антитела к лимфотоксину-альфа

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено антитело к лимфотоксину-альфа (LT ), в том числе его химерные и гуманизированные варианты. Рассмотрены содержащие его композиции, его применение для получения лекарственного средства для лечения аутоиммунных нарушений, способ ингибирования активированной лимфотоксином-альфа клеточной пролиферации ex vivo с помощью антитела по изобретению, а также нуклеиновая кислота, экспрессирующий вектор, клетка-хозяин и основанный на их использовании способ продуцирования антитела. Настоящее изобретение может найти дальнейшее применение в терапии аутоиммунных заболеваний. 9 н. и 42 з.п. ф-лы, 27 ил., 7 табл., 21 пр.

Формула изобретения

1. Выделенное антитело к лимфотоксину- (LT ) для применения в способе лечения аутоиммунного нарушения у субъекта, содержащее следующие 6 последовательностей определяющих комплементарность областей (CDR):

(a) последовательность CDR-L1, содержащую аминокислоты А1-А11, где А1-А11 представляют собой KASQAVSSAVA (SEQ ID № 1) или RASQAVSSAVA (SEQ ID № 2), или содержащую аминокислоты А1-А17, где А1-А17 представляют собой KSSQSLLYSTXQKXFLA (SEQ ID № 3), или KSSQSLLYSAXQKXFLA (SEQ ID № 4), или KSSQSLLYSTAQKXFLA (SEQ ID № 5), или KSSQSLLYSTXQKXALA (SEQ ID № 6), где Х представляет собой N;

(b) последовательность CDR-L2, содержащую аминокислоты В1-В7, где В1-В7 представляют собой SASHRYT (SEQ ID № 7) или WASTRDS (SEQ ID № 8);

(c) последовательность CDR-L3, содержащую аминокислоты С1-С9, где С1-С9 представляют собой QQHYSTPWT (SEQ ID № 9), или QEXYSTPWT (SEQ ID № 11), или QQYYSYPRT (SEQ ID № 13), или QQYASYPRT (SEQ ID № 14) или QQYYAYPRT (SEQ ID № 15), где Х представляет собой S, N, V или Н;

(d) последовательность CDR-H1, содержащую аминокислоты D1-D10, где D1-D10 представляют собой GYTFTSYVIH (SEQ ID № 16) или GYTFSSYWIE (SEQ ID № 17);

(e) последовательность CDR-H2, содержащую аминокислоты Е1-Е17, где Е1-Е17 представляют собой YXXPYXDGTXYXEKFKG (SEQ ID № 18), или EISPGSGSTXYXEEFKG (SEQ ID № 19), или YXXPYXAGTXYXEKFKG (SEQ ID № 101) или EIXPGSGSTIYXEKFKG (SEQ ID № 110), где X представляет собой N; и

(f) последовательность CDR-H3, содержащую аминокислоты F1-F9, где F1-F9 представляют собой PTMLPWFAY (SEQ ID № 20), или содержащую аминокислоты F1-F5, где F1-F5 представляют собой GYHGY (SEQ ID № 21) или GYHGA (SEQ ID № 22);

где указанное антитело:

(i) связывается с тримером лимфотоксин- ₃ (LT ₃) и блокирует взаимодействие LT ₃ с рецептором фактора некроза опухоли-1 (TNFRI) и рецептором фактора некроза опухоли-II (TNFRII); и

(ii) блокирует взаимодействие LT с рецептором лимфотоксина-бета (LT -R).

2. Антитело по п.1, где аутоиммунное нарушение выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, волчанки, такой как системная красная волчанка или волчаночный нефрит, синдрома Вегенера, воспалительного заболевания кишечника (ВЗК), такого как болезнь Крона или язвенный колит, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры (ITP), тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР), аутоиммунной тромбоцитопении, рассеянного склероза (PC), псориаза, нефропатии IgA-типа, полинейропатии IgM-типа, миастении gravis, васкулита, сахарного диабета, синдрома Рейно, синдрома Шегрена, гломерулонефрита, тиреоидита Хашимото, болезни Грейвса, гастрита с Helicobacter Pylori и хронического гепатита С.

3. Антитело по п.1 или 2, где аутоиммунное нарушение представляет собой ревматоидный артрит.

4. Антитело по п.1, где SEQ ID № 11 представляет собой QESYSTPWT (SEQ ID № 10) или QEVYSTPWT (SEQ ID № 12).

5. Антитело для применения в способе лечения по п.1, где последовательность CDR-L1 представляет собой SEQ ID № 2 или 3, или 4, или 6.

6. Антитело по п.1, где

(i) CDR-L1 содержит SEQ ID № 1 или 2, CDR-L2 содержит SEQ ID № 7 и

CDR-L3 содержит SEQ ID № 9, 10, 11 или 12; или

(ii) CDR-H1 содержит SEQ ID № 16, CDR-H2 содержит SEQ ID № 18 или

101 и CDR-H3 содержит SEQ ID № 20; или

(iii) CDR-L1 содержит SEQ ID № 3, 4, 5 или 6, CDR-L2 содержит SEQ ID № 8 и CDR-L3 содержит SEQ ID № 13, 14 или 15; или

(iv) CDR-H1 содержит SEQ ID № 17, CDR-H2 содержит SEQ ID № 19 или

110 и CDR-H3 содержит SEQ ID № 21 или 22.

7. Антитело по п.1, где

(i) CDR-L1 содержит SEQ ID № 1 или 2, CDR-L2 содержит SEQ ID № 7, CDR-L3 содержит SEQ ID № 9, 10, 11 или 12, CDR-H1 содержит SEQ ID № 16, CDR-H2 содержит SEQ ID № 18 или 101 и CDR-H3 содержит SEQ ID № 20; или

(ii) CDR-L1 содержит SEQ ID № 3, 4, 5 или 6, CDR-L2 содержит SEQ ID № 8, CDR-L3 содержит SEQ ID № 13, 14 или 15, CDR-H1 содержит SEQ ID № 17, CDR-H2 содержит SEQ ID № 19 или 110 и CDR-H3 содержит SEQ ID № 21 или 22.

8. Антитело по п.4, где CDR-L1 содержит SEQ ID № 2, CDR-L2 содержит SEQ ID № 7, CDR-L3 содержит SEQ ID № 10, CDR-H1 содержит SEQ ID № 16, CDR-H2 содержит SEQ ID № 101 и CDR-H3 содержит SEQ ID № 20, где X представляет собой N.

9. Антитело по п.1, где CDR-L1 содержит SEQ ID № 3, CDR-L2 содержит SEQ ID № 8, CDR-L3 содержит SEQ ID № 13, CDR-H1 содержит SEQ ID № 17, CDR-H2 содержит SEQ ID № 110 и CDR-H3 содержит SEQ ID № 21, где X представляет собой N.

10. Антитело по п.1, содержащее:

(i) консенсусную каркасную последовательность подгруппы 1 человека (SEQ ID № 40); или

(ii) консенсусную каркасную последовательность тяжелой цепи подгруппы III человека (SEQ ID № 41).

11. Антитело по п.10, где каркасная последовательность содержит замену в положении 71, 73 или 78, такую как R71A, N73T или N78A или их сочетание.

12. Антитело по п.1, которое:

(i) содержит Fc-область и снижает уровни воспалительных цитокинов, ассоциированных с ревматоидным артритом, в анализе артрита in vitro;

и/или

(ii) связывается с гетеродимерным комплексом лимфотоксин- (LT );

и/или (iii) снижает количество несущих LT клеток.

13. Антитело по п.1, которое является химерным или гуманизированным.

14. Антитело по п.13, где каркасная последовательность представляет собой консенсусную каркасную последовательность человека.

15. Антитело по п.1, которое представляет собой изотип IgG, такой как IgG1 или IgG2a.

16. Антитело по пп.12-15, где Fc-область представляет собой Fc-область дикого типа.

17. Антитело по пп.12-15, дополнительно содержащее в своей Fc-области одну или более аминокислотных замен, которые приводят к тому, что оно обладает увеличенной функцией антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) по сравнению с тем же антителом с Fc-областью с последовательностью дикого типа, например, содержащее в своей Fc-области от одной до трех аминокислотных замен.

18. Антитело по п.17, где Fc-область содержит аминокислотные замены в любом одном или в любом сочетании положений, которые представляют собой 268D, или 298А, или 326D, или 333А, или 334А, или 298А совместно с 333А, или 298А совместно с 334А, или 239D совместно с 332Е, или 239D совместно с 298А и 332Е, или 239D совместно с 268D, и 298А, и 332Е, или 239D совместно с 268D, и 298А, и 326А, и 332А, или 239D совместно с 268D, и 298А, и 326А, и 332Е, или 239D совместно с 268D, и 283L, и 298А, и 332Е, или 239D совместно с 268D, и 283L, и 298А, и 326А, и 332Е, или 239D совместно с 330L, и 332Е, и 272Y, и 254Т, и 256Е, или 250Q совместно с 428L, или 265А, или 297А, где в отсутствие 297А находится замена 265А, а в отсутствие 265А находится замена 297А.

19. Антитело по любому из пп.12-18 с моновалентной аффинностью к LT человека, которая является приблизительно такой же или большей, чем моновалентная аффинность к LT мыши антитела, полученного посредством гибридомной клеточной линии, депонированной под инвентарным номером в American Type Culture Collection PTA-7538 (гибридомный лимфотоксин альфа 2 бета 1 мыши S5H3.2.2).

20. Антитело по п.19, где моновалентная аффинность выражена в виде значения Kd, необязательно измеренная посредством оптического биосенсора или радиоиммунологическим анализом.

21. Антитело п.1, имеющее:

(i) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 23 или 24, или

(ii) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 25 или 26, или

(iii) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 23, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 25, или

(iv) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 24, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 26, или

(v) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 27 или 28, или

(vi) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 29, 30 или 31, или

(vii) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 27, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 29, или

(viii) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 27, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 30, или

(ix) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 27, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 31, или

(х) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 28, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 30, или

(xi) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 28, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 31, или

(xii) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 102, или

(xiii) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 103, или

(xiv) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 102, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 103, или

(xv) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 107, или

(xvi) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 106, или

(xvii) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 107, и

вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 106, или

(xviii) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 108, или

(xix) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 109, или

(хх) вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID № 108, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID № 109.

22. Антитело по п.1, имеющее вариабельный домен легкой цепи с SEQ ID № 102 и вариабельный домен тяжелой цепи с SEQ ID № 103.

23. Антитело по п.1, имеющее вариабельный домен легкой цепи с SEQ ID № 107 и вариабельный домен тяжелой цепи с SEQ ID № 106.

24. Антитело по п.1, имеющее вариабельный домен легкой цепи с SEQ ID № 108 и вариабельный домен тяжелой цепи с SEQ ID № 109.

25. Антитело по любому из пп.1, 16 или 17 со сниженным количеством фукозы относительно количества фукозы на том же антителе, продуцируемом в клетках яичника китайского хомяка дикого типа.

26. Антитело по п.25 без фукозы.

27. Композиция антитела для применения в способе лечения аутоиммунного нарушения у субъекта, содержащая эффективное количество антитела по любому из пп.1-26, обладающего Fc-областью, где приблизительно 20-100% антител в композиции содержат в Fc-области зрелую структуру углеводного кора, в котором отсутствует фукоза.

28. Композиция по п.27, где:

(i) антитело содержит Fc-область, которая модифицирована так, чтобы изменить одно или более из антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC), комплементзависимой цитотоксичности (CDC) или фармакокинетических свойств антитела по сравнению с последовательностью Fc IgG дикого типа, посредством замены аминокислот, выбранных из группы, состоящей из A, D, Е, L, Q, Т и Y в любом одном или в любом сочетании положений Fc-области, выбранных из группы, состоящей из: 238, 239, 246, 248, 249, 250, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 314, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 428, 430, 434, 435, 437, 438 и 439; или

(ii) антитело обладает активностью антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC) в присутствии эффекторных клеток человека или обладает увеличенной активностью ADCC в присутствии эффекторных клеток человека по сравнению с таким же во всем остальном антителом, содержащим Fc IgG1 человека дикого типа;

или

(iii) антитело дополнительно содержит замену в Fc, которая представляет собой 268D, или 326D, или 333А совместно с 334А, или 298А совместно с 333А, или 298А совместно с 334А, или 239D совместно с 332Е, или 239D совместно с 298А и 332Е, или 239D совместно с 268D, и 298А, и 332Е, или 239D совместно с 268D, и 298А, и 326А, и 332А, или 239D совместно с 268D, и 298А, и 326А, и 332Е, или 239D совместно с 268D, и 283L, и 298А, и 332Е, или 239D совместно с 268D, и 283L, и 298А, и 326А, и 332Е, или 239D совместно с 330L и 332Е.

29. Композиция по п.27 или 28, где:

(i) антитело связывает FCyRIII; или

(ii) антитело связывает FCyRIII с лучшей аффинностью или опосредует антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC) более эффективно, чем гликопротеин со зрелой структурой углеводного кора, содержащей фукозу, связанную с Fc-областью гликопротеина.

30. Композиция по п.27, где:

(i) антитело продуцировано клеткой яичника китайского хомяка (СНО), такой как клетка Lec13; или

(ii) антитело продуцировано клеткой млекопитающего, не имеющего гена фукозилтрансферазы, такого как ген FUT8.

31. Композиция по п.27, где антитело:

(i) не содержит разветвляющий надвое N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), связанный со зрелой структурой его углеводного кора; или

(ii) антитело содержит разветвляющий надвое N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), связанный со зрелой структурой его углеводного кора.

32. Композиция по п.27, где:

(i) антитело содержит один или более остатков галактозы, связанных со зрелой структурой его углеводного кора; или

(ii) антитело не содержит одного или более остатков галактозы, связанных со зрелой структурой его углеводного кора; или (iii) антитело содержит один или более остатков сиаловой кислоты, связанных со зрелой структурой его углеводного кора; или (iv) антитело не содержит одного или более остатков сиаловой кислоты, связанных со зрелой структурой его углеводного кора.

33. Композиция по п.27, которая содержит:

(i) по меньшей мере, приблизительно 2% нефукозилированных антител;

или

(ii) по меньшей мере, приблизительно 4% нефукозилированных антител;

или

(iii) по меньшей мере, приблизительно 10% нефукозилированных антител;

или

(iv) по меньшей мере, приблизительно 19% нефукозилированных антител;

или (v) приблизительно 100% нефукозилированных антител.

34. Композиция для применения в способе лечения аутоиммунного нарушения у субъекта, содержащая эффективное количество антитела по любому из пп.1-26 и носитель.

35. Композиция по п.34, дополнительно содержащая лекарственное средство, такое как иммуносупрессирующее средство, антагонист, который связывает поверхностный маркер В-клеток, антагонист BAFF, модифицирующее заболевание противоревматическое лекарственное средство (DMARD), антагонист интегринов, нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID), антагонист цитокинов или их сочетание.

36. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по любому из пп.1-26.

37. Экспрессирующий вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.36.

38. Клетка-хозяин, способная экспрессировать экзогенный генетический материал, содержащая нуклеиновую кислоту по п.36.

39. Способ продуцирования антитела, включающий культивирование клетки-хозяина по п.38 в условиях, позволяющих продукцию антитела, и выделение указанного антитела.

40. Способ ингибирования активированной лимфотоксином- клеточной пролиферации ex vivo, где указанный способ включает приведение клетки или ткани в контакт с эффективным количеством антитела по любому из пп.1-26.

41. Применение выделенного антитела к лимфотоксину- (LT ) по любому из пп.1-26 при получении лекарственного средства для лечения аутоиммунного нарушения.

42. Применение по п.41, где аутоиммунное нарушение выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, волчанки, такой как системная красная волчанка или волчаночный нефрит, синдрома Вегенера, воспалительного заболевания кишечника (ВЗК), такого как болезнь Крона или язвенный колит, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры (ITP), тромботической тромбоцитопенической пурпуры (ТТР), аутоиммунной тромбоцитопении, рассеянного склероза (PC), псориаза, нефропатии IgA-типа, полинейропатии IgM-типа, миастении gravis, васкулита, сахарного диабета, синдрома Рейно, синдрома Шегрена, гломерулонефрита, тиреоидита Хашимото, болезни Грейвса, гастрита с Helicobacter Pylori и хронического гепатита С.

43. Применение по п.41 или 42, где аутоиммунное нарушение представляет собой ревматоидный артрит.

44. Применение по п.41, где в эффективном количестве вводят, по меньшей мере, одно дополнительное лекарственное средство, где антитело к LT представляет собой первое лекарственное средство, где второе лекарственное средство представляет собой иммуносупрессирующее средство, антагонист, который связывает поверхностный маркер В-клеток, антагонист BAFF, модифицирующее заболевание противоревматическое лекарственное средство (DMARD), антагонист интегринов, нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID), антагонист цитокинов или их сочетание.

45. Применение по п.44, где второе лекарственное средство представляет собой DMARD или метотрексат.

46. Применение по п.41, где:

(i) субъекта никогда ранее не лечили лекарственным средством от данного заболевания; или

(ii) субъекта никогда ранее не лечили антагонистом TNF; или

(iii) субъекта ранее лечили лекарственным средством от данного заболевания; или

(iv) субъекта ранее лечили антагонистом TNF или DMARD.

47. Применение по п.41, где антитело представляет собой чистое антитело или антитело конъюгировано с другой молекулой, такой как цитотоксическое средство.

48. Применение по п.41, где антитело вводят внутривенно или подкожно.

49. Применение по п.41, где субъект страдает ревматоидным артритом, и антитело индуцирует у субъекта значительный клинический ответ.

50. Применение по п.41, где у субъекта существует аномальный уровень одного или более регуляторных цитокинов, антинуклеарных антител (ANA), антител к ревматоидному фактору (RF), креатинина, азота мочевины крови, антиэндотелиальных антител, антинейтрофильных цитоплазматических антител (АНЦА), инфильтрирующих клеток с CD20, антител к двухцепочечной ДНК (дцДНК), антител к антигену Smith (Sm), антител к ядерному рибонуклеопротеину, антител к фосфолипиду, антител к рибосомальным Р, антител к Ro/SS-A, антител к Ro, антител к La, антител к ассоциированному с синдромом Шегрена антигену А или В (SS-А или SS-B), антител к белку центромер В (CENP В) или белку центромер С (CENP С), аутоантител к ICA69, аутоантител, окрашивающих нуклеарную или перинуклеарную зону нейтрофилов (пАНЦА), антител к Saccharomyces cerevisiae, кросс-реактивных антител к ганглиозиду GM1 или ганглиозиду GQ1b, антител к рецептору ацетилхолина (AchR), антител к подтипам AchR или антител к мышечно-специфичной тирозинкиназе (MuSK), сывороточных антител к эндотелиальным клеткам, IgG или антител к десмоглеину (Dsg), антител к центромерам, антител к топоизомеразе-1 (Scl-70), антител к РНК-полимеразе или к U3-рибонуклеопротеину (U3-RNP), антител к клубочковой базальной мембране (GBM), антител к митохондриям (АМА) или к митохондриальному М2, антител к пероксидазе щитовидной железы (ТРО), антител к тироглобину (TG) или антител к рецептору стимулирующего щитовидную железу гормона (TSHR), антинуклеарных антител (AN), антител к актину (АА) или к антигену гладких мышц (ASM), IgA к эндомизиалу, IgA к тканевой трансглутаминазе, антител IgA к глиадину или IgG к глиадину, антител к CYP21A2, антител к CYP11A1 или к CYP17, антител к рибонуклеопротеину (RNP), или специфичных для миозита антител, антител к ассоциированному с миелином гликопротеину (MAG), антител к вирусу гепатита С (HCV), антител к ганглиозиду GM1, антител к сульфат-3-глюкуронилпараглобозиду (SGPG), или антител IgM к гликоконъюгату, антител IgM к ганглиозиду, антител к пероксидазе щитовидной железы (ТРО), антител к тироглобину (TG) или антител к рецептору стимулирующего щитовидную железу гормона (TSHR), антител к основному белку миелина или антител к олигодендроцитарному гликопротеину миелина, антител IgM к ревматоидному фактору, направленных против Fc-части IgG, антител к фактору VIII или их сочетаний.

51. Применение по п.41, где:

(a) антитело вводят не более чем приблизительно один раз в две недели;

или

(b) антитело вводят приблизительно раз в месяц.

Описание изобретения к патенту

Текст описания приведен в факсимильном виде.