зубная паста, содержащая лиофилизированную массу живых бифидобактерий

Формула изобретения

Зубная паста, содержащая в качестве активных ингредиентов 0,001-5,0 мас.% лиофилизированной массы живых бифидобактерий, 0,01-5,0 мас.% лизоцима; 0,01-5,0 мас.% папаина; 2,00-20,00 мас.%; абразивного компонента; 5,00-20,88 мас.% увлажнителя; 0,05-5,0 мас.% гидроколлоида; 0,10-2,00 мас.% ПАВ; 0,10-0,32 мас.% натрия фторида; 0,50-5,00 мас.% тетракалия пирофосфата; 0,15-0,40 мас.% консерванта; 0,05-1,50 мас.% ароматизатора; 30,00-87,029 мас.% воды.

Описание изобретения к патенту

Предпосылки создания изобретения

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии. С целью повышения очищающего, противомикробного и иммуностимулирующего действия, восстановления естественной микрофлоры полости рта, разработана зубная паста, содержащая лиофилизированную массу живых бифидобактерий, ферменты: папаин и лизоцим. Предлагаемая зубная паста позволяет восстановить естественную микрофлору полости рта, активировать фагоцитоз, увеличить содержание лизоцима слюны, способствует увеличению количества иммунокомпетентных клеток. Зубная паста обладает хорошими органолептическими свойствами: она белого цвета, с приятным запахом и хорошими вкусовыми свойствами.

Уровень техники

Композиции для полости рта, такие как зубные пасты, гели, эликсиры, бальзамы, ополаскиватели предназначены, главным образом, для удаления зубного налета и/или предупреждения его образования при регулярном использовании. Зубной налет представляет собой многокомпонентный, постоянно формирующийся биотоп полости рта, основу которого составляют практически все представители микрофлоры полости рта в конгломерате с протеинами и полисахаридами. Антигены этих микроорганизмов стимулируют активность факторов иммунобиологической резистентности организма. В процессе образования зубного налета происходит выраженное изменение состава микрофлоры. В первой фазе, длительностью 2-4 часа образуется ранний зубной налет с преобладанием аэробных и факультативно-анаэробных бактерий - стрептококки, стафилококки, нейссерии и лактобактерии. Общее содержание бактерий составляет не более 100-1000 в 1 г. Во второй фазе (4-5-е сутки) происходит сдвиг аэробной и факультативно-анаэробной микрофлоры в сторону анаэробных лептотрихий и фузобактерий. Общее содержание бактерий увеличивается до 1-10 млн в 1 г. В третьей фазе (6-7-е сутки и далее) заканчивается формирование качественного состава зубного налета - резко снижается содержание аэробов и факультативных анаэробов и преобладают облигатные анаэробы (бактероиды, фузобактерий, вейлонеллы, актиномицеты, пептострептококки), выделяющие комплекс токсических веществ, вызывающих разрушение Ig A и Ig G, резкий сдвиг pH в кислую сторону, что приводит к прогрессированию микробной инвазии, развитию кариеса и заболеваний пародонта.

Из уровня техники известны различные лечебно-профилактические зубные пасты, используемые для профилактики воспалительных заболеваний пародонта, содержащие противовоспалительные и противомикробные компоненты, например, экстракты лекарственных растений и витамины (Лечебно-профилактическая зубная паста «Silca Herb plus»® (Германия) и масло чайного дерева зубная паста «Natural whitening toothpaste with tea tree oil»® (США). Однако данная паста обладает низкой очищающей способностью, поскольку не содержит компонентов, направленно растворяющих зубной налет.

Известна зубная паста Lacalut Brilliant White Menta®, удаляющая зубной налет за счет высокообразивных соединений.

Известна зубная паста с фермент-содержащей композицией, где фермент выбран из группы протеиназ, включающей в себя папаин, разрушающий белковую основу зубного налета (Отбеливающая зубная паста «Rembrandt»® (США), а также паста, содержащая лизоцим, глюкозооксидазу, лактопероксидазу и лактоферрин (зубная паста «Biotene®» (Финляндия), которая применяется для лечения ксеростомии. Описанная зубная паста в процессе чистки зубов генерирует активные формы кислорода и способна влиять только на аэробные и факультативно-анаэробные бактерии.

Из RU 2407512 C1 известна зубная паста, содержащая ферменты папаин; декстраназу; альфа-амилазу; инвертазу или глюкоамилазу; глюкозооксидазу; лактопероксидазу; лизоцим или лактоферрин, для восстановления микрофлоры полости рта и профилактики воспалительных заболеваний пародонта.

Из RU 2333768 C2 известны фермент-содержащие композиции с цетилпиридинием хлоридом с улучшенными гигиеническими свойствами против зубного налета.

Известен адгезивный бальзам для десен Асепта®, содержащий хлоргексидина биглюконат - антисептик, эффективный против аэробных и факультативно-анаэробных бактерий и метронидазол - антибактериальный компонент, эффективный в отношении анаэробных бактерий и простейших.

Известна гелевая зубная паста Дентофам®, содержащая концентрат бактериофагов, селективная в отношении видов Streptococccus и Staphylococcus.

Известен препарат «Лизоцим», выпускаемый в виде герметично укупоренных флаконах по 0,05; 0,1 и 0,15 г, оказывающий бактериолитическое действие и обладающий способностью стимулировать неспецифическую реактивность организма. Лизоцим катализирует реакцию гидролиза 1,4- -связей между N-ацетилмурамовой кислотой и 2-ацетамидо-2-дезокси-D-глюкозой (N-ацетилглюкозамин), содержащихся в мукополисахаридах, мукопептидах и хитине клеточных стенок бактерий, грибов и простейших, обладает ярко выраженным антимикробным (разрушает клеточные стенки большинства грам-положительных и некоторых грам-отрицательных бактерий), микостатическим (задерживает развитие микроскопических грибов), а также ранозаживляющим действием. (Найдено из Интернет: <URL:http://provizor.org/node/11671)

Известен фермент папаин - растительный протеолитический фермент класса гидролаз, проявляющий широкую субстратную специфичность: катализирует гидролиз пептидных связей в белках и пептидах, а также гидролизует амиды, эфиры и тиоэфиры. (Найдено из Интернет:

<URL:http://slovari.yandex.ru/%D0%BF%D0%B0%D0%BF%D0%B0%D0%B8%D0%BD/%D0%91%D0%A1%D0%AD/%D0%9F%D0%B0%D0%BF%D0%B0%D0%B8%D0%BD/)

Известна лечебно-профилактическая зубная паста N-ZIM Prebio, выпускаемая компанией Артлайф с 2009 года (Лечебно-профилактическая зубная паста N-ZIM Prebio. 02.08.2011, Найдено из Интернет: <URL:http://www.artlife-chel.ru/main/466-n-zim-prebio>), включает лизат лактобактерий, который повышает местный иммунитет, препятствуя тем самым размножению патогенных микроорганизмов в полости рта и сохранению полезной микрофлоры. Зубная паста N-ZIM Prebio содержит также фермент папаин, который эффективно расщепляет зубной налет без повреждения зубной эмали.

Согласно данным компании Артлайф, зубная паста N-ZIM Prebio содержит: воду деминерализованную, сорбит, диоксид кремния, дикальций фосфат дигидрат, полиэтиленгликоль, натрий лауроилсаркозинат, натрий карбоксиметилцеллюлозу, ароматизатор, Д-пантенол, натрий лаурилсульфат, лизин, диоксид титана, папаин, натрий фтористый, аминофторид, аллантоин, сахарин, лизат лактобактерий, метилпарабен, пропилпарабен, стевиозид, экстракт алоэ; при этом массовая доля фторида составляет не менее 0,1%.

Заявленная зубная паста отличается от зубной пасты N-ZIM Prebio тем, что содержит лиофилизированную массу живых бифидобактерий, и, кроме того, паста содержит фермент лизоцим и тетракалия пирофосфат.

Известны композиции зубных паст, содержащие бифидобактерий (см., например, JP 2004250374 А, опубл. 09.09.2004; JP 4757475 B2, опубл. 24.08.2011; DE 202009011379 U1, опубл. 03.02.2011; WO 2000078322 A2, опубл. 28.12.2000; US 20060018843 A1, опубл. 26.01.2006; RU 2260042 C2, 2005.09.10).

В частности, из JP 2004250374, опубл. 09.09.2004, известна композиция зубной пасты, включающая, в масс.%: лиофильно высушенную массу Bifidobacterium longum (0,1), кальция глюконат (5,0), кальция гидрофосфат (20,0), ангидрид кремниевой кислоты (5,0), глицерин (25,0), натрия карбоксиметилцеллюлозу (1,0), натрия лаурилсульфат (0,1), парабен (0,1), ароматизатор (1,0) и воду очищенную (см. Пример в JP 2004250374, опубл. 09.09.2004 в Базе данных Derwent). Паста обладает высокой ингибирующей активностью в отношении образования зубного налета.

Заявленная зубная паста отличается от JP 2004250374 тем, что содержит ферменты папаин и лизоцим, причем следует отметить, что лизоцим является фактором неспецифического иммунитета, способствует восстановлению естественной микрофлоры полости рта и усиливает нормализующее действие на микрофлору полости рта и иммуностимулирующее действие лиофилизированной массы живых бифидобактерий. За счет комплексного воздействия на отдельные компоненты иммунопатологических процессов посредством влияния на клеточный (субпопуляции T-лимфоцитов, лимфокины) и гуморальный (В-лимфоциты, иммуноглобулины) иммунитет, способности расщеплять циркулирующие в крови и фиксированные в тканях иммунные комплексы, папаин оказывает регулирующее влияние на компоненты комплемента и адгезивные молекулы (ICAM-1, LFA и др.).

Из RU 2355420 и RU 2381021 известны композиции зубных паст, включающие ферменты, в частности, лизоцим и папаин, а также тетракалия пирофосфат.

Заявленная зубная паста отличается от RU 2355420 и RU 2381021 тем, что содержит лиофилизированную массу живых бифидобактерий.

Композиции для полости рта, такие как зубные пасты, гели, эликсиры, ополаскиватели, содержащие ферменты: папаин, лизоцим и лиофилизированную массу живых бифидобактерий не описаны.

Таким образом, задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить композицию для полости рта, содержащую папаин, лизоцим и лиофилизированную массу живых бифидобактерий, которая может быть использована для гигиены полости рта, активации фагоцитоза, увеличения содержание лизоцима слюны, количества иммунокомпетентных клеток, восстановления микрофлоры полости рта и профилактики воспалительных заболеваний пародонта, вызываемых кариесогенными микроорганизмами, такими как S.mutans, S.aureus и другие.

Сущность изобретения

Согласно настоящему изобретению неожиданно обнаружено, что введение в состав зубной пасты папаина, лизоцима и лиофилизированной массы живых бифидобактерий способствует значительному повышению иммуностимулирующей эффективности и восстановлению микрофлоры полости рта.

Описание предпочтительных воплощений

Лиофилизированную массу живых бифидобактерий вводят в зубную пасту в концентрации от 0,001 до 5,0 мас.%, и, предпочтительно, от 0,01 до 5,0 мас.%.

Ферменты, которые могут быть использованы при осуществлении на практике настоящего изобретения представлены протеазами, гидролизующими белки и лизоцимом. В качестве протеолитических ферментов могут быть использованы растительные протеазы: папаин и бромелайн в концентрации от 0,01 до 5,0 мас.% и, предпочтительно, от 0,1 до 5,0 мас.%.

Лизоцим, полученный из яичного белка, с молекулярной массой примерно 15000 а.е.м. обладает противомикробным действием в отношении грамположительных бактерий и в меньшей степени грамотрицательных, гидролизуя фрагменты пептидогликановой стенки бактерий и может быть использован в концентрации от 0,01 до 5,0 мас.% и, предпочтительно, от 0,1 до 5,0 мас.%.

Зубная паста

При получении зубной пасты лиофилизированную массу живых бифидобактерий и ферменты смешивают с основой зубной пасты и получают продукт, способный восстанавливать микрофлору полости рта, оказывать иммуностимулирующее действие и эффективно удалять зубной налет.

Основа для зубной пасты

Приемлемые наполнители, используемые для получения зубных пасту по настоящему изобретению представлены гидрофильной фазой, состоящей из воды и увлажнителя, в качестве которого могут быть использованы пропиленгликоль, глицерин, сорбитол 70%, ПЭГ с молекулярной массой от 200 до 400 а.е.м., либо их смеси. Концентрация увлажнителя обычно составляет в сумме от 5 до 20,88 мас.%, и предпочтительно, от 5 до 20 мас.%. Вода, присутствующая в зубной пасте, будет составлять от 30,00 до 87,029 мас.%, и предпочтительно, от 34,88 до 86,23 мас.%.

Из абразивов могут быть использованы абразивы на основе диоксида кремния со средним размером частиц от 5 до 20 мкм, например Сорбосил AC 35; AC 39; TC 15 (Inneos Silicas), Zeodent 113:163 (J.M.Huber) и другие аналогичные по характеристикам. Другие, используемые в зубных пастах абразивы представлены трикальцийфосфатом, дикальций фосфат дигидратом, силикатом алюминия. Концентрация абразива обычно составляет в сумме от 2 до 20 мас.%, и предпочтительно, от 2 до 20 мас.%.

Из загустителей могут быть использованы природные и синтетические гидроколлоиды, такие как карбоксиметилцеллюлоза и ее соли, гидроксиэтилцеллюлоза, альгинат натрия, каррагенат натрия, ксантановая камедь под разными торговыми названиями. Концентрация загустителя обычно составляет в сумме от 0,05 до 5,0 мас.%, и предпочтительно, от 0,1 до 2,0 мас.%.

Из поверхностно-активных веществ могут быть использованы различные разрешенные к применению в средствах гигиены полости рта анионные, катионные и неионогенные поверхностно-активные вещества под разными торговыми названиями. Концентрация поверхностно-активного вещества обычно составляет в сумме от 0,1 до 2,0 мас.%, и предпочтительно, от 0,1 до 1,0 мас.%.

Из фторидов могут быть использованы натрия фторид, фторид олова, натрия монофторфосфат, аминофторид с концентрацией фторидиона в диапазоне от 0,05 до 0,15 мас.%, и предпочтительно от 0,1 до 0,15 мас.%.

Из фосфатов могут быть использованы тетрапирофосфаты натрия и/или калия, динатрия пирофосфат, полифосфат натрия с концентрацией в сумме от 0,5 до 5,0 мас.%, и предпочтительно, от 1,0 до 5,0 мас.%.

Из антибактериальных веществ могут быть использованы метил - и пропилпарабены или их соли с концентрацией в сумме от 0,15 до 0,4 мас.%, и предпочтительно от 0,2 до 0,3 мас.%.

Из ароматизаторов могут быть использованы любые разрешенные к применению вкусо-ароматические добавки с концентрацией в диапазоне от 0,05 до 1,5 мас.%, и предпочтительно от 0,1 до 1,5 мас.%.

Другие компоненты, которые могут быть введены в состав зубной пасты представлены десенсибилизаторами, отбеливающими добавками, красителями без оказания существенного воздействия на свойства и характеристики зубной пасты по данному изобретению.

Получение зубной пасты

Зубную пасту по данному изобретению обычно изготавливают общепринятыми способами, используя твердые или жидкие косметически приемлемые носители или эксципиенты, выбранные из эмульгаторов, диспергирующих агентов, консервантов, ароматизаторов, регуляторов pH, полимерных носителей и других эксципиентов, которые целесообразны для приготовления композиций для местного применения.

Примеры

В качестве воплощения заявленного изобретения предложена зубная паста, содержащая в качестве активных ингредиентов 0,001-5,0 мас.% лиофилизированную массу живых бифидобактерий, 0,01-5,0 мас.% лизоцим; 0,01-5,0 мас.% папаин; 2,00-20,00 мас.% абразивный компонент; 5,00-20,88 мас.% увлажнитель; 0,05-5,0 мас.% гидроколлоид; 0,10-2,00% мас.% ПАВ; 0,10-0,32 мас.% натрий фторид; 0,50-5,00 мас.% тетракалия пирофосфат; 0,15-0,40 мас.% консервант; 0,05-1,50 мас.% ароматизатор; 30,00-87,029 мас.% вода.

В качестве предпочтительного воплощения заявленного изобретения предложена зубная паста, указанная выше, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Папаин	0,1-5,00
Абразивный компонент	2,00-20,00
Увлажнитель	5,00-20,00
Лиофилизированная масса живых бифидобактерий	0,01-5,00
Гидроколлоид	0,10-2,00
ПАВ	0,10-1,00
Натрий фторид	0,05-0,32
Лизоцим	0,1-5,00
Тетракалия пирофосфат	1,00-5,00
Консервант	0,20-0,30
Ароматизатор	0,10-1,50
Вода деминерализованная	34,88-86,23

Активными ингредиентом заявленной зубной пасты являются: папаин, лизоцим, лиофилизированная масса живых бифидобактерий. Папаин гидролизует пептидные связи лизатов, что приводит к образованию большего числа соединений, обладающих иммуностимулирующим действием. За счет комплексного воздействия на отдельные компоненты иммунопатологических процессов посредством влияния на клеточный (субпопуляции T-лимфоцитов, лимфокины) и гуморальный (B-лимфоциты, иммуноглобулины) иммунитет, способности расщеплять циркулирующие в крови и фиксированные в тканях иммунные комплексы, папаин оказывает регулирующее влияние на компоненты комплемента и адгезивные молекулы (ICAM-1, LFA и др.).

Лиофилизированная масса живых бифидобактерий подавляет рост и развитие многих условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, создавая благоприятные условия для нормализации микрофлоры полости рта, кишечника и улучшения пищеварения.

Лизоцим, полученный из яичного белка, с молекулярной массой примерно 15000 а.е.м. является фактором неспецифического иммунитета, обладает противомикробным действием в отношении грамположительных бактерий и в меньшей степени грамотрицательных, гидролизуя фрагменты пептидогликановой стенки бактерий.

Таким образом, комплексное использование вышеуказанных активных компонентов приводит к следующему результату: модификация зубного налета с образованием легко удаляемых водорастворимых соединений, восстановление естественной микрофлоры полости рта, активация иммунной системы с целью противомикробной и защиты от воздействия патогенных микроорганизмов. Для приготовления зубной пасты используют субстанции: «Папаин», Лиофилизированная масса живых бифидобактерий» (Bifidobacterium bifidum штамм 1)», «Лизоцим». Лиофильно высушенный порошок «Папаин» используется в медицине совместно с лизоцимом для лечения межпозвоночной грыжи, в виде присыпок и примочек в стоматологии при гингивите и пародонтите, и других воспалительных состояниях полости рта. Лиофилизированная масса живых бифидобактерий» (Bifidobacterium bifidum штамм 1) используется для лечения дисбактериоза различного генеза, дисфункции кишечника, острых кишечных инфекциях (дизентерии, сальмонеллеза, пищевых токсикоинфекциях), острых и хронических неспецифических воспалительных заболеваниях ЖКТ, сопровождающиеся угнетением репаративных процессов слизистой оболочки, инфекционных и деструктивных осложнениях (язвенно-некротический колит, угроза сепсиса, гипотрофия, анемия, экссудативный диатез). У новорожденных и недоношенных детей при смешанной патологии на фоне интенсивной терапии (лечение и профилактика).

Дополнительными преимуществами указанной композиции являются способность восстанавливать естественную микрофлору полости рта.

Предлагаемая зубная паста уменьшает образование налета на 58,33% и совершенно безвредна и безопасна при длительном применении.

Существенными отличиями предлагаемой зубной пасты являются следующие.

Заявленная зубная паста обладает стабильностью в отношении активности ферментов, входящих в ее состав, при длительном хранении, которая достигается путем иммобилизации ферментов на полимерных носителях, содержащихся в указанной композиции. В качестве указанных полимерных носителей могут быть использованы любые полимеры, способные связываться с ферментами с образованием комплексов фермент-носитель. Примерами таких полимерных носителей являются альгинат натрия (FMC) и натрий карбоксиметилцеллюлоза (Hercules).

Активность заявленной зубной пасты обусловлена активностью входящих в ее состав ферментов и лиофилизированной массой живых бифидобактерий. Обнаружено, что зубная паста, содержащая в качестве активных ингредиентов 0,001-5,0 мас.% лиофилизированную массу живых бифидобактерий, 0,01-5,0 мас.% лизоцим; 0,01-5,0 мас.% папаин; 2,00-20,00 мас.% абразивный компонент; 5,00-20,88 мас.% увлажнитель; 0,05-5,0 мас.% гидроколлоид; 0,10-2,00% мас.% ПАВ; 0,10-0,32 мас.% натрий фторид; 0,50-5,00 мас.% тетракалия пирофосфат; 0,15-0,40 мас.% консервант; 0,05-1,50 мас.% ароматизатор; 30,00-87,029 мас.% вода, обладает стабильностью в отношении активности ферментов при ее длительном хранении, в то время как активность этих ферментов, приготовленных в виде раствора, быстро падает. Следовательно, заявленная композиция может быть использована для эффективной профилактики воспалительных заболеваний пародонта.

Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами.

ПРИМЕР 1

Зубная паста на основе папаина, лизоцима, лиофилизированной массы живых бифидобактерий и других косметически приемлемых носителей или эксципиентов имеет следующий состав:

Папаин	0,01
Диоксид кремния	2,00
Сорбитол 70%	10,00
Лиофилизированная масса живых бифидобактерий	0,001
Альгинат натрия	0,50
Полисорбат-20	0,10
Натрий фторид	0,05
Лизоцим	0,01
Тетракалия пирофосфат	0,50
Консервант	0,15
Ароматизатор	0,05
Вода деминерализованная	86,629

Указанную композицию готовят по следующей методике. В деминерализованной воде последовательно растворяют все компоненты кроме альгината натрия, затем добавляют альгинат натрия и перемешивают до образования геля. Полученную зубную пасту перемешивают, вакуумируют и гомогенизируют.

ПРИМЕР 2

Зубная паста на основе папаина, лизоцима, лиофилизированной массы живых бифидобактерий и других косметически приемлемых носителей или эксципиентов имеет следующий состав:

Папаин	5,00
Дикальций фосфат дигидрат	20,00
Глицерин	20,00
Лиофилизированная масса живых бифидобактерий	5,00
Натрий КМЦ	5,00
ПЭГ-40 гидрогенизированное касторовое масло	2,00
Натрий фторид	0,32
Лизоцим	5,00
Тетракалия пирофосфат	5,00
Консервант	0,40
Ароматизатор	1,50
Вода деминерализованная	30,78

Указанную композицию готовят по следующей методике. В деминерализованной воде последовательно растворяют все компоненты кроме натрий КМЦ и дикальций фосфат дигидрата, затем добавляют натрий КМЦ и дикальций фосфат дигидрат, перемешивают до образования геля. Полученную зубную пасту перемешивают, вакуумируют и гомогенизируют.

Оценка стабильности ферментов в зубной пасте

Поскольку главным недостатком ферментов является их нестабильность при длительном хранении готовых форм на их основе в течение срока годности, была проведена сравнительная оценка сохранения активности фермента папаина при хранении в виде раствора и в виде композиции для местного применения.

Активность папаина определяли по следующей методике.

Для определения протеолитической активности папаина использовали модифицированный метод Кунитца. За одну протеолитическую единицу принимают такое количество фермента, при воздействии которого на субстрат казеин в течение 10 минут в стандартных условиях освобождается такое количество продуктов гидролиза, которое приводит к возрастанию оптической плотности при длине волны 280 нм на одну единицу.

Результаты приведены в таблице 1.

Таблица 1
Исследуемые образцы	Основные ингредиенты	Стабильность при хранении
1	2	3
Паста № 1	Согласно Примеру 1	Активность 95% для папаина в течение 1 года наблюдения
Паста № 2	Согласно Примеру 2	Активность 82% для папаина в течение 1 года наблюдения
Раствор нативного фермента	-	Активность 10% для папаина в течение 7 суток

Как видно из представленной таблицы 1, введение ферментов в зубные пасты позволяет получить стабильные косметические композиции для местного применения при профилактике воспалительных заболеваний пародонта. Несмотря на то, что при введении ферментов в состав таких композиций происходит незначительная потеря ферментативной активности, при дальнейшем хранении в течение 1 года ферменты не изменяют своей активности благодаря фиксации лабильной структуры фермента полимером-носителем.

Антимикробную активность лизоцима определяли методом серийных разведении. В качестве питательной среды использовали мясопептонный бульон; в качестве тест-микроорганизмов - чистые культуры: Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Esherichia coli, Candida albicans. В каждую пробирку вносили односуточную культуру в количестве 1000 клеток/мл. Культуры клеток: Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Esherichia coli выращивали в пробирках на среде с мясопептонным бульоном при 37°C в течение суток, а культуру Candida albicans на агаризированной среле Сабуро при 24°C двое суток. Титрование начинали с концентрации 10 мг/мл (с разведения 1/10). В качестве контроля использовали пробирку, в которую вносилась только питательная среда и микроорганизм. Концентрацию в последней пробирке с отсутствием роста принимали за минимальную ингибирующую концентрацию. Для оценки бактерицидного действия из пробирок с отсутствием роста сделали пересев на чашки с мясопептонным бульоном. Чашки термостатировали при 37°C в течение суток. Бактерицидное действие отмечали в случае отсутствия роста на плотной питательной среде.

Таблица 2
Наименование ингредиента	Staphylococcus aureus		Bacillus cereus		Esherichia coli		Candida albicans
	МИК, мг/мл	МЦК, мг/мл	МИК, мг/мл	МЦК, мг/мл	МИК, мг/мл	МЦК, мг/мл	МИК, мг/мл	МЦК, мг/мл
Лизоцим	2	4	2	4	20	40	30	50
Лиофилизированная масса живых бифидобактерий	20	40	20	40	20	40	60	80

Как видно из таблицы 2, оптимальная ингибирующая концентрация составляет: для лизоцима: 2 мг/мл - в случае Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Escherichia coli; 30 мг/мл - для Candida albicans;

для лиофилизированной массы живых бифидобактерий - 20 мг/мл - в случае Staphylococcus aureus, Bacillus cereus; 20 мг/мл - для Escherichia coli; 60 мг/мл - для Candida albicans

бактерицидная концентрация для лизоцима - 4 мг/мл - в случае Staphylococcus aureus, Bacillus cereus; 40 мг/мл - для Escherichia coli; 50 мг/мл - для Candida albicans; для лиофилизированной массы живых бифидобактерий - 40 мг/мл - в случае Staphylococcus aureus, Bacillus cereus; 40 мг/мл - для Escherichia coli; 80 мг/мл - для Candida albicans

Клинические испытания предлагаемой зубной пасты проводили в течение одного месяца на 30 добровольцах в возрасте 21-24 лет, клинически здоровых, без деформаций зубов и челюстей. Для определения очищающего действия пасты проводили контролируемую и неконтролируемую чистку зубов предлагаемой пастой. Контролируемую чистку зубов пробанты проводили согласно методике, предложенной в «Методических указаниях по экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытаниям профилактических и лечебных зубных паст» (Москва-София, 1983), в течение 3 мин на 1-й, 7-й, 14-й, 21-й и 28-1 день. В остальные дни пробанты чистили зубы той же щеткой и пастой, утром и вечером, в домашних условиях без контроля. Перед контролируемой чисткой и после нее проводилось определение индекса гигиены по Грину-Вермиллиону:

Количественная оценка проводилась по 4-х бальной системе:

- окрашивание всей поверхности коронки зуба оценивалось в 3 балла;

- окрашивание 2/3 поверхности коронки зуба оценивалось в 2 балла;

- окрашивание 1/3 поверхности коронки зуба оценивалось в 1 балл;

- отсутствие окрашивания поверхностей зубов оценивалось в 0 баллов.

Расчет показателей индекса гигиены по Грину-Вермиллиону проводился по формуле:

K _cp=K/n, где

K_cp - усредненный цифровой показатель индекса гигиены у всех зубов, у которых проводилось определение показателей индекса;

K - общая сумма значений индекса у всех зубов, у которых проводилась оценка показателей;

n - число зубов, у которых проводилась оценка показателей.

Очищающая эффективность зубной пасты рассчитывалась по формуле:

Очищающая эффективность=[(ИГ_до1 -ИГ_доX)/ИГ_до1]×100, где

ИГ_до1- показатель индекса гигиены полученный при первичном осмотре, до чистки зубов;

ИГ_доX - показатель индекса гигиены полученный при последующем осмотре (7, 14, 21, 28 дни осмотра), до чистки зубов.

Редукция зубного налета при однократной чистке зубов определялась по формуле, при каждой контролируемой чистке зубов:

Редукция=[(ИГ _доX-ИГ_послеX)/ИГ_доX]×100, где

ИГ_доX - показатель индекса гигиены полученный при осмотре перед началом контролируемой чистки зубов (1, 7, 14, 21, 28 дни);

ИГ_послеX - показатель индекса гигиены полученный при осмотре после проведения контролируемой чистки зубов (1, 7, 14, 21, 28 дни).

Из табл.3, 4 и 5 видно, что предлагаемая зубная паста обладает повышенной очищающей способностью, а следовательно и противокариесным эффектом за счет более выраженного удаления зубных отложений и обеспечивает удаление 62,96% зубного налета.

Для определения противовоспалительных свойств предлагаемой зубной пасты все пробанты (те же 30 человек) проводили контролируемую чистку зубов в течение одного месяца.

Противовоспалительное действие пасты оценивалось по изменению состояния прикрепленной к зубам десны с помощью индекса РМА по формуле:

Индекс PMA=[Сумма показателей/(3 × число зубов)]×100, где

P - воспаление десневого сосочка, которое оценивается в 1 балл;

M - воспаление десневого края, которое оценивается в 2 балла;

A - воспаление прикрепленной десны альвеолярного отростка, которое оценивается в 3 балла.

Оценка противовоспалительного действия зубной пасты проводилась на основании анализа динамики индекса PMA, который определяли при повторных осмотрах на 1-й, 7-й, 14-й, 21-й и 28-й дни. Противовоспалительная эффективность рассчитывалась по формуле:

Противовоспалительная эффективность=[(PMA₁ -PMA_x)/PMA₁]×100,

где

PMA₁ - показатель индекса РМА полученный при первичном осмотре в 1-й день исследования;

PMA_x - показатель индекса РМА полученный при последующем осмотре (7, 14, 21 и 28 дни).

Данные приведены в табл.6 и 7. Из них наглядно видно, что после использования данной пасты состояние тканей пародонта значительно улучшалось: у 100% пробантов исчезали явления катарального гингивита, а индекс PMA снижался с 48,0 до 6,2, что соответствовало 87,08% противовоспалительной эффективности данной пасты.

Оценка кровоостанавливающего действия проводилась по индексу кровоточивости Кечке:

I степень - редко, оценивается в 2 балла;

II степень - во время чистки зубов, оценивается в 4 балла;

III степень - во время еды и самопроизвольно, оценивается в 8 баллов.

Кровоостанавливающая эффективность определялась по формуле:

Кровоостанавливающая эффективность=[(ИК₁ -ИК_x)/ИК₁]×100, где

ИК₁ - индекс кровоточивости в начале исследования;

ИК_x - индекс кровоточивости в конце эксперимента.

Данные приведены в табл.8 и 9. Из них видно, что после использования данной пасты состояние тканей пародонта улучшается, и кровоточивость десен снижается с 2,8 до 0,9 баллов, что соответствует 67,86% кровоостанавливающей эффективности данной пасты.

Таким образом, предлагаемая зубная паста обладает более высоким очищающим (62,96% очищающая эффективность), противовоспалительным (87,08% противовоспалительный эффект) и кровоостанавливающим (67,86% кровоостанавливающая эффективность) эффектом.

Табл.3
Состояние	OHI-S Green-Vermillion
	1-й день	7-й день	14-й день	21-й день	28-й день
До чистки	2,7	2,2	1,7	1,20	1,00
После чистки	1,4	1,3	1,2	0,95	0,80

Табл.4
Редукция зубного налета при однократном использовании зубной пасты	1-й день	7-й день	14-й день	21-й день	28-й день
	48,15%	40,91%	29,41%	20,83%	20,0%

Табл.5
Очищающая эффективность пасты (по сравнению с 1-м днем)	7-й день	14-й день	21-й день	28-й день
	18,52%	37,04%	55,56%	62,96%

Табл.6
Индекс PMA	1-й день	7-й день	14-й день	21-й день	28-й день
	48,0%	27,5%	15,8%	10,09%	6,2%

Табл.7
Противовоспалительная эффективность	7-й день	14-й день	21-й день	28-й день
	42,71%	67,08%	78,98%	87,08%

Табл.8
Индекс кровоточивости по Кечке	1-й день	7-й день	14-й день	21-й день	28-й день
	2,8	2,2	2,0	1,5	0,9

Табл.9
Кровоостанавливающая эффективность	7-й день	14-й день	21-й день	28-й день
	21,43%	28,57%	46,43%	67,86%