ:ФС=95:5)	5,5	6,11	4,74	77,6	2,56	54,0

	Олеиновая кислота (масс. части)	ФХ:ФГ	рН	Сразу после приготовления	Сразу после нагревания	После хранения при 40°С в течение 7 дней
PGE1 (мкг/мл) (a)	PGE1 (мкг/мл) (b)	остаточное содержание PGE1 (%) (b/a)	PGE1 (мкг/мл) (с) (%) (с/b)	остаточное содержание PGE1
Сравнитель ный пример 5	0	99,9:0,1	6,0	-	-	-	-	-
Сравнитель ный пример 6	0,133	(ФХ:ФЭА=96,5:3,5)	5,0	7,10	5,66	79,7	2,52	44,5
	5,5		5,61	79,0	2,44	43,5
Сравнитель ный пример 7	0	(ФХ:ФК=95:5)	5,5	6,93	4,93	71,3	3,00	60,7

Таблица 3
	рН	Сразу после приготовления	Сразу после нагревания	После хранения при 40°С в течение 7 дней
Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)
Пример 1	5,0	193	86	211	82	200	66
5,5	214	88	213	88
5,5	213	32	211	63	212	72
6,0	212	78	213	82
Пример 2	5,0	222	68	218	80	225	78
5,5	219	55	220	85
Пример 3	6,0	229	56	226	70	230	74
Пример 4	5,0	226	86	225	88	229	50
5,5	227	74	225	80

	РН	Сразу после приготовления	Сразу после нагревания	После хранения при 40°С в течение 7 дней
Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)
Пример 5	5,0	210	85	211	71	217	66
Пример 6	5,0	230	74	223	60	232	68
Пример 7	5,5	218	86	219	68	215	80
6,0	221	73	213	78
Пример 8	6,0	197	81	198	60	196	82
Пример 9	5.5	217	77	221	71	211	74
Пример 10	5,5	198	58	191	56	181	64
Пример 11	6,0	195	67	239	53	234	72
Пример 12	5,5	227	93	233	85	226	74

Таблица 4
	рН	Сразу после приготовления	Сразу после нагревания	После хранения при 40°С в течение 7 дней
Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (им)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)
Сравнитель ный пример 1	5,5	214	33	219	47	219	63
Сравнитель ный пример 2	5,0	189	69	731	315	423	195
			После нагревания происходит расслоение
	5,5			После нагревания происходит расслоение, и измерение становится невозможным	413	185
Сравнитель ный пример 3	5,0	216	78	419	189	427	179
5,5			311	76	340	99
6,0			227	75	226	67
Сравнитель ный пример 4	5,5	221	29	225	77	219	80

	pH	Сразу после приготовления	Сразу после нагревания	После хранения при 40°С в течение 7 дней
Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)
Сравнитель ный пример 5	6,0	192	78	753	354	-	-
После нагревания происходит расслоение
Сравнитель ный пример 6	5,0	195	70	191	76	197	72
5,5			187	68	186	71
Сравнитель ный пример 7	5,5	238	53	239	65	238	66

В Таблицах 1 и 2 "ФХ:ФГ" обозначает соотношение ФХ к ФГ в фосфолипиде, используемом в каждой жировой эмульсии.

Как следует из результатов, представленных в Таблицах 1-4, поскольку жировые эмульсии примеров 1-12 содержат фосфолипид, который содержит ФХ и ФГ в соотношении (ФХ:ФГ) от 85:15 до 99,7:0,3, остаточное содержание PGE1 после хранения при 40°С в течение семи дней составляет 70% или более (80% или более, 85% или более, в зависимости от условий). Более того, средний диаметр капель жира составляет 300 нм или менее, изменение среднего диаметра капель жира невелико сразу после приготовления, сразу после нагревания и после хранения при 40°С в течение семи дней. Поэтому жировые эмульсии примеров 1-12 проявляют отличную стойкость, а также отличную устойчивость проявляет ее активный ингредиент (PGE1).

Что касается жировой эмульсии сравнительного примера 1, то остаточное содержание PGE1 в жировой эмульсии после хранения при 40°С в течение семи дней значительно ниже его содержания в жировой эмульсии сразу после приготовления. Касательно жировой эмульсии сравнительного примера 2, изменение среднего диаметра капель жира сразу после нагревания и после хранения при 40°С в течение семи дней превышает изменение среднего диаметра капель жира сразу после приготовления. Более того, средний диаметр капель жира сразу после нагревания и после хранения при 40°С в течение семи дней значительно больше изменения среднего диаметра капель жира сразу после приготовления, и наблюдается расслоение препарата. Касательно жировой эмульсии сравнительного примера 3, диаметр капель жира увеличивается сразу после нагревания при рН 5,0 и 5,5, а остаточное содержание PGE1 после хранения при 40°С в течение семи дней уменьшается при рН 6,0. В частности, поскольку соотношение ФХ к ФГ (ФХ:ФГ) в фосфолипиде выходит за пределы диапазона 85:15-99,7:0,3 в жировых эмульсиях сравнительных примеров 1-3 и 5, то устойчивость активного ингредиента (PGE1) и/или стойкость эмульсии ухудшаются. В сравнительном примере 4, в котором вместо ФГ используют ФС, стойкость эмульсии сохраняется сразу после нагревания и после хранения при 40°С в течение семи дней. Однако остаточное содержание PGE1 после хранения при 40°С в течение семи дней становится значительно ниже.

В сравнительном примере 7, в котором вместо ФГ используют ФК, стойкость эмульсии сохраняется сразу после нагревания и после хранения при 40°С в течение семи дней. Однако остаточное содержание PGE1 после хранения при 40°С в течение семи дней становится значительно ниже. Т.е. при использовании фосфатидилсерина (ФС) или фосфатидной кислоты (ФК) вместо ФГ стойкость эмульсии сохраняется, но PGE1 исчезает быстро.

В сравнительном примере 6 стойкость эмульсии увеличивается при введении ФЭА в фосфолипид. Однако PGE1 исчезает быстрее по сравнению со сравнительными примерами 1-3.

2.21. Результаты после хранения при 20°С в течение двух месяцев.

Жировые эмульсии (рН 5,5) примеров 1 и 7 и сравнительного примера 1 хранят при 20°С в течение двух месяцев. В Таблицах 5 и 6 показаны остаточное содержание PGE1 и средний диаметр частиц после хранения. Остаточное содержание PGE1 после хранения при 20°С в течение двух месяцев рассчитывают по формуле (1).

Как следует из результатов, представленных в Таблицах 5 и 6, активный ингредиент (PGE1) в жировой эмульсии примера 1 имеет более высокую устойчивость по сравнению с активным ингредиентом жировой эмульсии сравнительного примера 1 даже после хранения при 20°С в течение двух месяцев.

Таблица 5
	Олеиновая кислота (%)	ФХ:ФГ	РН	Сразу после приготовления	Сразу после нагревания	После хранения при 20°С в течение двух месяцев
PGE1 (мкг/мл) (а)	PGE1 (мкг/мл) (b)	остаточное содержание PGE1 (%) (b/а)	PGE1 (мкг/мл) (с) остаточное	содержание PGE1 (%) (c/b)
При мер 1	0	98:2	5,5	5,69	5,37	94,3	4,97	92,5
При мер 7	0	98:2	5,5	6,64	6,13	92,3	5,59	91,1
Срав нитель ный пример 1	0,133	100:0	5,5	7,20	6,32	87,8	4,36	69,1

Таблица 6
	Олеиновая кислота (%)	Сразу после приготовления	Сразу после нагревания	После хранения при 20°С в течение двух месяцев
Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)
При мер 1	5,5	213	32	211	63	211	79
При мер 7	5,5	218	86	219	68	224	36
Срав нитель ный при мер 1	5,5	214	33	219	47	228	67

2.22. Результаты после хранения при 5°С в течение шести месяцев

Жировые эмульсии (рН 5,5) примеров 1 и 7 и сравнительного примера 1 хранят при 5°С в течение шести месяцев. В Таблицах 7 и 8 показаны остаточное содержание PGE1 и средний диаметр частиц после хранения. Остаточное содержание PGE1 после хранения при 5°С в течение шести месяцев рассчитывают по формуле (1).

Как следует из результатов, представленных в Таблицах 7 и 8, активный ингредиент (PGE1) в жировой эмульсии примеров 1 и 7 имеет более высокую устойчивость по сравнению с активным ингредиентом жировой эмульсии сравнительного примера 1 даже после хранения при 5°С в течение шести месяцев.

Таблица 7
	Олеиновая кислота (%)	ФХ:ФГ	РН	Сразу после приготовления	Сразу после нагревания	После хранения при 5°С в течение шести месяцев
PGE1 (мкг/мл) (а)	PGE1 (мкг/мл) (b)	остаточное содержание PGE1 (%) (b/a)	PGE1 (мкг/мл) (с)	остаточное содержание PGE1 (%) (с/b)
Пример 1	0	98:2	5,5	5,69	5,37	94,3	5,36	99,8
Пример 7	0	98:2	5,5	6,64	6,13	92,3	5,99	97,6
Сравнительный пример 1	0,133	100:0	5,5	7,20	6,32	87,8	5,32	84,2

Таблица 8
	pH	Сразу после приготовления	Сразу после нагревания	После хранения при 5°С в течение шести месяцев
Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)
При мер 1	5,5	213	32	211	63	227	87
При мер 7	5,5	218	86	219	68	236	64
Срав нитель ный пример 1	5,5	214	33	219	47	231	52

2.23. Результаты после хранения при 5°С в течение одного года

Жировые эмульсии (рН 5,5) примеров 1 и 7 и сравнительного примера 1 хранят при 5°С в течение одного года. В Таблицах 9 и 10 показаны остаточное содержание PGE1 и средний диаметр частиц после хранения. Остаточное содержание PGE1 после хранения при 5°С в течение одного года рассчитывают по формуле (1).

Как следует из результатов, представленных в Таблицах 7 и 8, активный ингредиент (PGE1) в жировой эмульсии примеров 1 и 7 имеет более высокую устойчивость по сравнению с активным ингредиентом жировой эмульсии сравнительного примера 1 даже после хранения при 5°С в течение одного года.

Таблица 9
	Олеиновая кислота (%)	ФХ:ФГ	pH	Сразу после приготовления	Сразу после нагревания	После хранения при 5°С в течение одного года
PGE1 (мкг/мл) (a)	PGE1 (мкг/мл) (b)	остаточное содержание PGE1 (%) (b/a)	PGE1 (мкг/мл) (с)	остаточное содержание PGE1 (%) (c/b)
При мер 1	0	98:2	5,5	5,69	5,37	94,3	5,13	95,6
При мер 7	0	98:2	5,5	6,64	6,13	92,3	5,60	91,4
Срав нитель ный при мер 1	0,133	100:0	5,5	7,20	6,32	87,8	4,71	74,5

Таблица 10
	pH	Сразу после приготовления	Сразу после нагревания	После хранения при 5°С в течение одного года
Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)	Средний диаметр частиц (нм)	Стандартное отклонение (нм)
При мер 1	5,5	213	32	211	63	205	78
При мер 7	5,5	218	86	219	68	218	74
Сравните льный при мер 1	5,5	214	33	219	47	211	65