конечные продукты гликирования в качестве действующих веществ

Формула изобретения

1. Косметическая композиция, имеющая препятствующее росту волос действие, содержащая соединение, имеющее химическую структуру в соответствии с формулой 15:

2. Косметическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что она находится в форме мази, таблетки, лосьона, крема, эмульсии, суспензии, молочка, пасты, геля, пены или спрея, в особенности эмульгированной форме.

3. Косметическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере еще один компонент, выбранный из группы эмульгаторов, поверхностно-активных веществ, косметических действующих веществ, витаминов, гидролизатов белков, веществ, формирующих пленку, веществ УФ-фильтров, отдушек, действующих веществ-кондиционеров, загустителей, консервантов, антиоксидантов, красителей, агентов с буферными свойствами, продуктов отложения, раздувающих агентов, восстановителей, действующих веществ против перхоти, средств для искусственного загара, агентов удержания влажности кожи и/или веществ, придающих блеск.

4. Применение соединения, имеющего химическую структуру в

соответствии с формулой 15



в качестве средства, препятствующего росту волос.

5. Применение косметической композиции, содержащей соединение, имеющее химическую структуру в соответствии с формулой 15, в качестве средства, препятствующего росту волос.

6. Применение по п.5, отличающееся тем, что доля соединения во всей композиции составляет от 0,00001 до 15 мас.%, предпочтительно от 0,0001 до 5 мас.%, особо предпочтительно от 0,001 до 1 мас.%.

7. Применение по одному из пп.5 или 6, отличающееся тем, что косметическая композиция находится в форме мази, таблетки, лосьона, крема, эмульсии, суспензии, молочка, пасты, геля, пены или спрея, в особенности эмульгированной форме.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение касается применения косметической рецептуры, содержащей, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ (конечных продуктов гликирования, AGE - Advanced Glycation Endproducts) и/или их предшественников в качестве средства для обработки кожи, в особенности для защиты кожи и/или для ухода за ней.

Будучи самым большим органом человеческого организма, кожа выполняет множество жизненно важных функций. В среднем площадь поверхности кожи составляет у взрослого человека 2 м², она играет огромную роль как орган защиты и орган чувств. Задача этого органа состоит в передаче механических, термических, актиничных, химических и биологических стимулов, а также в отражении их. Кроме того, она осуществляет важную функцию регуляторного органа и "конечного звена" в метаболизме человека.

Поэтому важным компонентом ухода за человеческим телом является косметическая обработка кожи. Цель ухода за кожей в смысле косметики состоит в усилении и восстановлении естественной функции кожи как барьера против воздействия погоды и окружающей среды и против утраты организмом собственных веществ (например, воды, естественных жиров, электролитов), а также в замедлении естественного процесса старения.

Воздействие погоды и окружающей среды, как, например, электромагнитное излучение (ультрафиолетовое и инфракрасное), газы, тяжелые металлы, частицы пыли или сажи, либо же окислительный стресс часто ведут к тому, что биологическая функция кожи страдает.

Поэтому особый интерес представляют действующие косметические вещества, которые обеспечивают уход за кожей, защищают ее от проявления возрастных изменений и способствуют ее обновлению. На рынке в больших количествах и в различных рецептурных формах присутствуют препараты для ухода за кожей и для ее защиты, содержащие целый ряд различных косметических действующих веществ и комплексов действующих веществ.

Тем не менее, как и прежде, имеется потребность в расширении этой палитры (нынешнего технического уровня) новыми косметическими действующими веществами или комплексами действующих веществ. Большой интерес представляют прежде всего такие действующие вещества, которые обеспечивают возможность долговременной защиты кожи и/или лучшего ухода за ней.

В публикации DE 10041482 в связи с этим описаны так называемые КПГ (AGE, Advanced Glycation Endproducts, конечные продукты гликирования) в качестве косметических действующих веществ, предназначенных для запуска и интенсификации механизмов загара человеческой кожи, а также применение одного или нескольких веществ из группы КПГ и/или их предшественников для интенсификации синтеза меланина в коже.

В тексте немецкой публикации DE 10160966 содержится описание средства для окраски волос, содержащей, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ, его синтетических предшественников и/или липофусцинов, а также применение такого средства для окраски волос в целях интенсификации синтеза меланина в корнях волос и отложения меланина в волосах.

Общим для обеих публикаций является то, что для интенсификации синтеза меланина в волосах и/или в коже используют косметические действующие вещества из группы КПГ. Указания на другое или более выраженное биологически значимое воздействие КПГ в обоих документах отсутствуют.

Неожиданно было обнаружено, что соединения из группы КПГ и/или их предшественников можно также применять как средства для обработки кожи, в частности для защиты кожи и/или для ухода за ней.

Поэтому предметом настоящего изобретения является применение косметической рецептуры, содержащей, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ и/или их предшественников, в качестве средства для обработки кожи, в особенности для защиты кожи и/или для ухода за ней.

Еще одним предметом настоящего изобретения является способ воздействия на кожу, в особенности, в целях защиты кожи и/или ухода за ней, при котором на кожу местным образом наносят косметическую рецептуру, применяемую для защиты кожи и/или ухода за ней.

Равным же образом предметом настоящего изобретения является применение косметической рецептуры, содержащей, по меньшей мере, одно соединение из группы конечных продуктов гликирования (КПГ)

- для иного нежели в терапевтических целях повышения уровня энергетического метаболизма, предпочтительно - для повышения скорости синтеза АТФ в клетках кожи.

- для иного нежели в терапевтических целях угнетения активности деления клеток кожи.

- для иного нежели в терапевтических целях угнетения воспалительных реакций кожи.

Также предметом настоящего изобретения является косметическая рецептура, содержащая, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ на основе лизина и/или аргинина и/или их предшественников, причем конечные продукты гликирования (КПГ) на основе лизина и/или аргинина и/или их предшественники получают путем реакции сахаров, предпочтительно глюкозы, лактозы, галактозы и/или маннозы, в особенности, глюкозы и/или лактозы, с аминокислотами лизином и/или аргинином.

В предпочтительной форме исполнения вышеуказанная косметическая рецептура в качестве дополнительного компонента содержит эмульгатор или поверхностно-активное вещество, которое предпочтительно выбирают из группы анионных, катионных, амфотерных и/или неионных ПАВ или эмульгаторов либо же из их смесей.

Особо предпочтительно наличие в косметических рецептурах по меньшей мере еще одного компонента, выбранного из группы косметических действующих веществ, витаминов, гидролизатов белков, веществ, формирующих пленку, веществ-УФ-фильтров, отдушек, действующих веществ-кондиционеров, загустителей, консервантов, антиоксидантов, красителей, агентов с буферными свойствами, продуктов отложения, раздувающих агентов, восстановителей, действующих веществ против перхоти, дубильных веществ, агентов удержания влажности кожи и/или веществ, придающих блеск.

Еще одним предметом настоящего изобретения является способ воздействия на кожу, в особенности в целях защиты кожи и/или ухода за ней, при котором на кожу местным образом наносят вышеуказанную косметическую рецептуру.

Другой предмет настоящего изобретения - это применение, по меньшей мере, одного соединения из группы конечных продуктов гликирования (КПГ) и/или их предшественников для создания косметической рецептуры и/или медикамента

- для повышения уровня энергетического метаболизма, предпочтительно - для повышения скорости синтеза АТФ в клетках кожи.

- для угнетения активности деления клеток кожи.

- для лечения воспалительных реакций кожи.

Под термином "кожа", применяемым в общем смысле, согласно изобретению подразумевают кожу как таковую, слизистую оболочку, а также придатки кожи постольку, поскольку в их состав входят живые клетки, в частности волосяные фолликулы, корни волос, волосяные луковицы, эпителий ногтевого ложа (Lectulus), соединяющийся с вентральной поверхностью ногтевой пластины, а также сальные и потовые железы. В смысле изобретения под употребляемым в общем смысле термином "кожа" подразумевают "человеческую кожу".

Обозначение AGE (КПГ) является сокращением английского термина "Advanced Glycation Endproducts" ("конечные продукты гликирования"). КПГ в смысле настоящего изобретения получают, например, согласно следующему (данному для примера) уравнению реакции:

В смысле настоящего изобретения помимо собственно КПГ выгодны также их предшественники, как, например, продукты реакций Амадори или Майяра (соответствуют формуле (III) в приведенном выше уравнении реакции) либо же так называемые КПРГ (конечные продукты раннего гликирования, EGEs, Early Glycation Endproducts), которые образуются, например, как промежуточные продукты при перегруппировке продуктов реакции Амадори (III) в КПГ (IV).

Термин "предшественники" охватывает также и другие продукты реакции Майяра, в особенности те, которые также могут быть производными продуктов реакции Амадори, как, в частности, мальтол (лариксин, 3-гидрокси-2-метил-4Н-пиран-4-он) и 4-гидрокси-2,5-диметил-3(2Н)-фуранон (фуранеол ®).

Следует подчеркнуть, что термин "предшественники" в смысле настоящего изобретения не подразумевает исходные компоненты конкретной реакции, то есть не прошедшие преобразование вещества.

Целесообразные исходные компоненты (I) несут альдегидную группу (СНО), и их выбирают, например, из группы сахаров (альдозы, например, триозы, тетрозы, пентозы, гексозы и им подобные, как то: глюкоза, галактоза, манноза и т.д.). Целесообразные исходные компоненты (II) содержат свободную аминогруппу, их выбирают, например, из группы аминокислот и группы пептидов с концевыми аминогруппами; особенно целесообразно применять лизин, гидроксилизин, аргинин, триптофан и гистидин. Кроме того, целесообразно, если свободная аминогруппа имеет происхождение в N-конце белков или пептидов, к целесообразным источникам также относятся сфингозин и дигидросфингозин и их гомологи с ацильными остатками различной длины (ненасыщенными).

Предпочтительно, чтобы КПГ согласно изобретению включали в себя, по меньшей мере, одно пятичленное и/или шестичленное кольцо, содержащее азот и/или кислород.

В смысле настоящего изобретения целесообразны, например, производные фурана FFI 1 и фуранон 2, имеющие следующие структурные формулы:

Кроме того, в смысле настоящего изобретения целесообразен так называемый AFGP, который отличается следующей структурной формулой 3:

Помимо этого в смысле настоящего изобретения целесообразны пирралины, которые отличаются следующей структурной формулой 4:

Помимо этого в смысле настоящего изобретения целесообразны пиранопираноны, которые отличаются следующей структурной формулой 5:

Сверх того, в смысле настоящего изобретения целесообразны пирролиноны, которые отличаются следующими структурными формулами:

Согласно изобретению целесообразно, чтобы остаток R в структурных формулах 1, 3 и 4 являлся производным, например, от белков и пептидов; соответственно это предпочтительно остатки пептидов, аминокислот или белков, которые могут быть связаны с атомом азота концевым или боковым атомом.

Кроме того, целесообразно выбирать R среди насыщенных или ненасыщенных, разветвленных или неразветвленных алкиловых групп, имеющих 1-35 атомов углерода.

Кроме того, в смысле настоящего изобретения целесообразен пентозидин 10, который отличается следующей структурной формулой:

Кроме того, в смысле настоящего изобретения особенно целесообразен так называемый А2Е 11, который отличается следующей структурной формулой:

Разумеется, представленные структурные формулы не ограничивают изобретение определенными изомерами веществ согласно изобретению. Напротив, в смысле настоящего изобретения также целесообразно применение и непредставленных изомеров или смесей изомеров.

Кроме того, предпочтительны конечные продукты гликирования (КПГ), получаемые посредством реакции, по меньшей мере, одного соединения из группы сахаров, по меньшей мере, с одним соединением из группы аминокислот, и/или их предшественники, причем предпочтительно, чтобы молярное соотношение сахара и аминокислоты при реакции находилось между 10:1 и 1:1, особо предпочтительно - чтобы оно составляло от 7:1 до 1:1, а в особенности - 5:1 или 4:1.

Другие предпочтительные конечные продукты гликирования (КПГ) и/или их предшественники получают путем преобразования аминокислоты, выбранной из группы, включающей лизин, гидроксилизин, аргинин, триптофан и/или гистидин.

Другие предпочтительные конечные продукты гликирования (КПГ) и/или их предшественники получают путем преобразования альдозы, предпочтительно выбранной из группы, включающей глюкозу, лактозу, галактозу и/или маннозу.

Равным же образом предпочтительны конечные продукты гликирования (КПГ) и/или предшественники на основе лизина и/или аргинина, получаемые реакцией сахаров, предпочтительно - глюкозы, лактозы, галактозы и/или маннозы, в особенности глюкозы и/или лактозы, с аминокислотами лизином и/или аргинином, предпочтительно - при температуре реакции от 15°С до 95°С. Особо предпочтительны продукты преобразования, которые образуются при реакциях в диапазонах температур между 16°С и 35°С, между 36°С и 50°С, между 51°С и 75°С или между 76°С и 95°С, в частности - при 15°С, 20°С, 25°С, 30°С, 35°С, 40°С, 45°С, 50°С, 55°С, 60°С, 65°С, 70°С, 75°С, 80°С, 85°С, 90°С или 95°С.

Кроме того, предпочтительны конечные продукты гликирования (КПГ) и/или предшественники на основе лизина и/или аргинина, получаемые реакцией сахаров, предпочтительно - глюкозы, лактозы, галактозы и/или маннозы, в особенности глюкозы и/или лактозы, с аминокислотами лизином и/или аргинином, причем продолжительность реакции составляет от 0,5 ч до 48 ч. Особо предпочтительны продукты преобразования, которые формируются при продолжительности реакции, находящейся между 0,5 ч и 2 ч, между 1 ч и 4 ч, между 1 ч и 8 ч, между 4 ч и 16 ч и/или между 12 ч и 24 ч, в частности при ее длительности 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч.

В принципе, предпочтительно сочетание любой из вышеуказанных температур реакции с любым из указанных значений длительности реакции.

Крайне предпочтительные условия преобразования - это реакция сахаров, предпочтительно глюкозы, лактозы, галактозы и/или маннозы, в особенности глюкозы и/или лактозы, с аминокислотами лизином и/или аргинином примерно при 15°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 20°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 25°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 30°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 35°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 40°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 45°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 50°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 55°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 60°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 65°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 70°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 75°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 80°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 85°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч, примерно при 90°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч или примерно при 95°С при продолжительности реакции, составляющей примерно 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч или 24 ч.

В отношении продолжительности реакции слово "примерно" означает, что реальная продолжительность реакции может отклоняться от приведенных значений на величину до 20 мин.

В отношении температуры реакции слово "примерно" означает, что реальная температура реакции может отклоняться от приведенного значения на величину до 3°С.

Предпочтительный растворитель для создания КПГ согласно изобретению - это вода, значение рН в которой с помощью смеси фосфатов, применяемой в качестве буфера, доводят до значения в пределах от 3,0 до 10,0, предпочтительно до 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0 или 10,0, в особенности - 7,0.

Предпочтительный способ создания КПГ согласно изобретению - это реакция, по меньшей мере, одного сахара, по меньшей мере, с одной аминокислотой в водном буферном растворе. После этого уменьшают объем растворителя и выделяют продукт, предпочтительно - путем сушки заморозкой.

Кроме того, предпочтительные КПГ на основе лизина и/или их предшественники согласно изобретению - это продукты реакции Майяра между лизином А и сахарами; в качестве примера таких веществ согласно изобретению следует упомянуть N- -фруктозиллизин (фруктозолизин) 12, N- -карбоксиметиллизин (CML) 13, карбоксиэтиллизин (CEL) 14 или мальтозин 15, а также пиридозин 15а, отличающиеся следующими структурными формулами:

Кроме того, предпочтительные КПГ на основе аргинина и/или их предшественники согласно изобретению - это продукты реакции Майяра между аргинином В и сахарами; в качестве примера таких веществ согласно изобретению следует упомянуть орнитиноимидазолинон 16, аргопиримидин 17 , 3-дезоксиглюкозулозу (3-DG) 18 или галактозидлизомальтол 19, отличающиеся следующими структурными формулами:

В смысле настоящего изобретения целесообразно также применение продуктов гликирования лизина и аргинина, таких как, например, CML 20, CEL 21, пирралин 22 , DOLD 23, GOLD 24, MOLD 25, пентозидин 26, дигидроксиимидазолидин 27, Glarg 28, СМА 29, GO-имидазолон 30, MGO-имидазолон 31 , 3-DG-имидазолон 32 или аргопиримидин 33, которые отличаются следующими структурными формулами:

Предпочтительная форма исполнения изобретения - это применение косметической рецептуры согласно изобретению, содержащей соединение или смесь различных соединений из группы КПГ и/или их предшественников в количестве от 0,00001 до 15% масс., предпочтительно - от 0,0001 до 5% масс., особо предпочтительно - от 0,001 до 1% масс. в каждом случае - относительно всего состава.

Потенциал косметического и фармацевтического действия группы КПГ (конечных продуктов гликирования) и/или их предшественников согласно изобретению основан на ряде чрезвычайно благоприятных и неожиданных эффектах этих веществ, более подробное описание каковых эффектов приведено ниже.

АТФ (аденозинтрифосфат) - это вещество, служащее универсальной формой накопления химической энергии в клетках. При отщеплении дистальной фосфатной группы образуются АДФ и P_i (неорганический фосфат-ион). Эта реакция весьма экзотермична, т.е. сопровождается высвобождением энергии. Синтез АТФ в клетках осуществляется при расщеплении жиров, углеводов и белков с их окислением. В клетках кожи и, соответственно, в биологически активных клетках волосяных фолликулов АТФ служит поставщиком энергии для процессов биосинтеза и транспорта. Эти процессы эндотермичны, т.е. их прохождение возможно только при поступлении энергии. Соответственно, для поддержания оптимального уровня метаболизма, а также состояния клеточных структур и их обновления клетки нуждаются в достаточном уровне обеспечения АТФ.

Например, клеткам сосочкового слоя дермы АТФ необходим для синтеза факторов роста и, таким образом, для управления жизненным циклом волоса. С синтезом АТФ также тесно связаны пролиферация и дифференцировка кератиноцитов волосяного стержня, поскольку обязательной предпосылкой обоих процессов является биосинтез специфичных белков. Если некоторый продукт может повысить скорость синтеза АТФ в значимых для волос клетках, то клетки получают больше энергии для поддержания метаболических процессов, а также для сохранения и обновления клеточных структур, например, при восстановлении волос или образовании их заново.

Поэтому обязательным условием здоровья кожи и силы и жизнеспособности волос является достаточное снабжение кожи АТФ.

В рамках настоящего изобретения установили, что благодаря применению состава, содержащего, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ и/или их предшественников, можно повысить интенсивность энергетического метаболизма в клетке кожи, в особенности скорость синтеза АТФ (см. пример 3). Таким образом можно гарантировать или улучшить энергообеспечение клеток, в частности, поврежденных воздействием внешней среды или ослабленных в силу возрастных изменений, благодаря чему добиваются укрепления или повышения жизненной активности биологически активных клеток (их витализации).

Поэтому предпочтительная форма исполнения изобретения - это применение косметической рецептуры, содержащей, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ и/или их предшественников

- для витализации и/или ревитализации кожи,

- для ускорения регенерации кожи, подвергшейся воздействию стресса, в особенности - стресса, обусловленного воздействием ультрафиолета,

- для обработки кожи зрелого возраста и/или для замедления старения кожи.

Также предметом настоящего изобретения является применение косметической рецептуры, содержащей, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ, для не терапевтического повышения интенсивности энергетического метаболизма в клетках кожи, предпочтительно - для повышения скорости синтеза АТФ.

Под термином "клетки кожи" в рамках настоящего изобретения подразумевают все клетки, которые являются составной частью человеческой кожи или кожи животных как таковой, слизистой оболочки, а также придатков кожи постольку, поскольку в их состав входят живые клетки, в частности волосяных фолликулов, корней волос, волосяных луковиц, эпителия ногтевого ложа (Lectulus), соединяющегося с вентральной поверхностью ногтевой пластины, а также сальных и потовых желез.

Предпочтительно под понятием "клетки кожи" подразумевают органотипические клеточные культуры, например описанные в европейском патенте 1455854 реконструированные дермальные сосочки.

В рамках настоящего изобретения также установили, что благодаря применению рецептуры, содержащей по меньшей мере одно соединение из группы КПГ и/или их предшественников, можно добиться эффекта угнетения пролиферации (см. пример 4). Вещества, оказывающие такой эффект, желательны тогда, когда нарушена регулировка деления клеток. Применение их возможно (но не ограничено) в лечении опухолей, в противодействии излишнему росту волос или их утолщению, при нарушении гомеостаза эпидермиса или при избыточном иммунном ответе.

Благодаря применению рецептуры, содержащей, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ и/или их предшественников, можно также снизить высвобождение факторов роста HGF (Hepatocyte Growth Factor - фактор роста гепатоцитов) и KGF (Keratinocyte Growth Factor - фактор роста кератиноцитов) в клетках сосочкового слоя дермы (см. пример 6). Факторы роста HGF и KGF важны в регулировке жизненного цикла волос. В тех случаях, когда желательно снизить интенсивность роста волос или уменьшить толщину волос, большое значение имеют вещества, оказывающие отрицательное регуляторное воздействие на эти факторы.

Поэтому предпочтительная форма исполнения изобретения - это применение косметической рецептуры, содержащей, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ и/или их предшественников для снижения оволосения в терапевтических и иных целях и/или для снижения толщины волос, предпочтительно - для снижения интенсивности роста волос и/или уменьшения толщины волос в косметических (не терапевтических) целях.

Также предметом настоящего изобретения является применение косметической рецептуры, содержащей, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ, для не терапевтического ингибирования интенсивности деления клеток кожи, предпочтительно - фибробластов.

В контексте настоящего изобретения под фибробластами подразумевают встречающиеся в естественных условиях и находящиеся прежде всего в дерме фибробласты, генетически модифицированные фибробласты либо же фибробласты, имеющие происхождение в спонтанных мутациях, или их предшественники. Фибробласты могут быть животного или человеческого происхождения.

Также предмет настоящего изобретения - это применение, по меньшей мере, одного соединения из группы КПГ и/или их предшественников для создания медикамента, имеющего целью ингибирование деления кожных клеток, предпочтительно - фибробластов.

В рамках настоящего изобретения также установили, что составы, содержащие, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ и/или их предшественников, обладают противовоспалительным действием, а в частности - обеспечивают снижение базового уровня выделения цитокина IL-8 (см. пример 5).

Воспалительные кожные реакции могут иметь различную природу. Помимо нарушения регуляции, которое, как считается, лежит в основе псориаза или нейродермита, причиной проявления типичных признаков воспаления, как то: покраснения, зуда и боли, часто являются внешние патогенные факторы. Основные молекулы, управляющие этими реакциями, - это цитокины. Эти низкомолекулярные белки участвуют в сигнальном каскаде воспалительных реакций. Центральную роль в этом контексте играет способствующий развитию воспаления цитокин IL-8, исполняющий множество задач. Вещества, снижающие высвобождение белка IL-8, как правило, снижают также проявления воспалительной реакции и, соответственно, способствуют достижению кожей состояния равновесия (ее "успокоению").

Соответственно, предпочтительная форма исполнения изобретения - это применение косметической рецептуры, содержащей, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ и/или их предшественников, для успокоения кожи и/или иного, нежели терапевтическое, лечения раздражения кожи, воспалительных реакций кожи и/или сухости кожи.

Предметом настоящего изобретения также является применение косметической рецептуры, содержащей, по меньшей мере, одно соединение из группы КПГ (конечных продуктов гликирования), для иного, нежели терапевтическое, торможения воспалительных реакций кожи, предпочтительно - для снижения базового уровня высвобождения цитокина IL-8 в кератиноцитах.

Кроме того, предмет настоящего изобретения - это применение по меньшей мере одного соединения из группы КПГ и/или их предшественников для создания медикамента, предназначенного для лечения воспалительных реакций кожи, предпочтительно - для снижения базового уровня высвобождения цитокина IL-8 в кератиноцитах.

В контексте настоящего изобретения под кератиноцитами подразумевают встречающиеся в естественных условиях и находящиеся прежде всего в дерме кератиноциты, генетически модифицированные кератиноциты либо же кератиноциты, имеющие происхождение в спонтанных мутациях, или их предшественники. Кератиноциты могут быть животного или человеческого происхождения.

В смысле настоящего изобретения под воспалительными реакциями кожи подразумевают, например, такие физиологические процессы, как сухость кожи, угревая сыпь, раздражения кожи и/или патологические процессы, как то: аллергии, псориаз, нейродермит или местное выпадение волос (alopecia areata), причем эти примеры не ограничивают список.

Ввиду широкого потенциала действия КПГ и/или их предшественников, применение рецептур согласно изобретению оказывает положительный эффект на кожу. Благодаря интенсификации энергетического метаболизма, в особенности скорости синтеза АТФ, а также угнетению воспалительных реакций и активности клеточного деления удается обеспечить надежную защиту кожи и/или улучшить уход за ней.

Дальнейшие биологические тесты в то же время показывают, что КПГ и/или их предшественники согласно изобретению, как правило, не оказывают побочного повреждающего воздействия на клетки, предпочтительно - не проявляют эффекта повреждения мембран в коже или в клетках кожи, предпочтительно - в сосочковых клетках дермы (см. пример 2). Напротив, исследования жизненной активности клеток кожи, предпочтительно - жизненной активности культур фибробластов, показывают, что применение рецептур, содержащих по меньшей мере одно соединение из группы КПГ и/или их предшественников, вызывает эффект активации клеток. Вредоносного воздействия веществ на клетки, как правило, не наблюдали (см. пример 1).

Еще одна предпочтительная форма исполнения - это применение косметической рецептуры согласно изобретению, которая содержит, по меньшей мере, еще один компонент, выбранный из группы эмульгаторов или поверхностно-активных веществ, действующих веществ, витаминов, гидролизатов белков, веществ, формирующих пленку, веществ УФ-фильтров, отдушек, действующих веществ-кондиционеров, загустителей, консервантов, антиоксидантов, красителей, агентов с буферными свойствами, продуктов отложения, раздувающих агентов, восстановителей, действующих веществ против перхоти, дубильных веществ, агентов удержания влажности кожи и/или веществ, придающих блеск.

На границе раздела фаз эмульгаторы вызывают формирование стабильных в воде или масле адсорбированных слоев, предотвращающих коалесценцию диспергированных капель и стабилизирующих, таким образом, эмульсию. Поэтому молекулы эмульгаторов, как и ПАВ, состоят из гидрофобной и гидрофильной части. Гидрофильные эмульгаторы предпочтительно формируют эмульсии типа "масло в воде", а гидрофобные - предпочтительно эмульсии типа "вода в масле". Описания эмульсий типа "вода в масле", стабилизированных без гидрофильных эмульгаторов, изложены в публикациях немецких патентов DE 19816665 А1 и DE 19801593 А1. Под эмульсией подразумевают распределение капель одной жидкости в другой жидкости (дисперсию), происходящее с затратами энергии на создание стабилизирующих фазовых разделов с участием ПАВ. При этом выбор эмульгирующих ПАВ или эмульгаторов определяется подлежащими диспергированию веществами и конкретной внешней фазой, а также размером частиц эмульсии.

Применимые согласно изобретению эмульгаторы - это, например,

- продукты присоединения 4-30 моль этиленоксида и/или от 0 до 5 моль пропиленоксида к линейным жирным спиртам, имеющим от 8 до 22 атомов углерода, к жирным кислотам с 8-22 атомами углерода и к алкилфенолам с 8-15 атомами углерода в алкильной группе,

- моно- и диэфиры жирных кислот с 12-30 атомами углерода и продуктов присоединения 1-30 молей этиленоксида к полиолам с 3-6 атомами углерода, в особенности к глицерину,

- продукты присоединения этиленоксида и полиглицерина к метилглюкозидным эфирам жирных кислот, алканоламидам и глюкамидам жирных кислот,

- алкилмоногликозиды и алкилолигогликозиды с 8-22 атомами углерода и их этоксилированные аналоги, причем предпочтительны степени олигомеризации от 1,1 до 5, в особенности - от 1,2 до 2,0, и глюкоза в качестве сахарного компонента,

- смеси алкил-(олиго)-глюкозидов и жирных спиртов, например представленный на рынке продукт Montanov^®68,

- продукты присоединения 5-60 моль этиленоксида к касторовому маслу и отвержденному касторовому маслу,

- частичные эфиры полиолов, имеющих от 3 до 6 атомов углерода, с насыщенными жирными кислотами с 8-22 атомами углерода,

- стеролы (стерины). Под стеролами подразумевают группу стероидов, которые несут гидроксильную группу на третьем атоме углерода стероидного каркаса и которые выделяют как из животных тканей (зоостеролы), так и из растительных жиров (фитостеролы). Примеры зоостеролов - это холестерол и ланостерол. Примеры надлежащих фитостеролов - это бета-ситостерол, стигмастерол, кампестерол и эргостерол. Из грибов и дрожжей также выделяют стеролы, так называемые микостерилы.

- фосфолипиды, прежде всего фосфолипиды глюкозы, которые получают, например, в виде лецитинов или фосфатидилхолинов из яичного желтка или семян растений (например, соевых бобов),

- эфиры жирных кислот с сахарами и сахарными спиртами, например, сорбит,

- полиглицерины и производные полиглицеринов, предпочтительно полиглицерил-2-диполигидроксистеарат (коммерческий продукт Dehymuls ^® PGPH) и полиглицерил-3-диизостеарат (коммерческий продукт Lameform^® TGI),

- линейные и разветвленные жирные кислоты с 8-30 атомами углерода и их натриевые, калиевые, аммониевые, кальциевые, магниевые и цинковые соли.

Средства согласно изобретению содержат эмульгаторы предпочтительно в количествах 0,1-25% масс., в частности 0,5-15% масс., от общей массы средства.

В особо предпочтительной форме исполнения в их состав входит, по меньшей мере, один неионогенный эмульгатор с величиной гидрофильно-липофильного баланса (HLB) от 8 до 18, согласно определениям HLB, приведенным в Römpp-Lexikon Chemie (Eds. J. Falbe, M.Regitz), 10. Auflage, Georg Thieme Verlag Stuttgart, New York, (1997), стр.1764. Подобные пригодные к использованию эмульгаторы - это, например, соединения с общей формулой R ¹-О-R², в которой R¹ - это первичная линейная алкильная, алкенильная или ацильная группа с 20-30 атомами углерода, а R² - водород, группа с формулой -(C _nH_2nO)_x-Н, где х=1 или 2, а n=2-4, либо же полигидроксиалкильная группа с 4-6 атомами углерода и 2-5 гидроксильными группами. Особо предпочтительно применять в качестве эмульгатора с формулой R¹-О-R² бехеновое или эруциловое производное, в котором R¹ представляет собой линейную алкильную, алкенильную или ацильную группу с 22 атомами углерода, замещенную в концевом положении.

Прочие пригодные к применению и предпочтительные эмульгаторы со значением HLB 8 и ниже - это продукты присоединения 1 или 2 моль этиленоксида или пропиленоксида к бехениловому спирту, эруциловому спирту, арахидиловому спирту либо же к бехеновой кислоте или эруковой кислоте. Предпочтительно также применение моноэфиров жирных кислот, имеющих 16-30 атомов углерода, и таких полиолов, как, например, пентаэритрит, триметилолпропан, диглицерин, сорбит, глюкоза или метилглюкоза. Примеры таких продуктов - это, например, сорбитан-монобехенат или пентаэритрит-моноэрукат.

В другой, также особо предпочтительной форме исполнения содержится, по меньшей мере, один ионный эмульгатор, выбранный из анионных, цвиттерионных, амфолитических и катионных эмульгаторов. Предпочтительные анионные эмульгаторы - это алкилсульфаты, алкилполигликольэфирсульфаты и соли эфиркарбоновых кислот с 10-18 атомами углерода в алкильной группе, имеющие до 12 гликольэфирных групп на молекулу, и моно- и диалкилэфиры сульфоянтарной кислоты с 8-18 атомами углерода в алкильной группе и алкилполиоксиэтилэфиры сульфоянтарной кислоты с 8-18 атомами углерода в алкильной группе и 1-6 оксиэтильными группами, моноглицеридсульфаты, алкил- и алкенилэфирфосфаты, а также конденсаты белков с жирными кислотами. Молекулы цвиттерионных эмульгаторов несут, по меньшей мере, одну квартернизованную аммониевую группу и, по меньшей мере, одну группу -COO^- - или В особенности пригодные цвиттерионные эмульгаторы - это так называемые бетаины, как, например, N-алкил-N,N-диметиламмоний-глицинаты, N-ацил-аминопропил-N,N-диметиламмоний-глицинаты и 2-алкил-3-карбоксиметил-3-гидроксиэтил-имидазолины, в каждом случае с 8-18 атомами углерода в ацильной или алкильной группе, а также кокосациламиноэтилгидроксиэтилкарбоксиметилглицинат. Амфолитические эмульгаторы, помимо алкильной или ацильной группы с 8-24 атомами углерода, содержат в своей молекуле, по меньшей мере, одну свободную аминогруппу и, по меньшей мере, одну группу -СООН- или -SO₃H и могут формировать внутренние соли. Примеры надлежащих амфолитических эмульгаторов - это N-алкилглицины, N-алкилпропионовые кислоты, N-алкиламиномасляные кислоты, N-алкилимидодипропионовые кислоты, N-гидроксиэтил-N-алкиламидопропилглицины, N-алкилтакрины, N-алкилсаркозины, 2-алкил-аминопропионовые кислоты и алкиламиноуксусные кислоты в каждом случае примерно с 8-24 атомами углерода в алкильной группе.

Количественное содержание ионных эмульгаторов составляет от 0,01 до 5% масс., предпочтительно - от 0,05 до 3% масс., а особо предпочтительно - от 0,1 до 1% масс., относительно всей массы средства.

Кроме того, рецептуры согласно изобретению могут содержать пенящиеся неионные, цвиттерионные, анионные и катионные поверхностно-активные вещества (ПАВ).

Примеры неионных ПАВ - это

- алкоксилированные алкиловые эфиры жирных кислот с формулой R¹CO-(OCH ₂CHR²)_xOR³, в которой R¹CO означает линейный или разветвленный, насыщенный и/или ненасыщенный ацильный остаток с 6-22 атомами углерода, R² означает водород или метил, R³ означает линейные или разветвленные алкиловые остатки с 1-4 атомами углерода, а x - числа от 1 до 20,

- продукты присоединения этиленоксида к алканоламидам жирных кислот и жирным аминам,

- N-алкилглюкамиды жирных кислот,

- N-оксиды алкиламинов с 8-22 атомами углерода,

- алкилполигликозиды, соответствующие общей формуле RO-(Z) _x, причем R означает алкильную группу с 8-16 атомами углерода, Z - сахар, а x - количество сахарных мономеров. Алкилполигликозиды, пригодные к использованию согласно изобретению, могут содержать только один определенный алкильный остаток R. Обычно, однако, эти соединения синтезируют, используя натуральные жиры и масла или минеральные масла. В этом случае роль алкильных остатков R играют смеси, соответствующие исходным соединениям или конкретному способу переработки этих соединений. Особо предпочтительны такие алкилполигликозиды, у которых R состоит в основном из алкильных групп с 8 и с 10 атомами углерода, в основном из алкильных групп с 12 и с 14 атомами углерода, в основном из алкильных групп с 8-16 атомами углерода или в основном из алкильных групп с 12-16 атомами углерода.

В качестве сахарного элемента Z можно использовать любые моносахариды или олигосахариды. Обычно применяют сахара с 5 или 6 атомами углерода, а также соответствующие олигосахариды; это, например, глюкоза, фруктоза, галактоза, арабиноза, рибоза, ксилоза, ликсоза, аллоза, альтроза, манноза, гулоза, идоза, талоза и сахароза. Предпочтительные сахарные элементы - это глюкоза, фруктоза, галактоза, арабиноза и сахароза; особо предпочтительна глюкоза. В среднем применимые согласно изобретению алкилполигликозиды содержат от 1,1 до 5, предпочтительно - от 1,1 до 2,0, особо предпочтительно 1,1 до 1,8 сахарных мономеров. Алкоксилированные гомологи указанных алкилполигликозидов также могут быть использованы согласно изобретению. В среднем эти гомологи могут содержать до 10 мономеров этиленоксида и (или) пропиленоксида на один алкилгликозид.

Под цвиттерионными ПАВ подразумевают такие поверхностно-активные соединения, молекулы которых несут по меньшей мере одну четвертичную аммониевую группу и как минимум одну группу -СОО^(-)- или В особенности пригодные цвиттерионные поверхностно-активные вещества - это так называемые бетаины, как, например, N-алкил-N,N-диметиламмоний-глицинаты, например кокосалкилдиметиламмоний-глицинат, N-ацил-аминопропил-N,N-диметиламмоний-глицинаты, например кокосациламинопропил-диметиламмоний-глицинат, и 2-алкил-3-карбоксиметил-3-гидроксиэтил-имидазолины в каждом случае с 8-18 атомами углерода в ацильной или алкильной группе, а также кокосациламиноэтилгидроксиэтилкарбоксиметилглицинат. Предпочтительное цвиттерионное ПАВ - это производное амида жирной кислоты, известное под обозначением INCI кокамидопропил бетаин.

В качестве анионных ПАВ в рецептурах согласно изобретению можно применять все пригодные к использованию на человеческом теле анионные поверхностно-активные вещества. Они отличаются анионной группой, как, например, карбоксилатной, сульфатной, сульфонатной или фосфатной группой, придающей растворимость в воде, и липофильной алкильной группой примерно с 8-30 атомами углерода. Дополнительно молекула может содержать гликольэфирные или полигликольэфирные группы, группы простых или сложных эфиров, амидные, а также гидроксильные группы. Примеры пригодных к использованию пенящихся анионных ПАВ - это, в каждом случае в форме натриевой, калиевой и аммониевой соли, а также моно-, ди- и триалканоламмониевой соли с 2-4 атомами углерода в алканольной группе

- ацилглутаматы с формулой (В-I)

в которой R¹CO означает линейный или разветвленный ацильный остаток с 6-22 атомами углерода и 0, 1, 2 или 3 двойными связями, а Х означает водород, щелочной и/или щелочноземельный металл, аммоний, алкиламмоний, алканоламмоний или глюкаммоний, например ацилглутаматы, являющиеся производными жирных кислот с 6-22, предпочтительно - с 12-18 атомами углерода, как, например, жирных кислот кокоса с 12/14 или 12/18 атомами углерода, лауриновой кислоты, миристиновой кислоты, пальмитиновой и/или стеариновой кислоты, в частности натрий-N-кокоил-глутамат и натрий-N-стеароил-L-глутамат,

- эфиры гидроксизамещенной дикарбоновой или трикарбоновой кислоты с общей формулой (B-II),

где Х - это Н или группа CH₂ COOR, Y - это Н или группа -ОН, с тем условием, что в том случае, когда Y=H, X=-CH₂COOR, R, R¹ и R² независимо друг от друга означают атом водорода, катион щелочного или щелочноземельного металла, аммониевую группу, катион аммоний-органического основания или остаток Z, происходящий от полигидроксилированного органического соединения, выбранного из группы, которую образуют этерифицированные алкилполисахариды с 6-18 атомами углерода в алкиловом остатке и 1-6 мономерами сахарида и/или этерифицированные алифатические гидроксиалкилполиолы с 6-16 атомами углерода и с 2-16 гидроксильными остатками, с тем условием, что по меньшей мере одна из групп R, R¹ или R² представляет собой остаток Z,

- сложные эфиры соли сульфоянтарной кислоты с общей формулой (В-III),

в которой R¹ и R² независимо друг от друга означают атом водорода, катион щелочного или щелочноземельного металла, аммониевую группу, катион аммоний-органического основания или остаток Z, происходящий от полигидроксилированного органического соединения, выбранного из группы, которую образуют этерифицированные алкилполисахариды с 6-18 атомами углерода в алкиловом остатке и 1-6 мономерами сахарида и/или этерифицированные алифатические гидроксиалкилполиолы с 6-16 атомами углерода и с 2-16 гидроксильными остатками, с тем условием, что, по меньшей мере, одна из групп R, R¹ или R² представляет собой остаток Z,

- моно- и диалкилэфиры сульфоянтарной кислоты с 8-24 атомами углерода в алкильной группе и алкилполиоксиэтилэфиры сульфоянтарной кислоты с 8-24 атомами углерода в алкильной группе и 1-6 этоксигруппами,

- сложные эфиры винной и лимонной кислот со спиртами, которые представляют собой продукты отложения примерно 2-15 молекул этиленоксида и (или) пропиленоксида на жирных спиртах с 8-22 атомами углерода,

- линейные и разветвленные жирные кислоты с 8-30 атомами углерода (мыла),

- эфиркарбоновые кислоты с формулой R-O-(CH ₂-CH₂O)_x-CH₂-COOH, в которой R - это линейная алкильная группа с 8-30 атомами углерода, а х=0 или 1-16,

- ацилсаркозинаты с линейным или разветвленным ацильным остатком с 6-22 атомами углерода и 0, 1, 2 или 3 двойными связями,

- ацилтаураты с линейным или разветвленным ацильным остатком с 6-22 атомами углерода и 0, 1, 2 или 3 двойными связями,

- ацилизетионаты с линейным или разветвленным ацильным остатком с 6-22 атомами углерода и 0, 1, 2 или 3 двойными связями,

- линейные алкансульфонаты с 8-24 атомами углерода,

- линейные альфа-олефинсульфонаты с 8-24 атомами углерода,

- метиловые эфиры альфа-сульфожирных кислот с 8-30 атомами углерода,

- алкилсульфаты и алкилполигликольэфирсульфаты формулы R-O(CH₂-CH₂O)_z-SO ₃X, в которой R предпочтительно представляет собой линейную алкильную группу, имеющую от 8 до 30 атомов углерода, особо предпочтительно - 8-18 атомов углерода, z=0 или от 1 до 12, особо предпочтительно 3, а Х - это ион натрия, калия, магния, цинка, аммония или моноалканоламмония, диалканоламмония или триалканоламмония с 2-4 атомами углерода в алканольной группе, причем особо предпочтительный пример - это кокоилэфирсульфат, имеющий степень этоксилирования z=3,

- смеси поверхностно-активных гидроксисульфонатов согласно немецкой заявке DE-A-3725030,

- сульфатированные гидроксиалкилполиэтилен- и (или) гидроксиалкиленпропиленгликольэфиры согласно немецкой заявке DE-A-3723354,

- сульфонаты ненасыщенных жирных кислот с 8-24 атомами углерода и 1-6 двойными связями согласно немецкой заявке DE-A-3926344,

- алкилэфирфосфаты и/или алкенилэфирфосфаты с формулой (B-IV),

- в которой R¹ предпочтительно означает алифатический углеводородный остаток с 8-30 атомами углерода, R² означает водород, остаток (CH₂ CH₂O)_nR¹ или X, n означает числа от 1 до 10, а Х означает водород, щелочной или щелочноземельный металл или NR³R⁴R⁵R⁶ , где R³-R⁶ независимо друг от друга представляют собой углеводородный остаток с 1-4 атомами углерода,

- сульфатированные сложные эфиры жирных кислот с алкиленгликолями, имеющие общую формулу R⁷CO(AlkO)_nSO ₃M, в которой R⁷CO- означает линейный или разветвленный, алифатический, насыщенный и/или ненасыщенный ацильный остаток с 6-22 атомами углерода, Alk означает СН₂СН₂ , СНСН₃СН₂ и (или) СН₂СНСН ₃, n означает числа от 0,5 до 5, а М представляет собой катион, как это описано в немецкой публикации DE-OS 19736906.5,

- моноглицерид-сульфаты и моноглицерид-эфирсульфаты формулы (B-V),

- в которой R⁸CO означает линейный или разветвленный ацильный остаток с 6-22 атомами углерода, x, у и z в сумме дают 0 или числа от 1 до 30, предпочтительно - от 2 до 10, а Х представляет собой щелочной или щелочноземельный металл. Типичные примеры надлежащих моноглицеридсульфатов и моноглицеридэфирсульфатов в смысле изобретения - это продукты реакции моноглицерида лауриновой кислоты, моноглицерида кокосовой жирной кислоты, моноглицерида пальмитиновой, стеариновой, масляной кислот и жирных кислот сала, а также этиленоксидных их аддуктов с триоксидом серы или хлорсульфоновой кислотой в форме натриевых солей. Предпочтительно применяют моноглицеридсульфаты с формулой (VI), где R⁸CO означает линейный ацильный остаток с 8-18 атомами углерода.

Косметическое действующее вещество, доля которого относительно всего количества рецептуры составляет 0,0001-38% масс., предпочтительно выбирают из следующих продуктов или их смесей:

- действующих веществ, снижающих потоотделение,

- дезодорирующих действующих веществ,

- мономеров, олигомеров и полимеров аминокислот, N-С₂-С₂₄-ацил-аминокислот, эфиров и/или физиологически приемлемых солей этих веществ,

- олигонуклеотидов ДНК или РНК,

- естественных соединений бетаинов,

- -гидроксикарбоновых кислот, -кетокарбоновых кислот, -гидроксикарбоновых кислот и их эфиров, лактонов или солей,

- флавоноидов или богатых флавоноидами растительных экстрактов,

- изофлавоноидов или богатых изофлавоноидами растительных экстрактов,

- полифенолов или богатых полифенолами растительных экстрактов,

- убихинона и убихинола, а также их производных,

- силимарина,

- эктоина,

- репеллентов,

- автозагарных действующих веществ,

- действующих веществ - осветлителей кожи,

- действующих веществ, оказывающих успокаивающее воздействие на кожу,

- увлажняющих действующих веществ,

- действующих веществ, регулирующих секрецию сальных желез.

В предпочтительной форме исполнения составы согласно изобретению содержат, по меньшей мере, один витамин, провитамин или соединение, называемое предшественником витаминов, из групп витаминов А, В, С, Е, Н и K и эфиров вышеупомянутых веществ.

К группе веществ, обозначаемых как витамин А, принадлежат ретинол (витамин A₁), а также 3,4-дидегидроретинол (витамин А₂). -каротин - это провитамин ретинола. В качестве компонентов витамина А следует учитывать согласно изобретению, например, кислоту витамина А (третиноиновую кислоту) и ее эфиры, альдегид витамина А и спирт витамина А, а также его сложные эфиры, как то: ретинилпальмитат и ретинилацетат. Составы согласно изобретению предпочтительно содержат компоненты витамина А в количествах 0,05-1% масс. от общей массы рецептуры.

К группе витамина В или к комплексу витамина В относятся в том числе

- витамин B₁, тривиальное наименование - "тиамин", химическое обозначение: 3-[(4'-амино-2'-метил-5'-пиримидинил)-метил]-5-(2-гидроксиэтил)-4-метилтиазолия хлорид. Тиамина гидрохлорид предпочтительно применяют в количествах от 0,05 до 1% масс. от общей массы средства,

- витамин B₂, тривиальное наименование - "рибофлавин", химическое обозначение: 7,8-диметил-10-(1-D-рибитил)-бензо[g]птеридин-2,4(3H,10H)-дион. Рибофлавин или его производные предпочтительно применяют в количествах от 0,05 до 1% масс. от общей массы средства,

- витамин В₃. Это обозначение относится к соединениям "никотиновая кислота" и "амид никотиновой кислоты" (ниацин-амид). Согласно изобретению предпочтителен амид никотиновой кислоты, который содержится в средствах согласно изобретению предпочтительно в количествах от 0,05 до 1% масс. от общего веса средства,

- витамин B₆, причем это наименование относится не к одному веществу, а к производным 6-гидроксиметил-2-метилпиридин-3-ола, известным под тривиальными наименованиями пиридоксин, пиридоксамин и пиридоксаль. Витамин В₆ содержится в средствах согласно изобретению предпочтительно в количествах от 0,0001 до 1,0% масс., в особенности в количествах от 0,001 до 0,01% масс.,

- витамин B₇ (биотин), который также называют витамином Н или "витамином кожи". Биотин представляет собой (3aS,4S,6aR)-2-оксогексагидротиенол[3,4-d]-имидазол-4-валериановую кислоту. Биотин содержится в средствах согласно изобретению предпочтительно в количествах от 0,0001 до 1,0% масс., в особенности в количествах от 0,001 до 0,01% масс.

Витамин С (аскорбиновую кислоту) предпочтительно применяют в количествах от 0,1 до 3% масс. от общей массы состава. Может быть предпочтительно использование производных: аскорбилпальмитата, аскорбилстеарата, аскорбилдипальмитата, аскорбилацетата, аскорбилфосфата магния, аскорбилфосфата натрия, аскорбатов натрия и магния, динатрия аскорбилфосфата и аскорбилсульфата, аскорбилтокоферилфосфата калия, аскорбата хитозана или аскорбилглюкозида. Также предпочтительно может быть применение в сочетании с токоферолами.

К группе витамина Е относятся токоферол, в особенности -токоферол, и его производные. Предпочтительные производные - это, в частности, эфиры, как то: токоферилацетат, токоферилникотинат, токоферилсукцинат, токофериллинолеат, токоферилолеат, токоферет-5, токоферет-10, токоферет-12, токоферет-18, токоферет-50 и токоферсолан. Токоферол и его производные предпочтительно присутствуют в количествах 0,05-1% масс. от общей массы рецептуры.

Под витамином F обычно подразумевают незаменимые жирные кислоты, в частности линолевую, линоленовую и арахидоновую кислоты.

Витамин Н - это другое обозначение биотина или витамина В ₇ (см. выше). К жирорастворимым витаминам группы витамина K, в основе которых лежит структура 2-метил-1,4-нафтохинона, относятся филлохинон (витамин K₁), фарнохинон или менахинон-7 (витамин K₂) и менадион (витамин K ₃). Содержание витамина K предпочтительно составляет от 0,0001 до 1,0% масс., в особенности - от 0,01 до 0,5% масс., в каждом случае - относительно всего состава.

Особо предпочтительны согласно изобретению пальмитат витамина А (ретинилпальмитат), пантенол, амид никотиновой кислоты, пиридоксин, пиридоксамин, пиридоксаль, биотин, аскорбилпальмитат, аскорбилацетат, аскорбилфосфат магния, аскорбилфосфат натрия, аскорбат натрия и аскорбат магния, а также эфиры токоферола, в особенности - токоферилацетат.

Целесообразно применять косметическую рецептуру, которая имеет форму мази, таблетки, лосьона, крема, эмульсии, суспензии, молочка, пасты, геля, пены или спрея, в особенности - эмульгированную форму.

Также предпочтительно применение косметической рецептуры согласно изобретению в форме шампуня, средства для ополаскивания волос, геля для волос, воды для промывания волос, лечебного средства для волос, крема для волос, лосьона для волос, спрея и настойки для волос.

Примеры исполнения

а) Получение КПГ путем реакции сахаров с аминокислотами

Общая рабочая методика AAV1

К буферному раствору (рН 7,0) добавляют сахар (40 ммоль) и аминокислоту (8-10 ммоль) и перемешивают реакционную смесь при указанной температуре в трехгорлой колбе с обратным холодильником в течение 4 часов. Половину растворителя удаляют в ротационном испарителе, а затем осуществляют выделение продукта путем сушки заморозкой. Во всех выделенных продуктах не удалось обнаружить свободные, не прореагировавшие аминокислоты.

А-1 Реакция L-лизина с лактозой (1:5)

Смесь:

D-(+)-лактоза m=13,7 г

М=342,3 г/моль (40 ммоль)

CAS: 200-559-2; Riedel-de Haen, моногидрат

(высушенный над силикагелем с кобальтовым окрашиванием при 70°С в вакуумном сушильном шкафу)

L-лизин m=1,17 г

S-2-6-диаминокапроновая кислота (8 ммоль)

М=146,2 г/моль

CAS: 56-87-1, Fluka, 98%

Буферный раствор, рН 7,0

200 мл фосфатной смеси, B.Kraft GmbH

Проведение эксперимента

Перемешивали согласно AAV1 в течение 4 ч при 95°С.

Результат:

m (неочищенного продукта) = 15,45 г (коричневый рыхлый лиофилизат)

А-2 Реакция L-лизина с лактозой (1:5)

Исходная смесь:

D-(+)-лактоза m=14,4 г

М=360,31 г/моль (40 ммоль)

CAS: 200-559-2; Riedel-de Haen, моногидрат

L-лизин m=1,17 г

S-2-6-диаминокапроновая кислота (8 ммоль)

М=146,2 г/моль

CAS: 56-87-1, Fluka, 98%

Буферный раствор, рН 7,0

200 мл фосфатной смеси, B.Kraft GmbH

Проведение эксперимента

Перемешивали согласно AAV1 в течение 4 ч при 60°С.

Результат:

m (неочищенного продукта) = 16,24 г (светло-желтый рыхлый лиофилизат)

А-3 Реакция L-лизина с лактозой (1:5)

Исходная смесь:

D-(+)-лактоза m=14,4 г

М=360,31 г/моль (40 ммоль)

CAS: 200-559-2; Riedel-de Haen, моногидрат

L-лизин m=1,17 г

S-2-6-диаминокапроновая кислота (8 ммоль)

М=146,2 г/моль

CAS: 56-87-1, Fluka, 98%

Буферный раствор, рН 7,0

200 мл фосфатной смеси, B.Kraft GmbH

Проведение эксперимента

Перемешивали согласно AAV1 в течение 4 ч при 35°С.

Результат:

m (неочищенного продукта) = 14,88 г (светло-желтый рыхлый лиофилизат)

А-4 Реакция L-аргинина с глюкозой (1:4)

Исходная смесь:

D-(+)-глюкоза m=7,21 г

М=180,16 г/моль (40 ммоль)

CAS: 492-62-6; Fluka, 99%

L-аргинин m=1,74 г

S-2-амино-5-гуанидино-валериановая кислота (10 ммоль)

М=174,2 г/моль

CAS: 74-79-3, Fluka, 99%

Буферный раствор, рН 7,0

200 мл фосфатной смеси, B.Kraft GmbH

Проведение эксперимента

Перемешивали согласно AAV1 в течение 4 ч при 95°С.

Результат:

m (неочищенного продукта) = 10,01 г (коричневый рыхлый лиофилизат)

А-5 Реакция L-аргинина с глюкозой (1:4)

Исходная смесь:

D-(+)-глюкоза m=7,21 г

М=180,16 г/моль (40 ммоль)

CAS: 492-62-6; Fluka, 99%

L-аргинин m=1,74 г

S-2-амино-5-гуанидино-валериановая кислота (10 ммоль)

М=174,2 г/моль

CAS: 74-79-3, Fluka, 99%

Буферный раствор, рН 7,0

200 мл фосфатной смеси, B.Kraft GmbH

Проведение эксперимента

Перемешивали согласно AAV1 в течение 4 ч при 60°С.

Результат:

m (неочищенного продукта) = 8,52 г (светло-желтый рыхлый лиофилизат)

А-6 Реакция L-аргинина с глюкозой (1:4)

Исходная смесь:

D-(+)-глюкоза m=7,21 г

М=180,16 г/моль (40 ммоль)

CAS: 492-62-6; Fluka, 99%

L-аргинин m=1,74 г

S-2-амино-5-гуанидино-валериановая кислота (10 ммоль)

М=174,2 г/моль

CAS: 74-79-3, Fluka, 99%

Буферный раствор, рН 7,0

200 мл фосфатной смеси, B.Kraft GmbH

Проведение эксперимента

Перемешивали согласно AAV1 в течение 4 ч при 35°С.

Результат:

m (неочищенного продукта) = 9,71 г (светло-желтый рыхлый лиофилизат)

b) Биологические тесты

Пример 1

Определение жизнеспособности клеток в культуре фибробластов после обработки субстанциями А-1, А-2, А-3, А-4, А-5 и А-6

Определение жизнеспособности культивируемых клеток дает информацию о состоянии клеток. Этот анализ позволяет определить как активирующие клетки эффекты действующих веществ, так и концентрации веществ, вызывающие повреждение клеток.

Жизнеспособность клеток в культуре определяют с помощью окислительно-восстановительных красителей. Эти красители проникают в клетку, а при присоединении электронов на внешней мембране митохондрий происходит их восстановление. Это восстановление обусловливает преобразование красителя (изменение его цвета), которое впоследствии определяют фотометрическим способом.

Для количественного анализа витальности контрольные клетки, не проходящие обработку, принимают за 100% и нормируют по ним результаты измерений образцов, прошедших обработку субстанциями. Если относительная витальность оказывается ниже 80%, то говорят о повреждающем клетки воздействии вещества, если она равна или превышает 120%, то об активирующем клетки воздействии.

Для этого теста применяли реагент клеточной пролиферации Cell Proliferation Reagent Wst-1 (Roche Applied Science, Манхайм, Германия).

Таблица 1
Относительная витальность после обработки фибробластов субстанциями А-1, А-2, А-3, А-4, А-5 и А-6; С (среднее значение), СО (стандартное отклонение)
Вещество	Концентрация мкг/мл	Витальность
С	СО
Глюкоза	0	100
250	111,6	5,8
500	96,1	12,0
1000	103,1	7,3
2000	105,2	5,9
4000	144,2	8,6
Лактоза	0	100,0
250	97,5	7,4
500	98,6	3,3
1000	102,0	5,7
2000	116,4	3,9
4000	119,8	4,0
А-1	0	100,0
63	104,4	11,2
125	117,2	20,3
250	140,2	24,9
500	142,0	19,5
1000	204,1	32,8
А-2	0	100,0
63	99,9	7,9
125	97,3	9,6
250	104,9	10,7
500	132,8	14,3
1000	175,7	12,7
А-3	0	100,0
63	110,3	11,2
125	111,2	10,0
250	108,2	11,1
500	114,4	9,0
1000	163,7	23,2
А-4	0	100,0
63	118,2	3,8
125	113,9	7,0
250	113,9	7,5
500	127,0	9,1
1000	131,9	12,6
А-5	0	100,0
63	102,5	9,7
125	104,0	6,9
250	116,1	10,4
500	139,3	12,7
1000	148,4	16,1
А-6	0	100,0
63	116,4	10,8
125	117,3	5,2
250	114,9	4,3
500	147,3	2,9
1000	157,3	8,5

Все использованные вещества оказывают на витальность исследованных фибробластов воздействие, зависящее от концентрации. Особенно явственно благоприятствуют витальности клеток А-1, А-2 и А-3. В рамках этого исследования воздействие мономеров сахаров можно исключить.

Пример 2

Определение повреждающих клетки побочных эффектов при обработке субстанциями А-1, А-2, А-3, А-4, А-5 и А-6

Определение выделения культивируемыми клетками лактат-дегидрогеназы (ЛДГ) позволяет сделать вывод о повреждении клеточной мембраны. В неповрежденных клетках ЛДГ находится исключительно в цитоплазме. Диффузия ЛДГ в окружающую среду культивации возможна только вследствие повреждения клеточной мембраны. С помощью колориметрической тестовой системы, связанной с субстратом, можно определить количество высвобожденной ЛДГ.

Для определения возможных побочных эффектов повреждения клеток с испытуемыми субстанциями культивировали восстановленные дермальные сосочки согласно европейскому патенту ЕР 1455854, а после обработки анализировали количество ЛДГ в среде.

Для таблицы 2 определяли время, которое необходимо, чтобы преобразовать заданное количество красителя. При этом считается, что величины более 100% указывают на отсутствие цитотоксических эффектов, в то время как значения менее 80% свидетельствуют о возможных реакциях повреждения клеток.

Для этого испытания использовали набор Cytotoxicity Detection Kit производства Roche (Манхайм, Германия) в соответствии с указаниями производителя.

Таблица 2
Анализ высвобождения лактат-дегидрогеназы после обработки веществами
Вещество	Используемая концентрация масса/объем[a]	Цитотоксичность (% отн. контроля)	CV%[b]
А-1	0,01%	95,7	12,6
0,10%	105,9	18,8
0,50%	107,4	6,1
А-2	0,01%	100,0	1,6
0,10%	103,1	2,1
0,50%	92,2	14,9
А-3	0,01%	99,2	5,5
0,10%	104,8	3,0
0,50%	101,9	1,0
А-4	0,01%	105,7	4,0
0,10%	102,9	6,0
0,50%	93,9	5,7
А-5	0,01%	95,9	5,0
0,10%	100,5	2,0
0,50%	94,9	7,6
А-6	0,01%	92,2	10,6
0,10%	98,8	1,2
0,50%	75,6	2,0
[а] Масса к объему в %
[b] Коэффициент вариации; стандартное отклонение от среднего арифметического t

При сравнении с не проходившим обработку контролем цитотоксический эффект обнаружен только у субстанции А-6 в самой высокой концентрации (0,5%).

Пример 3

Определение скорости синтеза АТФ для веществ А-1, А-2 и А-4

АТФ (аденозинтрифосфат) - это вещество, служащее универсальной формой накопления химической энергии в клетках. При отщеплении дистальной фосфатной группы образуются АДФ и P_i (неорганический фосфат-ион). Эта реакция весьма экзергонична, т.е. сопровождается высвобождением энергии. Синтез АТФ в клетках осуществляется при расщеплении жиров, углеводов и белков с их окислением. Это вещество является поставщиком энергии для биохимических процессов синтеза, транспорта (активный транспорт) и механической работы. Эти процессы эндергоничны, т.е. их прохождение возможно только при поступлении энергии. Соответственно, для поддержания оптимального уровня метаболизма клетки нуждаются в достаточном уровне обеспечения АТФ. Например, клеткам сосочкового слоя дермы АТФ также необходим для синтеза факторов роста и, таким образом, для управления жизненным циклом волоса. С синтезом АТФ также тесно связаны пролиферация и дифференцировка кератиноцитов волосяного стержня, поскольку обязательной предпосылкой обоих процессов является биосинтез специфичных белков. Если некоторый продукт может повысить скорость синтеза АТФ в значимых для волос клетках, то клетки получают больше энергии для поддержания метаболических процессов, а также для сохранения и обновления клеточных структур, например, при восстановлении волос или образовании их заново.

Метод определения АТФ

Определение АТФ проводили с помощью набора для количественного анализа ATPLiteTM-M (Packard). Принцип действия этого набора основан на том, что люцифераза Photinus pyralis катализирует реакцию, при которой в присутствии АТФ D-люциферин преобразуется в оксилюциферин. Эта реакция сопровождается испусканием зеленого света, интенсивность которого можно измерить люминометром. Интенсивность биолюминесценции пропорциональна количеству имеющегося АТФ.

Определение активности АТФ проводят в органотипических клеточных культурах (восстановленный дермальный сосочек согласно европейскому патенту ЕР 1455854). Воздействие смесью субстанций осуществляют в течение 24 часов, причем применяют контроль, не подвергшийся обработке. Затем клетки лизировали в течение 5 минут на встряхивающем устройстве, вводя в каждую полость по 100 мкл лизисного буфера, включенного в тестовый набор. После этого еще в течение 5 минут клетки инкубировали на встряхивающем устройстве, добавив в каждую полость по 100 мкл входящего в комплект раствора субстрата, а затем реакционную смесь переносили на черную микротитровальную пластину. По прошествии 10 минут инкубации в темноте измеряли люминесценцию.

Таблица 3
Влияние А-1, А-2 и А-4 на производство АТФ в органотипических клеточных культурах в %.
Вещество		3 ч	6 ч	24 ч
Конц. [a]	Среднее [b]	СО[c]	Среднее	СО	Среднее	СО
А-1	0,05	144	17,2	100	21,7	74	3,5
0,01	145	11,6	109	7,5	103	7,7
А-2	0,10	122	9,4	104	12,4	94	3,4
0,05	112	17,2	106	4,8	91	7,8
0,01	139	15,2	104	13,6	94	8,6
А-4	0,05	143	22,9	105	2,1	85	11,7
0,01	128	8,4	100	10,8	96	6,6
[а] Масса к объему (w/v) в %;
[b] Среднее арифметическое;
[с] Стандартное отклонение

Все три исследованные субстанции сразу способствуют интенсификации синтеза АТФ в сосочковых клетках дермы и, таким образом, поддерживают эффективность синтетических процессов в коже, в особенности, синтез АТФ в корнях волос.

Анализ с применением чистой глюкозы и лактозы не привел к изменению скорости синтеза АТФ ни на одном этапе и ни в одной концентрации.

Пример 4

Определение пролиферации фибробластов после обработки субстанциями А-4, А-5 и А-6.

Определение уровня пролиферации культивируемых клеток дает информацию о делении обработанных клеток. Этот анализ позволяет определить вещества, как стимулирующие, так и ингибирующие деление клеток. Характерный признак деления клеток - это дупликация ДНК. В процессе синтеза нуклеотиды встраиваются во вновь формирующуюся цепочку ДНК. Уровень пролиферации можно измерить, предлагая клеткам в качестве субстрата для синтеза не встречающееся в природе производное нуклеотидов (бромо-дезоксиуридин, BrdU), которое затем можно определить с применением специфических антител. Это позволяет флуориметрическим методом измерить количество вновь синтезированной ДНК, что пропорционально интенсивности процессов клеточного деления.

Для определения пролиферации контрольные клетки, не проходящие обработку, принимают за 100% и нормируют по ним результаты измерений образцов, прошедших обработку субстанциями. Если относительное значение пролиферации оказывается ниже 80%, то говорят об ингибиторном воздействии вещества, если она равна или превышает 120%, то о стимулирующем воздействии.

Для этого теста применяли набор CyQuant Assay Cell Proliferation Assay производства Molecular Probes согласно данным производителя.

Таблица 4
Определение пролиферации с помощью Cyquant. Результаты после обработки фибробластов А-4, А-5 и А-6.
Вещество	Концентрация мкг/мл	Пролиферация
С	СО
Глюкоза	0	100
250	79,6	21,2
500	71,8	23,3
1000	118,9	23,9
2000	90,5	13,4
4000	122,2	8,4
Лактоза	0	100,0
250	107,2	22,8
500	90,4	23,1
1000	111,7	9,3
2000	107,6	12,0
4000	77,5	27,5
А-4	0	100,0
63	54,6	10,1
125	51,9	10,3
250	63,3	10,1
500	47,2	7,3
1000	66,2	7,8
А-5	0	100,0
63	57,7	21,1
125	64,8	6,6
250	101,2	18,8
500	103,2	9,4
1000	119,4	26,1
А-6	0	100,0
63	45,1	12,0
125	63,4	17,1
250	59,5	15,1
500	73,4	12,1
1000	82,9	20,8

При обработке веществами А-4, А-5 и А-6 удалось добиться существенного снижения митотической активности фибробластов, причем эффект зависел от концентрации. Обнаружить воздействие сахарных компонентов (глюкозы, лактозы) не удалось.

Эффекты ингибирования пролиферации желательны во всех случаях, когда нарушена регулировка деления клеток. Поэтому вещества согласно изобретению можно применять в борьбе с избыточным ростом волос или избыточной толщиной волос.

Пример 5

Определение высвобождения IL_8 из кератиноцитов линии НаСаТ после обработки А-2, А-3, А-5 и А-6.

Измерение базового уровня выделения IL-8 дает информацию о воздействии субстанций на воспалительные реакции. IL-8 - это способствующий воспалению цитокин, который берет на себя главную роль в каскаде воспалительных реакций кожи. При этом снижение базового уровня высвобождения IL-8 указывает на возможные противовоспалительные эффекты исследуемых веществ.

Для определения высвобождения IL-8 кератиноциты линии НаСаТ инкубировали на пластинах с 24 ячейками в среде Хенкса с глутамаксом, 5% фетальной телячьей сыворотки и антибиотиками. В день 2 после посева клетки инкубируют с исследуемыми субстанциями в концентрации 0,5%. Через 15-20 ч после обработки отбирали супернатант клеточной культуры и с помощью ELISA определяли количество высвобожденного IL-8.

Для этого анализа применяли набор Quantikine IL-8 производства фирмы RnD-Systems (Висбаден, Германия).

Величины, представленные в таблице 5, - это относительные значения, нормированные на необработанный контроль из 4 независимых экспериментов.

Таблица 5
Относительные значения базового высвобождения IL-8 в сравнении с не прошедшим обработку контролем после обработки кератиноцитов НаСаТ субстанциями А-2, А-3, А-5 и А-6 при концентрации применения 0,5%. Представлены средние значения (С) четырех независимых экспериментов, соответствующие стандартные отклонения (СО) и показатели значимости по Т-тесту.
	Контрольный образец	А-2	А-3
С	100,0	75,4	83,9
СО	0	11,8	12,3
Т-тест		0,0060	0,0392

	Контрольный образец	А-5	А-6
С	100,0	65,8	59,9
CO	0	12,7	20,8
Т-тест		0,0017	0,0083

Все вещества существенно снижают базовый уровень высвобождения IL-8.

Исследование глюкозы и лактозы в концентрациях по 0,5% ни в одном из экспериментов не привело к значительному изменению базового уровня выделения IL-8.

Основываясь на этих результатах, можно говорить о противовоспалительном действии веществ А-2 и А-3 и особенной противовоспалительной эффективности веществ А-5 и А-6.

Пример 6

Высвобождение факторов роста

Два фактора роста - фактор роста гепатоцитов (HGF) и фактор роста кератиноцитов (KGF) - важные регуляторы жизненного цикла волос. Что касается веществ, регулирующих жизненный цикл волос, следует полагать изменение доступности их в сравнении с не прошедшим обработку контролем. Количественно определить высвобождение HGF и KGF можно с помощью коммерческого набора для ELISA (Quantikine, RnD-Systems, Висбаден, Германия). Для этого реконструированные модели волосяных фолликулов, описанные в европейском патенте 1455854, в течение 72 ч инкубируют с испытуемыми веществами и определяют концентрацию факторов роста в среде описанным способом. Чтобы исключить возможность того, что описанные эффекты вызываются не прошедшими преобразование сахарами (глюкозой или лактозой), соответствующие отдельные компоненты также подвергают тесту в наивысшей возможной концентрации. Количественные значения не прошедшего обработку контроля приравнивают к 100%, а значения обработанных образцов нормируют на эти 100%. Стандартные отклонения рассчитывают по трем биологическим комплектам.

Таблица 6
Анализ высвобождения KGF и HGF в [%] после обработки реконструированных волосяных фолликулов в сравнении с не прошедшим обработку контролем.
Вещество	Использованная концентрация[a]	HGF	KGF
С, %	СО, %	С, %	СО, %
без обработки	0%	100,0	25,0	100,0	20,5
А-1	0,01%	90,6	17,1	80,7	2,6
0,05%	83,7	18,8	80,6	21,2
0,10%	72,7	2,8	75,8	13,0
0,50%	68,1	7,2	58,0	2,2
А-2	0,01%	90,2	8,2	85,3	7,1
0,05%	114,3	25,5	126,6	10,8
0,10%	76,2	6,9	102,7	20,0
0,50%	78,4	23,0	111,2	30,0
А-3	0,01%	68,4	14,6	94,8	14,1
0,10%	59,6	17,5	81,0	16,1
0,50%	56,3	18,2	83,7	12,5
А-4	0,01%	92,0	20,3	87,4	12,5
0,05%	84,6	19,8	104,2	31,1
0,10%	63,0	12,8	78,9	20,4
0,50%	55,0	2,4	62,3	6,5
А-5	0,01%	60,6	0,5	92,3	14,1
0,10%	63,9	10,2	90,5	22,0
0,50%	66,4	4,6	77,7	6,4
А-6	0,01%	66,2	8,4	102,4	22,8
0,10%	69,0	24,1	68,6	17,9
0,50%	79,0	27,8	93,4	29,0
Лактоза	0,40%	65,3	8,0	101,2	12,8
Глюкоза	0,40%	87,6	7,2	88,6	13,2
без обработки	0%	100	8	100	14
[а] Масса к объему в %

При сравнении высвобождения HGF после обработки реконструированных моделей волосяных фолликулов видно, что все испытуемые вещества в соответствующей мере оказывают негативное регуляторное воздействие. Особенно заметные и зависимые от концентрации эффекты наблюдают у веществ А-1, А-3 и А-4. К снижению выделения HGF также вела обработка чистой лактозой и - в меньшей степени - обработка глюкозой.

Что касается высвобождения KGF, испытуемые вещества также демонстрируют снижение выделения. При этом особенно заметна реакция моделей волосяных фолликулов на субстанцию А-1. Однозначно установить влияние обработки сахарами (лактозой и глюкозой) не представляется возможным.

Основываясь на имеющихся данных, можно утверждать, что вышеуказанные вещества вызывают вполне однозначные эффекты.

Оба фактора роста - важные передатчики сигналов в регуляции жизненного цикла волоса. Сосочковые клетки волосяного фолликула синтезируют и выделяют HGF и KGF в целях управления такими процессами, как активность деления кератиноцитов волос, прежде всего в фазе роста (анагене). Если, как это изложено в отношении некоторых веществ, высвобождение этих факторов роста снижается, возможна остановка фазы роста. Это означает, что волос более не растет, переходит в регрессионную фазу своего жизненного цикла и выпадает.

Основываясь на этом, можно утверждать, что исследуемые вещества обладают потенциалом воспрепятствования росту волос.

Пример 7:

Кроме того, исследовали влияние КПГ на профиль экспрессии генов дермальных сосочковых клеток.

Для этого в каждом случае системным образом обрабатывали реконструированные модели волосяных фолликулов, описанные в европейском патенте 1455854, приведенными в таблице 7 испытуемыми веществами в течение 24 часов в указанных концентрациях. Затем определяли относительный профиль экспрессии генов для маркеров HGF и KGF (важные маркеры анагенной фазы жизненного цикла волоса) и TGF-бета 1, TGF-бета 2 и IGFBP3 (важные маркеры катагенной фазы жизненного цикла волоса). В качестве эталона использовали экспрессию при инкубации с не прошедшей обработку средой; приведенные в таблице значения представляют собой дифференциальную экспрессию генов. Значительной можно считать дифференциальную экспрессию гена, превосходящую абсолютные численные значения контрольной экспрессии гена в 1,66 или более раз.

Таблица 7
Исследование профиля относительной экспрессии генов значимых маркеров жизненного цикла волос при инкубации с различными КПГ и/или их предшественниками; применяемая концентрация приведена в % масс.; числа, приведенные в скобках после названий веществ, указывают на структурные формулы, изображенные выше.
	Анаген	Катаген
Вещества	Конц.	HGF	KGF	TGF 1	TGF 1	IGFBP3
без обработки/только среда		1,00	1,00	1,00	1,00	1,00
Мальтол	0,025%	1,07	-3,02	-1,20	-3,21	-3,63
Мальтол	0,01%	-1,23	-1,87	-1,28	-1,86	-1,69
Фруктозолизин ( 12)	0,1%	-1,69	-2,49	-1,10	-2,40	-1,83
Фруктозолизин	0,01%	-1,92	-1,96	1,04	-2,40	-1,44
3-дезоксиглюкозулоза (18)	0,1%	-1,78	-1,93	-1,27	-1,54	-2,12
3-дезоксиглюкозулоза	0,01%	-2,09	-1,33	1,02	-1,67	-1,20
орнитиноимидазолинон (16)	0,1%	-3,30	-1,25	1,08	-1,66	-1,60
Мальтозин (15 )	0,1%	-2,09	-1,45	3,39	-2,24	7,55
Карбоксиметиллизин (13)	0,1%	-1,77	1,24	1,35	-1,07	1,98

Снижение экспрессии в отношении маркеров анагена и, соответственно, снижение выделения факторов роста, как уже указано в примере 6, представляет собой четкое указание на пригодность исследованных веществ (согласно таблице 7) к применению в качестве средств, препятствующих росту волос (в особенности к косметическому или нетерапевтическому применению).

Кроме того, при использовании 0,1% масс. мальтозина можно также наблюдать повышенную экспрессию генов маркеров катагена. TGF-бета 1 вызывает в кератиноцитах апоптоз (программированную смерть клеток) и, соответственно, прекращает удлинение волосяного стержня, т.е. рост волоса. Представляется, что мальтозин особо пригоден к применению в качестве средства, препятствующего росту волос (особенно в рамках косметического или нетерапевтического применения).