композиции, содержащие галактоманнан, и способ их получения

Формула изобретения

1. Соединение структурной формулы I, причем указанное соединение получено из растения Trigonella foenum graecum.

2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что указанное соединение представляет собой низкомолекулярный галактоманнан, имеющий молекулярную массу примерно 702 дальтон и молекулярную формулу С₂₄Н₄₆O₂₃.

3. Соединение по п.1, отличающееся тем, что указанное соединение улучшает состав тела, увеличивает силу и положительно воздействует на факторы, связанные с предиабетическими и диабетическими состояниями.

4. Соединение по п.1, отличающееся тем, что указанное соединение охарактеризовано ВЭЖХ хроматограммой на фиг.1 и ВЭЖХ-МС хроматограммой на фиг.2.

5. Композиция, содержащая эффективное количество соединения структурной формулы I, полученного из Trigonella thenum graecum



возможно совместно с фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом (веществами), предназначенная для улучшения состава тела, увеличения силы и улучшения факторов, связанных с преддиабетическими и диабетическими состояниями.

6. Композиция по п.5, отличающаяся тем, что вспомогательные вещества выбраны из группы, содержащей гранулирующие вещества, связывающие вещества, смазывающие вещества, разрыхляющие вещества, подсластители, красители, вкусовые агенты, покрывающие агенты, пластификаторы, консерванты, суспендирующие вещества, эмульгаторы и вещества для сферонизации.

7. Композиция по п.5, отличающаяся тем, что указанная композиция приготовлена в виде различных дозированных форм, выбранных из группы, включающей таблетки, пастилки, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии в жестких или мягких капсулах из геля, сиропы и эликсиры.

8. Композиция по п.5, отличающаяся тем, что указанное соединение получено из частей растения Trigonella foenum graecum, выбранных из группы, включающей корни, побеги, листья и семена; предпочтительно семена.

9. Композиция по п.5, отличающаяся тем, что указанная композиция нетоксична и лишена побочных эффектов.

10. Композиция по п.5, отличающаяся тем, что указанные преддиабетические и диабетические состояния включают нарушенный состав тела, уменьшенную сухую мышечную массу, пониженный катаболизм жировых веществ, уменьшенную силу, нарушенный метаболизм глюкозы, повышенную резистентность к инсулину, повышение глюкозы крови, кардиоваскулярные заболевания, ожирение и диабетическое состояние второго типа.

11. Способ получения соединения структурной формулы I



из растения Trigonella foenum graecum, причем указанный способ включает стадии

а. экстракции расплющенных семян алифатическим углеводородным растворителем и водно-спиртовой смесью для удаления жировых веществ;

b. концентрирования экстракта с получением полужидкой массы;

с. растворения концентрированной массы с получением прозрачного раствора;

d. пропускания прозрачного раствора через ионообменную смолу для удаления азотистых и ионных оснований с получением очищенного раствора;

е. пропускания очищенного раствора через колонку с адсорбентом для удерживания активных соединений и получения чистого раствора; и

f. концентрирования полученного чистого раствора с последующим высушиванием под вакуумом с получением порошка соединения формулы I.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что указанную экстракцию проводят в течение 3-12 ч, предпочтительно в течение примерно 10 ч и при температуре в пределах от примерно 30 до примерно 40°С, предпочтительно примерно при 35°С.

13. Способ по п.11, отличающийся тем, что указанный алифатический углеводородный растворитель выбран из группы, содержащей гексан, гептан, октан и циклогексан, предпочтительно гексан.

14. Способ по п.11, отличающийся тем, что указанная водно-спиртовая смесь для экстракции имеет соотношение в пределах от 1:9 до 9:1, предпочтительно примерно 1:7, и указанный экстракт концентрируют под вакуумом при температуре в пределах примерно от 45 до 75°С, предпочтительно примерно при 50°С,

15. Способ по п.11, отличающийся тем, что указанную массу растворяют в деионизованной воде, и указанная ионообменная смола представляет собой катионнообменную смолу в виде геля.

16. Способ по п.11, отличающийся тем, что выход соединения формулы I составляет примерно 32 г на 1000 г семян пажитника греческого; и соединение формулы I имеет степень чистоты в пределах примерно от 90% до 97%, предпочтительно примерно 95%.

17. Способ улучшения состава тела, увеличения силы и лечения предиабетических и диабетических болезненных состояний у субъекта, причем указанный способ включает стадию введения субъекту фармацевтически эффективного количества соединения структурной формулы I, полученного из Trigonella foenum graecum,



возможно совместно с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами.

18. Способ по п.17, отличающийся тем, что указанные преддиабетические и диабетические состояния включают нарушенный состав тела, уменьшенную сухую мышечную массу, пониженный катаболизм жировых веществ, уменьшенную силу, нарушенный метаболизм глюкозы, повышенную резистентность к инсулину, повышение глюкозы крови, кардиоваскулярные заболевания, ожирение и диабетическое состояние второго типа.

19. Способ по п.17, отличающийся тем, что указанные вспомогательные вещества выбраны из группы, включающей гранулирующие вещества, связывающие вещества, смазывающие вещества, разрыхляющие вещества, подсластители, красители, вкусовые агенты, покрывающие агенты, пластификаторы, консерванты, суспендирующие вещества, эмульгаторы и вещества для сферонизации.

20. Способ по п.17, отличающийся тем, что указанное соединение, возможно совместно с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, приготавливают в виде различных дозированных форм, выбранных из группы, включающей таблетки, пастилки, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии в жестких или мягких капсулах из геля, сиропы и эликсиры.

21. Способ по п.17, отличающийся тем, что субъект является животным или человеком.

22. Способ по п.17, отличающийся тем, что указанное соединение положительно воздействует на преддиабетические и диабетические состояния, включая инсулиноподобное действие, снижение уровней сахара крови, предотвращение истощения организма, улучшение состава тела, уменьшение содержания жира в организме и увеличение сухой мышечной массы.

23. Способ по п.17, отличающийся тем, что указанное соединение получают из частей растения Trigonella foenum graecum, выбранных из группы, включающей корни, побеги, листья, семена, предпочтительно семена.

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к новому соединению растительного происхождения, которое обладает уникальными свойствами в отношении улучшения состава тела, увеличения сухой мышечной массы, "сжигания" жира, увеличения силы и улучшения метаболизма глюкозы.

Настоящее изобретение также относится к использованию указанного соединения у субъектов с диагностированным диабетом и у субъектов в преддиабетическом состоянии. Настоящее изобретение также относится к использованию указанного соединения для снижения содержания жира в организме, увеличения сухой мышечной массы и улучшения состава тела. Указанное улучшение в составе тела также улучшает метаболизм глюкозы. Настоящее изобретение относится к использованию указанного соединения у субъектов с нарушенным метаболизмом глюкозы. Настоящее изобретение также относится к использованию указанного соединения для повышения мышечной массы и увеличения силы субъекта.

Настоящее изобретение также относится к способу приготовления указанного соединения, предназначенного для улучшения состава тела, увеличения сухой мышечной массы, "сжигания" жира, увеличения силы и улучшения метаболизма глюкозы.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сахарный диабет представляет собой эндокринное расстройство, которому в 2000 г. было подвержено 171 миллион человек, а к 2030 году данный показатель, вероятно, достигнет 366 миллионов человек. Указанное заболевание характеризуется нарушенной регуляцией уровней глюкозы крови. Уровни глюкозы регулирует гормон, инсулин, который секретируется бета-клетками островков Лангерганса в поджелудочной железе. Нарушенная секреция инсулина поджелудочной железой или резистентность к секретируемому инсулину (инсулиновая резистентность) представляют собой основную причину сахарного диабета второго типа. Причиной нарушенного продуцирования инсулина является сложное взаимодействие существующих генетических факторов с условиями окружающей среды и образом жизни. В сегодняшнем космополитическом обществе особенности образа жизни, такие как переедание, низкая двигательная активность и беспорядочное потребление "богатой энергией и бедной питательными веществами" обработанной, замороженной или "готовой к употреблению" пищи вместе с преобладанием условий, способствующих ожирению, играют основную роль в увеличении случаев диабета.

В здоровом организме глюкоза эффективно регулируется инсулином посредством тщательно контролируемого механизма обратной связи между уровнями глюкозы крови и гормонами поджелудочной железы. В организме диабетика уровни глюкозы крови повышены, поскольку неполноценные бета-клетки поджелудочной железы не секретируют необходимое количество инсулина. Недостаточная регуляция глюкозы, которая представляет собой первичный источник энергии для процессов метаболизма и других клеточных функций, является причиной различных метаболических расстройств, которые представляют собой долговременные хронические патологические состояния, вызванные появлением диабета. После появления сахарного диабета второго типа развивается ряд хронических осложнений, которые затрагивают многие органы и ответственны за процент летальных исходов заболевания и общий уровень смертности, связанный с указанным заболеванием. Таким образом, ранняя диагностика и немедленное регулирование уровней глюкозы крови очень важны при лечении диабета.

Диабет влияет на процессы, посредством которых организм абсорбирует и усваивает сахар крови. Получается, что при том же уровне потребления питательных веществ организм не обладает достаточным количеством глюкозы для получения энергии и роста. Кроме того, у пациентов, страдающих диабетом, более высокий уровень катаболической активности, вызывающий потерю мышечного белка и отрицательный баланс азота, по сравнению с людьми, у которых нормальные уровни сахара крови.

Поэтому для эффективного лечения указанного заболевания регулирование уровней глюкозы крови следует сочетать с улучшением состава тела.

Кроме возрастающей численности населения, страдающего диабетом, еще одна область, требующая незамедлительного внимания, - это вызывающая тревогу скорость с которой распространяются "предиабетические" состояния. В предиабетическом состоянии клетки организма постепенно и все отчетливее демонстрируют повышенную резистентность к действию инсулина. Указанная резистентность к действию инсулина ведет к ситуации, когда уровни глюкозы крови превышают нормальные показатели. В терминах медицины данное состояние, характеризующееся повышенными уровнями глюкозы крови, называют также нарушенной толерантностью к глюкозе или нарушенной гликемией натощак (НТГ/НГН), в зависимости от того, какой тест применяли для его обнаружения. Каждый тест выявляет одно из указанных состояний.

По причине указанного состояния, характеризующегося повышенными уровнями глюкозы крови, люди с предиабетическим состоянием быстро переходят в диабетическое состояние. Кроме того, они, возможно, уже испытывали неблагоприятные хронические воздействия на здоровье, связанные с диабетическим состоянием. Получается, что глюкоза циркулирует в крови вместо того, чтобы быть использованной клетками для получения энергии, и поэтому уровни глюкозы крови повышены. Например, у людей с предиабетом риск заболеть кардиоваскулярным заболеванием в 1,5 раза выше по сравнению с людьми, у которых нормальная глюкоза крови.

Свыше 41 миллиона взрослых американцев в возрасте от 40 до 74 лет находятся в предиабетическом состоянии. Предиабет представляет собой патогенетический предшественник диабета второго типа. Ожирение (индекс массы тела, BMI>30), нездоровая диета и сидячий образ жизни могут привести к предиабету. Ожирение является основополагающей причиной резистентности к инсулину, которая, в свою очередь, является ключевым фактором в развитии обратимого предиабета.

Предиабет представляет собой состояние, которое возникает, когда у человека нарушены уровни глюкозы крови, но данное нарушение не соответствует требованиям, необходимым для постановки диагноза диабет, поскольку не проявляется никаких клинических симптомов указанного заболевания. Как правило, предиабетическое состояние вызывается, в том числе, изменениями в составе тела.

Нарушение или несостоятельность состава тела обычно проявляется как увеличение содержания жира, особенно в виде ожирения по абдоминальному типу. Накапливающие жир клетки действуют в качестве "хранилищ" гормона и запускают секрецию цитокинов, которые ингибируют чувствительность к инсулину. Это является пусковым моментом состояния, называемого резистентностью к инсулину, которое характеризуется высокими уровнями циркулирующих в крови глюкозы и инсулина. Указанное повышение уровней инсулина и глюкозы в крови ведет к превращению глюкозы в запасной жир, вызывая дополнительное увеличение массы жира. Это является началом порочного круга, в котором масса жира поддерживает процесс своего накопления, приводя к уменьшению сухой мышечной массы. Мышечная масса способствует захвату глюкозы. Поэтому уменьшение сухой мышечной массы ведет к сниженному захвату глюкозы, что вносит дополнительный вклад в уже повышенные уровни глюкозы.

Повышенные уровни циркулирующей в крови глюкозы ответственны за токсичность по отношению к бета-клеткам поджелудочной железы ("глюкотоксичность"). Фактически дисфункция бета-клеток инициируется на предиабетической стадии. Кроме того, в настоящее время диабет диагностируют согласно критерию, сформулированному Всемирной Организацией Здравоохранения или Американской Диабетологической Ассоциацией, если предсуществующие повышенные уровни глюкозы крови уже вызвали 40-50% дисфункцию бета-клеток.

Сочетание увеличенной массы жира и повышенных уровней сахара крови может быть суммировано в виде ряда нисходящих ступеней, которые вместе представляют циклический процесс, начинающийся с нарушенного состава тела, ведущего к увеличению содержания жира и уменьшению сухой (скелетной) мышечной массы, что вызывает снижение метаболизма глюкозы (предиабет), и впоследствии появление диабета второго типа.

Немощность (ослабленность) состава тела

Увеличенная жировая масса и уменьшенная масса (скелетной) мышечной ткани

Пониженная степень захвата глюкозы клетками (скелетной) мышечной ткани

Повышенное содержание жира, который действует в качестве "хранилища" гормонов, при этом адипоциты секретируют цитокины

"Перекрестное взаимодействие" между цитокинами и инсулином, ведущее к сниженной эффективности инсулина или резистентности к инсулину

Повышенные уровни циркулирующей в крови глюкозы - Повышенные уровни инсулина

Повышенная глюкоза крови - Глюкотоксичность в бета-клетках - Инициация дисфункции бета-клеток

Повышенные уровни инсулина - Резистентность к инсулину

Высокая глюкоза крови+Нарушенный состав тела = Преддиабетическое состояние

Появление диабета

Поэтому можно сделать вывод, что снижение содержания жира в организме представляет собой вынужденный шаг для предотвращения/замедления прогрессирования предиабета с переходом в диабетическое состояние. Кроме того, возможность снижения уровней глюкозы крови является положительным фактором при лечении предиабета.

Кроме того, в исследованиях также выявлена роль, которую играет распределение жира в организме для НТГ (нарушенной толерантности к глюкозе) и НГН (нарушенной гликемии натощак). Женщины с повышенными уровнями глюкозы крови отличаются более высокой аккумулированной подкожной и общей жировой массой, чем женщины с нормальными уровнями глюкозы крови. Соответственно, было выявлено, что степень ожирения, морфологическое и временное распределение жира связаны с предиабетическим состоянием. Поскольку не существует единого терапевтического решения в отношении всех симптомов резистентности к инсулину или предиабета, чтобы вызвать обратное развитие указанных патологических состояний необходимо опираться на многосторонний подход.

В настоящее время населению с предиабетическим состоянием не уделяется должного внимания, а необходимо не только контролировать сахар крови, но также улучшать состав тела для предотвращения прогрессирования указанного патологического состояния и предотвращения других хронических патологических состояний, связанных с высоким содержанием жира в организме. Кроме предиабета существует много других патологических состояний, связанных с повышенным уровнем жира в организме (ожирением) (Патологические состояния, связанные с повышенным содержанием жира в организме): резистентность к инсулину, появление диабета второго типа у взрослых, сердечные заболевания и инсульт, остеоартрит, метаболический синдром, поликистоз яичников и т.д.

Таким образом, лечебная тактика при диабете требует комбинированной терапии, включающей контроль сахара крови и улучшение состава тела. Кроме того, уровень населения с предиабетом сейчас возрастает из-за нездорового, сидячего образа жизни, получившего распространение в последнее время.

Учитывая указанные факторы, существует необходимость в терапевтически эффективном решении для всех указанных патологических состояний.

Trigonella foenum graecum:

Пажитник греческий (Trigonella foenum graecum) представляет собой одно из древнейших, используемых в медицине растений, принадлежит к семейству бобовых. Указанное растение широко распространено в Средиземноморском регионе, Индии, Северной Америке, Европе и Китае. Пажитник греческий используют и в качестве лекарственного растения, и в качестве приправы к пище. Семена пажитника греческого находят очень широкое употребление в Индии как часть основного продовольственного зерна. Листья пажитника греческого также широко употребляют в Индии в качестве листовых овощей, они представляют собой богатый источник кальция, железа, бета-каротина и других витаминов. Пажитник греческий имеет долгую историю лечебного использования в аюрведической и китайской медицине. Сообщалось, что пажитник греческий проявляет лечебные свойства, такие как регулирование сахара крови, гиполипидемическое действие, противовоспалительное действие и влияние на инфекционный процесс. Также считают, что указанное растение задерживает опорожнение желудка, замедляет абсорбцию углеводов и ингибирует абсорбцию глюкозы.

Химический состав семян пажитника греческого: влажность - 9%, зольный остаток - 3%, липиды - 8%, белки - 26% и крахмал - 6%. Кроме того, в семенах пажитника греческого общее содержание клетчатки - 48%, содержание камеди - 20% и содержание клетчатки, растворимой нейтральным детергентом - 28%.

Лечебные свойства пажитника греческого, а именно снижение сахара крови, замедление абсорбции глюкозы и углеводов, задержка опорожнения желудка, снижение уровня липидов и холестерина - относят к наличию в семенах пажитника греческого камедей. Камеди по своей природе обладают свойствами, посредством которых они могут замедлять абсорбцию молекул в процессе пищеварения и выделения. Задерживая опорожнение желудка, они также играют роль в снижении аппетита.

Как правило, камеди представляют собой или гидрофобные, или гидрофильные молекулы большой молекулярной массы со свойствами коллоидов, которые в подходящем растворителе или в вызывающем набухание веществе образуют гели или очень вязкие суспензии или растворы. Способность камедей абсорбировать подходящие растворители и разбухать является основной причиной физиологического действия камеди на процессы пищеварения.

Семена представляют собой древний источник камедей. Большинство семян содержит крахмал в качестве своего основного запасного питательного вещества, который используется в процессе первоначального роста растения. Многие семена содержат запасные питательные вещества полисахаридной природы, отличные от крахмала, и некоторые из таких семян собирают для получения пищевых камедей. Подобные пищевые полимеры или камеди обычно называют пищевой клетчаткой.

Камеди или пищевые клетчатки встречаются в виде соединений с линейной цепью, состоящих из звеньев сахара, которые называют гликозильными звеньями. Линейные цепи могут содержать несколько сотен гликозильных звеньев. Некоторые пищевые полисахариды (клетчатки) встречаются в виде полисахаридов с разветвленной цепью и называются гликанами. Молекулярные массы клетчаток как с линейной, так и с разветвленной цепью охватывают широкий диапазон 2000-100000 дальтон. Важным различием между линейными и разветвленными полисахаридами является их влияние на вязкость раствора. Линейные клетчатки имеют тенденцию переводить раствор в более вязкое состояние, чем разветвленные клетчатки. Свойство линейных клетчаток повышать вязкость объясняется легким гидролитическим расщеплением линейной молекулы.

Главные компоненты, которые образуют камедь в семенах пажитника греческого, представляют собой галактозу и маннозу. Указанные сахара соединяются в определенных соотношениях, образуя полисахаридные клетчатки линейного типа. Указанные полисахариды образуют питательные запасы эндоспермия. Известно, что камедь или клетчатка, полученные из пажитника греческого, хорошо подходят для повышения вязкости и в качестве связывающего агента. Кроме того, галактоманнан пажитника греческого уникален по сравнению с другими галактоманнанами в плане соотношения манноза/галактоза, которое составляет в нем 1:1. Он также более растворим в холодной воде, чем его существующие аналоги. Также существует документальное свидетельство, что галактоманнановая камедь или пищевая клетчатка, полученная из пажитника греческого, имеет молекулярную массу приблизительно 30000 дальтон. Количественные выходы продукта, полученного экстракцией указанных галактоманнанов, были ограничены 15-20%.

Поэтому физиологические функции клетчаток в первую очередь определяются их способностью разбухать в определенном растворителе и повышать вязкость данного раствора. Два указанных свойства отвечают за задержку опорожнения желудка и более низкие уровни абсорбции молекул в присутствии клетчаток.

Пищевые клетчатки состоят из большого числа различных полисахаридов, которые не подвержены метаболизму в верхних отделах пищеварительной системы. Поэтому, когда пищевая клетчатка проходит через желудок в тонкий, а затем в толстый кишечник, свойства клетчаток, связанные с разбуханием и реологией, отвечают за их физиологическую функцию.

Благодаря свойственной клетчаткам тенденции к увеличению объема, они добавляют значительный объем к содержимому при прохождении через ЖКТ. Поэтому клетчатки уменьшают контакт тонкого и толстого кишечника с молекулами, которые проходят через них и, таким образом, снижают абсорбцию молекул, таких как сахар. Кроме того, клетчатки также обволакивают желчь, секретируемую в тонком кишечнике и препятствуют ее реабсорбции, снижая, таким образом, доступность желчи, которая представляет собой отправной пункт для холестерина.

Свойство клетчаток повышать вязкость среды также задерживает опорожнение желудка и поэтому вызывает снижение аппетита.

Поэтому пришли к выводу, что указанные высокомолекулярные полисахариды оказывают периферическое воздействие на состояние ЖКТ. Периферическое воздействие относится к определенному локализацией действию. Указанное действие не является системным, поскольку не происходит абсорбции полисахаридов в кровоток. Абсорбция указанных полисахаридов невозможна из-за их высокой молекулярной массы. Поэтому действие указанных молекул с высокой молекулярной массой ограничено местом, в котором они присутствуют.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Заявка на патент США № 20080027024 относится к комбинации глюкоманнана, ксантановой камеди и альгината для достижения вязкости с тем, чтобы обеспечить доставку пищевой клетчатки для использования в целях повышения чувства сытости, снижения массы тела, снижения уровней глюкозы крови или снижения уровней холестерина крови у млекопитающих. Данный патент относится к комбинации различных камедей для достижения необходимой вязкости для реализации функций, заявленных в указанном документе.

Заявка на патент США № 20070098 относится к композиции, которая содержит глюкоманнан и по меньшей мере один галактоманнан. В данном патенте указанный глюкоманнан получен из корней или луковиц растения аморфофаллюс коньяк. Указанные полисахариды также содержат глюкозу и маннозу в соотношении 5:8. Отличительной чертой глюкоманнана, полученного из растения аморфофаллюс коньяк, является его молекулярная масса, которая превосходит молекулярную массу любой известной клетчатки и находится в диапазоне 200000-2000000 дальтон. Поскольку указанный полисахарид представляет собой клетчатку большой молекулярной массы, он не будет абсорбироваться в кровоток, и поэтому будет оказывать только периферическое действие на организм субъекта.

Патент США № 5847109 относится к композиции, содержащей галактоманнаны, полученные из пажитника греческого, в которых по меньшей мере 50 повторяющихся звеньев. Молекулярная масса указанного заявленного соединения составляет ~18000 дальтон. Указанное соединение имеет большую молекулярную массу. Поскольку указанное соединение имеет большую молекулярную массу, оно не будет абсорбироваться в кровоток. Действие, заявленное в указанном патенте, относится к снижению глюкозы после приема пищи, снижению холестерина и усиленной реакции на инсулин, что связано с периферическим действием любой пищевой клетчатки. Указанное действие имеет локальный характер и реализуется в тонком и толстом кишечнике. Поскольку указанные молекулы обладают большой молекулярной массой и представляют собой камеди, они проникают в тонкий кишечник, абсорбируют воду, разбухают и занимают значительную часть полости толстого кишечника, таким образом, препятствуя абсорбции сахаров и реабсорбции желчи, необходимой для образования холестерина. Данное периферическое действие указанной композиции ответственно за ее физиологическую функцию. Указанная композиция не может абсорбироваться в кровоток по причине ее большой молекулярной массы, и поэтому не будет оказывать системного действия.

Патент США № 7141254 относится к композиции для лечения диабета, которая содержит тригонеллин, аминокислоты и галактоманнан. Содержание галактоманнана, указанного в данном патенте, находится в пределах 10-60%. Кроме того, отсутствуют данные по действию галактоманнана, независящему от действия тригониллина и аминокислот.

ЗАДАЧИ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Основной задачей настоящего изобретения является получение нового очищенного соединения растительного происхождения. Другой задачей настоящего изобретения является положительное воздействие на факторы, связанные с диабетическим и предиабетическим состоянием.

Еще одной задачей настоящего изобретения является использование указанного очищенного соединения для уменьшения содержания жира в организме, увеличения, таким образом, мышечной массы и улучшения состава тела.

Еще одной задачей настоящего изобретения является использование очищенного соединения для поддержания нормальных уровней глюкозы крови у субъекта с диагностированным диабетическим и предиабетическим состоянием. Другой задачей является задержка или предотвращение прогрессирования предиабетического состояния и его перехода в диабет второго типа.

Еще одной задачей настоящего изобретения является использование очищенного соединения для улучшения захвата глюкозы клетками по инсулиноподобному механизму.

Еще одной задачей настоящего изобретения является использование нового очищенного соединения растительного происхождения для снижения содержания жира в организме, улучшения, таким образом, состава тела и увеличения мышечной массы.

Еще одной задачей настоящего изобретения является разработка способа приготовления нового очищенного соединения растительного происхождения для положительного воздействия на факторы, связанные с диабетическим, предиабетическим состоянием, для уменьшения содержания жира в организме, улучшения, таким образом, состава тела и увеличения мышечной массы.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Согласно настоящему изобретению предложено соединение структурной формулы I, отличающееся тем, что указанное соединение получают из Trigonella foenum graecum.

Композиция, содержащая соединение структурной формулы I, полученное из Trigonella foenum graecum

и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, предназначенная для улучшения факторов, связанных с преддиабетическими и диабетическими состояниями; способ получения соединения структурной формулы I

из растения Trigonella foenum graecum, причем указанный способ включает стадии: экстракции механически обработанных (расплющенных) семян алифатическим углеводородным растворителем и водно-спиртовой смесью для удаления жировых веществ; концентрирование экстракта с получением полужидкой массы; растворения концентрированной массы с получением прозрачного раствора; пропускания прозрачного раствора через ионообменную смолу для удаления азотистых и ионных оснований с получением очищенного раствора; пропускания очищенного раствора через колонку с адсорбентом для удерживания активных соединений; и концентрирования полученного чистого раствора с последующим высушиванием под вакуумом с получением порошка соединения формулы I; и способ лечения преддиабетических и диабетических болезненных состояний у субъекта, который в этом нуждается, причем указанный способ включает стадию введения фармацевтически эффективного количества соединения структурной формулы I, полученного из Trigonella foenum graecum.

возможно совместно с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фиг.1. ВЭЖХ хроматограмма соединения структурной формулы I.

Фиг.2. ВЭЖХ-МС хроматограмма соединения структурной формулы I.

Фиг.3. Гистограммы, на которых отображены результаты исследования влияния тестируемого соединения структурной формулы I на массу тела.

Фиг.4. Гистограмма действия тестируемого соединения структурной формулы I на уровни тестостерона.

Фиг.5. График, на котором показано действие тестируемого соединения структурной формулы I на состав тела.

Фиг.6. График, на котором показано действие тестируемого соединения структурной формулы I на силу.

Фиг.7. Гистограмма, на которой показана способность соединения структурной формулы I усиливать захват глюкозы клетками.

Фиг.8. Гистограмма, на которой показано действие соединения структурной формулы I на сухую мышечную массу.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к соединению структурной формулы I, которое получено из Trigonella foenum graecum.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение представляет собой низкомолекулярный галактоманнан с молекулярной массой примерно 702 дальтон.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение имеет молекулярную формулу C₂₄H₄₆O₂₃.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение предназначено для улучшения состава тела, увеличения силы и положительного воздействия на факторы, связанные с предиабетическими и диабетическими состояниями.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение представлено в виде ВЭЖХ хроматограммы на Фиг.1.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение представлено в виде ВЭЖХ-МС хроматограммы на Фиг.2.

Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей соединение структурной формулы I, полученное из Trigonella foenum graecum

возможно совместно с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, предназначенной для улучшения состава тела, увеличения силы и положительного воздействия на факторы, связанные с предиабетическими и диабетическими состояниями.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения вспомогательные вещества выбраны из группы, содержащей гранулирующие вещества, связывающие вещества, скользящие вещества, разрыхляющие вещества, подсластители, красители, вкусовые агенты, покрывающие агенты, пластификаторы, консерванты, суспендирующие вещества, эмульгаторы и вещества для сферонизации.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанную композицию приготовляют в виде различных дозированных форм, выбранных из группы, включающей таблетки, пастилки, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии в жестких или мягких капсулах из геля, сиропы и эликсиры.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение получают из частей растения Trigonella foenum graecum.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанные части растения выбраны из группы, содержащей корни, побеги, листья, семена, растение целиком, предпочтительно семена.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанная композиция нетоксична и лишена побочных эффектов.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанные предиабетические и диабетические состояния включают нарушенный состав тела, уменьшенную сухую мышечную массу, пониженный катаболизм жировых веществ, уменьшенную силу, нарушенный метаболизм глюкозы, повышенную резистентность к инсулину, повышение глюкозы крови, кардиоваскулярные заболевания, ожирение и диабетическое состояние второго типа.

Настоящее изобретение относится к способу получения соединения структурной формулы I

из растения Trigonella foenum graecum, причем указанный способ включает стадии: экстракции механически обработанных (расплющенных) семян алифатическим углеводородным растворителем и водно-спиртовой смесью для удаления жировых веществ; концентрирование экстракта с получением полужидкой массы; растворения концентрированной массы с получением прозрачного раствора; пропускания прозрачного раствора через ионообменную смолу для удаления азотистых и ионных оснований с получением очищенного раствора; пропускания очищенного раствора через колонку с адсорбентом для удерживания активных соединений; и концентрирования полученного чистого раствора с последующим высушиванием под вакуумом с получением порошка соединения формулы I.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанную экстракцию проводят в течение 3-12 часов, предпочтительно в течение 10 часов.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанную экстракцию проводят при температуре в пределах от 30 до 40°С, предпочтительно примерно при 35°С.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанный алифатический углеводородный растворитель выбран из группы, содержащей гексан, гептан, октаны и циклогексаны, предпочтительно гексан.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения водно-спиртовая смесь для экстракции имеет соотношение в пределах от 1:9 до 9:1, предпочтительно примерно 1:7.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанный экстракт концентрируют под вакуумом при температуре в пределах от 45 до 55°С, предпочтительно примерно при 50°С.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанную массу растворяют в деионизованной воде.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанная ионообменная смола представляет собой катионнообменную смолу в виде геля.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения количественные выходы соединения формулы I составляют примерно 32 г на 1000 г семян пажитника греческого.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения степень чистоты соединения формулы I находится в пределах от 90% до 97%, предпочтительно примерно 95%.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанный экстракт концентрируют под вакуумом при температуре в пределах от 50 до 75°С, предпочтительно примерно при 50°С.

Настоящее изобретение относится к способу лечения предиабетических и диабетических болезненных состояний у субъекта, который в этом нуждается, указанный способ включает стадию введения фармацевтически эффективного количества соединения структурной формулы I

возможно совместно с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами субъекту.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанные предиабетические и диабетические состояния включают нарушенный состав тела, уменьшенную сухую мышечную массу, пониженный катаболизм жировых веществ, уменьшенную силу, нарушенный метаболизм глюкозы, повышенную резистентность к инсулину, повышение глюкозы крови, кардиоваскулярные заболевания, ожирение и диабетическое состояние второго типа.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения вспомогательные вещества выбраны из группы, содержащей гранулирующие вещества, связывающие вещества, скользящие вещества, разрыхляющие вещества, подсластители, красители, вкусовые агенты, покрывающие агенты, пластификаторы, консерванты, суспендирующие вещества, эмульгаторы и вещества для сферонизации.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанную композицию приготовляют в виде различных дозированных форм, выбранных из группы, содержащей таблетки, пастилки, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии в жестких или мягких капсулах из геля, сиропы и эликсиры.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения субъект является животным или человеком.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение положительно воздействует на предиабетические и диабетические состояния за счет своей инсулиноподобной активности, снижения уровней сахара крови, предотвращения истощения организма, улучшения состава тела, уменьшения содержания жира в организме и увеличения сухой мышечной массы.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение получают из частей растения Trigonella foenum graecum.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанные части растения выбраны из группы, содержащей корни, побеги, листья, семена, растение целиком, предпочтительно семена,

Настоящее изобретение в одном из вариантов реализации относится к соединению растительного происхождения, которое характеризуется, в том числе, данными ВЭЖХ хроматограммы, представленной на Фиг.1, возможно совместно с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами и предназначено для улучшения состава тела и улучшения нарушенного метаболизма глюкозы. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение получают из растительного сырья, предпочтительно из Trigonelle foenum graecum. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение представляет собой низкомолекулярное соединение с молекулярной массой в пределах 200-1000 дальтон. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение не обладает андрогенной активностью.

Настоящее изобретение в другом варианте реализации относится к способу получения соединения растительного происхождения, охарактеризованного ВЭЖХ хроматограммой (Фиг.1), причем указанный способ включает стадии механической обработки (расплющивания) семян для уменьшения их размера, удаления масел и липидов алифатическим углеводородным растворителем, экстракции водно-спиртовым растворителем, удаления нежелательных соединений, концентрирования и высушивания с получением порошка. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанный алифатический углеводородный растворитель выбран из группы, содержащей гексан, гептан, октаны и циклогексаны, предпочтительно гексан. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения водно-спиртовой растворитель для экстракции выбран из группы, содержащей метанол, этанол и изопропанол, предпочтительно этанол. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения экстракцию проводят при температуре в пределах от 30 до 40°С, предпочтительно при 35°С. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения экстракцию проводят в течение 3-10 часов, предпочтительно в течение 10 часов. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения степень чистоты соединения растительного происхождения находится в пределах 0-95%.

Настоящее изобретение в другом варианте реализации относится к использованию соединения растительного происхождения, которое характеризуется, в том числе, данными ВЭЖХ хроматограммы, представленной на Фиг. 1, и соединения структурной формулы I для улучшения состава тела и нарушенного метаболизма глюкозы. Настоящее изобретение в другом варианте реализации относится к использованию указанного соединения для уменьшения содержания жира в организме и увеличения мышечной массы. Настоящее изобретение в другом варианте реализации относится к использованию указанного соединения для увеличения силы. Настоящее изобретение в другом варианте реализации относится к использованию указанного соединения для улучшения нарушенного метаболизма глюкозы.

Настоящее изобретение в другом варианте реализации относится к использованию соединения, соответствующего структурной формуле I и ВЭЖХ хроматограмме, представленной на Фиг.1, для положительного воздействия на факторы, связанные с преддиабетическими и диабетическими состояниями, отличающегося тем, что положительное воздействие на факторы, связанные с предиабетическим и диабетическим состоянием выбрано из группы, включающей инсулиноподобную активность, снижение уровней сахара крови, улучшение состава тела, уменьшение содержания жира в организме и увеличения сухой мышечной массы.

Настоящее изобретение относится к новому соединению растительного происхождения и его производным, предназначенному для положительного воздействия на факторы, связанные с преддиабетическим и диабетическим состоянием. Указанное соединение характеризуется ВЭЖХ хроматограммой, представленной на Фиг.1, и дополнительно характеризуется ВЭЖХ-МС хроматограммой, представленной на Фиг.2. Настоящее изобретение также относится к способу получения указанного нового соединения растительного происхождения многостадийным способом, описанным в данном документе. Настоящее изобретение относится к использованию указанного соединения для улучшения состава тела путем уменьшения содержания жира в организме и увеличения сухой мышечной массы. Настоящее изобретение также относится к использованию указанного соединения для увеличения силы у субъекта, который в этом нуждается. Настоящее изобретение также относится к использованию указанного соединения растительного происхождения для положительного воздействия на факторы, связанные с диабетическим и предиабетическим состоянием, такие как сахар крови и состав тела. Настоящее изобретение также относится к использованию указанного соединения растительного происхождения для эффективного воздействия на состав тела, связанный с диабетическим и предиабетическим состоянием.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения соединение структурной формулы I соответствует характерной хроматограмме, как представлено на Фиг.1, и возможно со вспомогательными веществами. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения соединение структурной формулы I характеризуется ВЭЖХ-МС хроматограммой, как представлено на Фиг.2, и возможно со вспомогательными веществами. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение, полученное из семян пажитника греческого, представляет собой низкомолекулярное соединение с молекулярной массой 702 дальтон. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение обладает системным действием на организм субъекта. Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к использованию указанного соединения для улучшения состава тела путем уменьшения содержания жира в организме и увеличения мышечной массы. Указанное увеличение мышечной массы также вызывает увеличение силы.

Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к использованию указанного соединения для усиления захвата глюкозы клетками по инсулиноподобному типу. Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к использованию указанного соединения для снижения уровней сахара крови у субъекта, который в этом нуждается.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанные вспомогательные вещества выбраны из группы, включающей наполнители, камеди, подсластители, оболочки, связывающие вещества, разрыхлители, скользящие вещества, разрыхляющие вещества, суспендирующие вещества, растворители, красители, регуляторы сыпучести, антиадгезивные вещества, антистатики, ПАВ, пластификаторы, эмульгаторы, вкусовые агенты, усилители вязкости и антиоксиданты.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение приготовляют в виде дозированных форм, таких как жидкость, порошок, капсула, таблетка, инъекционная форма, пластырь, мазь, гель, эмульсия, крем, лосьон, зубная паста, аэрозоль и капли. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение представляет собой или порошок, или жидкость.

Настоящее изобретение также относится к способу получения указанного нового соединения растительного происхождения, отличающемуся тем, что указанный способ включает стадии:

1. Подготовки к экстракции: механическая обработка семян для уменьшения их размера.

2. Удаления масел и липидов.

3. Экстракции водно-спиртовым растворителем.

4. Удаления алколоидов, азотистых соединений, полярных высокомолекулярных соединений и сапонинов.

5. Концентрирования и высушивания для получения порошка.

Настоящее изобретение также относится к применению настоящего соединения структурной формулы I, которое дополнительно определяется характерной хроматограммой, представленной на Фиг.1, возможно совместно со вспомогательными веществами для производства лекарственного препарата, предназначенного для положительного воздействия на факторы, связанные с диабетическим и предиабетическим состоянием, и уменьшения содержания жира в организме, улучшения, таким образом, состава тела и увеличения мышечной массы. Степень чистоты полученного соединения растительного происхождения находится в пределах 0-95%, предпочтительно 90%.

Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения указанное соединение представляет собой или порошок, или жидкость и обладает минимальными побочными эффектами.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения выделение соединения структурной формулы I, которое дополнительно определяется характерной хроматограммой на Фиг.1, из семян пажитника греческого включает способ, описание которого приведено ниже.

Указанное соединение получают из различного семенного материала, как правило, содержащего высокомолекулярные (например, семена пажитника греческого) и низкомолекулярные водорастворимые биоактивные соединения. Данные биоактивные соединения выделяют оригинальным способом, который позволяет избирательно экстрагировать соединения с молекулярной массой в пределах от 1000 до 200 дальтон и ниже. Семена вальцуют, используя валковую шелушильно-шлифовальную машину, до толщины от 1 до 8 мм. Эффективной экспозиции сердцевины добиваются вальцеванием до размера предпочтительно 1 мм. Обработанные семена (муку) загружают в экстрактор, имеющий на дне фильтр с подходящим размером пор, предпочтительно 200 меш/мкм, чтобы избежать утечки муки, полученной из семян, вместе с растворителем. Через слой полученной из семян муки пропускают алифатический углеводородный растворитель, такой как гексан, гептан, октан и циклогексан, предпочтительно гексан. Слой алифатического углеводорода в гильзе экстрактора (перколятора) интенсивно рециркулирует в течение 10-12 часов так, что в итоге мука освобождается от масел и липидов. После экстракции алифатическим углеводородным растворителем муку повторно экстрагируют смесью алифатического спирта и воды с соотношением вода/спирт от 1:1 до 9:1, предпочтительно 1:7. Указанный спирт может представлять собой метанол, этанол, изопропанол, предпочтительно этанол в качестве спиртового растворителя. Водно-спиртовую смесь пропускают в перколяторе сверху вниз через слой семенного материала. Процесс рециркуляции растворителя продолжают в течение 3-10 часов, предпочтительно 8 часов при комнатной температуре.

Прозрачный экстракт со дна перколятора визуально проверяют на наличие взвеси и, если необходимо, подвергают дополнительной фильтрации. Чистый фильтрат концентрируют под вакуумом при температуре в пределах от 50°С до 75°С, предпочтительно при 55°С до получения пастообразной массы. Полученную пасту перерастворяют в деионизованной воде до получения прозрачного раствора, содержащего примерно 2% сухого вещества. Прозрачный раствор пропускают через колонку с ионообменной смолой, содержащую сильнокислую анионообменную смолу, способную удалять из потока алкалоиды и другие азотистые соединения. Выходящую из колонки жидкость, свободную от соединений основного характера и аминокислот, пропускают через колонку, содержащую полимерный сорбент amberlyt XAD -761, способный удалять из потока все высокомолекулярные полярные соединения и сапонин. Полученную после этого жидкость концентрируют до полужидкого состояния и высушивают распылением в распылительной сушилке параллельных потоков для получения порошка.

В целом способ выделения указанного очищенного низкомолекулярного соединения, которое соответствует признакам, характерным для сахаров по данным тонкослойной хроматографии (проявление путем распыления 10% спиртового раствора серной кислоты и нагревания), состоит из следующих стадий:

1. Семена (пажитник греческий) подвергают вальцеванию для экспозиции сердцевины, чтобы обеспечить эффективное обезжиривание, экстракцию и обработку.

2. Алифатический гидрофобный растворитель многократно пропускают через слой муки, полученной из семян пажитника греческого, для ее эффективного обезжиривания.

3. Затем полученную из семян муку загружают в перколятор и пропускают через слой муки смесь алифатического спирта и воды для достижения эффективной экстракции.

4. Растворитель (водно-спиртовую смесь) концентрируют под вакуумом при низких температурах для обеспечения целостности сырья, а полученную массу растворяют в деионизованной воде для получения прозрачного раствора.

5. Полученный таким образом прозрачный раствор пропускают через ионообменную колонку для удаления всех азотистых веществ и ионных оснований.

6. Полученный таким образом раствор пропускают через полимерный сорбент XAD-761 для удержания сапонинов и высокомолекулярных соединений.

7. Полученный на выходе раствор концентрируют до полужидкого состояния при низкой температуре.

8. Раствор высушивают, используя вакуумную лотковую сушилку или распылительную сушилку с получением сыпучего порошка.

Дозировка продукта настоящего изобретения

Для человека доза составляет от 1 до 100 мг/кг, предпочтительно 6,5 мг/кг для "сжигания" жира, повышения сухой массы, увеличения силы и контролирования предиабетического состояния. От 2 до 100 мг/кг для контроля диабета, предпочтительно 10 мг/кг для контроля диабета и восстановления потери массы тела при диабете.

Для животных (крыс) доза составляет от 10 до 200 мг/кг, предпочтительно 35 мг/кг для "сжигания" жира и повышения сухой массы, и 60 мг/кг для снижения сахара крови при диабетическом состоянии.

Технология, приведенная в настоящей заявке, дополнительно подтверждена с помощью следующих примеров. Тем не менее, указанные примеры не следует считать ограничивающими сферу настоящего изобретения.

Пример 1

1000 г семян пажитника греческого с содержанием влаги менее 7% обрабатывали в шелушильно-шлифовальной машине до размера 5 мм. Обработанный материал помещали в колонку, высота слоя составляла 300 мм. 5 литров гексана пропускали через слой пажитника греческого, собираемый со дна элюент подвергали рециркуляции через слой пажитника греческого в течение 10 часов при 35°С. После 10 часов слой пажитника греческого высушивали, освобождая от гексана. Смесь растворителей (8 литров), состоящую из изопропилового спирта и воды, в соотношении 4:1 пропускали через указанный слой в течение 8 часов при 35°С путем рециркуляции элюента. После 8 часов слой пажитника греческого освобождали от экстрактов и всех собранных экстрактов. Собранные экстракты концентрировали до получения полужидкой массы под вакуумом при 50°С. Сконцентрированную массу перерастворяли в 5 литрах деионизованной воды для получения прозрачного раствора. Прозрачный водный раствор медленно, в течение 2-х часов пропускали через колонку, содержащую 500 мл сильнокислой катионнообменной смолы в макропористой форме. Элюент с колонки проверяли ТСХ скринингом на присутствие алкалоидов и азотистых соединений, таких как аминокислоты. (Подвижная фаза для ТСХ: бутанол, уксусная кислота, вода в соотношении 12:8:2). Проявление осуществляли с помощью нингидринового реактива. После прохождения через колонку полученную на выходе жидкость пропускали в течение 3-х часов через 750 мл полимерного сорбента, содержащего Amberlite XAD-761. Собранную на выходе из колонки жидкость концентрировали при температуре ниже 50°С под вакуумом до получения густой пасты, которую высушивали распылением в малой распылительной сушилке при следующих условиях:

Температура на входе: 160°С.

Температура на выходе: 80°С.

Распылитель: 12000 об/мин.

Выход продукта: 32 г.

Пример 2

1000 г семян пажитника греческого с содержанием влаги менее 7% обрабатывали в шелушильно-шлифовальной машине до размера 5 мм. Обработанный материал помещали в колонку, высота слоя составляла 300 мм. 5 литров гексана пропускали через слой пажитника греческого и элюент, собираемый со дна элюент подвергали рециркуляции через слой пажитника греческого в течение 10 часов при 35°С. После 10 часов слой пажитника греческого высушивали, освобождая от гексана. Смесь растворителей (8 литров), состоящую из этилового спирта и воды, в соотношении 4:1 пропускали через указанный слой в течение 8 часов при 35°С путем рециркуляции элюента. После 8 часов слой пажитника греческого освобождали от экстрактов и всех собранных экстрактов. Собранные экстракты концентрировали до получения полужидкой массы под вакуумом при 50°С. Сконцентрированную массу перерастворяли в 5 литрах деионизованной воды для получения прозрачного раствора. Прозрачный водный раствор медленно, в течение 2-х часов пропускали через колонку, содержащую 500 мл сильнокислой катионнообменной смолы в макропористой форме. Элюент с колонки проверяли ТСХ скринингом на присутствие алкалоидов и азотистых соединений, таких как аминокислоты. (Подвижная фаза для ТСХ: бутанол, уксусная кислота, вода в соотношении 12:8:2). Проявление осуществляли с помощью нингидринового реактива. После прохождения через колонку полученную на выходе жидкость пропускали в течение 3-х часов через 750 мл полимерного сорбента, содержащего Amberlite XAD-761. Собранную на выходе из колонки жидкость концентрировали при температуре ниже 50°С под вакуумом до получения густой пасты, которую высушивали вакуумной сушкой для получения мелкого порошка.

ВЭЖХ анализ вышеуказанного соединения проводили, используя обращено-фазную колонку и ИДС детектор (испарительный детектор светорассеяния). Результаты выявили наличие целевого соединения (относительная площадь пика 91%) и минорного соединения. Условия проведения ВЭЖХ анализа представлены ниже.

КОНЦ. 100 мг в 50 мл метанола

ДЕТЕКТОР Испарительный светорассеяния

КОЛОНКА С18 обращено-фазная, 250 мм×4,6 мм×5 мкм

СКОРОСТЬ ПОТОКА 1 мл/мин

ГЕЛИЙ 1,3 мл/мин

Индекс	Наименование	Начало	Время	Завершение	Высота пика	Площадь пика	Площадь
		[мин]	[мин]	[мин]	[мкВ]	[мкВ.сек]	[%]
1	Соединение, использованное в качестве маркера	1,593	1,975	2,822	658405,77	11435381,23	91,750
2	Неизвестное соединение	3,116	3,275	3,545	174541,71	1028220,02	8,250
Суммарно							100,00

Аналогично условия проведения ВЭЖХ-МС анализа представлены ниже:
	Начальная	Конечная
Вид исследования	масса	масса	Набор масс
МС сканирование	703	708
Источник ионов (электроспрей в режиме позитивной ионизации)	Установленные параметры	Считанные параметры
Капилляр (кВ)	4,00	4,01
Конус (В)	90,00	91,21
Экстрактор (В)	2,00	2,32
РЧ линза (В)	0,3	0,3
Температура источника (°С)	100	99
Температура десольватации (°С)	150	148
Скорость потока газа конуса (л/ч)	50	49
Скорость потока десольватирующего газа (л/ч)	700	695
Macс-анализатор	Установленные параметры	Считанные параметры
Разрешение LM 1	15,0
Разрешение НМ 1	14,9
Энергия иона 1	1,0
Вход	50	-50
Столкновение	2	-3
Выход	50	-50
Разрешение LM 2	15,0
Разрешение НМ 1	15,0
Энергия иона 2	3,0
Умножитель (В)	650	-650
Скорость потока шприцевого насоса	20,0
Манометры
Давление газа в ячейке манометра
Пирани (мбар)	<1е-4 мбар
Конфигурация MUX
Зонд	стандартный

Пример 3

1000 г семян пажитника греческого с содержанием влаги менее 7% обрабатывали в шелушильно-шлифовальной машине до размера 6 мм. Обработанный материал помещали в колонку, высота слоя составляла 300 мм. 5 литров гексана пропускали через слой пажитника греческого и элюент, и собираемый со дна элюент подвергали рециркуляции через слой пажитника греческого в течение 10 часов при 35°С. После 10 часов слой пажитника греческого высушивали, освобождая от гексана. Смесь растворителей (8 литров), состоящую из метанола и воды, в соотношении 4:1 пропускали через указанный слой в течение 8 часов при 35°С путем рециркуляции элюента. После 8 часов слой пажитника греческого освобождали от экстрактов и всех собранных экстрактов. Собранные экстракты концентрировали до получения полужидкой массы под вакуумом при 50°С. Сконцентрированную массу перерастворяли в 5 литрах деионизованной воды для получения прозрачного раствора. Прозрачный водный раствор медленно, в течение 2-х часов пропускали через колонку, содержащую 500 мл сильнокислой катионнообменной смолы в макропористой форме. Элюент с колонки проверяли ТСХ скринингом на присутствие алкалоидов и азотистых соединений, таких как аминокислоты. (Подвижная фаза для ТСХ: бутанол, уксусная кислота, вода в соотношении 12:8:2). Проявление осуществляли с помощью нингидринового реактива. После прохождения через колонку полученную на выходе жидкость пропускали в течение 3-х часов через 750 мл полимерного сорбента, содержащего Amberlite XAD-761. Собранную на выходе из колонки жидкость концентрировали при температуре ниже 50°С под вакуумом до получения густой пасты, которую высушивали распылением в небольшой распылительной сушилке при следующих условиях:

Температура на входе: 160°С.

Температура на выходе: 80°С.

Распылитель: 12000 об/мин.

В следующих примерах описанное тестируемое соединение представляет собой новое соединение растительного происхождения, которое относится к настоящему изобретению.

Исследования, описанные в следующих примерах, были проведены для определения действия указанного нового соединения растительного происхождения на состав тела, силу и уровни сахара крови.

Нарушение состава тела, которое диагностируют при индексе массы тела, BMI>30, представляет собой одну из основных причин и характерный признак предиабетического состояния и диабетических состояний. Следующие эксперименты отражают свойство нового соединения растительного происхождения уменьшать содержание жира в организме и улучшать состав тела. Кроме того, улучшение в составе тела, достигаемое уменьшением содержания жира, переходит в увеличение мышечной массы, что также отражено следующими примерами. Потеря мышечной массы представляет собой серьезный симптом после появления диабета. Следующие примеры также служат цели показать способность нового соединения увеличивать мышечную массу. Увеличение мышечной массы улучшает состав тела, уменьшает катаболическую активность и распад мышечной ткани, связанные с диабетом.

Пример 4

Действие тестируемого соединения структурной формулы I на состав тела

Для исследования были выбраны неполовозрелые крысы-самцы линии Wistar с массой тела примерно 55 г (±5 г). Эти крысы были анестезированы эфиром и кастрированы. После 4-х недель введения тестируемых соединений животных забивали, семенные пузырьки, вентральную простату и musculus levator ani тщательно выделяли и взвешивали. Массу тела животных регистрировали в начале и по завершении эксперимента. Увеличение массы семенных пузырьков и вентральной простаты свидетельствует об андрогенной активности, тогда как увеличение массы musculus levator ani считали показателем анаболической активности.

Четырехнедельное введение тестируемого соединения (10 мг/кг per os) не вызвало какого-либо изменения массы тела крыс, в то время как в группах, которым вводили тестостерон (10 мг подкожно два раза в неделю) и тестируемое соединение (35 мг/кг per os), наблюдали значительное возрастание массы тела по сравнению с группой контроля. Результаты исследования представлены в виде гистограммы на Фиг.3.

Тестируемое соединение (10 и 35 мг/кг) не увеличивало массу органов мужской репродуктивной системы, т.е. простаты, семенных пузырьков и penis. Это важный результат, который свидетельствует, что хотя тестируемое соединение обладает анаболической активностью, оно не оказывает никакого андрогенного действия на животных. Также следует отметить, что тестируемое соединение вызвало значительное увеличение массы musculus levator ani.

Неандрогенное действие тестируемого соединения

Также для исключения любой возможности андрогенной активности на увеличение массы тела и мышечной массы измеряли уровни тестостерона в сыворотке крови.

Для исследования были выбраны неполовозрелые крысы-самцы линии Wistar с массой тела примерно 55 г (±5 г). Эти крысы были анестезированы эфиром и кастрированы. После 4-х недель введения тестируемых соединений у крыс забирали кровь методом ретроорбитальной пункции и анализировали сыворотку на содержание тестостерона, которое измеряли с помощью набора для радиоиммунного анализа (РИА).

Важным и интересным моментом, который следует отметить, является то, что не наблюдалось значимого повышения уровней общего тестостерона в сыворотке крови после ежедневного введения тестируемого соединения в дозе 35 мг/кг per os. Результаты исследования представлены в виде гистограммы на Фиг.4.

Пример 5

Клинические испытания для подтверждения эффективности тестируемого соединения

Впоследствии было проведено двойное слепое плацебо-контролируемое исследование на 49 подготовленных волонтерах для оценки безопасности и эффективности тестируемого соединения. Данное двухмесячное исследование проводили путем добавления 500 мг тестируемого соединения, и волонтеры тренировались с отягощениями 4 раза в неделю. В процессе данного исследования оценивали действие тестируемого соединения на состав тела (содержание жира) и силу.

Состав тела:

Плотность тела анализировали посредством биоэлектрического импеданса и гидростатического взвешивания. На основании данных параметров вычисляли массу тела без жира.

Данные, представленные на Фиг.5, позволяют сделать вывод, что в течение восьми недель исследования тестируемый продукт уменьшил содержание жира в организме на 12%. Это значительное уменьшение.

Термин "состав тела" используют для описания процентного содержания костной, жировой и мышечной ткани в организме. Уменьшение жира в организме при неизменной массе тела указывает на увеличение мышечной массы. Тестируемое соединение уменьшает содержание жира в организме, в то же время поддерживая массу тела. Таким образом, тестируемое соединение увеличивает мышечную массу.

Сила:

Поскольку указанный продукт использовали для увеличения мышечной массы, оценивали действие тестируемого соединения на силу волонтеров. Это осуществляли выполнением повторяющихся изотонических упражнений (жим лежа и жим ногами), Увеличение силы определяли на основании веса, который были способны поднять испытуемые при выполнении этих двух упражнений.

Наблюдали значительное увеличение силы, проявившееся в увеличении способности поднимать вес в упражнениях жим лежа и жим ногами. Увеличение составило 100% по сравнению с плацебо в упражнении жим лежа и 80% по сравнению с плацебо в упражнении жим ногами. Указанное увеличение является статистически значимым по сравнению с плацебо и свидетельствует об эффективности тестируемого соединения в отношении увеличения силы. Результаты данного исследования графически представлены на Фиг.6.

Пример 6

Способность тестируемого соединения усиливать захват глюкозы клетками: инсулиноподобное действие

В данном примере исследовали время- и дозозависимый захват дезокси-D-глюкозы, 2-(1-¹⁴C) клетками 3T3-L1, которые предварительно подвергали действию тестируемого соединения.

Клетки 3T3-L1 культивировали (DMEM+FBS) в 24-х луночном планшете, в питательную среду добавляли тестируемое соединение в концентрации 5 мкг/мл и 50 мкг/мл за 10 или 30 минут до исследования захвата глюкозы. Клетки, в питательную среду которых добавляли 100 нМ инсулина, использовали в качестве положительного контроля. Радиоактивность (cpm) измеряли с помощью TopCount (Packard).

В результате данного исследования установлено, что 10-минутное присутствие инсулина в среде повышает захват глюкозы в 1,74 раза. Добавление в питательную среду тестируемого соединения приводило к усиленному захвату глюкозы при концентрации 5 мкг/мл. Данные, полученные в этом исследовании, совпадают с результатом визуализации транслокации GLUT4 в клетках CHO-GLUT4eGFP. Результаты исследования представлены в виде гистограммы на Фиг.7.

Из результатов вышеуказанного исследования представляется очевидной способность тестируемого соединения проявлять инсулиноподобную активность и усиливать захват глюкозы клетками.

Пример 7

Действие тестируемого соединения на уровни сахара крови и массу тела на ранних стадиях диабета, вызванного аллоксаном

Крысам-самцам линии Wistar интраперитонеально вводили аллоксана моногидрат (160 мг/кг) для индуцирования диабета. Через 48 часов после инъекции определяли уровни глюкозы крови, используя наборы для измерения глюкозы. Отбирали животных с уровнями глюкозы крови выше 300 мг на декалитр, их разделили на четыре группы по 6 крыс в каждой.

Группа 1: Контроль без диабета

Группа 2: Контроль с диабетом

Группа 3: Тестируемое соединение (60 мг/кг)

Группа 4: Пиоглитазон (стандарт лекарственной терапии) (5 мг/кг)

Животные получали соответствующие растворы тестируемых веществ в определенной дозе в течение 30 дней. Анализировали уровни сахара крови и массу тела в день, предшествующий введению тестируемых соединений, на 15-й и 30-й день эксперимента.

Уровни сахара крови:

Сыворотку получали центрифугированием крови, полученной ретроорбитальной пункцией, на 7000 об/мин при 4°С в течение 15 минут. Полученную сыворотку собирали для определения уровней сахара крови. Данные по уровням глюкозы крови в разных группах приведены в таблице 1.

Таблица 1
Уровни сахара крови в группах, получавших соединение структурной формулы I, и в других группах
Группа и воздействие	Уровень сахара крови (мг/дл)	Изменение УСК (%)
0 день	15 день	30 день
Контроль без диабета (физ. р-р)	93,17±3,53	103,41±4,0	114,12±3,44	21,5% повышение
Контроль с диабетом (физ. р-р)	361,66±5,11	458,83±5,34	502,1б±5,93	38,84% повышение
Тестируемое соединение, структурная формула I (60 мг/кг)	416,5±14,42	294,5±12,22	187±9,33	55% СНИЖЕНИЕ
Порошок семян пажитника (2 г/кг)	406,6	424,7	404,55	Статистически незначимо
Необработанный спиртовой экстракт пажитника (1 г/кг)	354,5	347,8	361,6	Статистически незначимо
Пиоглитазон (5 мг/кг)	438,66±6,37	376,33±7,29	281±5,92	35,8% СНИЖЕНИЕ

В группе, получавшей тестируемое соединение, на 30-й день наблюдали значительное снижение уровней сахара крови (55% снижение). Группу, получавшую пиоглитазон, использовали в качестве стандартной лекарственной модели. У тестируемого соединения выявили отличный диабетический контроль и способность снижать повышенные уровни сахара крови.

Аллоксан представляет собой органическое соединение, которое широко используют для индуцирования экспериментального диабета у крыс. Аллоксан эффективен из-за своего селективного действия на бета-клетки поджелудочной железы у крыс. Поскольку данное соединение по структуре сходно с глюкозой и поэтому захватывается молекулой GLUT2 в бета-клетках поджелудочной железы крыс. Таким образом, использование аллоксана позволяет оценить защищенность бета-клеток по отношению к данному соединению. Повреждение бета-клеток сопровождается повышением уровней сахара крови. Таким образом, снижение уровней глюкозы крови даже после воздействия аллоксаном является показателем защищенности бета-клеток.

Данный эксперимент отражает способность тестируемого соединения снижать уровни сахара крови даже в присутствии аллоксана, отражая, таким образом, профилактическое действие тестируемого соединения на бета-клетки поджелудочной железы.

Таким образом, результаты вышеуказанного эксперимента позволяют сделать вывод о способности тестируемого соединения снижать уровни сахара крови при диабетическом состоянии и предиабетическом состоянии. Кроме того, тестируемое соединение также обладает профилактическим действием в отношении воздействия аллоксана на бета-клетки поджелудочной железы. Вышесказанное свидетельствует о лечебном потенциале указанного соединения, который может быть использован как при диабетическом, так и при предиабетическом состоянии.

Масса тела:

Средняя масса тела значительно увеличилась у крыс без диабета. Наблюдали значительное уменьшение массы тела в группе с диабетом по сравнению с группой без диабета. В группе, получавшей тестируемое соединение, масса тела в день, предшествующий началу исследования, составляла 185,16 г, а на 30-й день исследования 240,83 г. Результаты данного исследования свидетельствуют об увеличении массы тела у животных, получавших тестируемое соединение. У этих животных также наблюдали лучший диабетический контроль. У животных, получавших тестируемое соединение, наблюдали увеличение массы тела на 29%, что является хорошим результатом по сравнению с уменьшением массы тела на 9% у контрольных животных с диабетом. Данные по процентному изменению массы тела в разных группах приведены в таблице 2.

Таблица 2
Процентное изменение массы тела в группах, получавших соединение структурной формулы I, и в других группах
Группа и воздействие	Масса тела (г)	% Изменения массы тела
0 день	15 день	30 день
Контроль без диабета (физ. р-р)	143,33±4,43	209,5±5,01	223,66±4,95	56% УВЕЛИЧЕНИЕ
Контроль с диабетом (физ. р-р)	166,83±4,88	158±5,52	151,33±4,92	9% УМЕНЬШЕНИЕ
Тестируемое соединение, структурная формула I (60 мг/кг)	185,16±6,53	215,83±6,05	240,83±6,42	29% УВЕЛИЧЕНИЕ
Пиоглитазон (5 мг/кг)	165±5,41	198,5±6,45	207,83±4,49	25% УВЕЛИЧЕНИЕ

Потеря массы тела представляет собой один из клинических признаков диабета и показатель недостаточного диабетического контроля. Предполагают, что указанная потеря массы тела происходит из-за дегенерации адипоцитов и мышечной ткани для восполнения потерянной энергии. Потеря энергии происходит вследствие учащенного диуреза и избыточного превращения гликогена в глюкозу. Борьба с потерей массы тела представляет собой ключевой фактор лечебной тактики при диабете.

Следовательно, тестируемое соединение проявило значительный потенциал в отношении уменьшения потери массы тела, а также в отношении повышения массы тела у животных с диабетом.

Последующее исследование провели для оценки воздействия увеличения массы тела на содержание мышечной ткани животных. Результаты данного исследования свидетельствуют, что увеличение мышечной массы имело место и, таким образом, увеличение массы тела можно объяснить увеличением мышечной массы, а не жира.

Musculus levator ani экспериментальных животных проверяли в отношении действия тестируемых веществ на мышечную массу.

Как видно из графика, представленного на Фиг.8, имеется значительное увеличение мышечной массы у животных, получавших тестируемое соединение. На основании двух вышеуказанных результатов можно сделать вывод, что тестируемое соединение оказывает положительное действие на общий состав тела. Поддержание здорового состава тела представляет собой одну из основных задач при контроле прогрессирования предиабетического состояния и поддержания состояния.

Сочетание контроля глюкозы крови (как показано выше) и поддержания здорового состава тела является очень важной для контроля прогрессирования существующего предиабетического состояния в диабет. Кроме того, и контроль сахара крови, и улучшение состава тела важны также и для контроля диабета. Поэтому указанное тестируемое соединение является весьма подходящим для применения при диабете и предиабете.

Приведенное выше описание является иллюстративным в отношении различных вариантов реализации настоящего изобретения и его нельзя воспринимать как ограничивающее, следует понимать, что специалист в данной отрасли может разработать множество очевидных вариантов настоящего изобретения.