применение гидрофобин-полипептидов в качестве усилителя пенетрации

Формула изобретения

1. Применение гидрофобина структурной формулы (I)

,

где остатки X, которые являются одинаковыми или различными, означают каждую из 20 аминокислот природного происхождения (Phe, Leu, Ser, Tyr, Cys, Trp, Pro, His, Gin, Arg, Ile, Met, Thr, Asn, Lys, Val, Ala, Asp, Glu, Gly), причем указанные при X индексы означают количество аминокислот в соответствующей части последовательности X,

остатки С означают цистеин, аланин, серин, глицин, метионин или треонин, причем, по меньшей мере, четыре из них означают цистеин, индексы n и m, независимо друг от друга, означают натуральные числа между 0 и 500,

в качестве усилителя пенетрации активных веществ в косметических и/или фармацевтических композициях.

2. Применение по п.1, причем гидрофобин имеет структурную формулу (II)

,

причем X, С и индексы при Х имеют упомянутые в п.1 значения, причем, по меньшей мере, 6 из обозначенных как С остатков являются цистеином, и

индексы n и m означают числа между 0 и 350.

3. Применение по п.1, причем гидрофобии имеет структурную формулу (III)



причем X, С и индексы при Х имеют упомянутые в п.1 значения, причем, по меньшей мере, 6 из обозначенных как С остатков являются цистеином, и

индексы n и m означают числа между 0 и 200.

4. Применение по п.1 в комбинации, по меньшей мере, с одним другим усилителем пенетрации.

5. Применение по п.4, причем, по меньшей мере, один другой усилитель пенетрации выбирают из группы, включающей диметилсульфоксид, додецилсульфат натрия, диметилформамид, N-метилформамид, одноатомные или многоатомные спирты, такие как этанол, 1,2-пропандиол или бензиловый спирт, насыщенные и ненасыщенные жирные спирты с 8-10 атомами углерода, такие как лауриловый спирт или цетиловый спирт, углеводороды, такие как минеральное масло, алканы, сложный эфир, азоны, такие как 1-додецилазациклогептан-2-он, пропиленгликоль, хитозан, насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты, такие как стеариновая кислота или олеиновая кислота, сложные эфиры жирных кислот, содержащие до 24 атомов углерода, или сложные диэфиры дикарбоновой кислоты, содержащей до 24 атомов углерода, такие как метиловый эфир, этиловый эфир, изопропиловый эфир, бутиловый эфир, втор-бутиловый эфир, изобутиловый эфир, трет-бутиловый эфир или моноглицериновый эфир уксусной кислоты, капроновой кислоты, лауриновой кислоты, миристиновой кислоты, стеариновой кислоты или пальмитиновой кислоты, фосфатные производные, такие как лецитин, терпены, мочевину и ее производные и простой эфир, такой как кислот, полиэтоксиэтилен, этилендиаминтетрауксусную кислоту, неролидол, оксиды лимонена и фосфолипиды.

6. Применение гидрофобина по одному из пп.1-5 для получения средства для усиления проникновения активных веществ в косметических и/или фармацевтических композициях при локальном использовании.

7. Применение по одному из пп.1-6 в полутвердых лекарственных формах, выбранных предпочтительно из группы, состоящей из мази, крема, геля и пасты.

8. Применение по одному из пп.1-6 в мембранах, матрице или пластыре.

9. Применение по одному из пп.1-6 в дерматологических средствах.

10. Применение по одному из пп.1-6 в косметических составах для волос, кожи или зубов.

11. Способ получения средства для усиления проникновения активных веществ в косметических и/или фармацевтических композициях при локальном использовании, отличающийся тем, что в состав, содержащий, по меньшей мере, одно активное вещество, вводят гидрофобин, определенный в одном из пп.1-3, при необходимости в комбинации, по меньшей мере, с одним другим усилителем пенетрации, определенным в п.5, в твердой форме, в растворе или в дисперсии в органической или неорганической среде.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к применению гидрофобинполипептидов в качестве усилителя пенетрации.

Усилители пенетрации приобретают в последние годы все большее значение в различных областях, таких, например, как компонент косметических и фармацевтических композиций, средств защиты растений или средств для нанесения покрытий.

Из международной заявки WO 93/002669 известен усилитель трансдермальной пенетрации. В ней описывается комбинация полярных и неполярных усилителей пенетрации в содержащей активное вещество клейкой матрице в трансдермальных терапевтических системах. В качестве полярного усилителя пенетрации называются многоатомные спирты, а в качестве неполярного усилителя пенетрации - эфир жирной кислоты. В описанных трансдермальных терапевтических системах усилитель пенетрации вызывает увеличение скорости пенетрации биологически активного вещества, причем имеются в виду трудно растворимые или не растворимые в воде стероидные гормоны.

В трансдермальных терапевтических системах становится возможным временно воспрепятствовать барьерной функции рогового слоя посредством окклюзивного эффекта или посредством усилителя пенетрации, такого как вышеназванные усилители или диметилсульфоксид (DMSO) и, таким образом, обеспечить возможность проникновения через кожу низкомолекулярных веществ.

Другими усилителями пенетрации, используемыми в терапевтических составах, являются, например, одно- или многоатомные спирты, такие как этанол, 1,2-пропандиол или бензиловый спирт, насыщенные и ненасыщенные жирные спирты, содержащие от 8 до 10 атомов углерода, такие как лауриловый спирт или цетиловый спирт, углеводороды, такие как минеральное масло, алканы, сложный эфир, азоны, такие как 1-додецил-азациклогептан-2-он, пропиленгликоль, хитозан, насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты, такие как стеариновая кислота или олеиновая кислота, сложные эфиры жирных кислот, содержащие до 24 атомов углерода, или сложные диэфиры дикарбоновых кислот, содержащие до 24 атомов углерода, такие как метиловый эфир, этиловый эфир, изопропиловый эфир, бутиловый эфир, втор.бутиловый эфир, изобутиловый эфир, трет.бутиловый эфир или моноглицериновые эфиры уксусной кислоты, капроновой кислоты, лауриновой кислоты, миристиновой кислоты, стеариновой кислоты или пальмитиновой кислоты, фосфатные производные, такие как лецитин, терпены, мочевина и ее производные и простые эфиры, такие как диметилизосорбид и моноэтиловый эфир диэтиленгликоля, соли желчных кислот, полиэтоксиэтилены, этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), неролидол, окислы лимонена и фосфолипиды.

Другими известными усилителями пенетрации являются додецилсульфат натрия (SDS), диметилформамид и N-метилформамид.

Усилители пенетрации используются также в области защиты растений для гарантированного обеспечения проникновения средств для защиты растений.

Гидрофобины являются небольшими протеинами, содержащими от около 100 до 150 аминокислот, встречающихся в нитевидных грибах, например, Schizophyllum commune. Во всех случаях они содержат 8 звеньев цистеина. Гидрофобины могут быть выделены из природных источников, однако они могут быть также получены генно-инженерными способами, такими, например, как описаны в международных заявках WO 2006/082251 или WO 2006/131564.

Гидрофобины распределены в водонерастворимой форме на поверхности различных грибковых структур, таких как, например, плесень, споры, мякоть плодов. Гены для гидрофобинов могут быть выделены из аскомицетов, дейтеромицетов и базидиомицетов. Некоторые грибы содержат больше одного гидрофобина, например, Schizophyllum commune, Corprinus cenereus, Aspergillus nidulans. Очевидно, что различные гидрофобины инволюционируют на различных стадиях развития грибов. При этом гидрофобины, вероятно, ответственны за различные функции (van Wetter et al., 2000, Mol. Microbiol., 36, 201-210; Kershaw et al., 1998, Fungal Genet. Biol., 1998, 23, 18-33).

В качестве биологической функции гидрофобинов помимо снижения поверхностного натяжения воды для образования плесени описывается также гидрофобинизация спор (Wosten et al., 1999, Curr. Biol., 19, 1985-88; Bell et al., 1992, Genes Dev., 6, 2382-2394). Кроме того, гидрофобины служат для распространения газовых каналов в мякоти плодов в лишайниках и в качестве компонентов в системе опознания поверхности растений посредством грибкового патоненеза (Lugones et al., 1999, Mycol. Res., 103, 635-640; Hamer & Talbot 1998, Curr. Opinion Microbiol., Band 1, 693-697).

В технике было предложено использовать гидрофобины по различному назначению.

В международной заявке WO 96/41882 предлагается применение гидрофобинов в качестве эмульгаторов, загустителя, поверхностно-активных веществ, для гидрофилизации гидрофобных поверхностей, для улучшения водоупорности гидрофильных субстратов, для приготовления эмульсий типа «масло-в-воде» или «вода-в-масле». Кроме того, предложено использование их в фармацевтике, например, для приготовления мазей или кремов, а также в косметике, например, для защиты кожи или приготовления шампуней для волос и ополаскивателей для волос.

В европейском патенте EP 1252516 описано покрытие различных субстратов, таких как, например, окна, объективы, биосенсоры, медицинские устройства, резервуары, рамы или автокары, раствором, содержащим гидрофобии, при температуре от 30 до 80°C.

Кроме того, было предложено, например, применение их в качестве деэмульгатора (международная заявка WO 2006/103251), в качестве ингибитора испарения (международная заявка WO 2006/128877) или ингибитора загрязнения (международная заявка WO 2006/103215).

В патентной заявке США US 20030217419 A1 описывается применение гидрофобина SC3 из Schizophyllumg commune для косметических составов для обработки терапевтических материалов. При этом образуется косметическое депо, выдерживающее несколько операций мытья шампунем.

Применение гидрофобинов в качестве усилителя пенетрации до настоящего времени еще не известно.

Задачей настоящего изобретения явилось новое применение гидрофобина.

Дополнительно следовало решить задачу обеспечения возможности или улучшения проницаемости через границы фаз активных веществ, для которых до сих пор эти границы фаз были непроницаемыми или слабо проницаемыми.

Другой задачей явилось снижение концентрации активных веществ при их использовании.

Следующей задачей настоящего изобретения было создание косметических и/или фармацевтических композиций, содержащих в качестве усилителя пенетрации гидрофобии, который гарантирует лучшее проникновение активного вещества, особенно, без раздражения кожи или слизистых оболочек.

Еще одной задачей настоящего изобретения явилось создание средства для защиты растений, содержащего в качестве усилителя пенетрации гидрофобии, гарантирующего лучшую проницаемость активных веществ, в особенности, не вызывая повреждения обработанных растений и без нанесения вреда окружающей среде.

Эти задачи решаются применением гидрофобина в качестве усилителя пенетрации.

Согласно изобретению термин «усилитель пенетрации» и «средство, способствующее пенетрации», являются синонимами.

Для изобретения необходимо отдельно пояснить следующее.

Пенетрация согласно настоящему изобретению означает проникновение веществ через границу фаз.

Границей фаз согласно настоящему изобретению является переход из одной фазы в соседнюю фазу.

Фазой согласно изобретению является область, внутри которой не наступает никаких скачкообразных изменений каких-либо физических величин (параметров). Следовательно, при переходе из одной фазы в соседнюю фазу, а также внутри слоя величиной лишь в небольшое количество молекулярных диаметров изменяется, по меньшей мере, одно физическое или химическое свойство из группы, состоящей из плотности, электрических свойств, магнитных свойств, показателя преломления, химического состава, кристаллической структуры.

В одном из вариантов настоящего изобретения усиление пенетрации через границы фаз означает, что в сравнении с эталоном, который имеет идентичные химические, биологические и физические свойства, и при идентичных химических, биологических и физических условиях или предпосылках, в то же самое время через границу фаз проникает большее количество активного вещества или проникает то же самое количество вещества, но за более короткое время.

В одном из вариантов настоящего изобретения усиление пенетрации или повышенная пенетрация или усиленная пенетрация активных веществ через границу фаз означает, что делается возможным или улучшается проникновения активного вещества через границы фаз, тогда как до этого эта граница фаз была непроницаемой или слабо проницаемой. Это имеет место в сравнении с контрольным элементом, имеющим идентичные химические, биологические и физические свойства, и при идентичных химических, биологических и физических условиях или предпосылках, причем в то же самое время через границу фаз проникает большее количество активного вещества или проникает то же самое количество активного вещества, но за более короткое время.

Усилителями пенетрации являются вещества, посредством которых усиливается пенетрация другого вещества через границу фаз.

Под термином «гидрофобии» или «гидрофобины» согласно настоящему изобретению следует подразумевать в последующем полипептиды общей структурной формулы (I):

,

где X может означать каждую из 20-ти аминокислот природного происхождения (Phe, Leu, Ser, Туг, Cys, Trp, Pro, His, Gin, Arg, lie Met, Thr, Asn, Lys, Val, Ala, Asp, Glu, Gly). Радикал X, в каждом случае, может быть одинаковым или разным. При этом находящиеся при X индексы, в каждом случае, означают количество аминокислот в каждой части последовательности X, C означает цистеин, аланин, серии, глицин, метионин или треонин, причем, по меньшей мере, четыре из обозначенных как C радикалов означают цистеин и индексы пит, независимо друг от друга, означают натуральные числа между 0 и 500, предпочтительно, между 15 и 300.

Полипептиды формулы (I) характеризуются, кроме того, свойством увеличивать контактный угол капли воды при комнатной температуре после покрытия стеклянной поверхности, по меньшей мере, до 8°, 10°, 20°, предпочтительно, до 25(и, наиболее предпочтительно, до 30°, в каждом случае, в сравнении с контактным углом капли воды таких же размеров на непокрытой стеклянной поверхности.

Обозначенные как C¹-C⁸ аминокислоты, предпочтительно, являются цистеинами. Однако они могут быть также заменены на другие аминокислоты с той же плотностью упаковки, предпочтительно, на аланин, серии, треонин, метионин или глицин. Конечно, по меньшей мере, четыре, предпочтительно, по меньшей мере, 5, особенно предпочтительно, по меньшей мере, 6 и, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 7 позиций от C¹ до C⁸ должны состоять из цистеинов. В протеинах по изобретению цистеины могут находиться либо в восстановленной форме, либо могут быть связанными друг с другом дисульфидными мостиками. Особенно предпочтительным является внутримолекулярное образование мостиков C-C, в особенности, по меньшей мере, с одним, предпочтительно, с двумя, особенно предпочтительно с тремя и, наиболее предпочтительно, с четырьмя внутримолекулярными дисульфидными мостиками. При вышеуказанном обмене цистеинов на аминокислоты с подобной плотностью упаковки, предпочтительно, попарно обмениваются такие C-позиции, которые могут образовывать друг с другом внутримолекулярные дисульфидные мостики. В случае, если в обозначенных как X позициях используют также цистеины, серины, аланины, глицины, метионины или треонины, то нумерация отдельных C-позиций в общих формулах может, соответственно, изменяться.

Предпочтительно, для осуществления настоящего изобретения используют гидрофобины общей формулы (II):

причем X, C и индексы при X и C имеют упомянутые выше значения, индексы пит означают числа между 0 и 350, предпочтительно, от 15 до 300. Кроме того, протеины характеризуются вышеупомянутым изменением контактного угла и, помимо этого, по меньшей мере, 6 из обозначенных как C радикалов являются цистеином. Особенно предпочтительно, если все радикалы C являются цистеином.

Наиболее предпочтительно, используют гидрофобины общей формулы (III):

причем X, C и индексы при X имеют упомянутые выше значения, индексы n и m означают числа между 0 и 200, кроме того, протеины характеризуются вышеназванным изменением контактного угла и, по меньшей мере, 6 из обозначенных как C радикалов означают цистеин. Особенно предпочтительно, если все радикалы C являются цистеином.

Радикалами X_n и X_m могут быть также последовательности пептидов природно соединенные с гидрофобином. Однако одним радикалом или обоими радикалами могут являться также пептидные последовательности, не соединенные природно с гидрофобином. Среди них могут быть такие радикалы X_n и/или X_m, у которых пептидные последовательности природного происхождения продолжаются пептидными последовательностями не природного происхождения.

В случае, если у X_n и/или X_m речь идет о не соединенных естественным образом (природно) с гидрофобином пептидных последовательностях, то такие последовательности, как правило, состоят, по меньшей мере, из 20, предпочтительно, по меньшей мере, из 35 аминокислот. Речь может идти, например, о последовательностях от 20 до 500, предпочтительно, от 30 до 400 и, наиболее предпочтительно, от 35 до 100 аминокислот.

Такой радикал, не соединенный природно с гидрофобином, в последующем должен также называться как партнер соединения. Это должно означать, что протеины могут состоять, по меньшей мере, из одной части гидрофобина и одной части партнера соединения (слияния), которые в природе вместе в этой форме не встречаются. Гидрофобины соединения, состоящие из партнера соединения и части гидрофобина, описаны, например, в международной заявке WO 2006/082251 (страница 2 строка 18 по страница 5, строка 25), в международной заявке WO 2006/082253 (страница 2 строка 20 по страница 6 строка 13) и в международной заявке WO 2006/131564 (страница 2 строка 17 по страница 6 строка 26).

Партнер соединения может быть выбран из множества протеинов. С частью гидрофобина может быть соединен только лишь один единственный партнер соединения либо также несколько партнеров соединения могут быть соединены с частью гидрофобина, например, с концевыми аминогруппами (X_n) или с концевыми карбоксигруппами (X_m) части гидрофобина. Однако также, например, два партнера соединения могут быть соединены в позиции (X_n или X_m) протеина по изобретению.

Особенно пригодными партнерами соединения являются встречающиеся в природе в микроорганизмах, особенно в E.coli или в Bacillus subtilis. Примерами такого партнера соединения являются также последовательности yaad (SEQ ID NO:16 в международной заявке WO 2006/082251), уаае (SEQ ID N0:18 в международной заявке WO 2006/082251), убиквитин (Ubiquitin) и тиоредоксин (Thioredoxin). Хорошо пригодны также фрагменты или производные названных последовательностей, которые содержат лишь часть названных последовательностей, например, от 70 до 99%, предпочтительно, от 5 до 50% и, наиболее предпочтительно, от 10 до 40%, или у которых отдельные аминокислоты или нуклеотиды изменены по сравнению с названными последовательностями, причем процентные данные в каждом случае относятся к количеству аминокислот.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения гидрофобин соединения содержит помимо названного партнера соединения в качестве одной из групп X_n или X_m либо в качестве концевой составляющей такой группы еще и, так называемый, домен сродства (affinity tag/affinity tail). При этом имеются в виду, в принципе, известные анкерные группы, способные вместе с дополнительными группами влиять на рост и облегчать обработку и очистку протеинов. Примеры таких доменов сродства включают , , , или , причем в общем случае к является натуральным числом от 1 до 10. Предпочтительной является группа , где k имеет значение от 4 до 6. При этом группа X _n и/или X_m может состоять исключительно из таких доменов сродства и либо природно соединенный с гидрофобином или не соединенный природно с гидрофобином радикал _Xn или X_m продолжается на расположенном на конце домене сродства.

Используемые по изобретению гидрофобины являются гидрофобинами согласно структурным формулам (I), (II) и (III), а также гидрофобинами соединения.

Используемые по изобретению гидрофобины могут быть также модифицированными в их полипептидной последовательности, например, посредством гликозилирования, ацетилирования или также посредством химической поперечной сшивки, например, глутаровым альдегидом.

Свойством используемых по изобретению гидрофобинов или их производных является изменение поверхностных свойств при покрытии поверхностей протеинами. Изменение поверхностных свойств может быть установлено экспериментально, например, посредством измерения контактного угла капли воды перед и после покрытия поверхности протеином и определения разности обоих измерений.

Измерение контактного угла специалисту, в принципе, известно. Измерения проводят при комнатной температуре, а также при размере капель 5 мкл и с использованием в качестве субстрата стеклянных пластинок. Точные экспериментальные условия для пригодного в качестве примера метода измерения контактного угла приведены в экспериментальной части. При названных там условиях используемые по изобретению протеины соединения обладают свойством увеличивать контактный угол, по меньшей мере, на 20°, предпочтительно, по меньшей мере, на 25°, особенно предпочтительно, по меньшей мере, на 30°, 40°, 45(и, в особенности, на 50°, в каждом случае, в сравнении с контактным углом капель того же размера на стеклянной поверхности без покрытия.

Особенно предпочтительными гидрофобинами для осуществления настоящего изобретения являются гидрофобины типа dewA, rodA, hypA, hypB, sc3, basf1, basf2. Такие гидрофобины, включая их последовательности, описаны, например, в международной заявке WO 2006/82251. Если не указано иное, то приведенные ниже последовательности относятся к последовательностям, опубликованным в международной заявке WO 2006/82251. Наглядные таблицы с номерами SEQ-ID находятся в международной заявке WO 2006/82251 (страница 20, строки от 1 до 5).

Особенно пригодными согласно изобретению являются протеины соединения yaad-Xa-dewA-his (SEQ ID NO:20), yaad-Xa-rodA-his (SEQ ID NO:22) или yaad-Xa-basf1-his (SEQ ID NO:24) с указанными в скобках последовательностями полипептидов, а также с кодированными вместо этого последовательностями нуклеиновых кислот, особенно, с последовательностями согласно SEQ ID NO:19, 21, 23. Особенно предпочтительно могут использоваться протеины соединения yaad-Xa-dewA-his (SEQ ID NO:20). Особенно предпочтительными являются также протеины, которые получаются из представленных в SEQ ID NO:20, 22 или 24 полипептидных последовательностей обменом, внедрением или делецией, по меньшей мере, от 1 и до 10, предпочтительно, 5, особенно предпочтительно, 5% всех аминокислот и которые обладают еще, по меньшей мере, 50% биологического свойства исходных протеинов. Под биологическим свойством протеинов подразумевают уже описанное изменение контактного угла, по меньшей мере, на 20°, особенно, по меньшей мере, на 25°, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, на 30°, 40°, 45° и, в особенности, на 50°.

Особенно пригодными для осуществления настоящего изобретения производными являются производные, полученные укорачиванием yaad партнера соединения yaad-Xa-dewA-his (SEQ ID NO:20), yaad-Xa-rodA-his (SEQ ID NO:22) или yaad-Xa-basf1-his (SEQ ID NO:24). Вместо полного yaad-партнера соединения (SEQ ID NO:16) с 294 аминокислотами может быть благоприятным использовать укороченный yaad-радикал. Укороченный радикал должен включать, по меньшей мере, 20, предпочтительно, по меньшей мере, 35 аминокислот. Например, можно использовать укороченный радикал, содержащий от 20 до 293, предпочтительно, от 25 до 250, особенно предпочтительно, от 35 до 150 и, например, от 35 до 100 аминокислот. Примером такого вида протеина является yaad40-Xa-dewA-his (SEQ ID NO:26 в международной заявке WO 2007/014897), содержащий укороченный до 40 аминокислот yaad-радикал.

Место расщепления между гидрофобином и партнером соединения или партнерами соединения может использоваться для того, чтобы отщепить партнер соединения и высвободить чистый гидрофобии в немодифицированной форме (например, посредством BrCN-расщепления у метионина, Faktor-Xa-расщепления, энтеркиназа-расщепления, тромбинрасщепления, TEV-расщепления и т.д.).

Используемые в качестве усилителя пенетрации гидрофобины могут быть получены химически посредством известного способа синтеза пептидов, например, таким как твердофазный синтез по Меррифильду (Merrifield).

Гидрофобины природного происхождения могут быть выделены из природных источников соответствующими методами. Например, можно сослаться на Wosten et. al., Eur. J Cell Bio. 63, 122-129 (1994) или на международную заявку на патент WO 96/41882 (страница 23, строка 15 по страницу 24, строка 8).

Генно-инженерный способ получения гидрофобинов без партнера соединения из Talaromyces thermophilus описан в патентной заявке США US 2006/0040349 (параграфы [0071] по [0090]).

Получение протеинов соединения может быть осуществлено, предпочтительно, генно-инженерным способом, при котором кодирующую для партнера соединения и для части гидрофобина последовательность нуклеиновой кислоты, особенно, DNA-последовательность комбинируют таким образом, чтобы в организме хозяина образовать желаемый протеин посредством экспрессии генов комбинированной последовательности нуклеиновой кислоты. Такой способ получения описан, например, в международной заявке WO 2006/082521 (страница 6 строка 21 по страницу 12 строка 37) или в международной заявке WO 2006/082253 (страница 5 строка 33 по страницу 11 строка 13). Партнер соединения значительно облегчает получение гидрофобинов. Гидрофобины соединения при генно-инженерном способе продуцируются с явно лучшим выходом, чем гидрофобии без партнера соединения.

Продуцированные генно-инженерным способом от организма хозяина гидрофобины соединения могут обрабатываться, в принципе, известным образом и могут быть очищены известными хроматографическими методами.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения можно использовать упрощенные способы обработки и очистки, описанные в международной заявке WO 2006/082253 страницы 11/12 (страница 11 строка 15 по страницу 11 строка 33).

Для этого сначала отделяют ферментированные клетки из ферментирующего бульона, растворяют и отделяют осколки клеток из телец включения (inelusion bodies). Последнее может быть благоприятно осуществлено центрифугированием. Наконец, тельца включения могут быть растворены, в принципе, известным образом, например, кислотами, основаниями и/или детергенцией, для высвобождения гидрофобинов соединения. Тельца включения с используемыми по изобретению гидрофобинами соединения могут быть полностью растворены, как правило, уже при использовании 0,1 м едкого натрия (NaOH) в течение около 1 часа.

Полученные растворы, в случае необходимости, после установления желаемого показателя pH, могут использоваться для осуществления этого изобретения без дополнительной очистки. Однако гидрофобины соединения могут быть также выделены из растворов в виде твердого вещества. Выделение может осуществляться, предпочтительно, распылительным гранулированием или распылительной сушкой, как описано в международной заявке WO 2006/082253 (страница 11 строка 35 по страницу 12 строка 21). Полученные упрощенным способом обработки и очистки продукты содержат кроме остатков клеточных осколков, как правило, около от 80 до 90 мас.% протеинов. Количество гидрофобинов соединения составляет в зависимости от вида соединения и условий ферментации, как правило, от 30 до 80 мас.% от общего количества всех протеинов.

Выделенные продукты, содержащие гидрофобины соединения, могут храниться в виде твердого вещества и с целью использования растворяются в конкретных желаемых средах.

Гидрофобины соединения могут использоваться для осуществления этого изобретения сами по себе, как таковые, либо также после расщепления и отделения партнера соединения они могут использоваться в виде «чистого» гидрофобина. Расщепление, предпочтительно, проводят после выделения телец включения и их растворения.

Согласно изобретению гидрофобины используют в качестве усилителя пенетрации. В одном варианте осуществления изобретения гидрофобины используют в комбинации, по меньшей мере, с одним другим усилителем пенетрации, причем, по меньшей мере, один другой усилитель пенетрации выбирают из группы, включающей диметилсульфоксид (DMSO), додецилсульфат натрия (SDS), диметилформамид, N-метилформамид, одноатомные или многоатомные спирты, такие как этанол, 1,2-пропандиол или бензиловый спирт, насыщенные и ненасыщенные жирные спирты, содержащие от 8 до 10 атомов углерода, такие как лауриловый спирт или цетиловый спирт, углеводороды, такие как минеральное масло, алканы, сложные эфиры, азоны, такие как 1-додецилазациклогептан-2-он, пропиленгликоль, хитозан, насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты, такие как стеариновая кислота или олеиновая кислота, сложные эфиры жирных кислот, содержащие до 24 атомов углерода, или сложные диэфиры дикарбоновых кислот, содержащие до 24 атомов углерода, такие как метиловый эфир, этиловый эфир, изопропиловый эфир, бутиловый эфир, втор.бутиловый эфир, изобутиловый эфир, трет.бутиловый эфир, или моноглицериновый эфир уксусной кислоты, капроновой кислоты, лауриновой кислоты, миристиновой кислоты, стеариновой кислоты или пальмитиновой кислоты, фосфатные производные, такие как лецитин, терпены, мочевина и ее производные и простые эфиры, такие как диметилизосорбид и диэтиленгликольмоноэтиловый эфир, соли желчных кислот, полиэтоксиэтилены, этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), неролидол, оксиды лимонена и фосфолипиды.

В другом, особенно предпочтительном, варианте осуществления изобретения гидрофобии используют в качестве усилителя пенетрации в комбинации с диметилсульфоксидом (DMSO) или полигликолем.

Еще в одном варианте осуществления изобретения гидрофобии используют в качестве усилителя пенетрации в комбинации, по меньшей мере, с еще одним другим усилителем пенетрации при уходе за кожей и обработке выделанной кожи.

В следующем, особенно предпочтительном, варианте осуществления изобретения гидрофобии используют в качестве усилителя пенетрации кислот и оснований, например, карбоновых кислот или аммиака, буферной системы, полимеров, неорганических частиц, таких как двуокись кремния или силикаты, красящие вещества, такие как красители, душистые вещества или биоциды в комбинации, по меньшей мере, с одним другим усилителем пенетрации для ухода за кожей и обработки дубленой кожи.

В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения усиливают пенетрацию через границу раздела фаз.

В другом варианте осуществления изобретения благодаря этому содействуют пенетрации активных веществ.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения под активными веществами подразумевают все вещества с фармацевтическим или биологическим действием. Активными веществами, таким образом, являются соединения, выбранные из группы, состоящей из фармацевтически активных соединений, терапевтически активных соединений и биологически активных соединений, косметически активных соединений, веществ, способствующих удовлетворению косметических требований (с целью маркетинга), таких как перлпротеины, качественно и/или количественно влияющих на биохимические и/или физиологические процессы в организме, то есть способствующие им или вообще лишь делающих их возможным либо тормозящими их.

Активные вещества, кроме того, в небольших количествах оказывают сильное фармацевтическое, химическое, биологическое или физиологическое действие. При этом количество их является небольшим относительно массы организма, которое активное вещество достигает после проникновения через границу фаз.

При этом получается частное от деления массы активного вещества, проникающего через границу фаз, на массу организма, выбранное из группы, состоящей из интервалов: [1 ppt (1:10¹² ) до 10% (1:10)], [1 ppb (1:10⁹ до 1% (1:100)], [1 ppt (1:10¹²) до 1 ppb (1:10⁹], [1 ppt (1:10 ¹² до 1:1000)], [1 ppb (1:10⁹ до 1:1000)], [1 ppt (1:10¹² до 1 ppm (1:10⁶)], [1 ppb (1:10 ⁹ до 1 ppm (1:10⁶)], [1 ppm (1:10⁶ до 1:1000)], [(1:1000) до 1% (1:100)].

В одном из вариантов настоящего изобретения организм выбирают из группы, состоящей из отдельных индивидуумов, выбранных из ряда одноклеточных микроорганизмов, грибков, растений или животных, а также составляющих их частей, таких как клетки и клеточные ткани.

В другом варианте настоящего изобретения организмом является весь организм или его части, например, такие как кожа для изготовления дубленой кожи.

При использовании в качестве усилителя пенетрации гидрофобина усиление пенетрации активного вещества в сравнении с контрольным объектом может составлять 0,5, 0,6, 0,7, 0,9 или 1%. Предпочтительным является усиление пенетрации на 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10%, особенно предпочтительно, на 11, 12, 13, 14 или 15%, наиболее предпочтительно, на 16, 17, 18, 19 или 20% или более.

Другим объектом настоящего изобретения является применение гидрофобина для получения средства для улучшения проникновения активных веществ при локальном использовании.

Другой областью использования гидрофобина в качестве усилителя пенетрации является приготовление дерматологических составов.

Поэтому в одном из вариантов изобретения гидрофобии используют в способе для получения полутвердых лекарственных форм или косметических составов, выбранных из группы, состоящей из мазей, кремов, геля и паст.

Полутвердые лекарственные формы получают, как описано, например, в "Arzneiformelehre" von Ursula Schöffling, 4. Auflage, Deutsche Apotheker Verlag, 2003, Seiten 353 bis 392.

Составы содержат, помимо описанных там вспомогательных веществ, гидрофобии в количестве, выбранном из группы, состоящей из от 0,000001 до 10 мас.%, от 0,0001 до 10 мас.%, от 0,001 до 10 мас.%, от 0,01 до 10 мас.%, от 0,1 до 10 мас.% и от 1 до 10 мас.%, а также биологически активные вещества в количестве, выбранном из группы, состоящей из от 0,000001 до 10 мас.%, от 0,0001 до 10 мас.%, от 0,001 до 10 мас.%, от 0,01 до 10 мас.%, от 0,1 до 10 мас.% и от 1 до 10 мас.%.

Другой областью использования гидрофобина по изобретению в качестве усилителя пенетрации является получение средств для терапевтического или профилактического использования при определенных заболеваниях кожи и слизистых оболочек. Такими областями использования, в особенности, являются:

- вирусные заболевания (например, герпес, Coxsackie, Varicella zoster, вирус цитомегалии и т.п.);

- бактериальные заболевания (например, туберкулез, сифилис и т.п.);

- грибковые заболевания (например, Candida, Cryptococcus, Histoplasmosis, Aspergillus, Mucormycosis и т.п.);

- онкологические заболевания (например, меланома, аденома и т.п.);

- аутоиммунные заболевания (например, PEMPHIGUS VULGARIS, BULLOUS PEMPHI-GOID, SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSA и т.п.);

- солнечный ожог;

- заражение паразитами (например, клещами, блохами и т.п.);

- инсектицидный контакт (например, кровососущие насекомые, такие как комары Anopheles и т.п.).

В одном из вариантов изобретения составы для вышеназванного использования находятся в виде аэродисперсий, таких, например, как описано в "Arzneiformelehre" von Ursula Schöffling, 4. Auflage, Deutsche Apotheker Verlag, 2003, Seiten 336 bis 352.

В одном из вариантов изобретения составы для вышеназванного использования находятся в виде высвобождающейся системы, выбранной из группы, состоящей из наночастиц, наносуспензий, липосом, микроэмульсий и биоадгезивных форм составов, например, таких как описаны в "Arzneiformelehre" von Ursula Schoffling, 4. Auflage, Deutsche Apotheker Verlag, 2003, Seiten 468 bis 471.

Составы содержат помимо описанных там вспомогательных веществ гидрофобии в количестве, выбранном из группы, состоящей из от 0,000001 до 10 мас.%, от 0,0001 до 10 мас.%, от 0,001 до 10 мас.%, от 0,01 до 10 мас.%, от 0,1 до 10 мас.% и от 1 до 10 мас.%, а также биологически активные вещества в количестве, выбранном из группы, состоящей из от 0,000001 до 10 мас.%, от 0,0001 до 10 мас.%, от 0,001 до 10 мас.%, от 0,01 до 10 мас.%, от 0,1 до 10 мас.% и от 1 до 10 мас.%.

Другой областью использования гидрофобина в качестве усилителя пенетрации согласно настоящему изобретению является получение мембран, матрицы и пластырей, содержащих биологически активные вещества, например, выбранные из группы, состоящей трансдермальных терапевтических систем (TTS).

Их получают, например, таким образом, как описано в "Arzneiformelehre" von Ursula Schoffling, 4. Auflage, Deutsche Apotheker Verlag, 2003, Seiten 462 bis 468.

Составы содержат помимо описанных там вспомогательных веществ гидрофобии в количестве, выбранном из группы, состоящей из от 0,000001 до 30 мас.%, от 0,0001 до 30 мас.%, от 0,001 до 30 мас.%, от 0,01 до 30 мас.%, от 0,1 до 30 мас.% и от 1 до 30 мас.%, а также биологически активные вещества в количестве, выбранном из группы, состоящей из от 0,000001 до 30 мас.%, от 0,0001 до 30 мас.%, от 0,001 до 30 мас.%, от 0,01 до 30 мас.%, от 0,1 до 30 мас.%, от 1 до 30 мас.% и от 0,1 до 50 мас.%, от 1 до 50 мас.%.

Следующим возможным использованием гидрофобина в качестве усилителя пенетрации согласно изобретению является получение косметических составов.

При этом в одном из вариантов имеются в виду косметические составы для волос, косметические составы для кожи или косметические составы для зубов.

В названных составах или композициях по изобретению в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения в качестве активных веществ используют молекулы эффектора.

Под молекулами эффектора в последующем подразумевают молекулы, обладающие некоторым предопределенным действием. Ими могут быть либо протеиноподобные молекулы, такие как энзимы, или непротеиногенные молекулы, такие как красители, светостабилизаторы, витамины и жирные кислоты либо соединения, содержащие ионы металлов.

Среди протеиноподобных молекул эффектора предпочтительными являются ферменты, пептиды и антитела.

Среди ферментов в качестве молекул эффектора предпочтительными являются оксидазы, пероксидазы, протеазы, тирозиназы, ферменты, связывающие металлы, лакто-пероксидазы, лизоцим, амилогликозидазы, глюкозеоксидазы, супероксид-дисмутазы, фотолиазы, калалазы.

В качестве протеиноподобных молекул эффектора хорошо пригодны также гидролизаты протеинов из растительных и животных источников, например, гидролизаты протеинов морского происхождения или гидролизаты шелка.

Особенно пригодными являются определенные пептиды, используемые для противостарения, такие как матриксил (наименование по Международной номенклатуре косметических компонентов (INCI): глицерин-вода-бутиленгликоль-карбомер-полисорбат 20-пальмитоил пентапептид-4); аргирелин (INCI наименование: вода, ацети-гексапептид-3); ригин (INCI наименование вода (и)-глицерин (и) Steareth-20 (и) пальмитоил тетрапептид-7); Eyeliss (INCI наименование: вода-глицерин-геспиридин-метил Chalcone-Steareth-20-дипептид-2-пальмитоил тетрапептид-7); Regu-Age (INCI наименование: оксидо редуктазы-пептиды сои-экстракт гидролизованных рисовых отрубей) и меланостатин-5 (INCI наименование: вода-декстрин-нанопептид-1).

Среди непротеиноподобных молекул эффектора предпочтительными являются полуперманентные красители или окислительные красители. В качестве красителей пригодны все обычно употребляемые красители для волос.Пригодные красители известны специалисту из Справочников по косметике, например, из Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika, Hüthig Verlag, Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1.

Кроме того, в качестве молекул эффектора предпочтительными являются антиоксиданты, антиоксиданты, которые также называют акцепторами радикалов, способные нейтрализовать, так называемые, свободные радикалы. Ими являются агрессивные соединения, образующиеся физиологически при многочисленных процессах роста вещества и выделения энергии. Они являются важными для реакций отторжения тел, однако могут также вызывать повреждение наследственного вещества (DNA), клеточных мембран и белковых телец. Эти повреждения могут привести к преждевременному старению тканей, отмиранию тканей и онкологическим заболеваниям. К антиоксидантам относятся каратиноиды аскорбиновой кислоты (витамин C, E 300), а также натрий-L-аскорбат (E 301) и кальций-L-аскорбат (E 302); аскорбилпальмитат (E 304); бутилгидроксианизол (E 320); бутилгидрокситолуол (E 321); кальций-динатрий-этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA) (E 385); галлат, а также пропилгаллат (E 310), октилгаллат (E 311) и додецилгаллат (лаурилгалат) (E 312); изоаскарбиновая кислота (E 315), а также натрийизоаскорбат (E 316); лецитин (E 322); молочная кислота (E 270); полифосфаты, такие как дифасфаты (E 450), трифосфаты (E 451) и полифосфаты (E 452), двуокись серы (E 220), а также сульфит натрия (E 221), бисульфит натрия (E 222), дисульфит натрия (E 223), сульфит калия (E 224), сульфит кальция (E 226), бисульфит кальция (E 227) и бисульфит калия (E 228); селен; токоферол (витамин E, E 306), а также альфа-токоферол (E 307), гамма-токоферол (E 308) и дельта-токоферол (E 309); хлорид двухвалентного олова (E 512); лимонная кислота (E 330), а также цитрат натрия (E 331) и цитрат калия (E 332); L-глютатион, L-цистеин, полифенолы, флаваноиды, фитоэстрогены, глютатион и антиокислительные энзимы (ферменты) супероксидисмутаза, глютатионпероксидаза и каталаза.

Согласно изобретению в качестве антиоксидантов выбирают, по меньшей мере, одно соединение из названной выше группы антиоксидантов.

Другими пригодными молекулами эффектора являются каротиноиды. Под каротиноидами согласно изобретению подразумевают следующие соединения: бета-каротин, ликопин, лютеин, астаксантин, цеаксантин, криптоксантин, цитранаксантин, кантаксантин, биксин, бета-апо-4-каротинал, бета-апо-8-каротинал, сложный эфир бета-апо-8-каротиновой кислоты, по отдельности или в виде смеси. Предпочтительно используемыми каротиноидами являются бета-каротин, ликопин, лютеин, астаксантин, цеаксантин, цитранаксантин и кантаксантин.

Под ретиноидами в рамках настоящего изобретения подразумевают витамин A-спирт (ретинол) и его производные, такие как витамин A - альдегид (ретиналь), витамин A - кислота (ретиновая кислота) и витамин A - сложный эфир (например, ретинилацетат, ретинилпропионат и ретинил-пальмитат). Термин «ретиновая кислота» включает как все транс-ретиновые кислоты, так и 13-цис ретиновую кислоту. Термины «ретинол» и «ретиналь», предпочтительно, включают все транс-соединения. В качестве предпочтительного ретиноида для суспензий по изобретению используют все транс-ретинолы, в последующем называемые ретинолом.

Другими предпочтительными молекулами эффектора являются витамины, в особенности, витамин A и его сложный эфир.

Витаминами, по существу, являются органические соединения, которые либо не синтезируются в животном и человеческом организме, либо синтезируются лишь в недостаточных количествах. На основе этого определения в качестве витаминов были классифицированы 13 компонентов или групп компонентов. К жирорастворимым витаминам относятся витамин A (ретинолы), витамин D (кальциферолы), витамин E (токоферолы, токотриэнолы) и витамин K (филлоквиноны). К водорастворимым витаминам относятся витамин B₁ (тиамин), витамин B₂ (рибофлавин), витамин B₆ (пиридоксалевая группа), витамин B₁₂ (кобаламин), витамин C (L-аскарбиновая кислота), пантотеновая кислота, биотин, фолевая кислота и ниацин.

Под витаминами, провитаминами и полупродуктами витаминов из групп A, C, E и F подразумевают, в особенности, 3,4-дидегидроретинол, бета-каротин (провитамин витамина A), аскорбиновая кислота (витамин C), а также сложный эфир пальмитиновой кислоты, глюкозиды или фосфаты аскорбиновой кислоты, токоферолы, в особенности, а-токоферол, а также его сложный эфир, например, ацетат, никотинат, фосфат и сукцинат; кроме того, витамин F, под которым подразумевают, по существу, жирные кислоты, в особенности, линолевую кислоту, линоленовую кислоту и арахидоновую кислоту.

Витамин E является собирательным наименованием группы (до настоящего времени) восьми жирорастворимых веществ, обладающих и не обладающих антиокислительным действием. Витамин E является составной частью всех мембран животных клеток, однако образуется только фотосинтезирующими активными организмами, такими как растения и цианобактерии. Четыре из восьми известных форм витамина E называются токоферолами (альфа-токоферол, бета-токоферол, гамма-токоферол и дельта-токоферол). Другие известные до настоящего времени четыре формы витамина E называются токотриенолами (альфа-токотриенол, бета-токотриенол, гамма-токотриенол и дельта-токотриенол). Кроме того, благоприятными могут быть производные этих веществ, такие как альфа-токофкрилацетат.

Витамин A и его производные и провитамины оказывают, предпочтительно, особенный разглаживающий кожу эффект

К предпочтительно используемым согласно изобретению витаминам, провитаминам или полупродуктам витаминов группы витамина B или его производным, а также производным 2-фуранона, среди прочих, относятся:

Витамин B₁: тривиальное наименование триамин, химическое название 3-[(4'-амино-2'-метил-5'-пиримидинил)метил]-5-(2-гидроксиэтил)-4-метил-тиазолийхлорид.

Витамин B₂: тривиальное наименование рибофлавин, химическое название 7,8-диметил-10-(1-D-рибитил)-бензо[g]птеридин-2,4-(3H,10H)-дион. В свободной форме рибофлавин встречается, например, в сыворотке, другие производные рибофлавина могут быть выделены из бактерий и дрожжей. Другими также пригодными по изобретению стереоизомерами рибофлавина являются выделяемый из рыбьей муки или печени миксофлавин, содержащий вместо D-рибитила радикал D-арабитила.

Витамин B₃. Под этим наименованием часто приводят такие соединения, как никотиновую кислоту и амид никотиновой кислоты (ниацинамид). Предпочтительным согласно изобретению является амид никотиновой кислоты.

Витамин B₅ (пантотеновая кислота и пантенол). Предпочтительно используют пантенол. Используемыми согласно изобретению производными пантенола являются, в особенности, сложные и простые эфиры пантенола, а также катионные производные пантенола. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения дополнительно могут использоваться помимо пантотеновой кислоты или пантенола также производные 2-фуранона. Особенно предпочтительными производными являются также коммерческие соединения дигидро-3-гидрокси-4,4-ди-метил-2(3H)-фуранон с тривиальным названием патолактон (Merck), 4-ди-гидроксиметил-g-бутиролактон (Merck), 3,3-диметил-2-гидрокси-g-бутиро-лактон (Aldrich) и 2,5-дигидро-5-метокси-2-фуранон (Merck), причем включаются категорически все стереоизомерные формы.

Витамин B₆, причем под ним подразумевают не какое-либо однородное вещество, а известные под тривиальными наименованиями пиридоксин, пиридоксамин и пиридоксаль производные 5-гидроксиметил-2-метил-пиридин-3-ол.

Витамин B₇ (биотин), известный также как витамин H или «витамин кожи». Биотином является (3aS,4S,6aR)-2-оксогексагидротиенол[3,4]имидазол-4-валериановая кислота.

Особенно предпочтительными согласно изобретению являются пантенол, пантолактон, амид никотиновой кислоты, а также биотин. Согласно настоящему изобретению могут использоваться соответствующие производные (соли, сложные эфиры, сахара, нуклеотиды, нуклеозиды, пептиды и липиды).

В качестве липофильных маслорастворимых антиоксидантов из этой группы предпочтительными являются токоферол и его производные, сложные эфиры галловой кислоты, флавоноиды и каротиноиды, а также бутилгидрокситолуол/анизол. Предпочтительными антиоксидантами являются аминокислоты, например, тирозин и цистеин, и их производные, а также дубильные вещества, в особенности, растительного происхождения.

Тритерпены, особенно, тритерпеновые кислоты, такие как урзоловая кислота, розмариновая кислота, бетулиновая кислота, ладонная кислота и брионоловая кислота.

Другими предпочтительными молекулами эффектора являются, преимущественно, низко дозируемые плодовые кислоты (альфагидроксикислоты), такие, например, как яблочная кислота, лимонная кислота, молочная кислота, винная кислота, гликолевая кислота.

В качестве молекул эффектора согласно изобретению выбирают соединения из названных выше групп плодовых кислот.

Они могут присутствовать в концентрации от 0,1% до 35%, предпочтительно, от 0,1% до 10%, в особенности, от 1% до 10%, особенно, от 1% до 5%.

Другими предпочтительными молекулами эффектора являются мочевина и ее производные. Они могут присутствовать в концентрации от 0,1% до 25%, предпочтительно, от 0,1% до 10%, в особенности, от 1 до 10% и от 1 до 5%.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения молекулы эффектора подвергают соединению с гидрофобин-полипептидной последовательностью.

Молекулы эффектора связаны с гидрофобин-полипептидной последовательностью. Связь между молекулами эффектора и гидрофобин-полипептидной последовательностью может основываться как на ковалентных связях, так и на ионных связях или связи силами Ван-дер-Ваальса.

Предпочтительным является ковалентное связывание. Это может осуществляться, например, через боковые цепи гидрофобин-полипептидной последовательности, в особенности, посредством функциональных аминогрупп или карбоксильных групп или тиольных групп. Предпочтительным является связывание посредством функциональных аминогрупп одного или нескольких радикалов лизина, посредством одной или нескольких тиольных групп, радикалов цистеина или посредством концевых N- или концевых C-функциональных групп гидрофобин-полипептида. Связи молекул эффектора с гидрофобин-полипептидной последовательностью может осуществляться непосредственно, то есть в виде ковалентного присоединения двух химических функциональных групп, уже имеющихся в молекуле эффектора, и гидрофобин-полипептидной последовательности. Например, функциональные аминогруппы гидрофобин-полипептидной последовательности связываются с карбоксилатными функциональными группами. Однако связывание может осуществляться также посредством, так называемого, линкера, то есть посредством, по меньшей мере, бифункциональной молекулы, которая вступает в связь с функциональной группой гидрофобин-полипептидной последовательности с другой функциональной группой молекулы эффектора.

Если молекула эффектора также состоит из полипептидной последовательности, то связывание молекулы эффектора и гидрофобин-полипептидной последовательности может осуществляться посредством, так называемого, протеина соединения, то есть посредством общей полипептидной последовательности, состоящей из обеих частичных последовательностей, то есть из молекулы эффектора и гидрофобин-полипептидной последовательности.

Между молекулами эффектора и гидрофобин-полипептидной последовательностью могут быть также введены, так называемые, пространственные элементы, например, полипептидные последовательности, содержащие потенциальные места расщепления протеазой, липазой, эстеразой, фосфатазой, гидролазой, или введены полипептидные последовательности, способствующие легкой отмывке протеина соединения, например, так называемые, гистаги (Histags), то есть олигогистидиновые радикалы.

В случае непротеиноподобных молекул эффектора соединение с гидрофобин-полипептидной последовательностью осуществляется, предпочтительно, посредством содержащих функциональные группы радикалов (боковых групп) гидрофобин-полипептида, входящих в ковалентную связь с химической функциональной группой молекулы эффектора.

При этом предпочтительным является связывание посредством амино-, тиольных или гидроксильных функциональных групп гидрофобин-полипептида, которые могут образовывать, например, с карбоксильными функциональными группами молекулы эффектора, при необходимости, после активирования, соответствующие амидные, тиоэфирные или сложноэфирные связи.

Другим предпочтительным связыванием гидрофобин-полипептидной последовательности с молекулой эффектора является использование линкера. Такой линкер имеет две или более, так называемые, анкерные группы, посредством которых он может присоединять гидрофобин-полипептидную последовательность и одну или несколько молекул эффектора. Анкерной группой для гидрофобин-пептида может являться, например, тиольная функциональная группа, посредством которой линкер может образовывать с радикалом цистеина гидрофобин-полипептида дисульфидную связь. Анкерной группой для молекулы эффектора может являться, например, карбоксильная функциональная группа, посредством которой линкер может образовывать с гидроксильной функциональной группой молекулы эффектора сложноэфирную связь.

Использование такого линкера позволяет осуществить точное соответствие присоединения желаемой молекуле эффектора. Кроме того, благодаря этому можно определенным образом соединить несколько молекул эффектора с гидрофобин-полипептидной последовательностью.

Используемый линкер ориентируется на присоединяемую функциональную группу. Пригодными являются, например, молекулы, которые присоединяются к гидрофобин-полипептидам посредством сульфгидрильных реакционноспособных групп, например, малеимиды, пиридилдисульфиды, альфа-галоацетилы, винилсульфон, и к молекулам эффектора посредством:

- групп, реакционноспособных по отношению к сульфгидрильным группам, (например, малеимиды, пиридилдисульфиды, альфа-галоацетилы, винилсульфоны); групп, реакционноспособных по отношению к аминогруппам (например, сукцинимидильный сложный эфир, карбодиимиды, гидоксиметилфосфин, сложный имидоэфир, PFP- сложный эфир и т.п.);

- групп, реакционноспособных по отношению к сахару или окисленному сахару (например, гидразиды и т.п.);

- групп, реакционноспособных по отношению к карбоксильным группам (например, карбодиимиды и т.п.);

- групп, реакционноспособных по отношению к гидроксильным группам (например, изоцианаты и т.п.);

- групп, реакционно-способных по отношению к тиамин-группам (например, псоралены и т.п.);

- неселективных групп (например, арилазиды и т.п.);

- фотоактивируемых групп (например, перфторфенилазид и т.п.);

- металлкомплексообразующих групп (например, EDTA, гексагис, ферритин)

- антител и их фрагментов (например, одноцепочечные антитела, F(ab)-фрагменты антител, каталитические антитела).

Альтернативно может проводиться непосредственное сочетание между активным веществом/эффектором и кератинсоединяющими доменами, например, посредством карбодиимидов, глутарового альдегида или других известных специалисту поперечно-сшивающих агентов.

Линкер может быть стабильным, терморасщепляюющимся, фоторасщепляющимся или ферментно расщепляющимся (особенно, липазами, эстеразами, протеазами, фосфатазами, гидролазами и т.п.). Соответствующие химические структуры являются известными специалисту и интегрируются между частями молекул.

Примеры ферментно расщепляющихся линкеров, которые могут использоваться в молекулах по изобретению, названы, например, в международной заявке WO 98/01406 (страница 3 строка 30 по страницу 23 строка 9), на общее содержание которой делается этим ссылка.

Содержащие гидрофобии в качестве усилителя пенетрации составы по изобретению имеют следующую область использования в косметике человека, особенно, при уходе за кожей и волосами, уходе за зубами, в уходе за животными, в уходе за выделанной кожей и при обработке ее.

Предпочтительно, составы используют в косметике кожи, ногтей, зубов и волос. Они обеспечивают высокую концентрацию и продолжительность действия эффекторов для ухода за кожей, зубами и волосами или эффекторов, защищающих кожу, ногти, зубы и волосы.

Пригодные вспомогательные вещества и добавки для приготовления косметических составов для волос, зубов или кожи являются обычно употребляемыми специалистом и могут быть заимствованы из справочников по косметике, например, Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika, Huthig Verlag, Heidelberg, 1989, ISBN 3-7785-1491-1.

Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения эти косметические составы для волос, кожи или зубов служат для ухода за волосами или кожей либо зубами или для защиты их и находятся в виде эмульсии, дисперсии, суспензии, водных составов, поверхностно-активных веществ, молочка, лосьона, крема, бальзама, мази, геля, гранул, пудры, препаратов в виде стержня, таких, например, как губная помада, в виде пен, аэрозолей или спрея. Такие композиции хорошо пригодны для локальных составов. В качестве эмульсий пригодны эмульсии типа «масло-в-воде» (М/В-тип) и «вода-в-масле» (B/M-тип) либо микроэмульсии.

Обычно косметические составы для волос, зубов или кожи используют для нанесения на кожу (локально), зубы или волосы. При этом под локальными составами подразумевают такие составы, которые пригодны для того, чтобы наносить активные вещества в тонко распределенном виде или, предпочтительно, в форме, способной ресорбироваться на коже. Для этого пригодны, например, водные или водно-спиртовые растворы, спреи, пены, пенные аэрозоли, мази, водные гели, эмульсии типа M/B и B/M, микроэмульсии или косметические препараты в форме стержня.

Согласно предпочтительному варианту осуществления косметического средства по изобретению это средство содержит носитель. Предпочтительным носителем является вода, газ, жидкость на основе воды, масло, гель, эмульсия или микроэмульсия, дисперсия или их смеси. Названные носители проявляют хорошую совместимость с кожей. Особенно предпочтительными для локальных составов являются водные гели, эмульсии или микроэмульсии.

В качестве эмульгаторов могут использоваться неионогенные поверхностно-активные вещества, цвиттерионы, амфолитные поверхностно-активные вещества или анионактивные эмульгаторы. Эмульгаторы могут содержаться в составе по изобретению в количестве от 0,1 до 10 мас.%, предпочтительно, от 1 до 5 мас.% в расчете на состав.

В качестве неионогенных поверхностно-активных веществ могут использоваться, например, поверхностно-активные вещества, по меньшей мере, одной из нижеследующих групп:

- продукты присоединения от 2 до 30 молей окиси этилена и/или от 0 до 5 молей окиси пропилена к прямоцепочечным жирным спиртам с 8-22 атомами углерода, к жирным кислотам с 12-22 атомами углерода и к алкилфенолам с 8-15 атомами углерода в алкильной группе;

- моно- и диэфиры жирных кислот с 12/18 атомами углерода и продуктов присоединения 1-30 молей окиси этилена к глицерину;

- моно- и диэфиры глицерина или сорбитана и насыщенных и ненасыщенных жирных кислот с 6-22 атомами углерода и продукты их оксиэтилирования;

- алкилмоно- и олигогликозиды с 8-22 атомами углерода в алкильном радикале и их этоксилированные аналоги;

- продукты присоединения от 15 до 60 молей окиси этилена к рицинолевому (касторовому) маслу и/или отвержденному рицинолевому маслу;

- эфиры полиолов и, особенно, полиглицериновые эфиры, такие как полигл ицеринпол ирицинолеат, полиглицеринполи-12-гидроксистеарат или полиглицериндимерат.Пригодными являются также смеси соединений из нескольких этих классов веществ;

- продукты присоединения от 2 до 15 молей окиси этилена к рицинолевому (касторовому) маслу и/или отвержденному рицинолевому маслу;

- неполный сложный эфир на основе прямоцепочечных, разветвленных, ненасыщенных или насыщенных жирных кислот, содержащих от 6 до 22 атомов углерода, рицинолевой кислоты, а также 12-гидроксистеариновой кислоты и глицерина, полиглицерина, пентаэритрита, дипентаэритрита, сахарных спиртов (например, сорбит), алкилглюкозидов (например, метилглюкозида, бутилглюкозида, лаурилглюкозида), а также полиглюкозидов (например, целлюлозы);

- моно-, ди- и триалкилфосфаты, а также моно-, ди- и/или три-полиэтилен-гликольалкилфосфаты и их соли;

- спирты шерстяного воска (ланолиновый спирт);

- сополимеры полисилоксана и простого полиалкилполиэфира или соответствующие производные;

- смешанные эфиры пентаэритрита, жирных кислот, лимонной кислоты и жирного спирта согласно патенту ФРГ DE PS 1165574 и/или смешанные эфиры жирных кислот, содержащих от 6 до 22 атомов углерода, метилглюкозида и полиолов, предпочтительно, глицерина или полиглицерина, а также

- полиалкиленгликоли;

- бетаины.

Кроме того, в качестве эмульгаторов могут использоваться цвиттерионные поверхностно-активные вещества. Цвиттерионными поверхностно-активными веществами называют поверхностно-активные соединения, содержащие в молекуле, по меньшей мере, одну четвертичную аммониевую группу и, по меньшей мере, одну карбоксилатную или сульфонатную группу. Особенно пригодными цвиттерионными поверхностно-активными веществами являются, так называемые, бетаины, такие как N-алкил-N,N-диметиламмонийглицинаты, например, кокос-алкилдиметиламмонийглицинат, N-ациламино-пропил-N,N-диметиламмонийглицинаты, например, кокосациламинопропилдиметиламмонийглицинат, и 2-алкил-3-карбоксиметил-3-гидроксиэтилимидазолины, содержащие в каждом случае от 8 до 18 атомов углерода в алкиле или ацильной группе, а также кокосациламиноэтилгидроксиэтилкарбоксиметилглицинат.Особенно предпочтительным является известное под наименованием CTFA производное амида жирной кислоты - кокосамидопропилбетаин.

Также пригодными эмульгаторами являются амфолитные поверхностно-активные вещества. Под амфолитными поверхностно-активными веществами подразумевают поверхностно-активные соединения, содержащие в молекуле помимо одной C_8,18-алкильной или C_8,18-ацильной группы, по меньшей мере, одну свободную аминогруппу и, по меньшей мере, одну группу -COOH или -SO₃H и способные образовывать внутренние соли. Примерами пригодных амфолитных поверхностно-активных веществ являются N-алкилглицины, N-алкилпропионовые кислоты, N-алкиламиномасляные кислоты, N-алкилиминодипропионовые кислоты, N-гидроксиэтил-N-алкиламидопропилглицины, N-алкилтаурины, N-алкилсаркозины, 2-алкиламинопропионовые кислоты и алкиламиноуксусные кислоты, в каждом случае, содержащие около от 8 до 18 атомов углерода в алкильной группе.

Особенно предпочтительными амфолитными поверхностно-активными веществами являются N-кокосалкилиминопропионат, кокосациламиноэтиламинопропионат и C_12/18-ацилсаркозин.

Помимо амфолитных эмульгаторов могут также использоваться четвертичные эмульгаторы, причем особенно предпочтительными такими эмульгаторами являются эмульгаторы типа четвертичных сложных эфиров, предпочтительно, соли метил-кватарнизированных триэтанол-аминовых диэфиров жирных кислот.Кроме того, в качестве анионактивных эмульгаторов могут использоваться сульфаты алкиловых простых эфиров, сульфаты моноглицеридов, сульфаты жирных кислот, сульфосукцинаты и/или эфиркарбоновые кислоты.

В качестве масляной основы могут использоваться спирты Гербе на основе жирных спиртов с 6-18 атомами углерода, предпочтительно, с 8-10 атомами углерода, эфиры прямоцепочечных жирных кислот с 6-22 атомами углерода и прямоцепочечных жирных спиртов с 6-22 атомами углерода, эфиры разветвленных карбоновых кислот с 6-13, атомами углерода с прямоцепочечными жирными спиртами с 6-22 атомами углерода, эфиры прямоцепочечных жирных кислот с 6-22 атомами углерода с разветвленными спиртами, особенно, с 2-этилгексанолом, эфиры прямоцепочечных и/или разветвленных жирных кислот с многоатомными спиртами (такими как, например, пропиленгликоль, димерные диолы или тримерные триолы) и/или бета-спирты Гербе, триглицериды на основе жирных кислот с 6-10 атомами углерода, жидкие моно-, ди- и триглицеридные смеси на основе жирных кислот с 6-18 атомами углерода, эфиры жирных спиртов с 6-22 атомами углерода и/или спирты Гербе с ароматическими карбоновыми кислотами, особенно, с бензойной кислотой, эфиры дикарбоновых кислот с 2-12 атомами углерода и прямоцепочечных или разветвленных спиртов с 1-22 атомами углерода или полиолов, содержащих от 2 до 10 атомов углерода и от 2 до 6 гидроксильных групп, растительные масла, разветвленные первичные спирты, замещенные циклогексаны, прямоцепочечные карбонаты жирных спиртов с 6-22 атомами углерода, карбонаты Гербе, эфиры бензойной кислоты с прямоцепочечными и/или разветвленными спиртами с 6-22 атомами углерода (например, Finsolv^Ò TN), простые диалкиловые эфиры, продукты раскрытия цикла эпоксидированных эфиров жирных кислот с полиолами, силиконовые масла и/или алифатические либо нафтеновые углеводороды. Кроме того, в качестве масляной основы могут использоваться также силиконовые соединения, например, диметилполисилоксаны, метилфенилполисилоксаны, циклические силикаты, такие как аминомодифицированные, модифицированные жирной кислотой, спиртами, простыми полиэфирами, эпоксимодифициированные, модифицированные фтором, алкил- и/или гликозидмодифицированные силиконовые соединения, которые могут находиться при комнатной температуре как в жидком, так и в смолообразном состоянии. Масляная основа может содержаться в средствах по изобретению в количестве от 1 до 90 мас.%, предпочтительно, от 5 до 80 мас.% и, в особенности, от 10 до 50 мас.% в расчете на состав.

Пригодными молекулами эффектора (ii), в особенности, для дезодорантов являются парфюмерные масла, циклодекстрины, ионообменники, рицинолеат цинка, ингибирующие микробы/бактериостатические соединения (например, DCMX, Irgasan DP 300, TCC).

Для антиперспирантов пригодны танины и цинк/алюминиевые соли.

Помимо описанных вспомогательных веществ составы содержат гидрофобии в количестве, выбранном из группы, состоящей из от 0,000001 до 10 мас.%, 0,0001 до 10 мас.%, 0,001 до 10 мас.%, 0,01 до 10 мас.%, 0,1 до 10 мас.% и 1 до 10 мас.%.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения гидрофобии используют в качестве усилителя пенетрации в средствах для защиты растений.

Кроме того, объектами настоящего изобретения являются способ получения средств для защиты растений, содержащих гидрофобии, а также средства для защиты растений, содержащие гидрофобии.

Средство для защиты растений содержит, кроме описанных вспомогательных веществ, гидрофобии в количестве, выбранном из группы, состоящей из от 0,000001 до 10 мас.%, 0,0001 до 10 мас.%, 0,001 до 10 мас.%, 0,01 до 10 мас.%, 0,1 до 10 мас.% и 1 до 10 мас.%.

Содержание активного вещества и/или эффектора может варьироваться в широких пределах. Амфолитные полимерные составы особенно способствуют приготовлению, так называемых, концентратов активного вещества, содержащих активное вещество в количестве, по меньшей мере, 5 мас.%, например, в количестве от 5 до 50 мас.% и, особенно, в количестве от 5 до 20 мас.% в расчете на общую массу состава.

Водные составы активного вещества по изобретению, предпочтительно, могут не содержать или содержат в небольшом количестве растворитель, то есть содержание органических растворителей в водном составе активного вещества часто составляет не более 10 мас.%, особенно, не более 5 мас.%, в особенности, не более 1 мас.% в расчете на общую массу состава.

В водные составы по изобретению могут входить многочисленные различные активные вещества и эффекторы. Особый вариант осуществления изобретения относится к составу активных веществ для защиты растений, то есть гербицидов, фунгицидов, нематоцидов, акарицидов, инсектицидов, а также к активным веществам, регулирующим рост растений.

Примеры фунгицидно активных веществ, которые могут использоваться в качестве активных веществ в водных составах по изобретению, включают:

- ацилаланины, такие как беналаксил, металаксил, офурац, оксадиксил;

- аминопроизводные, такие как алдиморф, додин, додеморф, денпропиморф, фенпропидин, гуазатин, имиоктадин, спироксамин, тридеморф;

- анилинопиримидины, такие как пириметанил, мепанипирин или циродинил;

- антибиотики, такие как циклогексимид, кризеофулвин, касугамицин, натамицин, полиоксин и стрептомицин;

азолы, такие как битертанол, бромоконазол, дифеноконазол, динитроконазол, эпоксиконазол, фенбуконазол, флуквиконазол, флузилазол, флутриафол, гексаконазол, имазалил, ипконазол, метконазол, миклобутанил, пенконазол, пропиконазол, прохлораз, протиоконазол, тебуконазол, тетраконазол, триадимефон, триадименол, трифлумицил, тритиконазол;

- 2-метоксибензофеноны, такие как описаны в европейском патенте EP A 897904 общей формулы I, например, метрафенон;

- дикарбоксимиды, такие как ипродион, миклозолин, процимидон, винклозолин;

- дитиокарбаматы, такие как фебрам, набам, манеб, макоцеб, метам, метирам, пропинеб, поликарбамат, тирам, цирам, цинеб;

- гетероциклические соединения, такие как анилазин, беномил, боксалид, карбендазим, карбоксин, оксикарбоксин, циазофамид, дазомет, дитианон, фамоксадон, фенамидон, фенаримол, фуберидазол, флутоланил, фураметпир, изопротиолон, мепронил, нуаримол, пикобезамид, пробеназол, проквиназид, пирифенокс, пироквилон, квиноксифен, силтиофам, тиабендазол, тифлузамид, тиофанат-метил, тиадинил, трициклазол, трифорин;

- производные нитрофенила, такие как бинапакрил, динокап, динобутон, нитрофтал-изопропил;

- фенилпирролы, такие как фенпиклонил, а также флудиоксонил;

- не классифицированные фунгициды, такие как ацибензолар-S-метил, бентиаваликарб, карпропамид, хлороталонил, цифлуенамид, цимоксанил, дикломезин, диклоцимет, диэтофенкарб, эдифенфос, этабоксам, фенгесамид, фентин-ацетат, феноксанил, феримзон, флуазинам, фозетил, фозетил-алюминий, ипроваликарб, гексахлоробензол, метрафенон, пенцицурон, пропамокарб, фталид, толоклофос-метил, квинтозен, коксамид;

- стробилурины, такие как описаны в международной заявке WO 03/075663 общей формулы I, например, азоксистробин, димокси-стробин, флуоксастробин, крезоксим-метил, метолиностробин, ориза-стробин, пикоксистробин, пираклостробин, а также трифлоксистробин;

- производные сульфеновой кислоты, такие как каптафол, каптан, дихлофлуанид, фолпет, толилфлуанид;

- амиды коричной кислоты и аналоги, такие как диметоморф, флуметовер, флуморф;

- 6-арил-[1,2,4]-триазоло[1,5-a]пиримидины, такие как описаны, например, в международных заявках WO 98/46608, WO 99/41255 или WO 03/004465 (в каждом случае, описанные общей формулой I (страница 1 строка 8 по страницу 11 строка 45, а также соединения, представленные формулой IA в сочетании с таблицами от 1 до 44 и таблицей A в международной заявке WO 03/00465);

- амидные фунгициды, такие как циклофенамид, а также (Z)-N-[ -(циклопропилметоксиимино)-2,3-дифтор-6-(дифторметокси)бензил]-2-фенилацетамид.

Примерами гербицидов, которые могут входить в водный состав активных веществ по изобретению включают:

- 1,3,4-тиадиазолы, такие как бутидазол и ципразол;

- амиды, такие как аллидохлор, бензоилпропэтил, бромобутид, хлортиамид, димепиперат, диметенамид, дифенамид, этобензанид, флампропметил, фозамин, изоксабен, метазахлор, алахлор, ацетохлор, метолахлор, монамид, напталам, пронамид, пропанил;

- аминофосфорные кислоты, такие как биланафос, буминафос, глуфосинатеаммоний, глифозат, сулофозат;

- аминотриазолы, такие как амитрол, анилиды, такие как анифос, мефенацет;

- арилоксиалкановые кислоты, такие как 2,4-D, 2,4-DB, кломепроп, дихлорпроп, дихлорпроп-P, дихлорпроп-P, фенопроп, флуроксипир, MCPA, MCPB, мекопроп, мекопроп-P, напропамид, напро-панилид, трихлопир;

- бензойные кислоты, такие как хлорамбен, дикамба;

- бензотиадиазиноны, такие как бентазон;

- отбеливатели, такие как кломазон, дифлуфеникан, фторохлоридоны, флупаоксам, флуридон, пиразолат, сулкотрион;

- карбаматы, такие как карбетамид, хлорбуфам, хлорпро-фам, десмедифам, фенмедипам, вернолат;

- хинолиновые кислоты, такие как квинклорак, квинмерак;

- дихлорпропионовые кислоты, такие как далапон;

- дигидробензофураны, такие как этофумезаты;

- дигидрофуран-3-он, такой как флуртамон;

- динитроанилины, такие как бенефан, бутрамин, динитрамин, эталфлурамин, флухлорамин, изопропамин, нитрамин, оризамин, пендиметалин, продиамин, профлуралин, трифлуралин, динитрофенолы, такие как бромфеноксим, динозеб, динозеб-ацетат, динотериб, DNOC, минотерб-ацетат;

- дифениловые простые эфиры, такие как ацифлуорфен-натрий, аклонифен, бифенокс, хлорнитрофен, дифеноксурон, этоксифен, флуородифен, флуородифен-этил, фомезафен, фуралоксифен, лактофен, нитрофен, нитрофлуорфен, окси флуорфен;

- дипиридины, такие как циперкват, дифензокват-метилсульфат, дикват, паракват-дихлорид;

- имидазолы, такие как изокарбамид;

- имидазолиноны, такие как имазаметапир, имазапир, имазаквин, имазетабенз-метил, имазетапир, имазапик, имазамокс;

- оксадиазолы, такие как метазолы, оксадиаргил, оксадиазон;

- оксираны, такие как тридифен;

- фенолы, такие как бромоксинил, иоксинил;

- сложные эфиры феноксифеноксипропионовой кислоты, такие как клодинафоп, цигалофон-бутил, дихлофоп-метил, феноксапроп-этил, феноксапроп-п-этил, фентиапроп-этил, флуазифон-бутил, флуазифоп-п-бутил, галоксифоп-этокси-этил, галоксифоп-метил, галоксифоп-п-метил, изоксапирифоп, пропаквизафоп, квизалофоп-этил, квизалофоп-п-этил, квизалофоп-тефурил;

- фенилуксусные кислоты, такие как хлорфенак;

- фенилпропионовые кислоты, такие как хлорфенпроп-метил;

- ppi-активные вещества, такие как бензофенап, циндон-этил, флумиклорак-пентил, флумиоксазин, флумипропин, флупропацил, сульфентразон, тидиазимин;

- пиразолы, такие как нипираклофен;

- пиридазины, такие как хлоридазон, малегидразиды, норфлуразон, пиридаты;

- пиридинкарбоновые кислоты, такие как клопиралид, дитиопир, тиклорам,тиизопир;

- пиримидиловые простые эфиры, такие как пиритиобаковая кислота, пиритиобак-натрий, KIH-2023, KIH-6127;

- сульфонамиды, такие как флуметзулам, метозулам;

- триазокарбоксамиды, такие как триазофенамид;

- урацилы, такие как бромацил, ленацил, тербацил;

- кроме того, бензазолин, бенфурезат, бесулид, бензофлуор, бентазон, бутамифос, кафенстерол, хлортал-диметил, цинметилин, дихлобенил, эндоталл, флуорбентранил, мефлуидид, перфлуидон, пиперофос, топрамезон и прогександион-кальций;

- сульфонилмочевины, такие как амадосульфурон, азимсульфон, бенсульфурон-метил, хлоримурон-этил, хлорсульфурон, циносульфурон, циклосульфамурон, этаметсульфурон-метил, флазисульфурон, гало-сульфурон-метил, имазолсульфурон, метсульфурон-метил, никосульфу-рон, примисульфурон, просульфурон, пиразосульфурон-этил, римсуль-фурон, сулфометурон-метил, тифенсульфурон-метил, триасульфурон, трибенурон-метил, трифлусульфурон-метил, тритосульфурон;

- активные вещества для защиты растений типа циклогексанона, такие как аллоксидим, клетодим, клопроксидим, циклоксидим, зетоксидим и тралоксидим. Наиболее предпочтительными гербицидноактивными веществами типа циклогексенона являются тепралоксидим (сравни AGROW № 243, 3.11.95, страница 21, Caloxydim - калоксидим) и 2-(1-[2-{4-хлорфенокси}пропилоксиимино]бутил)-3-гидрокси-5-(2H-тетрагидротиопиран-3-ил)-2-циклогексин-1-он и типа сульфонилмочевин: N-(((4-метокси-6-[трифторметил]-1,3,5-триазин-2-ил)амино)карбонил)-2-(трифторметил)-бензолсульфонамид.

Примеры инсектицидов, которые могут входить в водный состав активного вещества согласно изобретению, включают:

- органфосфаты, такие как ацефат, ацинфос-метил, хлорпирифос, хлорфенвинфос, диацинон, дихлорфос, диметилвинфос, диоксабенофос, дикротофос, диметоат, дисульфотон, этион, EPN, фенитротион, фентион, изоксатион, малатион, метамидофос, метидатион, метил-паратион, мевинфос, монокротофос, оксидеметон-метил, параоксон, паратион, фентоат, фозалон, фосмет, фосфамидон, форат, фоксим, пиримифос-метил, профенофос, протиофос, примифос-этил, пираклофос, пиридафентион, сульпрофос, триазофос, трихлорфон, тетрахлорвинфос, вамидотион;

- карбаматы, такие как аланикарб, бенфурокарб, бендиокарб, карбарил, карбофуран, карбосульфон, феноксикарб, фуратиокарб, индоксакарб, метиокарб, метомил, оксамил, пиримикарб, пропоксур, тиодикарб, триазамат;

- пиретроиды, такие как бефентрин, цифлутрин, циклопротрин, циперметрин, дельтаметрин, эсфенвалерат, этофенпрокс, фенпропатрин, фенвалерат, цигалотрин, лямбда-цигалотрин, перметрин, силафлуофен, тау-флувалинат, тефлутрин, тралометрин, альфа-циперметрин, зета-циперметрин, перметрин;

- регуляторы роста членистоногих: a) ингибиторы синтеза хитина, например, бензоилмочевина, такая как хлорфлуазурон, дифлубензурон, флуциклокурон, флуфенокурон, гексафлумурон, луфенурон, новалурон, тефлубензурон, трифлумурон; бупрофецин, диофенолан, гекситиазокс, этоксазол, клофентазин; b) экдизон-антагонисты, такие как галофенозид, метоксифенозид, тебуфенозид; c) ювиноиды, такие как пирипроксифен, метопрен, феноксикарб; d) липид-ингибиторы биосинтеза, такие как спиродиклофен;

- неоникотиноиды, такие как флоникамид, клотианидин, динотефуран, имидаклоприд, тиаметоксам, нитенпирам, нитиазин, ацетамиприд, тиаклоприд;

- другие не классифицированные инсектициды, такие как абаликтин, ацеквиноцил, ацетамиприд, амитраз, азадирахтин, бензультап бифеназат, картап, хлорфенапир, хлордимеформ, циромазин, диафентиурон, динетофурон, диофенолан, эмамектин, эндосульфан, этипрол, фенозаквин, фипронил, форметанат, форметанат гидрохлорид, гамма-НСН гидрометилон, имидаклоприд, индоксакарб, изопрокарб, метолкарб, пиридабен, пиметрозин, спиносад, тебуфенпирад, тиаметоксам, тиоциклам, ХМС и ксилилкарб; и

- N-фенилсемикарбазоны, такие как описаны общей формулой I в европейской заявке на патент EP-A 462156, в особенности, соединения общей формулы IV:

,

где R¹¹ и R¹² , независимо друг от друга означают водород, галоген, CN, алкил с 1-4 атомами углерода, алкокси с 1-4 атомами углерода или галоалкокси с 1-4 атомами углерода и R¹³ означает алкокси с 1-4 атомами углерода, галоалкил с 1-4 атомами углерода или галоалкокси с 1-4 атомами углерода, например, соединение IV, где R¹ означает 3-CF3 и R² означает 4-CN; a R³ означает 4-CF3.

Употребляемыми регуляторами роста являются, например, хлормекват-хлорид, мепикватхлорид, прогексадион-кальций или группа гиббериллина. К ней относятся, например, гиббериллин GA1, GA-3, GA-4, GA-5 и GA-7 и т.п., и соответствующие экзо-16,17-дигидрогиббериллины, а также их производные, например, сложный эфир с карбоновыми кислотами, содержащими 1-4 атома углерода. Предпочтительным согласно изобретению является экзо-16,17-дигидро-СА5-13-ацетат.

Предпочтительный вариант изобретения относится к применению гидрофобина по изобретению для получения водных составов активных веществ - фунгицидов, особенно, стробилуринов, азолена и 6-арил-триазоло[1,5-a]пиримидинов, таких как описаны, например, в международных заявках WO 98/46608, WO 99/41255 или WO 03/004465, в каждом случае, общей формулы I (страница 1, строка 8 по страницу 11, строка 45, а также соединений, приведенных в формуле IA, в сочетании с таблицами от 1 до 44 и таблицей A в международной заявке WO 03/00465), в особенности, биологически активных веществ общей формулы V:

где:

R^x означает группу NR¹⁴R¹⁵ или прямоцепочечный или разветвленный алкил с 1-8 атомами углерода, при необходимости, замещенный на галоген, OH, алкокси с 1-4 атомами углерода, фенил или циклоалкил с 3-6 атомами углерода, алкенил с 2-6 атомами углерода, циклоалкил с 3 - 6 атомами углерода, циклоалкенил с 3-6 атомами углерода, фенил или нафтил, причем четыре названных последних радикала могут содержать один, два, три или четыре заместителя, выбранных из галогена, OH, алкила с 1-4 атомами углерода, галогеналкокси с 1-4 атомами углерода, алкокси с 1-4 атомами углерода и галогеналкила с 1-4 атомами углерода;

R¹⁴ и R¹⁵, независимо друг от друга означают водород, алкил с 1-8 атомами углерода, галогеналкил с 1-8 атомами углерода, циклоалкил с 3-10 атомами углерода, галогенциклоалкил с 3-6 атомами углерода, алкенил с 2-8 атомами углерода, алкадиенил с 4-10 атомами углерода, галогеналкенил с 2-8 атомами углерода, циклоалкенил с 3-6 атомами углерода, галогенциклоалкенил с 2-8 атомами углерода, алкинил с 2-8 атомами углерода, галогеналкинил с 2-8 атомами углерода или циклоалкинил с 3-6 атомами углерода;

R¹⁴ и R¹⁵, вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют пяти -восьмичленный гетероцикл, присоединенный через азот и, возможно, содержащий один, два или три других гетероатома из группы O, N и S в качестве члена цикла и/или один или несколько заместителей из группы: галоген, алкил с 1-6 атомами углерода, галогеналкил с 1-6 атомами углерода, алкенил с 2-6 атомами углерода, галогеналкенил с 2-6 атомами углерода, алкокси с 1-6 атомами углерода, галогеналкокси с 1-6 атомами углерода, алкенилокси с 3-6 атомами углерода, галогеналкенилокси с 3-6 атомами углерода, (эксо)-алкилен с 1-6 атомами углерода и оксиалкиленокси с 1-3 атомами углерода;

L является выбранным из галогена, циано, ал кила с 1-6 атомами углерода, галогеналкила с 1-4 атомами углерода, алкокси с 1-6 атомами углерода, галогеналкокси с 1-4 атомами углерода и алкоксикарбонила с 1-6 атомами углерода;

L₁ обозначает алкил с 1-6 атомами углерода или галогеналкил с 1-6 атомами углерода и, в особенности, фтор или хлор;

X означает галоген, алкил с 1-4 атомами углерода, циано, алкокси с 1-4 атомами углерода или галогеналкил с 1-4 атомами углерода и, предпочтительно, галоген или метил и, в особенности, хлор.

Примерами соединений формулы V являются:

5-хлор-7-(4-метилпиперидин-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]-триазоло-[1,5-a]пиримидин;

5-хлор-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]-триазоло[1,5-a]пиримидин;

5-хлор-7-(морфолин-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(пиперидин-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло-[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(морфолин-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(изопропиламино)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(циклопентиламино)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(2,2,2-трифторэтиламино)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(1,1,1-трифторпропан-2-иламино)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(3,3-диметилбутан-2-иламино)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(циклогексилметил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(циклогексил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(2-метилбутан-3-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(3-метилпропан-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло-[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(4-метилциклогексан-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]-триазоло[1,5-а]-пиримидин;

5-хлор-7-(гексан-3-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(2-метилбутан-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(3-метилбутан-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло-[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(1-метилпропан-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло-[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(4-метилпиперидин-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]-триазоло-[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]-триазоло-[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(морфолин-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]-триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(пиперидин-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(морфолин-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]-триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(изопропиламино)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(циклопентиламино)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло-[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(2,2,2-трифторэтиламино)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]-триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(1,1,1-трифторпропан-2-иламино)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]-триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(3,3-диметилбутан-2-иламино)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]-триазоло[1,5-а]-пиримидин;

5-хлор-7-(циклогексилметил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(циклогексил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(2-метилбутан-3-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло-[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(3-метилпропан-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло-[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(4-метилциклогексан-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(гексан-3-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло-[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(2-метилбутан-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло-[1,5-a]-пиримидин;

5-хлор-7-(3-метилбутан-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло-[1,5-a]-пиримидин и

5-хлор-7-(1-метилпропан-1-ил)-6-(2,4,6-трифторфенил)-[1,2,4]триазоло-[1,5-a]-пиримидин.

Другой предпочтительный вариант осуществления изобретения относится к применению гидрофобина в качестве усилителя пенетрации для получения водных составов биологически активных веществ - инсектицидов, в особенности, арилпирролов, таких как хлорфенапир, пиретроидов, таких как бифентрин, цифлутрин, циклопротрин, циперметрин, дельтаметрин, эсфонвалерат, этофенпрокс, фенпропатрин, фенвалерат, цигалотрин, лямбда-цигалотрин, перметрин, силафлуофен, тау-флувалинат, тефлутрин, тралометрин, альфа-циперметрин, зета-циперметрин и перметрин, неоникотиноиды и семикарбазоны формулы IV, фипронил.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения применение гидрофобина в качестве усилителя пенетрации приводит к снижению концентрации биологически активных веществ, необходимой для достижения желаемого целевого действия до 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, предпочтительно, до 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 18%, 20%, наиболее предпочтительно, до 22%, 25% 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, особенно, 60%, 70%, 80%, 90%.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения сначала на обрабатываемую поверхность или на границу раздела фаз наносят раствор с фосфатным буфером. Гидрофобии растворяют в 50 ммолях раствора гидрофосфата натрия (NaH₂PO₄) с рН 7,5 в концентрации от 0,01 до 0,2 мас.%.

После выдерживания с гидрофобин-раствором осуществляют нанесение состава, содержащего, по меньшей мере, одно биологически активное вещество.

Другим объектом настоящего изобретения является способ улучшения поглощения активных веществ при локальном употреблении, отличающийся тем, что перед нанесением активных веществ или одновременно с нанесением активных веществ наносят гидрофобии.

Следующим объектом настоящего изобретения является способ получения средства для улучшения поглощения активных веществ при локальном употреблении, характеризующийся тем, что вводят гидрофобии в твердой форме, в растворе или в дисперсии в органической или неорганической среде в состав, содержащий, по меньшей мере, одно активное вещество.

Примеры

Пример 1а

Предпосылкой является то соображение, что культивирование клеток со сравниваемыми веществами, обладающими антиоксидантным действием, под влиянием гидрофобина (гидрофобии A (SEQ ID 20 из международной заявки WO 2007/014897) или В (SEQ ID 26 из международной заявки WO 2007/014897)) в качестве усилителя пенетрации приводит к усилению антиокислительного потенциала. В качестве контрольных испытаний помимо культур, культивированных со сравнительными веществами и без усилителя пенетрации, использовали необработанные культуры и культуры, обработанные наполнителем (связующим).

Для определения дозы перед началом основного испытания проводились испытания используемых концентраций посредством цитотоксичных проб (в данном случае посредством превращения МТТ). На основе этого предварительного опыта для определения влияния протеина на антиокислительную способность витамина С, токоферилацетата и кверцетина, а также с учетом экономичности использования была выбрана концентрация 0,001%.

В качестве вещества для сравнения использовали витамин Е (альфа-токоферилацетат), витамин С (магний-аскорбилфосфат) и кверцетин. В качестве испытуемых клеток использовали клетки нормальных дермальных соединительных тканей (фибробласты), так как они дают хорошую интенсивность сигнала в способах испытаний.

Для определения антиокислительных свойств растворов производили посев NHDF-культур (нормальных человеческих дермальных фибробластов) в сосуде для культивирования с 48 ячейками и осуществляли культивирование до полного покрытия поверхности культивирования. С этими статическими культурами затем проводили испытания. Сначала культуры обрабатывали испытуемыми растворами в течение 24 часов. Непосредственно после этого удаляли среду (включая испытуемые растворы), промывали культуры буфером и инкубировали с флуоресцентным красителем (DCFH). Непосредственно после этого несколько раз промывали для удаления не поглощенного красителя, а клетки смешивали с бесцветной средой для испытания. Пластинки с клетками помещали в считывающее устройство для определения интенсивности флуоресценции и начинали измерение с начальной фазы без напряжения. Затем посредством добавления перекиси водорода многократно индуцировали межклеточные свободные радикалы, образующие с красителем флуоресцирующее производное. Однако если свободные радикалы гасятся перед этим окислением антиокислителями, то образование флуоресцирующих производных предотвращается или уменьшается.

Слабая флуоресценция также показывает высокую антиокислительную способность. Эти испытания проводили в каждом случае 6 раз в трех независимых процессах.

В заключение результаты испытаний представлены в виде графиков.

С целью обзорности из общего периода времени 135 мин в каждом случае после 90 мин устанавливали момент поглощения (полное изображение показано в приложении). При этом по оси «Y» указано окислительное напряжение в клетках в виде флуоресценции, возникающей при взаимодействии свободных радикалов с находящимся межклеточным красителем DCFH. Это показывает, что более низкие столбики означают низкое окислительное напряжение и, следовательно, высокую антиокислительную способность клеток как следствие дополнения. Все показатели флуоресценции коррегируются с содержанием протеина культур после окончания измерений (определенным окрашиванием масс). Благодаря этому выравниваются колебания в числе клеток, которые также отражаются на колебаниях флуоресценции (по причине различного количества красителя). Представлены также данные, приведенные к числу клеток.

Сам по себе токоферилацетат не имеет никакого антиокислительного потенциала с использованной линией клеток в проведенных испытаниях.

Все же в двух из трех процессах можно наблюдать у комбинаций гидрофобии A/токоферилацетат и гидрофобии B/токоферилацетат пониженное окислительное напряжение. Это можно интерпретировать как слабый позитивный эффект протеина. Сам по себе один только гидрофобии обусловливает в двух из трех процессах слабо пониженное окислительное напряжение, которое лишь отчасти может объяснить снижение окислительного напряжения в комбинациях с токоферилацетатом. В третьем процессе этот эффект становится наиболее явным. Сам по себе один протеин в этом процессе не показывает какого-либо снижения окислительного напряжения, в то время как комбинация протеинов и токоферилацетата показывает обратное (Фиг.1).

Пример 1b

В качестве другого вещества с антиокислительным потенциалом испытывали кверцетин (Quercetin) с целью выявления его влияния на снижение окислительного напряжения в условиях испытания и с использованием веществ и методов, таких же, как в Примере 1a.

Результаты (Фиг.2) показывают, что эффективность действия кверцетина в сочетании с гидрофобином и протеином В повышалась (Н-протеин B 0,05% в сочетании с 0,0006% кверцетина).

Пример 2

Улучшение проникновения и связывания красителя при тонировании волос при обработке гидрофобином.

В этом испытании использовали евро-натуральные светлые волосы фирмы Kerling International Haarfabrik GmbH.

При тонировании волос испытывали коммерческие препараты (стадия 1).

Вариант испытания 1

Получают гидрофобии A или B с концентрацией от 0,01 до 0,2 мас.%. Растворителем является 50 ммолях раствора дигидрофосфата натрия (NaH₂ PO₄) с pH 7,5. Для ускорения растворения используют перемешивание раствора в течение 1 часа магнитной мешалкой при комнатной температуре.

Дополнительно для сравнения готовят суспензию без гидрофобина.

Осуществляют выдерживание волос в течение 1 часа при 32°C с последующей промывкой питьевой водой и сушкой.

Тонирование волос проводили согласно указаниям изготовителя.

Повторные промывки (1 минута вспенивание, 1 минута промывка, сушка при комнатной температуре) раствором Penaten Baly детского шампуня (1%) и последующая оценка в высушенном состоянии.

Вариант испытания 2

Получают гидрофобии A или B с концентрацией от 0,01 до 0,2 мас.%. Растворителем является 50 ммольный раствор дигидрофосфата натрия (NaH₂PO ₄) с pH 7,5. Для ускорения растворения перемешивают магнитной мешалкой в течение 1 часа при комнатной температуре.

Дополнительно готовят суспензию без гидрофобина.

Инкубация волос в течение 1 часа при 32°C с последующей непосредственной сушкой феном при 50°C

Промывка волос питьевой водой и сушка при комнатной температуре.

Тонирование волос проводили согласно указаниям изготовителя.

Повторные промывки (1 минута вспенивание, 1 минута промывка, сушка при комнатной температуре) раствором Penaten Baly детского шампуня (1%) и последующая оценка в высушенном состоянии.

У обработанных гидрофобином A или B волос можно было обнаружить усиление связывания и поглощения красителя, в особенности, в первом варианте испытания.

Пример 3

Усиление пенетрации в волосы молочной кислоты при обработке гидрофобином.

Приготовление растворов гидрофобина:

1. Приготовление 1%-ного раствора гидрофобина A и B в воде с ультратонкой фильтрацией растворением гидрофобина при интенсивном перемешивании магнитной мешалкой со скоростью перемешивания 900 об./мин в течение 45 минут.

2. Приготовление 1 мл обычно употребляемого готового раствора гидрофобина:

- 800 мкл воды ультратонкой фильтрации;

-+100 мкл 10-ти кратного буфера (500 ммолей трис, 10 ммолей хлорида кальция, pH 8);

-+100 мкл раствора гидрофобина.

Это соответствует 0,1%-ному раствору гидрофобина в 50 ммолях трис.1 ммолях хлорида кальция, pH 8).

Проведение испытания:

1. Подвергнутую глубокому замораживанию и освобожденную от шерсти свиную кожу (не вареную) пропитывали при комнатной температуре.

2. Обозначение поля нанесения раствором размером около 2 см×2 см.

3. Нанесение следующих растворов (снятие слоя кожи)

- контрольный опыт (без раствора);

- 100 мкл 0,1% H*A

- 100 мкл 0,1% H*B

4. Инкубация растворов при комнатной температуре в течение 1,5 часов.

5. Для удаления присутствующих солей буфера все поля нанесения промывали дважды по 500 мкл воды ультратонкой фильтрации и промокали бумажной салфеткой.

6. Нанесение на все поля, в каждом случае, 100 мкл 15%-ной молочной кислоты.

7. Инкубация растворов при комнатной температуре в течение 10 минут.

8. Удаление избыточной молочной кислоты бумажной салфеткой.

9. Измерение показателя pH свиной кожи на каждом поле нанесения. Проводили трехкратное измерение и использовали среднее значение pH. Присутствующую после измерения показателя pH воду промокают бумажной салфеткой. Использовали измеритель pH кожи Skin-pH-Meter PH 905 фирмы Courage & Khazaka.

10. Снятие самого верхнего свободного слоя клеток посредством Corneofix-Klebestreifens фирмы Courage & Khazaka.

11. Повторное измерение показателя pH.

12. Всего использовали трижды Corneofix-Klebestreifen и затем измеряли показатель pH.

Показатель pH	Без снятия слоя клеток	Однократное снятии слоя клеток	Двукратное снятии слоя клеток	Трехкратное снятии слоя клеток
Контроль	2,83	3,52	3,62	3,67
H*A	2,62	3,08	3,39	3,63
H*B	2,64	2,89	3,08	3,26

Результат:

Установлено, что покрытие гидрофобином, особенно гидрофобином B (H*B), но также и гидрофобином A (H*A) и последующая обработка молочной кислотой в глубоких слоях кожи (после снятия слоя) приводит к более низкому значению показателя pH кожи.

Этот результат отчетливо показывает, что гидрофобии приводит к более сильной пенетрации молочной кислоты в кожу, гидрофобии также служит усилителем пенетрации для этого вещества.