производные нафтиридина в качестве модуляторов калиевых каналов

Формула изобретения

1. Соединение формулы I



где W и Z представляют собой СН; Y представляет собой СН₂;

где R₁ и R₂ независимо представляют собой H, галоген, CH₂F, CHF ₂, CF₃, CF₂CF₃, или C ₁-С₆алкил;

R' представляет собой H;

R₃ и R₄ независимо представляют собой H, или C₁-С₃алкил, все указанные C₁-С₃алкильные группы и указанные C ₁-С₆алкильные группы необязательно замещены одной или двумя группами, независимо выбранными из ОН, галогена, C₁-С₃алкила, ОС₁-С₃ алкила или трифторметила;

q=1 или 0;

R₅ представляет собой C₁-С₆алкил;

и его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение по п.1, которое является соединением формулы IA

3. Соединение по п.1, где R₃ и R ₄ независимо представляют собой метил.

4. Соединение по п.1, где R₃ и R₄, оба, представляют собой метил и R₅ представляет собой неопентил.

5. Соединение по п.4, где R₁ представляет собой F или CF₃ и R₂ представляет собой Н или F.

6. Соединение, выбранное из группы, состоящей из:





и

7. Композиция, обладающая модулирующей активностью в отношении калиевых каналов, которая содержит фармацевтически приемлемый носитель и, по меньшей мере, один из следующих компонентов: i) фармацевтически эффективное количество соединения формулы I; и ii) фармацевтически приемлемую соль соединения формулы I.

8. Композиция по п.7, в которой фармацевтически приемлемым носителем является микрокристаллическая целлюлоза.

9. Способ профилактики или лечения заболевания или нарушения, на которое воздействуют активацией потенциально-открываемых калиевых каналов, содержащий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы I по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли.

10. Способ по п.9, где заболеванием или нарушением является судорожный приступ.

11. Способ по п.10, где соединением формулы I является соединение формулы IA.

12. Способ по п.9, где соединение формулы I выбрано из группы, состоящей из:





и

13. Способ по любому из пп.10-12, где терапевтически эффективное количество составляет от приблизительно 300 мг до приблизительно 2000 мг в день.

14. Способ повышения вероятности открытия каналов KCNQ2/3 у млекопитающего, содержащий введение вызывающего повышение активности каналов KCNQ2/3 у млекопитающего количества соединения формулы I или его соли.

15. Способ по п.14, где соединением формулы I является соединение формулы IA.

16. Способ увеличения нейронных М-потоков у млекопитающего, содержащий введение указанному млекопитающему эффективного количества соединения формулы IA или его соли.

17. Таблетка для перорального дозированного введения, обладающая модулирующей активностью в отношении калиевых каналов, которая содержит фармацевтически приемлемый носитель и от приблизительно 100 до приблизительно 700 мг соединения формулы IA или его соли.

18. Таблетка по п.17, дополнительно содержащая смазывающее вещество.

19. Таблетка по п.17, дополнительно содержащая дезинтегрирующий агент.

20. Таблетка по п.17, где таблеткой является таблетка, принимаемая с прожевыванием.

21. Фармацевтический сироп для педиатрического применения, обладающий модулирующей активностью в отношении калиевых каналов, который содержит на дозу от приблизительно 100 до приблизительно 700 мг соединения формулы IA или его соли.

Описание изобретения к патенту

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к новым соединениям, которые модулируют калиевые каналы. Соединения являются применимыми для лечения и профилактики заболеваний и нарушений, на которые влияют активности каналов ионов калия. Одним таким состоянием являются судорожные приступы.

Уровень техники

Обнаружено, что ретигабин (этиловый эфир N-[2-амино-4-(4-фторбензиламино)фенил]карбаминовой кислоты) (патент Соединенных Штатов № 5384330) является эффективным при лечении нарушений типа судорожных приступов у детей. Bialer, M. et al., Epilepsy Research 1999, 34, 1-41. Обнаружено также, что ретигабин является применимым при лечении боли, включая невропатическую боль. Blackburn-Munro and Jensen, Eur. J. Pharmacol. 2003, 460, 109-116; Wickenden, A.D. et al., Expert Opin. Ther. Patents 2004 14(4).

Форма эпилепсии, известная как "незлокачественные наследственные неонатальные судороги", связана с мутациями в каналах KCNQ 2/3. Biervert, С. et al., Science 1998, 27, 403-06; Singh, N.A. et al., Nat. Genet. 1998, 18, 25-29; Charlier, С. et al., Nat. Genet. 1998, 18, 53-55, Rogawski, Trends in Neurosciences 2000, 23, 393-398. Последующие исследования установили, что основным местом действия ретигабина является канал KCNQ 2/3. Wickenden, A.D. et al., Mol. Pharmacol. 2000, 58, 591-600; Main, M.J. et al., Mol. Pharmcol. 2000, 58, 253-62. Показано, что ретигабин повышает проводимость каналов при мембранном потенциале покоя и связывает ворота активации канала KCNQ 2/3. Wuttke, T.V. et al., Mol. Pharmacol. 2005, 67, 1009-1017. С увеличением усовершенствований в исследованиях в данной области было обнаружено, что ретигабин увеличивает нейронные М-потоки и повышает вероятность открытия каналов KCNQ 2/3. Delmas, P. and Brown, D.A. Nat. Revs Neurosci., vol. 6, 2005, 850-62; Tatulian, L. and Brown, D.A., J. Physiol., (2003) 549, 57-63.

Признание ретигабина в качестве модулятора калиевых каналов вызвало многочисленные поиски других модуляторов калиевых каналов среди соединений с различными структурными характеристиками, общими с ретигабином.

Раскрытие изобретения

В одном варианте осуществления данное изобретение предлагает соединение формулы I

где W и Z независимо представляют собой СН или N; Y представляет собой CH₂, О или NH;

где R₁ и R₂ независимо представляют собой Н, галоген, CH₂F, CHF₂, CF₃, CF₂CF₃, C₁-C₆алкил, С(=O)C₁-C₆алкил, СН₂С(=O)C ₁-C₆алкил, NH-C₁-C₆алкил, NHC(=O)C₁-C₆алкил, С(=O)N(СН₃ )₂, C(=O)N(Et)₂, С(=O)NH-C₁-C ₆алкил, С(=O)OC₁-C₆алкил, OC(=O)C ₁-C₆алкил, OC₁-C₆алкил, SC₁-C₆алкил, C₃-C₆ циклоалкил, (СН₂)_mC₃-C₆ циклоалкил, C₃-C₆циклоалкенил, (СН ₂)_mC₃-C₆циклоалкенил, C₂-C₆алкенил, C₂-C₆ алкинил, Ar₁, (CH₂)_mAr₁ , фенил, пиридил, пирролил, (CH₂)_mимидазолил, (СН₂)_mпиразил, фурил, тиенил, (СН₂ )_mоксазолил, (СН₂)_mизоксазолил, (СН₂)_mтиазолил, (СН₂)_m изотиазолил, (СН₂)_mфенил, (СН₂ )_mпирролил, (СН₂)_mпиридил или (СН₂)_mпиримидил, где указанные циклоалкильные и циклоалкенильные группы необязательно содержат один или два гетероатома, независимо выбранные из О, N и S, и алкильные, циклоалкильные, циклоалкенильные, алкенильные, алкинильные, имидазолильные, пиразильные, оксазолильные, изоксазолильные, тиазолильные, изотиазолильные, фенильные, пирролильные, пиридильные или пиримидильные группы необязательно замещены одной или двумя группами, независимо выбранными из ОН, галогена, циано, метила, этила или трифторметила, где m равно нулю, 1 или 2; или R₁ и R₂ вместе с атомами углерода кольца, к которым они присоединены, образуют 5- или 6-членное конденсированное кольцо, которое может быть насыщенным, ненасыщенным или ароматическим, которое необязательно содержит один или два гетероатома, независимо выбранные из О, N и S, и которое необязательно замещено галогеном, CF₃ или C₁-C₃алкилом; R' представляет собой Н, галоген, CF₃ или C₁-C₃ алкил; R₃ и R₄ независимо представляют собой Н, NH₂, (C₁-C₃алкил)NH, CN, галоген, CF₃, OCF₃, OC₁-C ₃алкил или C₁-C₃алкил, все указанные C₁-C₃алкильные группы и указанные C ₁-C₆алкильные группы необязательно замещены одной или двумя группами, независимо выбранными из ОН, галогена, C₁-C₃алкила, OC₁-C₃ алкила или трифторметила; q=1 или 0; R₅ представляет собой C₁-C₆алкил, (CHR₆) _wC₃-С₆циклоалкил, (CHR₆ )_wCH₂C₃-C₆циклоалкил, CH₂(CHR₆)_wC₃-C ₆циклоалкил, CR₆=СН-С₃-С₆ циклоалкил, СН=CR₆-C₃-C₆циклоалкил, (CHR₆)_wC₅-C₆циклоалкенил, CH₂(CHR₆)_wC₅-С ₆циклоалкенил, C₂-C₆алкенил, C ₂-C₆алкинил, Ar₁, (CHR₆ )_wAr₁, СН₂(CHR₆) _wAr₁ или (CHR₆)_wCH ₂Ar₁, где w=0-3, Ar₁ представляет собой фенил, пиридил, фурил, тиенил, пирролил, оксазолил, тиазолил или имидазолил, где C₁-C₆алкильная группа необязательно замещена гидрокси, метокси, метилтио или галогеном и где циклоалкильная и циклоалкенильная группы необязательно замещены одной или двумя группами, независимо выбранными из ОН, галогена, циано, метила, этила или трифторметила; R₆ представляет собой водород, метил, галоген или метокси, и его фармацевтически приемлемые соли. Такие соединения являются модуляторами калиевых каналов.

В другом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает композицию, содержащую фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель и по меньшей мере один из следующих компонентов: i) фармацевтически эффективное количество соединения формулы I; ii) его фармацевтически приемлемой соли; iii) его фармацевтически приемлемого сложного эфира и iv) его фармацевтически приемлемого сольвата.

В другом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает способ лечения или профилактики заболевания или нарушения, на которое воздействуют увеличением нейронных M-потоков, содержащий введение пациенту, нуждающемуся в этом, одного или нескольких из следующих компонентов: i) фармацевтически эффективного количества соединения формулы I; ii) его фармацевтически приемлемой соли; iii) его фармацевтически приемлемого сложного эфира и iv) его фармацевтически приемлемого сольвата.

Еще в одном варианте осуществления данное изобретение предоставляет способ профилактики или лечения заболевания или нарушения, на которое воздействуют активацией потенциально-открываемых калиевых каналов, содержащий введение пациенту, нуждающемуся в этом, одного или нескольких из следующих компонентов: i) фармацевтически эффективного количества соединения формулы I; ii) его фармацевтически приемлемой соли; iii) его фармацевтически приемлемого сложного эфира и iv) его фармацевтически приемлемого сольвата.

Еще в одном варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает способ лечения или профилактики судорожного приступа у человека, содержащий введение пациенту, который поражен или имеет потенциал поражения таким нарушением, одного или нескольких из следующих компонентов: i) фармацевтически эффективного количества соединения формулы I; ii) его фармацевтически приемлемой соли; iii) его фармацевтически приемлемого сложного эфира и iv) его фармацевтически приемлемого сольвата.

В другом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает фармацевтический препарат для перорального введения, содержащий терапевтически эффективное количество соединения формулы I и либо подходящий таблетирующий агент, либо подходящий сироп для педиатрического применения.

В другом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает таблетку для перорального введения, содержащую терапевтически эффективное количество соединения формулы I и подходящий таблетирующий агент.

В другом подходящем варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает сироп для педиатрического применения, содержащий раствор, или дисперсию, или суспензию соединения формулы I и подходящий сироп.

В другом варианте осуществления данное изобретение рассматривает фармацевтический препарат для введения животным, в том числе животным-компаньонам (собакам и кошкам) и домашнему скоту, содержащий терапевтически эффективное количество соединения формулы I и ветеринарно приемлемый носитель.

В другом варианте осуществления данное изобретение рассматривает способ профилактики или лечения заболевания или нарушения, на которое воздействуют активацией потенциально-открываемых калиевых каналов, содержащий введение животному, которое поражено или имеет потенциал поражения таким нарушением, одного или нескольких из следующих компонентов: i) фармацевтически эффективного количества соединения формулы I; ii) его фармацевтически приемлемой соли; iii) его фармацевтически приемлемого сложного эфира и iv) его фармацевтически приемлемого сольвата.

Данное изобретение включает в себя все таутомеры, соли и стереоизомерные формы соединений формулы I. Данное изобретение включает в себя также все соединения данного изобретения, у которых один или несколько атомов заменены их радиоактивными изотопами.

В более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет соединение формулы IA

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет соединение формулы IB

Еще в одном более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет соединение формулы IA, в которой W и Z, оба, представляют собой N.

В другом еще более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет соединение формулы IA, в которой W представляет собой N и Z представляет собой СН.

В другом еще более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет соединение формулы IA, в которой W представляет собой СН и Z представляет собой N.

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет соединение формулы IA, в которой R' представляет собой Н, галоген, CF₃ или метил.

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет соединение формулы IA, в которой W и Z, оба, представляют собой N и R' представляет собой Н, F или метил.

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет соединение формулы IB, в которой W и Z, оба, представляют собой N.

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет соединение формулы IB, в которой W представляет собой N и Z представляет собой СН.

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет соединение формулы IB, в которой W представляет собой СН и Z представляет собой N.

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет соединение формулы IB, в которой R' представляет собой Н, галоген, CF₃ или метил.

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет соединение формулы IB, в которой W и Z, оба, представляют собой N и R' представляет собой Н, F или метил.

В более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает соединение формулы IA, в которой R₅ представляет собой C₁-C₆алкил, (CHR₆)_w C₃-C₆циклоалкил, (CHR₆) _wCH₂C₃-C₆циклоалкил или СН₂(CHR₆)_wC₃-C ₆циклоалкил.

В более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает соединение формулы IB, в которой R₅ представляет собой C₁-С₆алкил, (CHR₆)_w C₃-C₆циклоалкил, (CHR₆) _wCH₂C₃-C₆циклоалкил или СН₂(CHR₆)_wC₃-C ₆циклоалкил.

В еще более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает соединение формулы IA, в которой R₅ представляет собой C₁-C₆алкил, (CHR₆)_w C3-C₆циклоалкил, (CHR₆)_wCH ₂C₃-C₆циклоалкил или СН₂ (CHR₆)_wC₃-C₆циклоалкил и R₁ представляет собой Н, CF₃ или галоген.

В еще более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает соединение формулы IA, в которой R₅ представляет собой C ₁-С₆алкил, замещенный метокси, метилтио или галогеном; R' представляет собой метил или Н и R₁ представляет собой Н, CF₃ или галоген.

В другом подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает соединение формулы I, в которой R₅ представляет собой CR₆=СН-С₃ -С₆циклоалкил, СН=CR₆-C₃-С ₆циклоалкил, (CHR₆)_wC₅ -С₆циклоалкенил, CH₂(CHR₆) _wC₅-С₆циклоалкенил, C₂ -C₆алкенил или C₂-C₆алкинил; R' представляет собой метил или Н и R₁ представляет собой Н, CF₃ или галоген.

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает соединение формулы IA, в которой R' представляет собой метил или Н; R₁ представляет собой Н, CF₃ или галоген; R₃ и R₄ представляют собой метил, аминометил или хлор и R₅ представляет собой Ar₁, (CHR₆)_w Ar₁, CH₂(CHR₆)_wAr ₁ или (CHR₆)_wCH₂Ar ₁.

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает соединение формулы IA, в которой R' представляет собой метил или Н; R₁ представляет собой Н, CF₃ или галоген; R₃ и R₄ представляют собой метил и R₅ представляет собой C₁-С₆ алкил, (CHR_6)wC₃-С₆циклоалкил, (CHR₆)CH₂C₃-C₆циклоалкил или СН₂(CHR₆)C₃-C₆ циклоалкил.

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает соединение либо формулы IA, либо формулы IB, в которой R ₂ представляет собой Н или F; R' представляет собой Н или галоген; R₃ и R₄ представляют собой метил и R₅ представляет собой C₁-С ₆алкил, (CHR₆)_wC₃-C ₆циклоалкил, (CHR₆)_wCH₂ C₃-C₆циклоалкил или СН₂(CHR ₆)_wC₃-C₆циклоалкил.

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает соединение формулы IA или формулы IB, в которой R₅ представляет собой CHZCHZ-циклопентил или одну из указанных ниже групп:

В другом более конкретном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает соединение формулы IA или IB, в которой R₁ представляет собой галоген или галогенметил; R₂ представляет собой Н или галоген и R₅ представляет собой одну из указанных выше групп.

В другом более определенном подродовом варианте осуществления данное изобретение предоставляет или рассматривает соединение формулы IA или IB, в которой R₁ представляет собой фенил, пиридил, пирролил, (CH₂)_mимидазолил, (CH₂)_mпиразил, (CH₂)_m оксазолил, (CH₂)_mизоксазолил, (CH₂ )_mтиазолил, (CH₂)_mизотиазолил, (CH₂)_mфенил, (CH₂)_m пирролил, (CH₂)_mпиридил или (CH₂ )_mпиримидил и R₅ представляет собой C ₅-С₆алкил или СН₂-С₃-С ₆циклоалкил.

Примеры, приведенные ниже, предоставлены для того, чтобы показать - но никоим образом не ограничить - различные возможные варианты осуществления данного изобретения.

Осуществление изобретения

При разработке соединений с терапевтическими свойствами, превосходящими терапевтические свойства ретигабина

авторы настоящего изобретения обнаружили, что пара-N-1,2,3,4-тетрагидроизохинолиланилиды и карбаматы формулы I

обладают неожиданной и необычной активностью по отношению к калиевым каналам, доказываемой их высокими активностями, измеряемыми в описанном ниже анализе оттока рубидия.

Применяемый в контексте термин "модулятор калиевых каналов" относится к соединению, способному вызывать увеличение потоков калиевых каналов. Он относится также к соединению, способному повышать вероятность открытия канала KCNQ 2/3. Для предварительного испытания соединений на их способность модулировать калиевые каналы авторы изобретения применяли описанный ниже тест на отток ионов рубидия.

Рассматриваемые данным изобретением соединения формулы I разработаны для перорального или внутривенного введения дозы до приблизительно 1200 мг в день. Так, в данном изобретении рассматриваются растворы и суспензии соединений формулы I, приготовленных для внутривенного введения. Аналогично этому, среди многих других примеров рассматриваются также растворы и суспензии, содержащие помимо соединений формулы I сироп, такой как сорбита или пропиленгликоля, подходящие для перорального введения больному ребенку. Кроме того, рассматриваются также как таблетки, принимаемые с пережевыванием, так и таблетки, принимаемые без пережевывания, содержащие соединения формулы I вместе с фармацевтически приемлемыми таблетирующими агентами и другими фармацевтически приемлемыми носителями и эксципиентами. Применяемый в контексте термин фармацевтически приемлемый носитель содержит такие эксципиенты, связывающие вещества, смазывающие вещества, таблетирующие агенты и дезинтегрирующие агенты, которые обычно применяют в области изготовления фармацевтических препаратов. Примеры таких агентов включают в себя - но не ограничиваются перечисленным - микрокристаллическую целлюлозу, лактозу, крахмал и дикальцийфосфат и провидон. Кроме того, рассматриваются дезинтегрирующие агенты, такие как натриевая соль гликолята крахмала, смазывающие вещества, такие как стеариновая кислота и SiO₂, и средства повышения растворимости, такие как циклодекстрины, среди многих других примеров для каждой группы. Такие вещества и способы их применения хорошо известны в фармацевтической области. Дополнительные примеры предоставлены в Kibbe, Handbook of Pharmaceutical Excipients, London, Pharmaceutical Press, 2000.

В изобретении рассматриваются также фармацевтические препараты, включающие в себя вакцинные препараты для введения животным, в том числе животным-компаньонам (собакам и кошкам) и домашнему скоту, такому как коровы, свиньи, овцы и лошади, содержащие терапевтически эффективное количество соединения формулы I и ветеринарно приемлемый носитель. Однако любое животное, которое восприимчиво к судорожным приступам, включено в объем данного изобретения. Типичным способом введения может быть внутримышечное, пероральное введение или подкожная инъекция от приблизительно 0,05 мл до 25 мл вакцинного препарата. Однако, как указано выше, соединения формулы I разработаны для введения дозы до приблизительно 1200 мг в день. Вакцинацию можно выполнить одной инокуляцией или посредством нескольких инокуляций. Рассматриваемые вакцинные композиции, применяемые в способах настоящего изобретения, могут включать в себя один или несколько ветеринарно приемлемых носителей. "Ветеринарно приемлемый носитель" включает в себя любой и все растворители, дисперсные среды, оболочки, адъюванты, стабилизирующие агенты, разбавители, эксципиенты, консерванты, изотонические агенты. Разбавители могут включать в себя воду, солевой раствор, декстрозу, этанол, глицерин и тому подобное. Изотонические агенты могут включать в себя, например, хлорид натрия, декстрозу, маннит, сорбит и лактозу. Адъюванты, рассматриваемые настоящим изобретением, включают в себя сапонин, холестерин, гель гидроксида алюминия, полный и неполный адъюванты Фрейнда. В настоящем изобретении рассматриваются также вакцинные препараты, содержащие от приблизительно 1 мг/мл до приблизительно 2000 мг адъюванта на дозу вакцинной композиции.

Общие схемы

Часть I. Получение соединений формулы V показано на схеме 1.

Часть II. Получение соединений формулы VII показано на схеме 2.

DMF - ДМФА

Часть III. Получение соединений формулы IX показано на схеме 3.

base - основание

Часть IV. Получение соединений формулы Х показано на схеме 4 Схема 4:

Lawesson's reagent - реагент Лоуссона

Часть V. Получение соединений формулы XI показано на схеме 5.

Lawesson's reagent - реагент Лоуссона

Часть VI. Получение соединений формулы XIII показано на схеме 6.

Получение конкретных соединений

Синтез N-[2,6-диметил-4-(2-трифторметил-7,8-дигидро-5Н-[1,6]нафтиридин-6-ил)фенил]-3,3-диметилбутирамида (11)

1-Бензил-4-пирролидин-1-ил-1,2,3,6-тетрагидропиридин (3)

Раствор, содержащий N-бензилпиперидон 1 (5 г, 26,4 ммоль) и пирролидин 2 (2,82 г, 39,6 ммоль) в толуоле (60 мл), нагревали для кипячения с обратным холодильником с азеотропным удалением воды. Реакционную смесь затем охлаждали и концентрировали при пониженном давлении. Образовавшееся масло растворяли в эфире, сушили над сульфатом магния и концентрировали при пониженном давлении. Сырой енамин 3 применяли в следующей стадии.

6-Бензил-2-трифторметил-5,6,7,8-тетрагидро-[1,6]нафтиридин (5)

К раствору сырого енамина 3 (500 мг, 2,1 ммоль) в диоксане (5 мл) добавляли соединение 4 (0,3 мл, 2,1 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Затем добавляли ацетат аммония (20 мг) и смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 18 час. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры, подкисляли 10% HCl, экстрагировали дихлорметаном и концентрировали. Очистка препаративной тонкослойной хроматографией (5% раствор DCM/MeOH) давала соединение 5.

2-Трифторметил-5,6,7,8-тетрагидро-[1,6]нафтиридин (7)

К раствору 5 (500 мг, 1,7 ммоль) в дихлорметане (8 мл) добавляли соединение 6, 3-хлорпропионилхлорид (0,22 мл, 2,1 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 18 час. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали. Образовавшийся остаток растворяли в метаноле (16 мл) и перемешивали при 40°С в течение 3 час. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали.

N-(4-Бром-2,6-диметилфенил)-3,3-диметилбутирамид (8)

3,3-Диметилбутаноилхлорид (3,37 г, 3,5 мл, 25 ммоль) и триэтиламин (2,53 г, 3,5 мл, 25 ммоль) добавляли к раствору 4-бром-2-хлор-6-(трифторметил)анилина (5,0 г, 25 ммоль) в ацетонитриле (30 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. К смеси добавляли воду и образованный осадок собирали, получая при этом указанное в заголовке соединение в виде порошка (7,46 г, выход 100%).

N-[2,6-Диметил-4-(2-трифторметил-7,8-дигидро-5Н-[1,6]нафтиридин-6-ил)фенил]-3,3-диметилбутирамид (11)

Бис(дибензилиденацетон)палладий (15 мг, 0,026 ммоль) и (2'-дициклогексилфосфанилбифенил-2-ил)диметиламин (40 мг, 0,1 ммоль) добавляли к сухому толуолу (5 мл, продут аргоном в течение 30 мин) и смесь перемешивали в течение дополнительных 30 минут при комнатной температуре в атмосфере аргона. Затем добавляли трет-бутоксид калия (188 г, 71 ммоль), соединение 7 (191 мг, 0,8 ммоль) и соединение 8 (200 мг, 0,67 ммоль); реакционную смесь перемешивали при 80°С на протяжении ночи. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через подушку силикагеля и очищали препаративной ТСХ (5% раствор DCM/MeOH), получая при этом соединение 11.

N-(2,6-диметил-4-(3-(трифторметил)-7,8-дигидро-1,6-нафтиридин-6(5Н)-ил)фенил)-3,3-диметилбутанамид

Бис(дибензилидинацетон)палладий (4 мг, 0.069 ммоль) и (2'-дициклогексилфосфанилбифенил-2-ил)диметиламин (7 мг, 0.015 ммоль) добавляли к сухому толуолу (1 мл, продут аргоном) и перемешивали в течение 15 минут в атмосфере аргона. Затем добавляли трет-бутоксид калия (36 мг, 0,32 ммоль), N-(4-бром-2,6-диметилфенил)-3,3-диметилбутанамид (52 мг, 0,17 ммоль) и 3-(трифторметил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,6-нафтиридин (WO/04069162) (40 мг, 0,15 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 80°С на протяжении ночи. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры, концентрировали и очищали биотагом (75% смесь этилацетат:гексаны), получая при этом требуемое соединение в виде твердого вещества. ¹Н ЯМР (ДМСО-d₆ , 400 МГц) 1,05 (с, 9Н), 2,11 (с, 6Н), 2,17 (с, 2Н), 3,08 (т, J=5,6 Гц, 2Н), 3,64 (т, J=5,9 Гц, 2Н), 4,48 (с, 2Н), 6,76 (с, 2Н), 8,08 (с, 1Н), 8,75 (с, 1Н), 8,90 (с 1Н).

Синтез других замещенных тетрагидро-1,6-нафтиридинов

Замещения в положениях 2 и 3 тетрагидро-1,6-нафтиридинов можно выполнить конденсацией 1-бензил-4-пиперидинона с соответствующими 3-аминоенонами с последующим дебензилированием (схема II).

Алкилирование в 5- или 8-положении тетрагидро-1,6-нафтиридинов можно выполнить химической модификацией производных пиридина (см. схему III).

Биологические результаты

Соединения формулы данного изобретения оценивали в качестве модуляторов калиевых каналов измерением высвобождения иона рубидия следующим анализом.

Способы: клетки PC-12 выращивали при 37°С и 5% CO₂ в среде DMEM/F12, дополненной 10% лошадиной сыворотки, 5% фетальной телячьей сыворотки, 2 мМ глутамина, 100 Ед./мл пенициллина, 100 Ед./мл стрептомицина. Их засевали в покрытых D-лизином 96-луночных микропланшетах для клеточных культур при плотности 40000 клеток на лунку и дифференцировали 100 нг/мл NGF-7 в течение 2-5 дней. Для анализа среду аспирировали и клетки промывали один раз 0,2 мл буфера для промывания (25 нМ HEPES, рН 7,4, 150 мМ NaCl, 1 мМ MgCl₂, 0,8 мМ NaH₂PO₄, 2 мМ CaCl₂). Клетки затем нагружали 0,2 мл буфера для нагрузки Rb⁺ (буфер для промывания плюс 5,4 мМ RbCl₂, 5 мМ глюкоза) и инкубировали при 37°С в течение 2 час. Прикрепленные клетки быстро промывали три раза буфером (такой же буфер, как для нагрузки Rb⁺, но содержащий 5,4 мМ KCl вместо RbCl) для удаления внеклеточного Rb⁺. Сразу после промывания к клеткам добавляли 0,2 мл буфера деполяризации (буфер для промывания плюс 15 мМ KCl) без добавления к клеткам соединений или с добавлением соединений для активации оттока каналов калиевых ионов. После инкубации в течение 10 мин при комнатной температуре супернатант осторожно удаляли и собирали. Клетки лизировали добавлением 0,2 мл буфера для лизиса (буфер для деполяризации плюс 0,1% тритона X-100) и также собирали лизаты клеток. Если собранные образцы сразу не анализировали на содержание Rb⁺ атомной абсорбционной спектроскопией (см. ниже), их хранили при 4°С без каких-либо отрицательных влияний на последующий анализ Rb⁺.

Концентрацию Rb⁺ в супернатантах (Rb ⁺ _sup) и лизатах клеток (Rb⁺ _Lys) количественно определяли с применением плазменного атомного абсорбционного спектрометра ICR8000 (Aurora Biomed. Inc., Vancouver, B.C.) в условиях, указанных изготовителем. Образцы по 0,05 мл из титрационных микропланшетов автоматически обрабатывали разведением равным объемом буфера для анализа образца Rb⁺ и впрыскивали в пламя воздух-ацетилен. Количество Rb⁺ в образце измеряли поглощением при 780 нм с применением полой электронно-лучевой лампы в качестве источника света и детектора РМТ. Калибровочную кривую, включающую в себя диапазон 0-5 мг/л Rb в буфере анализа образца, строили для каждого набора планшетов. Процент оттока Rb⁺ (F) определяли уравнением

F=[Rb⁺ _sup/(Rb⁺ _sup+Rb⁺ _Lys)]×100%.

Влияние (Е) соединения определяли уравнением: Е=[(F_c-F_b )/(F_s-F_b)]×100%, где F_c представляет собой отток в присутствии соединения в буфере деполяризации, F_b представляет собой отток в базальном буфере, F _s представляет собой отток в буфере деполяризации и F представляет собой отток в присутствии соединения в буфере деполяризации. Строили график зависимости действия (Е) соединения от его концентрации для вычисления величины ЕС₅₀, концентрации соединения для 50% максимального оттока Rb⁺. Результаты показаны ниже. Пояснение условных обозначений:

А: ЕС ₅₀ = 1 нМ - 50 нМ; В: EC₅₀ = 50 нМ - 100 нМ; С: E₅₀ = 100 нМ - 500 нМ.

Активность примерного соединения
СОЕДИНЕНИЕ	АКТИВНОСТЬ
	А
ретигабин	С