стабилизированная фармацевтическая композиция, cодержащая доцетаксел

Формула изобретения

1. Фармацевтическая композиция для инъекционного введения на основе однородной жидкости, содержащая доцетаксел, с контролируемым pH в интервале от 3 до 5, состоящая из:

(а) доцетаксела или его фармацевтически приемлемой соли,

(б) сурфактанта, выбранного из группы, состоящей из полисорбата, сложного эфира полиоксиэтиленгликоля и полиоксиэтиленовых производных касторового масла,

(в) безводного этанола в концентрации от 100 до 800 мг/мл, и

(г) регулятора pH, выбранного из лимонной кислоты, фумаровой кислоты, молочной кислоты, оловянной кислоты, янтарной кислоты, малеиновой кислоты, уксусной кислоты, винной кислоты и фосфорной кислоты.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой регулятором pH является лимонная кислота.

Описание изобретения к патенту

Область техники

Настоящее изобретение относится к стабилизированным фармацевтическим композициям для инъекций, содержащим доцетаксел, на основе однородной жидкости.

Предпосылки создания изобретения

Доцетаксел является одним из полусинтетических производных токсоида, который используется в качестве противоопухолевого средства. Формула доцетаксела представлена 4-ацетокси-2 -бензоилокси-5 ,2О-эпоски-1,7 ,10 -тригидрокси-9-оксо-такс-11-ен-13 -ил(2R,3S)-3-трет-бутилоксикарбониламино-2-гидрокси-3-фенил пропионатом, а его химическая структура соответствует приведенной ниже формуле 1. Эмпирическая формула доцетаксела выражается как C₄₃H₅₅NO₁₄, само соединение представляет собой белый или белесоватый порошок, при этом известно, что доцетаксел хорошо растворяется в жирах и плохо растворяется в воде, с растворимостью от 6 до 7 мкг/мл.

Формула 1

В патенте Кореи № 136722 раскрывается композиция, подходящая для инъекционного введения и несодержащая этанола, включающая не растворимые в воде производные таксана, растворенные в сурфактанте, выбранном из группы, включающей полисорбат, сложный эфир полиоксиэтиленгликоля и производные полиоксиэтилена касторового масла.

В последние годы доцетаксел выпускается компанией Авентис (Aventis) под названием Таксотер®, его техническое обоснование основано на патенте Кореи № 136722. В соответствии с указанным патентом для лечения рака эффективное вещество необходимо вводить в достаточном количестве, однако при этом во время инъекционной терапии у пациентов может развиваться анафилактический шок или алкоголизм, поскольку эффективное вещество применяется в высоких дозах по причине его низкой концентрации в инъекционном растворе. Следовательно, в указанном патенте рекомендуется полностью удалять этанол из композиций доцетаксела, в которых он применяется при приготовлении инъекционных лекарственных форм.

Однако коммерчески доступный препарат Таксотер® должен использоваться путем смешивания двух компонентов - 13% раствора разведенного этанола и концентрированного раствора доцетаксела с получением предварительной смеси. В полученном смешанном растворе концентрация доцетаксела составляет 10 мг/мл; специальным градуированным шприцом отбирается нужное количество и вводится в мешок для инфузий или флакон объемом 250 мл, содержащий 0,9% физиологический раствор или 5% раствор глюкозы. Если существует необходимость использовать доцетаксел в объеме больше 200 мл, рекомендуется вводить его в конечной разведенной концентрации не более 0,74 мг/мл.

При использовании препарата Таксотер® правильным является использование для инъекций раствора, содержащего этанол, и к настоящему времени не проводилось достоверных клинических исследований, оценивающих риск развития анафилактического шока или алкоголизма в результате постоянного введения этанола в ходе лечения.

Следовательно, количество этанола, используемого в качестве растворителя в инъекционных лекарственных формах, содержащих доцетаксел, не влияет на безопасность вводимой композиции в противоположность тому, что изложено в литературе, указанной в известном уровне техники.

Последнее время применение коммерчески доступного препарата Таксотер® сопровождается определенными трудностями, связанными с введением препарата, которое включает: предварительное смешивание концентрированного лекарственного препарата с раствором для разведения с получением предварительного смешанного раствора, вторичное разведение предварительного смешанного раствора 0,9% физиологическим раствором и капельное введение полученного разведенного раствора приблизительно в течение 1 часа и не ранее чем через 4 часа после приготовления предварительного раствора. Кроме того, еще одним недостатком препарата Таксотер® является то, что флакон с концентрированным лекарством, смешанным с раствором для разведения, необходимо аккуратно перевернуть вверх дном и подержать 45 секунд, чтобы получить предварительный смешанный раствор без интенсивного перемешивания, кроме того, в полученном растворе могут образовываться пузырьки, а для их исчезновения раствор необходимо выдерживать минимум 5 минут. Поскольку предварительно смешанный раствор остается стабильным при хранении в течение не более 8 часов при температуре от 2 до 8°C или при комнатной температуре, его необходимо дополнительно разбавлять жидкостью для перфузий.

Как описано выше, препарат доцетаксела Таксотер®, имеющий техническое обоснование в патенте Кореи № 136722, образует гелевую фазу при непосредственном разведении жидкостью для перфузии. Следовательно, введение такой композиции доцетаксела является трудоемким и неудобным процессом, включающим первичное разведение 13% раствором этанола и последующее разведение жидкостью для перфузии, необходимое для введения препарата Таксотер®. Кроме того, существует проблема хранения первичного разведенного раствора, т.к. он хранится ограниченный период времени в течение 8 часов при комнатной температуре или при температуре холодильной комнаты по причине своей низкой стабильности.

В патенте Кореи № 607391 раскрывается растворимая в воде твердая фармацевтическая композиция и ее водные растворы, содержащие доцетаксел и циклодекстрин, при этом доцетаксел используется для парентерального введения. Однако заявленная в указанном патенте композиция имеет свои недостатки, поскольку весовое соотношение доцетаксела и циклодекстрина превышает 1:50, следовательно, дорогой компонент циклодекстрин используется в большом количестве, что приводит к существенному увеличению стоимости препарата. Кроме того, существует проблема, касающаяся производства препарата, поскольку это очень трудоемкий процесс, так как содержащие доцетаксел растворимые в воде твердые композиции необходимо изготавливать путем замораживания сухим льдом.

При этом в патенте Кореи № 330316 раскрывается композиция для инъекционного введения, содержащая таксановые производные и сурфактант, выбранный из группы, включающей полисорбаты, эфиры алкоксикислот этиленоксидов и эфиры алкоксикислот и глицеридов жирных кислот, при этом указанная композиция для инъекционного введения включает две ячейки, которые используются для приготовления раствора, содержащего менее 5 вес.% этанола, и инъекционного раствора, содержащего таксановые производные, при этом растворитель выбранный из группы, включающей органические соединения и хлорид натрия, присутствует в концентрации 6 вес.% от общего количества сурфактанта; органические соединения способны препятствовать формированию гелевой фазы или дезинтеграции гелевой фазы при смешивании этанолсодержащего раствора с водным раствором, при этом указанные органические соединения содержат гидроксильную группу или функциональную группу амина и имеют молекулярный вес менее 200. Также в международной публикации WO 06/133510 описывается жидкая композиция для инъекционного введения, содержащая доцетаксел, полиэтиленгликоли и растворитель, при этом pH композиции находится в пределах от 2,5 до 7. Однако такая жидкая композиция является нестабильной, поскольку содержание сопутствующих соединений может существенно увеличиваться в течение месяца хранения (экспресс-тест), что описано в Сравнительных примерах настоящей заявки, кроме того, при вторичном разведении композиции жидкостью для перфузии и хранении в течение длительного времени могут образовываться преципитаты.

Кроме того, из области техники известно множество исследований, касающихся доцетаксела. Например, в патенте Кореи № 40119 раскрывается фармацевтическая композиция, содержащая ненасыщенные фосфолипиды и небольшое количество других негативных фосфолипидов, при этом активный ингредиент на основе таксоидов является стабильным и находится в высокой концентрации, а в патенте США № 2006-188566 раскрывается способ приготовления наночастиц доцетаксела, включающих поверхностно-стабилизирующий агент. Кроме того, в патенте № 2006-67952 раскрывается способ приготовления водно-масляной эмульсии доцетаксела для инъекционного введения с использованием небольшого объема масла; а в патенте США № 2007-82838 раскрывается способ повышения стабильности суспензии наночастиц, содержащей не растворимое в воде лекарство, такое как доцетаксел, заключающийся в использовании стабилизирующего агента, такого как сывороточный альбумин, при разведении композиции до ее введения.

Доцетаксел представляет собой высокотоксичный лекарственный препарат, который необходимо использовать в очень низких концентрациях. Таким образом, для его безопасного применения необходимо получить такую инъекционную форму, которая будет легко храниться и обеспечивать введение строго определенного количества доцетаксела.

Авторы настоящего изобретения предприняли попытки улучшить стабильность инъекционной композиции, содержащей доцетаксел, и разработать способ введения указанной композиции, а также оценить результаты применения таких инъекционных фармацевтических композиций доцетаксела на основе одной жидкой среды, которые могут использоваться самостоятельно, без использования промежуточного раствора для разведения благодаря своей улучшенной стабильности и увеличенному сроку хранения. Следовательно, настоящее изобретение является усовершенствованным, учитывая изложенные выше факты.

Подробное описание изобретения

Соответственно, настоящее изобретение разработано для устранения недостатков, известных из области техники, таким образом, целью настоящего изобретения является предложить фармацевтическую композицию доцетаксела на основе однородной жидкой среды, которую можно использовать самостоятельно, без промежуточного разведения раствором; указанная задача решается путем улучшения стабильности указанной инъекционной композиции доцетаксела и разработки способа введения этой инъекционной композиции.

Далее детально представлены варианты осуществления настоящего изобретения.

Для того чтобы решить проблемы, изложенные в области техники, инъекционная композиция доцетаксела на основе однородной жидкой среды должна удовлетворять следующим требованиям:

Во-первых, плохо растворимый в воде доцетаксел должен быть растворен.

Во-вторых, необходимо обеспечить стабильность композиции, в которой растворен доцетаксел; и, в-третьих, инъекционная композиция должна сохранять стабильность при разведении жидкостью для перфузии.

Согласно одному аспекту своего осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для инъекционного введения на основе однородной жидкой среды, содержащей доцетаксел, включающей (а) доцетаксел и его фармацевтически приемлемые соли, (б) сурфактант, выбранный из группы, содержащей полисорбат, сложные эфиры полиоксиэтиленгликоля и производные полиоксиэтилена касторового масла; (в) растворитель, включая безводный этанол в концентрации от 100 до 800 мг/мл в инъекционном растворе; (г) регулятор pH в количестве, достаточном для поддержания величины pH жидкой композиции на уровне 5 и менее.

Фармацевтическую композицию доцетаксела на основе однородной жидкой среды, заявленную в соответствии с настоящим изобретением, удобно вводить, кроме того, она является более стабильной по сравнению с предварительно смешанным раствором, в котором концентрированное лекарственное средство смешано с раствором для разведения, поскольку заявленная фармацевтическая композиция может использоваться самостоятельно без применения промежуточного раствора для разведения. В частности, заявленная фармацевтическая композиция имеет существенно улучшенную фармацевтическую стабильность, а также повышенную стабильность при длительном хранении, поскольку разрушение лекарственного вещества тормозится присутствием этанола, что дает ей существенные преимущества перед традиционными препаратами. Кроме того, поскольку традиционные существующие препараты содержат вязкие сурфактанты, они не могут вводиться самостоятельно. Поскольку заявленная в соответствии с настоящим изобретением фармацевтическая композиция содержит смесь этанола и сурфактанта, она может вводиться самостоятельно, поскольку не является вязкой.

Доцетаксел в составе композиции, заявленной в соответствии с настоящим изобретением, может быть представлен в любых формах, таких как ангидриды, гидраты, полиморфные формы, различные производные и пролекарства. Если доцетаксел находится в форме ангидрида, его концентрация в композиции составляет от 5 до 80 мг/мл, предпочтительно от 10 до 30 мг/мл.

Согласно одному варианту осуществления изобретения сурфактант, который используется в качестве растворителя, выбран из группы, включающей полисорбаты, такие, как Tween80^® , сложные эфиры полиоксиэтиленгликоля, такие как Emulphor ^® и производные полиоксиэтилена касторового масла, такие как Cremophore ELP^® и т.д.

Также согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения еще одним растворителем является безводный этанол, который может использоваться для растворения доцетаксела и уменьшения вязкости конечной композиции.

В частности, не представляется возможным раздельно вводить существующие стандартные препараты доцетаксела, поскольку они состоят из очень вязкого сурфактанта, в то время как композицию, заявленную в соответствии с настоящим изобретением, на основе смеси этанола и сурфактанта, можно вводить отдельно, поскольку она не является вязкой. Когда композицию разводят жидкостью для перфузии перед введением пациентам, наличие этанола усиливает растворение композиции, поскольку этанол обладает свойством препятствовать гелеобразованию. Однако, поскольку избыточное количество этанола может приводить к разрушению лекарства, а также способствовать развитию алкоголизма, необходимо тщательно подбирать его дозировку. Растворитель в композиции, заявленной в соответствии с настоящим изобретением, присутствует в концентрации от 100 до 800 мг/мл. Если растворитель присутствует в более низкой концентрации, чем та, что указана в соответствующем варианте осуществления данного изобретения, он может нарушать стабильность композиции при ее разведении, а высокие концентрации растворителя, напротив, вызывают разрушение лекарства и могут приводить к появлению симптомов алкоголизма.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения регулятор pH выбран из группы, включающей лимонную кислоту, муравьиную кислоту, молочную кислоту, оловянную кислоту, малеиновую кислоту, уксусную кислоту, виннокаменную кислоту, фосфорную кислоту и соляную кислоту; предпочтительным регулятором pH является лимонная кислота.

Согласно настоящему изобретению при растворении доцетаксела с полисорбатом в безводном этаноле величина pH композиции составляет приблизительно 7,0, при этом хранение композиции в течение 15 дней или более при комнатной температуре может приводить к уменьшению концентрации доцетаксела и увеличению концентрации сопутствующих соединений. Поэтому величина pH композиции, заявленной в соответствии с настоящим изобретением, должна быть обязательно снижена до 5 и менее, предпочтительно, до 3-5 при помощи регулятора pH.

Композиция, заявленная в соответствии с настоящим изобретением, может быть легко приготовлена при помощи способа, включающего следующие этапы: 1) доцетаксел растворяют в безводном этаноле, полное растворение совершается после добавления регулятора pH; 2) в полученный раствор при одновременном перемешивании и взбалтывании добавляют растворитель до получения гомогенного раствора; 3) полученную смесь фильтруют в стерильных условиях и помещают в стеклянные флаконы.

Как описано выше, фармацевтическая композиция доцетаксел на основе однородной жидкой среды, заявленная в соответствии с настоящим изобретением, представляет собой инъекционный препарат с повышенной стабильностью при длительном хранении, в котором не происходит разрушения лекарственных средств даже при использовании доцетаксела в сочетании с этанолом. Кроме того, указанная фармацевтическая композиция удобна в использовании, поскольку может разводиться и вводиться самостоятельно без использования промежуточного раствора для разведения.

Ниже детально представлены примеры вариантов осуществления настоящего изобретения.

Однако должно быть понятно, что данное описание представлено с иллюстративной целью и не ограничивает сущности изобретения.

Примеры 1-8: Получение заявленных жидких композиций доцетаксела

Доцетаксел (безводный) в количестве 200 мг полностью растворяют в безводном этаноле, основываясь на композициях и концентрациях, представленных ниже в Таблице 1, после чего дополнительно добавляют кислоту до полного растворения. Затем в полученный раствор при одновременном помешивании и взбалтывании медленно добавляют растворитель до получения гомогенного раствора. Конечный раствор фильтруют через 0,22 мкм фильтр и помещают в стеклянные флаконы с получением инъекционного препарата доцетаксела на основе однродной жидкой среды, который используют в Примерах 1-8 соответственно.

Таблица 1
Единица измерения: мг	Пример 1	Пример 2	Пример 3	Пример 4	Пример 5	Пример 6	Пример 7	Пример 8
Доцетаксел (безводный)	200	200	200	200	200	200	200	200
Полисорбат 80 (Tween 80®)	5200	-	5200	5200	5200	5200	5200	5200
Полиоксил 35 Касторовое масло (Cremophore ELP®)	-	5200	-	-	-	-	-	-
Безводный этанол	3900	3900	1910	8000	3900	3900	3900	3900
Лимонная кислота	20	20	20	20	-	-	10	30
Уксусная кислота	-	-	-	-	20	-	-	-
Молочная кислота	-	-	-	-	-	20	-	-

Сравнительные примеры 1-9: Получение препаратов доцетаксела

Препараты доцетаксела приготавливают на основе композиций и концентраций, представленных в Таблице 2, полученные препараты используют в Сравнительных примерах 1-9 соответственно.

В частности, коммерчески доступный жидкий препарат Таксотер^® используют в Сравнительном примере 2, получают его при помощи способа, описанного в патенте Кореи № 136722, путем растворения доцетаксела в безводном этаноле с последующим добавлением в полученный раствор полисорбата 80 и выпариванием безводного этанола при температуре 30°C в течение 2 часов в ротационном испарителе.

Таблица 2
Един. измер.: мг	Сравн. пример 1	Сравн. пример 2	Сравн. пример 3	Сравн. пример 4	Сравн. пример 5	Сравн. пример 6	Сравн. пример 7	Сравн. пример 8	Сравн. пример 9
Доцетаксела (безводн.)	200	200	200	200	200	200	200	200	200
Поли-сорбат 80 (Tween 80®)	-	5200	5200	5200	5200	5200	5200	5200	5200
Полиоксил 35 Касторовое масло (Cremophore ELP®)	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Макрогол 15 гидрокси-стеарат (Solutol HS®)	5200	-	-	-	-	-	-	-	-
PEG300	-	-	3900	-=	-	-	-	-	-
PEG400	-	-	-	3900	-	3900	-	-	-
Фармасолв	-	-	-	-	3900	-	-	-	-
Безводный этанол	3900	-	-	-	-	3900	1900	3900	3900
Лимонная кислота	20	-	20	20	20	20	-	-	5
Уксусная кислота	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Молочная кислота	-	-	-	-	-	-	-	-	-

Опытный пример 1: Влияние сурфактанта на стабильность заявленных композиций доцетаксела

Влияние сурфактанта на стабильность инъекционных композиции доцетаксела, приготовленных в Примерах 1 и 2 и Сравнительном примере 1, оценивают при комнатной температуре и специально созданных условиях хранения (40°C и 75% относительной влажности).

Содержание доцетаксела и его сопутствующих соединений в приготовленных растворах оценивают при следующих условиях при помощи HPLC:

1) Подвижная фаза - 0,02 ацетат натриевого буфера (pH, доведенный до 4,5): ацетонитрил = 60:40

2) Колонка - Hypersil MOS 15 см × 4,6 мм, 5 мкм, С8 или эквивалентная колонка

3) Длина волны - 230 нм

4) Скорость потока - 1,0 мл/мин

5) Приход - 20 мкл

Для того чтобы оценить содержание доцетаксела в качестве тестируемого образца, берется 10 мг доцетаксела (безводного), который помещают в волюметрическую колбу объемом 100 мл, растворяют в 20 мл ацетонитрила и затем измеряют в подвижной фазе; этот раствор и используется в качестве тестируемого образца. Кроме того, стандартный доцетаксел (безводный) берется в большем количестве чем 10 мг и приготавливается так же, как тестируемый образец. Полученный раствор используется в качестве стандартного раствора. Для того чтобы оценить количество сопутствующих соединений, берется 10 мг доцетаксела (безводного), который помещают в волюметрическую колбу объемом 10 мл, растворяют в 2 мл ацетонитрила и затем измеряют в подвижной фазе; этот раствор используется в качестве тестируемого образца.

Величину pH полученных растворов измеряют путем разведения эквивалентного количества (10 мг) доцетаксела (безводного) 5 мл инъекционного раствора, образцы оценивают невооруженным глазом, основываясь на изменении цвета раствора и появлении осадка. Результаты представлены в Таблице 3.

Таблица 3
	Стабильность в начале исследования	Стабильность после увеличенного периода хранения в 1 месяц
Образец	pH	Содержание (%)	Общее содержание сопутств. соединений (%)	Образец	pH	Содержа- ние (%)	Общее содержание сопутств. соединений (%)
Пример 1	Бесцветный Прозрачный	3,81	100,5	0,705	Бесцветный Прозрачный	3,91	100,4	1,104
Пример 2	Бесцветный Прозрачный	3,54	101,4	0,715	Бесцветный Прозрачный	3,56	101,0	1,206
Сравн. пример 3	Бесцветный Прозрачный	4,22	100,7	0,865	Светло-желтый	4,25	91,4	9,412

Как показано в Таблице 3, в ходе эксперимента было выявлено, что препараты доцетаксела, приготовленные в Примерах 1 и 2, в которых в качестве сурфактанта использовались полисорбат 80 и полиоксил 35 касторового масла согласно одному из вариантов осуществления данного изобретения, остались стабильными при комнатной температуре и при экстремальных условиях хранения, а в препарате, в котором в качестве сурфактанта использовался солютол HS, как описано в Сравнительном примере 1, были выявлены изменения, касающиеся цвета и концентрации доцетаксела и сопутствующих соединений.

Таким образом, было показано, что сурфактант, выбранный из группы, включающей полисорбаты, сложные эфиры полиоксиэтиленгликоля и производные полиоксиэтилена касторового масла, является важным фактором для поддержания стабильности композиции, в которой растворен доцетаксел, особенно в случае заявленной в изобретении инъекционной фармацевтической композиции доцетаксела на основе однородной жидкой среды.

Опытный пример 2: Влияние растворителя на стабильность заявленных композиций доцетаксела

Влияние растворителя, а именно этанола, на инъекционные композиции доцетаксела оценивают при помощи композиций, приготовленных в Примерах 1,3 и Сравнительных примерах 2-6.

Величину pH и образцы приготовленных растворов оценивают так же, как и в Сравнительном примере 1. Результаты представлены в Таблице 4.

Таблица 4
	Стабильность в начале исследования	Стабильность после увеличенного периода хранения в 1 месяц
Образец	pH	Содержание (%)	Общее содержание сопутств. соединений (%)	Образец	pH	Содержание (%)	Общее содержание сопутств. соединений (%)
Пример 1	Бесцветный Прозрачный	3,81	100,5	0,705	Бесцветный Прозрачный	3,91	100,4	1,104
Пример 3	Бесцветный Прозрачный	3,75	99,62	0,726	Бесцветный Прозрачный	3,76	100,09	1,290
Пример 4	Бесцветный Прозрачный	3,82	100,12	0,711	Бесцветный Прозрачный	3,81	100,44	1,030
Сравн. пример 2	Бесцветный Прозрачный	6,90	101,1	0,680	Светло-желтый	6,92	42,4	30,66
Сравн. пример 3	Бесцветный Прозрачный	3,92	100,30	0,715	Бесцветный Прозрачный	3,85	100,25	1,765
Сравн. пример 4	Бесцветный Прозрачный	3,84	99,84	0,695	Бесцветный Прозрачный	3,82	100,10	1,722
Сравн. пример 5	Бесцветный Прозрачный	3,77	101,02	0,725	Бесцветный Прозрачный	3,80	98,16	1,744

Согласно настоящему изобретению в результате эксперимента было показано, что препараты доцетаксела, приготовленные в Примерах 1, 3 и 4 оставались стабильными после увеличенного периода хранения в 1 месяц без изменения своего внешнего вида, концентрации и качества сопутствующих соединений, при этом в каждом из указанных инъекционных препаратов концентрация этанола составляла от 100 до 800 мг/мл. Кроме того, было показано, что препарат доцетаксела, приготовленный в Сравнительном примере 2, в состав которого не входили безводный этанол и регулятор pH, через месяц хранения не остался стабильным, что проявилось изменением цвета на светло-желтый, а также изменением концентрации доцетаксела и сопутствующих соединений.

Кроме того, было показано, что препараты доцетаксела, приготовленные в Сравнительных примерах 3-5, в которых в качестве растворителя вместо безводного этанола использовались гликоли и был добавлен регулятор pH, также оставались стабильными после 1 месяца хранения, при этом изменения концентрации доцетаксела и сопутствующих соединений были менее выражены, чем в препаратах, приготовленных в Примерах 1, 3 и 4 настоящего изобретения.

Таким образом, показано, что безводный этанол в концентрации от 100 до 800 мг/мл является важным фактором для поддержания стабильности композиции, в которой растворен доцетаксел, особенно в случае заявленной в изобретении инъекционной фармацевтической композиции доцетаксела на основе одной жидкой среды.

Опытный пример 3: Влияние величины pH на стабильность заявленных композиций доцетаксела

Влияние растворителей на стабильность инъекционных композиций доцетаксела, приготовленных в Примерах 1, 5-8 и Сравнительных примерах 2, 7-9, сравнивают и оценивают так же, как и в Опытном примере 1.

Таблица 5
	Стабильность в начале исследования	Стабильность после увеличенного периода хранения в 1 месяц
Образец	pH	Содержа- ние (%)	Общее содержание сопутств. соединений (%)	Образец	pH	Содержа- ние (%)	Общее содержание сопутств. соединений(%)
Пример 1	Бесцветный Прозрачный	3,81	100,5	0,705	Бесцветный Прозрачный	3,91	100,4	1,104
Пример 5	Бесцветный Прозрачный	3,94	100,2	0,654	Бесцветный Прозрачный	3,95	100,2	1,210
Пример 6	Бесцветный Прозрачный	4,02	100,6	0,741	Бесцветный Прозрачный	4,05	100,3	1,240
Пример 7	Бесцветный Прозрачный	4,47	101,5	0,716	Бесцветный Прозрачный	4,45	100,9	1,220
Пример 8	Бесцветный Прозрачный	3,32	99,8	0,722	Бесцветный Прозрачный	3,30	100,5	1,100
Сравн. пример 2	Бесцветный Прозрачный	6,90	101,1	0,680	Светло-желтый	6,92	42,4	30,68
Сравн. пример 7	Бесцветный Прозрачный	6,90	101,3	0,657	Светло-желтый	6,85	40,6	32,16
Сравн. пример 8	Бесцветный Прозрачный	6,94	100,5	0,701	Светло-желтый	6,92	39,2	35,52
Сравн. пример 9	Бесцветный Прозрачный	5,94	100,8	0,710	Бесцветный Прозрачный	5,90	75,6	18,21

Как видно из результатов изучения стабильности композиций доцетаксела, приготовленных в Примерах 1, 5 - 8 и Сравнительных примерах 2, 7 - 9, композиции, в которых величина pH при помощи кислоты отрегулирована до 5 и менее, имеют прекрасные показатели стабильности в начале исследования и после увеличенного периода хранения в 1 месяц, однако их внешний вид, концентрация доцетаксела и общих сопутствующих соединений существенно изменяется при увеличении pH в отсутствие кислоты или при низкой ее концентрации.

Следовательно, было показано, что величина pH композиции, которая должна быть доведена до 5 или менее, является важным фактором для поддержания стабильности композиции, в которой растворен доцетаксел, особенно в случае заявленной в изобретении инъекционной фармацевтической композиции доцетаксела на основе однородной жидкой среды.

Опытный пример 4: Оценка стабильности заявленных композиций доцетаксела при разведении

Для того чтобы оценить коммерчески доступный препарат Таксотер^® - жидкую лекарственную форму для инъекционного введения человеку (идентичную препарату, приготовленному в Сравнительном примере 2 настоящего изобретения), осуществляют исследование, основываясь на следующих рекомендациях и дозировках: сначала Таксотер ^® разводят 13% (вес./вес.) раствором этанола, добавляя его в инъекционную композицию, после чего дополнительно разводят 0,9% физиологическим раствором или раствором 5% глюкозы для получения раствора, в котором концентрация доцетаксела составляет максимум 0,74 мг/мл. Затем раствор вводят капельно в течение 1 часа, но не ранее чем через 4 часа после приготовления раствора. Таким образом, согласно настоящему изобретению стабильность композиций должна сохраняться как минимум 4 часа после разведения физиологическим раствором и подтверждаться отсутствием преципитации или других изменений.

1. Оценка стабильности при разведении: степень перемешивания

В этом эксперименте композиции, приготовленные согласно Примерам настоящего изобретения, чью стабильность изучают при увеличенных сроках хранения, сравнивают с контрольным препаратом Таксотер^® (Сравнительный пример 2) и композициями, приготовленными в Сравнительных примерах 3-6. Результаты представлены в Таблице 6. Степень перемешивания, которую оценивают во время разведения, определяют по пятибалльной шкале: очень хорошо (5), хорошо (4), средне (3), плохо (2) и очень плохо (1). Градация "очень хорошо", "хорошо", "средне", "плохо" и "очень плохо" относится к периоду времени, в течение которого раствор полностью перемешивается с раствором для разведения, и соответственно, означает 30 секунд, 60 секунд, 2 минуты, 3-5 минут и, по крайней мере, 5 минут.

Таблица 6
Стабильность при разведении - степень перемешивания
	Степень перемешивания
Пример 1	5
Пример 3	4
Пример 5	5
Пример 6	5
Пример 7	5
Пример 8	5
Сравнительный пример 2+1-й раствор для разведения	2
Сравнительный пример 3	3
Сравнительный пример 4	3
Сравнительный пример 5	5
Сравнительный пример 6	5

Как показано в Таблице 6, композиции, приготовленные в Примерах настоящего изобретения, имеют прекрасные показатели, поскольку они полностью растворяются в течение 1 минуты, при этом не требуется дополнительного времени для удаления пузырьков, образующихся во время перемешивания, поскольку отсутствует 1-ый этап смешивания. Однако препарат Таксотер ^® (Сравнительный пример 2) имеет низкую степень перемешивания (2 степень) даже при первичном разведении раствором, кроме того, его необходимо оставить на 5 минут, чтобы разошлись пузырьки, образующиеся во время перемешивания. Кроме того, было показано, что композиции, приготовленные в Сравнительных примерах 3 и 4, имеют среднюю степень перемешивания (3 степень) при оценке стабильности при разведении и степени смешивания, это означает, что проблемы возникают во время перемешивания. В случае препаратов из Сравнительных примеров 5 и 6 было показано, что они имеют прекрасные показатели смешивания, однако имеют проблемы со стабильностью при разведении, что выявляется при измерении степени преципитации.

2. Оценка стабильности при разведении: степень преципитации

Также в этом эксперименте композиции, приготовленные согласно Примерам настоящего изобретения, чью стабильность изучают при увеличенных сроках хранения, сравнивают с контрольным препаратом Таксотер^® (Сравнительный пример 2) для оценки их стабильности. Результаты представлены в Таблице 7. Степень преципитации конечной композиции, предназначенной для введения пациенту, оценивают по шестибалльной шкале: очень высокая (5), высокая (4), средняя (3), низкая (2), очень низкая (1) и практически отсутствует (0), в зависимости от количества осадка.

Таблица 7
Стабильность при разведении - преципитация
	Время
Начало	1 час	2 часа	3 часа	6 часов
Пр.1 + жидкость для перфузии	0	0	0	0	1
Пр.2 + жидкость для перфузии	0	0	0	0	1
Пр.5 + жидкость для перфузии	0	0	0	0	1
Пр.6+жидкость для перфузии	0	0	0	0	1
Пр.7 + жидкость для перфузии	0	0	0	0	1
Пр.8 + жидкость для перфузии	0	0	0	0	1
Сравн. пример 2+1-й раствор для разведения + жидкость для перфузии	0	0	1	1	3
Сравн. пример 3 + жидкость для перфузии	0	0	0	1	2
Сравн. пример 4 + жидкость для перфузии	0	0	0	1	2
Сравн. пример 5 + жидкость для перфузии	0	0	0	1	2
Сравн. пример 6 + жидкость для перфузии	0	0	0	2	2

При оценке результатов, полученных при изучении степени преципитации с учетом времени, было показано, что коммерчески доступный препарат Таксотер ^® (конечная композиция для введения Сравнительного примера 2) начинает выпадать в осадок через 2 часа, при этом степень преципитации увеличивается с течением времени. Кроме того, было показано, что композиции, приготовленные в Сравнительных примерах, имеют недостатки при оценке степени преципитации и стабильности при разведении.

Как представлено в Таблице 7, конечная композиция, разведенная жидкостью для перфузии, приготовленная согласно Примерам настоящего изобретения, имеет прекрасную стабильность при разведении по сравнению с композициями, приготовленными в Сравнительных примерах 2-6.

3. Оценка стабильности при разведении: изменения концентрации

Также в этом эксперименте композиции, приготовленные согласно Примерам настоящего изобретения, чью стабильность изучают при увеличенных сроках хранения, сравнивают с контрольным препаратом Таксотер^® (Сравнительный пример 2) для оценки их стабильности. Результаты представлены в Таблице 8. Изменение концентрации соединений в течение времени определяют при помощи HPLC.

Таблица 8
Стабильность при разведении - концентрация
	Время
	Начало	1 час	2 часа	3 часа	6 часов
Пр.1 + жидкость для перфузии	100,0	100,6	99,2	99,2	97,3
Пр.3 + жидкость для перфузии	100,0	99,4	100,0	100,0	95,4
Пр.5 + жидкость для перфузии	100,0	100,0	100,2	100,3	97,2
Пр.6 + жидкость для перфузии	100,0	99,7	100,2	98,7	95,5
Пр.7 + жидкость для перфузии	100,0	99,8	98,1	99,8	96,6
Пр.8 + жидкость для перфузии	100,0	100,3	99,6	99,2	96,4
Сравн. пример 1 + 1-й раствор для разведения + жидкость для перфузии	100,0	100,1	94,8	92,5	87,5
Сравн. пример 3 + жидкость для перфузии	100,0	97,9	97,6	97,9	96,0
Сравн. пример 4 + жидкость для перфузии	100,0	101,6	99,0	97,8	93,2
Сравн. пример 5 + жидкость для перфузии	100,0	99,8	100,2	96,5	91,5
Сравн. Пример 6 + жидкость для перфузии	100,0	100,3	99,5	93,4	92,0

При изменении концентрации соединений через определенное время было установлено, что полученные показатели стабильности при разведении для композиций, приготовленных в Примерах, аналогичны показателям, полученным при изучении степени преципитации и представленным в Таблице 7.

Как показано в Таблице 8, в композициях, приготовленных в Сравнительных примерах, включая коммерчески доступный препарат Таксотер^® (конечная композиция для введения, Сравнительный пример 2), происходит уменьшение концентрации активных соединений до 98% через 4 часа и до 87%-96% через 6 часов. Также из Таблицы 8 видно, что конечные композиции, разведенные жидкостью для перфузии, приготовленные согласно Примерам настоящего изобретения, сохраняют свою стабильность без какого-либо значимого уменьшения концентрации активного вещества, поскольку через 6 часов хранения его концентрация составляет как минимум 95%.

Таким образом, все композиции, приготовленные в Примерах настоящего изобретения, имеют хорошие показатели стабильности и концентрации соединений с учетом всех сопутствующих соединений даже при разведении жидкостью для перфузии. С другой стороны, композиция, приготовленная в Сравнительном примере 2, имеет очень низкую стабильность при разведении, что выражается низкой степенью перемешивания, высокой степенью преципитации и изменением концентрации соединений с течением времени, в то время как в композициях, приготовленные в Сравнительных примерах 3 и 4, не происходит существенного уменьшения концентрации соединений при оценке стабильности, однако выявляются недостатки при оценке степени перемешивания и преципитации. Кроме того, для композиции, приготовленной в Сравнительном примере 2, при учете сопутствующих соединений, было показано уменьшение концентрации активного вещества и недостаточная стабильность, а при оценке других композиций, приготовленных в Сравнительных примерах 3-6, также было показано уменьшение концентрации активного вещества и нарушение стабильности с учетом концентрации сопутствующих соединений при сравнении с композициями, приготовленными в Примерах.

Итак, было показано, что при использовании коммерчески доступного препарата Таксотер^® (Сравнительный пример 2) требуется двухэтапное разведение - сначала первичное разведение раствором для разведения, затем вторичное разведение Таксотера^® 0,9% физиологическим раствором, а это длительный и неудобный процесс, в ходе которого может происходить уменьшение концентрации активного вещества вследствие ошибок при разведении, поэтому сложно ввести пациенту точную дозу соединения.

Однако было показано, что композиции, заявленные в соответствии с настоящим изобретением, удобны в использовании, поскольку требуют однократного разведения 0,9% физиологическим раствором и, следовательно, обеспечивают введение точной дозы доцетаксела, имеют прекрасную стабильность при разведении по сравнению с коммерчески доступным препаратом Таксотер^® (Сравнительный пример 2) и другими композициями, приготовленными в Сравнительных примерах настоящего изобретения.