связующий элемент для рецептора gm-csf

Формула изобретения

1. Изолированная молекула антитела, которая связывает альфа-цепь рецептора колониестимулирующего фактора гранулоцитов/макрофагов (GM-CSFR ) человека и ингибирует связывание GM-CSF с GM-CSFR человека, причем указанная молекула антитела имеет значение KD меньше, чем 5 нМ при связывании GM-CSFR человека при определении с помощью поверхностного плазменного резонанса, и при этом указанное антитело содержит:

VH домен, который содержит набор гипервариабельных участков (CDR) VH домена: CDR1, CDR2 и CDR3 и каркасный участок, причем набор CDR VH домена включает VH CDR1 с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 173, VH CDR2 с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 4 и CDR3 VH с последовательностью аминокислот, выбранной из группы, которая состоит из: SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 65; SEQ ID NO: 75; SEQ ID NO: 85; SEQ ID NO: 95; SEQ ID NO: 105; SEQ ID NO: 115; SEQ ID NO: 125; SEQ ID NO: 135; SEQ ID NO: 145; SEQ ID NO: 155; SEQ ID NO: 165; SEQ ID NO: 175; SEQ ID NO: 185; и SEQ ID NO: 195; или содержит указанный набор CDR VH с не более чем 10 заменами аминокислот, при условии, что функциональность антитела сохранена;

VL домен, включающий набор CDR VL домена: CDR1, CDR2 и CDR3 и каркасный участок, причем набор CDR VL домена включает CDR1 VL с последовательностью SEQ ID NO: 8, CDR2 VL с последовательностью SEQ ID NO: 9 и VL CDR3 с последовательностью, выбранной из группы, которая состоит из: SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 200, или содержит указанный набор CDR VL с не более чем 10 заменами аминокислот, при условии, что функциональность молекулы антитела сохраняется;

и при этом VH домен и VL домен включают следующие остатки аминокислот:

S в положении остатка HI 7 при нумерации по Kabat в каркасном участке VH;

I в положении остатка Н34 при нумерации по Kabat в CDR1 VH;

Е в положении остатка Н54 при нумерации по Kabat в CDR2 VH;

I в положении остатка Н57 при нумерации по Kabat в CDR2 VH;

I, L, V, А или М в положении остатка Н94 при нумерации по Kabat в каркасном участке VH;

V, N, А или L в положении остатка Н95 при нумерации по Kabat в CDR3 VH;

S в положении остатка Н97 при нумерации по Kabat в CDR3 VH; и

S, F, Н, Р, Т или W в положении остатка Н99 при нумерации по Kabat в CDR3 VH;

А, Т, Р, S, V или Н в положении остатка Н100В при нумерации по Kabat в CDR3 VH;

S в положении остатка 27А при нумерации по Kabat в CDR1 VL;

N в положении остатка 27В при нумерации по Kabat в CDR1 VL;

I в положении остатка 27С при нумерации по Kabat в CDR1 VL;

D в положении остатка 32 при нумерации по Kabat в CDR1 VL;

N в положении остатка 51 при нумерации по Kabat в CDR2 VL;

N в положении остатка 52 при нумерации по Kabat в CDR2 VL;

К в положении остатка 53 при нумерации по Kabat в CDR2 VL;

S, Т или М в положении остатка L90 при нумерации по Kabat в CDR3 VL;

D, Е, Q, S, М или Т в положении остатка L92 при нумерации по Kabat в CDR3 VL; и

S, Р, I или V в положении остатка L96 при нумерации по Kabat в CDR3 VL.

2. Изолированная молекула антитела по п.1, в которой набор гипервариабельных участков в VH домене содержит CDR1 с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 173, CDR2 с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 4 и CDR3 с последовательностью аминокислот, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 65; SEQ ID NO: 75; SEQ ID NO: 85; SEQ ID NO: 95; SEQ ID NO: 105; SEQ ID NO: 115; SEQ ID NO: 125; SEQ ID NO: 135; SEQ ID NO: 145; SEQ ID NO: 155; SEQ ID NO: 165; SEQ ID NO: 175; SEQ ID NO: 185; и SEQ ID NO: 195; или содержит указанный набор последовательностей гипервариабельных участков с одной или двумя заменами аминокислот, при условии, что функциональность указанной молекулы антитела сохраняется, и при этом

указанный набор гипервариабельных участков VL домена содержит CDR1 с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 8, CDR2 с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 9 и CDR3 с последовательностью аминокислот, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 200, или содержит указанный набор последовательностей CDR с одной или двумя заменами аминокислот, при условии, что функциональность антитела сохраняется.

3. Изолированная молекула антитела по п.1, в которой набор гипервариабельных участков в VH домене содержит VH CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 3, VH CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 4 и VH CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 55 или содержит указанный набор CDRsVH с не более чем 10 заменами аминокислот, и при этом набор гипервариабельных участков в VL домене содержит VL CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 8, VH CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 9 и VH CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 60, или содержит указанный набор VL CDR с не более чем 10 заменами аминокислот.

4. Изолированная молекула антитела по п.3, в которой набор гипервариабельных участков в VH домене содержит VH CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 3, VH CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 4 и VH CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 55, или содержит указанный набор VH CDR с одной или двумя заменами аминокислот, при этом набор гипервариабельных участков в VL домене содержит VL CDR1 с последовательностью SEQ ID NO: 8, VH CDR2 с последовательностью SEQ ID NO: 9 и VH CDR3 с последовательностью SEQ ID NO: 60, или содержит указанный набор VL CDR с одной или двумя заменами аминокислот.

5. Изолированная молекула антитела по п.2, в которой CDR3 VH домена имеет последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 185 и SEQ ID NO: 195.

6. Изолированная молекула антитела по любому из пп.2-5, в которой CDR1 VH имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 3.

7. Изолированная молекула антитела по любому из пп.2-5, в которой CDR2 VH имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 4.

8. Изолированная молекула антитела по любому из пп.2-5, в которой остаток L90 (нумерация по Kabat) представляет собой S.

9. Изолированная молекула антитела по любому из пп.2-5, в которой остаток L92 (нумерация по Kabat) представляет собой D или Е.

10. Изолированная молекула антитела по любому из пп.2-5, в которой остаток L95A (нумерация по Kabat) представляет собой S.

11. Изолированная молекула антитела по любому из пп.2-5, в которой остаток L96 (нумерация по Kabat) представляет собой S.

12. Изолированная молекула антитела по любому из пп.2-5, в которой CDR3 VL имеет последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 200.

13. Изолированная молекула антитела по любому из пп.2-5, в которой CDR1 VL имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 8.

14. Изолированная молекула антитела по любому из пп.2-5, в которой VL CDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 9.

15. Изолированная молекула антитела по любому из пп.1-5, содержащая VH домен антитела, в котором остаток Н94 (нумерация по Kabat) представляет собой I.

16. Изолированная молекула антитела по любому из пп.1-5, которая связывает внеклеточный домен GM-CSFR человека с аффинностью (KD) 1 нМ или менее при анализе методом поверхностного плазменного резонанса.

17. Изолированная молекула антитела по п.16, которая связывает внеклеточный домен GM-CSFR человека с аффинностью (KD) 0,5 нМ или менее в анализе методом поверхностного плазменного резонанса.

18. Изолированная молекула антитела по любому из пп.1-5, которая имеет нейтрализующую активность IC50 60 пМ или менее в тесте на пролиферацию клеток TF-1 с 7 пМ GM-CSF человека.

19. Изолированная молекула антитела по п.18, которое имеет нейтрализующую активность IC50 10 пМ или менее в тесте на пролиферацию клеток TF-1 с 7 пМ GM-CSF человека.

20. Изолированная молекула антитела по любому из пп.1-5, которая имеет нейтрализующую активность IC50 50 пМ или менее в тесте на изменение формы гранулоцитов человека с 7 пМ GM-CSF человека.

21. Изолированная молекула антитела по п.20, которая имеет нейтрализующую активность IC50 25 пМ или менее в тесте на пролиферацию клеток TF-1 с 7 пМ GM-CSF человека.

22. Изолированная молекула антитела по любому из пп.1-5, которая имеет нейтрализующую активность IC50 100 пМ или менее в тесте на высвобождение ФНО моноцитами с 1 нМ GM-CSF человека.

23. Изолированная молекула антитела к GM-CSFR человека, которая содержит набор гипервариабельных участков HCDR1, HCDR2 и HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, в котором:

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 3, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 4, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 5, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 8, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO:9 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 10;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 13, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 14, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 15, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 18, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 19 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 20;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 33, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 34, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 35, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 38, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 39 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 40;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 43, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 44, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 45, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 48, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 49 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 50;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 53, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 54, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 55, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 58, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 59 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 60;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 63, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 64, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 65, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 68, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 69 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 70;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 73, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 74, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 75, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 78, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 79 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 80;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 83, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 84, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 85, ECDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 88, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 89 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 90;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 93, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 94, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 95, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 98, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 99 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 100;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 103, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 104, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 105, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 108, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 109 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 110;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 113, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 114, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 115, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 118, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 119 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 120;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 123, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 124, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 125, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 128, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 129 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 130;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 133, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 134, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 135, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 138, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 139 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 140;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 143, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 144, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 145, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 148, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 149 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 150;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 153, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 154, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 155, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 158, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 159 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 160;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 163, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 164, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 165, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 168, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 169 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 170;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 173, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 174, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 175, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 178, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 179 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 180;

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 183, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 184, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 185, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 188, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 189 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 190; или

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 193, HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 194, HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 195, LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 198, LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 199 и LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 200.

24. Изолированная молекула антитела по п.23, отличающаяся тем, что

HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 53;

HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 54;

HCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 55;

LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID: 58;

LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 59; и

LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 60.

25. Изолированная молекула антитела по п.23 или 24, которая содержит VH-домен антитела с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 52 и VL-домен антитела с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 57.

26. Изолированная молекула антитела по любому из пп.1-5, 23 или 24, причем указанная молекула антитела представляет собой молекулу гуманизированного антитела или антитела человека.

27. Изолированная молекула антитела по п.26, в котором каркасный участок VH-домена представляет собой каркасный участок VH1 DP5 или VH3 DP47 зародышевой линии человека.

28. Изолированная молекула антитела по п.26, которая содержит VL-домен, в котором каркасный участок VL-домена представляет собой каркасный участок VLambda I DPL8, VLambda 1 DPL3 или VLambda 6_6a зародышевой линии человека.

29. Изолированная молекула антитела по п.24, в которой каркасные участки VH домена FR1, FR2, FR3 и FR4 имеют следующие последовательности: FR1=SEQ ID NO: 251, FR2=SEQ ID NO: 252, FR3=SEQ ID NO: 253 и FR4=SEQ ID NO: 254.

30. Изолированная молекула антитела по п.24, в которой каркасных участки VL домена FR1, FR2, FR3 и FR4 имеют следующие последовательности: FR1=SEQ ID NO: 255, FR2=SEQ ID NO: 256, FR3=SEQ ID NO: 257 и FR4=SEQ ID NO: 258.

31. Изолированная молекула антитела по п.24, представляющая собой молекулу антитела IgG4 человека, причем VH домен имеет последовательность SEQ ID NO: 52 и VL домен имеет последовательность SEQ ID NO: 218.

32. Изолированная молекула антитела к GM-CSFR человека, которое ингибирует связывание GM-CSF с GM-CSFR , причем указанная молекула антитела связывает внеклеточный домен GM-CSFR человека с аффинностью (Kd) 5 нМ или меньше в анализе методом поверхностного плазменного резонанса, и при этом указанная молекула антитела включает VH-домен с последовательностью аминокислот VH-домена, представляющей собой SEQ ID NO: 52 или ее вариант с одним или двумя изменениями аминокислот, и

VL-домен с последовательностью аминокислот VL-домена, представляющей собой SEQ ID NO: 57 или ее вариант с одним или двумя изменениями аминокислот;

причем указанные изменения аминокислот в VH и/или VL домене выбраны из группы, состоящей из

замен, вставок и делеций в каркасном участке;

замен N, А или L в положении остатка по Kabat H95 в VH CDR3;

замен F, Н, Р, Т или W в положении остатка по Kabat H99 в VH CDR3;

замен А, Р, S, V или Н в положении остатка по Kabat H100B в VH CDR3;

замен S или М в положении остатка по Kabat L90 в VL CDR3;

замен D, Q, S, М или Т в положении остатка по Kabat L92 в VL CDR3; и

замен Р, I или V в положении остатка по Kabat L96 в VL CDR3, причем указанный вариант сохраняет функциональность указанной молекулы антитела.

33. Изолированная молекула антитела по любому из пп.1-5, 23-24 или 29-32, при этом указанная молекула антитела представляет собой IgG4.

34. Композиция для ингибирования или нейтрализации GM-CSFR , содержащая эффективное количество молекулы антитела по любому из пп.1-5, 23-24 или 29-32 и фармацевтически приемлемый наполнитель.

35. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая изолированную молекулу антитела по любому из пп.1-33.

36. Клетка-хозяин млекопитающего для экспрессии изолированной молекулы антитела по любому из пп.1-33, находящаяся in vitro и содержащая изолированную молекулу нуклеиновой кислоты по п.34.

37. Способ получения изолированной молекулы антитела по любому из пп.1-33, включающий культивирование клеток-хозяев по п.36.

38. Способ по п.37, включающий дополнительно очистку указанной молекулы антитела.

39. Композиция, содержащая эффективное количество изолированной молекулы антитела из пп.1-33, для лечения ревматоидного артрита, астмы, хронической обструктивной болезни легких или миелоидной лейкемии.

Описание изобретения к патенту

Текст описания приведен в факсимильном виде.