способ профилактики и терапии андрологических болезней у быков-производителей

Формула изобретения

1. Способ профилактики и терапии баланопоститов и патологии придаточных половых желез у быков-производителей, характеризующийся тем, что им двукратно подкожно по 0,1-0,2 мл на 1 кг массы тела вводят фильтрат экстракта семенников, полученный следующим образом: семенники здоровых быков-производителей выдерживают в течение 6-7 суток при температуре 2-4°С, пропускают через мясорубку и гомогенизатор, гомогенат заливают физиологическим раствором в соотношении 1:5, помещают в холодильник для экстрагирования при температуре 2-4°С в течение 24 ч, после чего фильтруют через марлю, слегка отжимая, и дополнительно через фильтр, или фильтровальную бумагу, или многослойный фильтр фильтрат стабилизируют маннитом из расчета 2 г на 100 мл, расфасовывают и стерилизуют.

2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что для профилактики фильтрат экстракта вводят в два этапа:

первый - за 10 дней до случного периода;

второй - в первые 3 дня после случного периода.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а точнее к способу профилактики и терапии баланопоститов и воспалительных процессов придаточных половых желез везикулита, простатита и бульбо-уретрального аденита у быков-производителей.

Известно, что данная патология у быков-производителей имеет довольно широкое распространение среди андрологических заболеваний, особенно среди животных, используемых на вольной случке в стадах мясного направления.

Известно также, что наиболее опасным для возникновения и развития андрологической патологии у быков-производителей является случной период, а степень заболеваемости животных находится в прямой зависимости от уровня общей естественной резистентности организма и непосредственно от локального (местного) иммунитета (устойчивости) органов репродукции (Воронин И.И. «Болезни быков-производителей», Киев, «Урожай», 1979; Зверева Г.В., Олескив В.Н., Хомин С.П., Андросюк М.Г. «Справочник по ветеринарному акушерству», Киев, «Урожай», 1985; Миролюбов М.Г. «Импотенция самцов». Материалы Всероссийской научно-практической и учебно-методической конференции по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных, Воронеж, 1974; Зюбин И.Н. с соавт. «К вопросу изучения импотенции быков-производителей (второе сообщение)», «Актуальные вопросы ветеринарной медицины». Материалы международного ветеринарного конгресса, Новосибирск, Россия, 2005).

Для стимуляции естественной резистентности организма многие ученые рекомендуют использовать биогенные (биологически активные) препараты, среди которых наиболее эффективными являются тканевые (Фибс, экстракт алоэ, торфот, пелоиододистилят, взвесь и экстракт плаценты, гидролизин Л-103, агаро-тканевой препарат, гемолизат, ферментный гидролизин, плацента эмульгированная и денатурированная), изготовленные по методу академика Филатова В.П. из тканей животных и растений (Калашников И.А. «Тканевые препараты и их применение», М., 1991). Эти препараты обладают широким спектром биологического действия на организм, способствуют восстановлению физиологических процессов, повышают защитные силы организма.

Однако вышеуказанные препараты предназначены в основном для медицинских целей, промышленное производство их для ветеринарных нужд до настоящего времени не налажено. К недостаткам этих препаратов следует отнести отсутствие методов и способов их применения по прямому назначению - для профилактики и терапии андрологической патологии, что требует дополнительных финансовых средств на их разработку.

Известен также биогенный тканевой препарат ветеринарного назначения - биостимульгин (Инструкция по приготовлению и контролю биостимульгина, утверждена ГУВ МСХ СССР, 13.03.79). Этот препарат обладает общестимулирующим действием на организм животных, а в ряде случаев способствует приостановлению воспалительных процессов в репродуктивных органах животных. Однако у биостимульгина слабо выражена специфическая направленность с непосредственным влиянием на факторы локального иммунитета органов и тканей.

Кроме того, препарат не содержит мукополисахаридов, обладающих, как известно, бактерицидными, бактериостатическими, вирусингибирующими и вируснейтрализующими свойствами. К недостаткам данного препарата следует отнести низкую биологическую активность по сравнению с заявляемым препаратом, отдаленность лечебно-профилактического эффекта, а также ограниченность срока хранения и использования биостимульгина (не более 6 месяцев со дня изготовления), что с экономической точки зрения не выгодно.

Самым близким аналогом по механизму действия заявляемого изобретения является «Утеролин для профилактики и терапии симптоматического бесплодия коров», патент РФ № 2141832. Авторы Зюбин И.Н., Зюбина М.Ф., Черных В.Г., Самокрутова О.Н. (публикация 27 ноября 1999, БИ № 33). По указанному аналогу предложен тканевой препарат направленного действия - утеролин нативный, который способствует быстрому восстановлению нарушений в гуморальном и клеточном иммунитете, стимулирует механизм общей неспецифической иммунобиологической реактивности организма, а также естественные факторы локального иммунитета органов репродукции самок.

Однако по данному аналогу, который практически лишен недостатков, невозможно успешно проводить высокоэффективную профилактику и терапию андрологической патологии, так как, обладая избирательной специфичностью по отношению к факторам локального иммунитета половых органов самок, утеролин нативный не оказывает существенного влияния на показатели локальной защиты репродуктивных органов самцов.

Целью настоящего изобретения является изыскание новых более эффективных и доступных биологических препаратов, обладающих свойством стимулировать не только общую неспецифическую резистентность, но и активизировать естественные факторы локальной защиты репродуктивных органов у быков-производителей при профилактике и комплексной терапии андрологической патологии.

Указанная цель достигается при использовании нового тканевого препарата направленного действия - фильтрата экстракта семенников, изготовленного из тканей семенников быков-производителей (авторы Гомбоев Б.Н., Зюбин И.Н., Сиразиев Р.З., Матюхина Е.В.).

В основу технологии получения препарата взята методика академика Филатова В.П. с некоторыми дополнениями авторов (стабилизация и стерилизация препарата).

Изготовление препарата включает следующие этапы:

- заготовка и обработка тканевого сырья;

- консервация на холоде;

- гомогенизация (измельчение тканей);

- экстрагирование и фильтрация;

- стабилизация препарата и стерилизация его текучим паром;

- расфасовка и оценка биологической активности препарата.

Сырьем для изготовления фильтрата экстракта семенников служат семенники быков-производителей, не имеющие патологических изменений.

Обработка сырья заключается в следующем: семенники берут в хозяйствах при стерилизации у физиологически здоровых быков, помещают в чистую стеклянную банку или эмалированную емкость, плотно закрывают и обертывают пергаментной бумагой. Затем помещают в холодильник для консервации и созревания при температуре 2-4°С и выдерживают в течение 6-7 суток, после чего ткань пропускают через мясорубку и дополнительно через гомогенизатор.

Полученный гомогенат (тканевой фарш) взвешивают и заливают экстрагеном - физиологическим раствором в соотношении 1:5, тщательно перемешивают, выливают в стеклянную бутыль, укупоривают, обертывают пергаментной бумагой и помещают в холодильник для экстрагирования при температуре 2-4°С в течение 24 часов.

После 24-часового экстрагирования тканевую массу фильтруют через марлю, слегка отжимая, и дополнительно через фильтр, или фильтровальную бумагу, или многослойный фильтр, фильтрат стабилизируют маннитом из расчета 2 г на 100 мл препарата.

Стабилизированный таким образом препарат расфасовывают во флаконы, закрывают резиновыми пробками с алюминиевыми колпачками и подвергают дробной стерилизации текучим паром (в течение 3 дней ежедневно по 30 минут).

Методом хроматографии и при помощи аминокислотного анализатора в составе фильтрата экстракта семенников выявлены и идентифицированы все незаменимые аминокислоты, комплексы полипептидов, видоизмененные компоненты нуклеиновых и карбоновых кислот, обладающих высокой биологической активностью. В нем также выявлены углеводы, макро- и микроэлементы, в состав которых входят: кальций, фосфор, марганец, цинк, медь, никель, железо. Кроме того, препарат содержит витамины группы A, B₁, В₂, В₁₂. Поэтому в препарате действующим началом являются не только биогенные стимуляторы (вещества «сопротивления»), образующиеся в процессе ограниченного аутолиза при его изготовлении, но и белковый комплекс с макро- и микроэлементами и витаминами. Кроме того, фильтрат экстракта семенников содержится гормон тестостерон. Тестостерон - истинный андроген, способствует нормальному росту мужских половых клеток и развитию вторичных половых признаков. Содержание его в семенниках быка составляет в среднем 100 мг/кг. Тестостерон регулирует развитие и секретную функцию придаточных половых желез, эта зависимость особенно проявляется у быков в отношении пузырьковидных желез.

Препарат вводится подкожно в дозе 0,1-0,2 мл на 1 кг массы тела животного.

Данный препарат обладает следующими свойствами, необходимыми для достижения цели изобретения.

1. Длительной стабильностью при хранении в течение 2 лет (срок наблюдения) со 100%-ной биологической активностью.

2. Способствует быстрому восстановлению нарушений в гуморальном и клеточном иммунитете, стимулирует механизм общей неспецифической естественной резистентности организма; под влиянием фильтрата экстракта семенников в крови животных достоверно увеличивается содержание гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, повышается уровень бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови (см. примеры конкретного исполнения 1, 2).

3. Обладает выраженной специфической направленностью действия на репродуктивные (половые) органы, при этом активизируются факторы локальной их защиты к микробному фактору, что препятствует развитию воспалительного процесса в половых органах, а при его наличии способствует более быстрому разрешению.

4. Адекватно эффективен для профилактики и терапии в сочетании с этиотропными средствами при андрологической патологии у быков-производителей (см. примеры конкретного исполнения и акт производственной апробации).

Примеры конкретного влияния

Пример 1. Изучение влияния фильтрата экстракта семенников на показатели неспецифической резистентности организма быков-производителей

Исследования проведены на базе ГУП племзавода ОПХ «Ононское» Шилкинского района Забайкальского края.

В качестве модели в опыт было взято 30 клинически здоровых быков-производителей герефордской мясной породы в возрасте 3-5 лет, которых разделили на три равные группы по 10 голов в каждой.

Для установления фоновых показателей до введения препарата, а затем на 11-й день после введения препарата от всех быков-производителей была взята кровь для исследования на гематологические, биохимические и иммунологические показатели.

Первая (опытная) группа обработана фильтратом экстракта семенников. Препарат вводили подкожно в дозе 0,1-0,2 мл на 1 кг массы тела животного. Доза препарата взята из расчета дозировки, установленной для аналога. Вторая (опытная) группа животных была обработана тканевым препаратом - утеролином нативным. Животные третьей группы служили контролем, им вводили физиологический раствор в той же дозе, что и испытуемые препараты. Полученные материалы представлены в табл.1.

Таблица 1
Влияние фильтрата экстракта семенников на гематологические показатели крови быков-производителей (M±m; n=30)
Изучаемые показатели	Фоновые данные, до введения препаратов	После применения препаратов через 10 дней (М±m)	Контроль (М±m)
Фильтрат экстракта семенников	Утеролин нативный
Гемоглобин, г/л	122,4±3,95	138,6±2,8**	136,5±3,13***	122,0±2,30
Эритроциты, × 1012/л	5,8±0,15	6,4±0,28*	6,3±0,20*	5,6±0,26
Лейкоциты, × 109/л	7,1±0,34	8,3±0,29*	8,1±0,50	7,4±0,30
Палочкоядерные нейтрофилы, %	4,5±0,32	4,2±0,33	4,1±0,17	4,8±0,56
Сегментоядерные нейтрофилы, %	26,7±0,98	23,5±0,31**	25,4±0,95*	26,5±0,90
Эозинофилы, %	6,3±0,35	5,8±0,21	5,8±0,28	6,4±0,80
Моноциты, %	4,2±0,41	4,3±0,53	4,4±0,35	4,4±0,47
Лимфоциты, %	58,3±1,76	62,2±1,32*	60,3±2,52	57,9±0,77
Примечание: разница показателей достоверна - *P<0,05; **P<0,01; ***P<0,001.

Из данных таблицы 1 видно, что у быков-производителей контрольной группы через 10 дней показатели крови незначительно отличались от таковых до начала применения тканевых препаратов в опытных группах.

В 1-й опытной группе, где применяли фильтрат экстракта семенников, через 10 дней содержание гемоглобина увеличилось на 12% по отношению к контролю и на 11,7% к фоновым показателям, количество эритроцитов, лейкоцитов, лимфоцитов - на 12,5% и 9,4%, 10,8% и 14,5%, 6,9% и 6,2% соответственно.

Число палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов и эозинофилов уменьшилось соответственно на 12,5% и 6,6%; 12,0% и 11,6%; 9,4% и 7,9% по отношению к контролю и фоновым показателям. Количество моноцитов практически не изменилось.

Во второй опытной группе при использовании утеролина нативного гематологические показатели за этот промежуток не значительно увеличились по сравнению с первой опытной группой.

Животные 1-й опытной группы, обработанные фильтратом экстракта семенников, имели более высокие показатели естественной резистентности, чем быки-производители контрольной и животные 2-й опытной группы (табл.2)

Таблица 2
Иммунологические показатели сыворотки крови быков-производителей после применения фильтрата экстракта семенников (М±m; n=30)
Изучаемые показатели	Результаты исследований	Контроль (М±m)
Опытная-I	Опытная-II
Общий белок, г/л	82,5±1,55	81,8±0,33	75,4±0,28***
Альбумин, г/л	36,1±0,14	36,0±0,16	32,4±0,33***
-Глобулин, г/л -Глобулин, г/л -Глобулин, г/л	31,4±0,40	30,1±0,19**	29,8±0,10***
30,6±0,40	30,7±0,13*	24,6±0,30***
39,8±0,22	38,9±0,50	26,3±0,б0***
Бактерицидная активность, %	68,4±0,42	44,7±0,42***	40,9±0,60***
Фагоцитарная активность, %	62,8±0,60	54,1±0,44***	50,3±0,60***
Примечание: разница показателей достоверна - *Р<0,05; **Р<0,01; ***Р<0,001. Расчет достоверности проводился между I-опытной и контрольной; I-опытной и II-опытной группами.

У быков-производителей 1-й опытной группы после применения фильтрата экстракта семенников через 10 дней содержание общего белка в крови по отношению к контролю выше на 8,6%, а по сравнению со второй группой всего на 0,8%.

Показатели иммуноглобулинов в 1-й опытной группе по сравнению со 2-й опытной отличались также не значительно, а с контрольной имелись видимые изменения: содержание альбумина выше на 10,2%; -глобулин на 5,1%; -глобулин на 19,6%; -глобулин на 33,9%.

Как показывают данные таблицы, имеется незначительное увеличение показателей общего белка и иммуноглобулинов в 1-й опытной группе по сравнению со 2-й группой животных. Что же касается бактерицидной и фагоцитарной активности, то здесь показатели в 1-й опытной группе достоверно выше - на 34,6% и 13,9% (***Р<0,001), чем во 2-й опытной, и на 40,2% и 19,9% (***Р<0,001) по сравнению с контролем соответственно.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что предлагаемый тканевой препарат - фильтрат экстракта семенников - достоверно активизирует как гуморальные, так и клеточные факторы неспецифической резистентности организма животных.

Иммуномодулирующие и стимулирующие действия фильтрата экстракта семенников на клеточные и гуморальные механизмы защиты в организме достигают максимума через 10 дней после применения препарата.

Для повышения активности и профилактической эффективности фильтрат экстракта семенников необходимо вводить подкожно по 0,1-0,2 мл на 1 кг массы тела в два этапа:

- первый - за 10 дней до случного периода;

- второй - в первые 3 дня после случного периода.

Пример 2. Изучение влияния фильтрата экстракта семенников на факторы местной защиты репродуктивных органов быков-производителей

В связи с отсутствием фоновых показателей локальной защиты репродуктивных органов быков-производителей изучаемой зоны нами проведены опыты по изучению этих показателей у клинически здоровых и больных андрологической патологией животных.

С этой целью на базе ГУП племзавода ОПХ «Ононское» Шилкинского района Забайкальского края были проведены опыты.

Известно, что половые органы быков-производителей имеют ряд специфических и неспецифических факторов локального иммунитета. Основным же фактором локальной защиты от микроорганизмов является иммунореактивный фермент - лизоцим, который содержится в секретах придаточных половых железах и препуциальной слизи. Поэтому этот показатель и был взят нами в качестве критерия оценки состояния локальной резистентности органов репродукции у клинически здоровых животных и с наличием андрологической патологии.

В опыт было взято 15 быков-производителей герефордской мясной породы в возрасте 3-5 лет, которых разделили на три группы: первая 5 голов клинически здоровые, вторая группа с наличием острых баланопоститов и поражением придаточных половых желез и третья - быки с хроническими баланопоститами и поражением придаточных половых желез (везикулит, простатит, бульбо-уретральный аденит).

Препуциальную слизь получали по методике Михайлова Н.Н. (1985), помещали в стерильные пробирки и доставляли в отдел лабораторно-аналитических исследований ГНУ НИИВ Восточной Сибири Россельхозакадемии для исследования.

Титр лизоцима определяли методом диффузии в МПА (мясопептонный агар), по зоне задержки роста культуры тест-микроба.

Полученные результаты исследований представлены в табл.3.

У животных с наличием баланопоститов и поражением придаточных половых желез (вторая группа) при остром течении заболевания титр иммунореактивного фермента лизоцима резко снижен как по отношению к здоровым животным, так и больным с хронической формой заболевания (третья группа).

Таблица 3
Титр лизоцима препуциальной слизи здоровых и больных быков-производителей (M±m; n=15)
№ п/п	Состояние животных	Количество животных	Количество исследованных проб	Титр лизоцима (мм)
1	Здоровые быки	5	5	46,2±0,11
2	Животные с острыми баланопоститами	5	5	12,6±0,70***
3	Быки с хроническими баланопоститами	5	5	20,4±0,90***
Примечание: разница показателей достоверна - *P<0,05; **Р<0,01; ***Р<0,001.

Расчет достоверности проводился между здоровыми животными и животными с острыми баланопоститами, здоровыми быками и быками с хроническими баланопоститами.

Данные таблицы 3 показывают, что у клинически здоровых быков-производителей уровень иммунореактивного фермента лизоцима находится на достаточно высоком уровне, при этом зона задержки роста тест-микроба (ЗЗР) по группе составила 46,2±0,11.

Установленная нами связь между уровнем содержания иммунореактивного фермента у здоровых и больных быков-производителей дает дополнительные возможности в расшифровке дефицита фермента лизоцима как фактора неспецифической резистентности органов репродукции, играющей важную роль в возникновении и течении заболевания.

Параллельно вышеизложенному исследованию проведено изучение иммунобиологических показателей сыворотки крови от больных острой формой баланопоститов с поражением придаточных половых желез и клинически здоровых животных. Результаты этих исследований отражены в таблице 4.

Таблица 4
Иммунологические показатели сыворотки крови здоровых и больных баланопоститами быков-производителей (M±m; n=15)
Изучаемые показатели	Результаты исследований
здоровые	больные
Общий белок, г/л	72,2±0,11	60,2±0,18***
Альбумин, г/л	33,1±0,16	31,0±0,10***
-Глобулин, г/л -Глобулин, г/л -Глобулин, г/л	29,3±0,70	20,3±0,11***
26,7±0,13	21,8±0,21***
29,8±0,50	22,7±0,11***
Бактерицидная активность, %	40,6±0,23	20,9±0,60***
Фагоцитарная активность, %	53,3±0,44	33,0±0,60***
Примечание: разница показателей достоверна - *Р<0,05; **Р<0,01; ***Р<0,001.

Материалы таблицы 4 наглядно показывают серьезное нарушение в иммунобиологическом статусе больных быков-производителей баланопоститами с одновременным поражением придаточных половых желез. Эти нарушения прослеживаются по всем показателям, но особенно резкие различия отмечаются в содержании уровня иммунных белков гамма-глобулинов на 7,1 г/л достоверно (***Р<0,001); бактерицидной и фагоцитарной активности соответственно на 19,7% и 20,3% (***Р<0,001).

Эти данные были использованы нами в дальнейшей работе в качестве критерия оценки фоновых показателей.

Изучение влияния фильтрата экстракта семенников на основные показатели локального иммунитета репродуктивных органов проведено на трех группах быков-производителей по 5 голов в каждой после случного периода. Перед формированием групп все животные подвержены диспансерному обследованию.

Первая опытная группа быков-производителей была обработана фильтратом экстракта семенников двукратно, с интервалом 2 дня, подкожно, в дозе 0,1 мл на 1 кг живой массы. Вторая (опытная) группа быков-производителей обрабатывалась аналогом утеролином нативным, в той же дозе, двукратно, с интервалом 2 дня, что и 1-я опытная группа. Третья группа не обрабатывалась.

До и после введения препарата от животных всех групп была взята препуциальная слизь и подвергнута исследованию на основной показатель резистентности репродуктивных органов лизоцим. Результаты исследований приведены в табл.5.

Таблица 5
Сравнительные показатели локальной защиты репродуктивных органов у быков-производителей после обработки тканевым препаратом - фильтрат экстракта семенников (M±m; n=15)
Изучаемые показатели	Группа животных
1-я опытная	2-я опытная	контрольная
Активность иммунореактивного фермента лизоцима (ЗЗР в мм)	54,6±0,60	42,4±0,24***	37,9±1,2***
Примечание: разница показателей достоверна - *Р<0,05; **Р<0,01; ***Р<0,001. Расчет достоверности проводился между I-опытной и контрольной; I-опытной и II-опытной группами.

Из данных табл.5 видно, что основные показатели местной защиты репродуктивных органов быков-производителей опытной группы после обработки фильтратом экстракта семенников достоверно отличаются от показателей контрольной и 2-й опытной групп животных.

Так, активность главного критерия локальной защиты лизоцима у быков-производителей 1-й опытной группы составила 54,6±0,60 мм против 37,9±1,2 мм в контроле и 42,4±0,24 мм 2-й опытной группы, что свидетельствует о снижении неспецифической резистентности этих органов.

При заключительном диспансерном обследовании животных в конце опыта у 1-го быка-производителя контрольной группы был выявлен острый катаральный баланопостит.

Таким образом, разработанная схема поэтапного применения фильтрата экстракта семенников обеспечивает высокий уровень основных показателей локальной защиты тканей репродуктивных органов и повышает сопротивляемость их к микробному фактору, что позволяет рекомендовать эту схему для профилактики андрологической патологии.

По механизму действия фильтрат экстракта семенников обладает выраженным направленным действием, так как органы, из которых он готовится (семенники), имеют непосредственное отношение к функции репродукции, обмену веществ и регуляторным механизмам.

По механизму действия тестикулин нативный является естественным стимулятором и регулятором защитных сил организма и тех органов, из которых он изготавливается.

С экологической точки зрения это биологически чистый, абсолютно безвредный нативный препарат, не оказывает побочного действия на организм животных, не обладает анафилактогенными свойствами, гистоминоподобным эффектом и кумуляцией.

Экономическая эффективность фильтрата экстракта семенников представлена в примерах конкретного выполнения.