противомикробная активность эфирного масла из семян робинии псевдоакации

Формула изобретения

Средство, обладающее противомикробным действием, представляющее собой эфирное масло из семян робинии псевдоакации (Robinia pseudaacacia L.), полученное путем сбора семян в октябре месяце, их трехкратной экстракции петролейным эфиром при нагревании в течение 45 мин при соотношении 1:3.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, медицинской промышленности и может быть использовано в частности к применению эфирного масла из семян робинии псевдоакации (Robinia pseudaacacia L.) в качестве средства, обладающего противомикробной активностью.

Известен способ получения масла противопролежного [патент РФ № 2416425], содержащее в своем составе жирное масло облепихи и дополнительно жирные масла таману и зародышей пшеницы, а также эфирные масла душицы, герани, кедра, майорана и других растений.

Известен способ получения композиции [патент РФ № 23 72096], обладающей фунгицидным, антимикробным и вирулецидным действием, характеризующаяся тем, что она содержит в качестве основы масляный, водно-спиртовый экстракты и эфирное масло монарды дудчатой, пропилен-гликолевые экстракты сосны и тополя, эфирные масла мяты, бизилика и др. Недостатки этих способов сводятся к тому, что они состоят из множества компонентов, кроме того, одновременная экстракция всех компонентов растительного сырья, собираемых в разное время, по мере их созревания, вынуждает хранить ряд компонентов в ожидании других, что приводит к потере их целебных свойств.

Известен способ получения экстракционного эфирного масла из зелени хвойных пород [патент РФ № 2396309], характеризующийся тем, что масло проявляет бактерицидные свойства. Способ предусматривает измельчение древесной зелени хвойных пород и ее экстракцию сжиженным углекислым газом при температуре 20-22°С и давлении 6-7 МПа. Недостаток этого метода заключается в сложности технологических операций по извлечению эфирного масла и применению дорогостоящего оборудования.

Известен способ получения биологически активного вещества [заявка РФ № 94025595], обладающего противомикробной, фагоцитарной, митотической и антиоксидантной активностью, включающий приготовление эфирного концентрата путем смешивания мятного масла и/или фенхелевого, тминного, анисового, укропного, кориандрового, бергамотного, лимонного, апельсинового, эвкалиптового, сан талового, иланг-илангового, мускатно-шалфейного и других масел и водного экстракта травы полыни, мяты перечной, почки сосны обыкновенной, солодки и других растений. Однако данный способ имеет ряд недостатков, а именно, невысокая степень извлечения биологически активных веществ из растительного сырья в воду, технологические трудности процесса тонкой фильтрации получаемого экстракта, обусловленные большим объемом фильтруемой массы, состоящей из множества компонентов, что может отразиться на свойствах препарата. Кроме того, одновременная экстракция всех компонентов растительного сырья, собираемых в разное время, по мере их созревания, вынуждает хранить ряд компонентов в ожидании других, что приводит к потере их свойств.

Известен способ получения эфирного масла лофанта анисового [заявка РФ № 2009143766] методом экстракции водяным паром, содержащее метилхавикол, а также вещества, обладающие противогрибковым, бактерицидным и дезинфицирующим действием. Основной недостаток этого метода заключается в том, что лофант анисовый является интродуцированным в Россию растением и технология его возделывания достаточно трудоемка (регулярный полив растения, внесение подкормки и предпосевная культивация земли).

Известен способ получения эфирного масла из полыни [патент РФ № 2356567] методом пародистилляции, обладающее антибактериальным, дезинфицирующим, антисептическим, противовоспалительным, ранозаживляющим и противоожоговым действием. Однако эти экстракты и эфирные масла не могут являться аналогами, так как получены из других растений.

Задачей, решаемой предлагаемым изобретением, является исследование противомикробной активности эфирного масла из растительного сырья робинии псевдоакации (Robinia pseudaacacia L.). Поставленная задача решается с помощью эфирного масла из семян робинии псевдоакации, собранных в октябре месяце и полученное методом трехкратной экстракции петролейным эфиром при нагревании в течение 45 минут при объемном соотношении растворителя к сырью 3:1.

Эфирное масло робинии псевдоакации за счет нахождения в нем комплекса биологически активных веществ проявляет заметную противомикробную активность к широкому ряду как грамотрицательных, так и грамположительных микроорганизмов.

В основе метода изучения противомикробной активности лежало исследование влияния активных веществ эфирного масла робинии на дыхательную систему микроорганизмов. Уровень дыхания или его подавления наблюдали по степени потребления глюкозы с индикатором метиленовой синью. Противомикробную активность определяли методом серийных разведении в 0,5 мл питательного бульона [Герхард Ф. Методы общей бактериологии. М., 1983. 612 с.]. В качестве тест-культур использовали штаммы возбудителей госпитальных инфекций: Escherichia coli СК, Klebsiella 204, В-1919 Bacillus mesentericum-3, Pseudomonas aeruginosa 165, Staphylococcus aureus 209, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter calcoaceticus, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus MRSA. Противомикробная активность эфирного масла робинии псевдоакации иллюстрируется следующим примером.

Пример.

Чистые бактериальные культуры, выращенные на питательной агаровой среде, помещенной в термостат при 37±1°С, смывали со среды через 18-20 ч 0,89% раствором хлорида натрия. Готовили взвесь по стандарту мутности 1·10⁹ кл/мл (10 ед. мутности). Для получения соответствующего разведения микробной взвеси готовили ряд последовательных семикратных разведении. После определения «рабочей дозы» тест-культуры титровали эфирное масло путем двухкратных разведении в объеме 0,5 мл мясо-пептонного бульона. Последняя пробирка в контрольном ряду не содержала эфирного масла и служила контролем дигидрогеназной активности клеток тест-культуры. В результате микробная нагрузка в пробирке соответствовала «рабочей дозе» тест-культуры. Пробирки с эфирным маслом и тест-культурой ставили на 24 ч на экспозицию при 37°С, а затем вносили индикатор метиленовой сини с глюкозой и мясо-пептонным агаром, содержимое пробирок перемешивали и инкубировали в течение часа при температуре 37±1°С. Результат учитывали по цвету питательной среды, если индикатор обесцветился, то это свидетельствовало об отсутствии подавления, если цвет не менялся, то это свидетельствовало о блокировании дыхательных ферментов клеток тест-культур активными компонентами эфирного масла. В качестве препарата сравнения использовали гентамицина сульфат. Результаты подвергали статистической обработке с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты исследования противомикробной активности эфирного масла робинии псевдоакации приведены в таблицах 1 и 2.

Таким образом, эфирное масло из семян робинии псевдоакации (Robinia pseudaacacia-L), проявляет заметную противомикробную активность к широкому ряду как грамотрицательных, так и грамположительных микроорганизмов.

Приложение.

Таблица 1
Противомикробная активность эфирного масла из семян робинии псевдоакации по отношению к штаммам грамотрицательных бактерий
Исследуемый образец	МПК (мкг/мл) по отношению к
	E.coli СК	Klebsiella 204	Pseudomonas aeruginosa 165	Proteus vulgaris	Klebsiella pneumoniae	Acinetobacter calcoaceticus
Робиния псевдоакация	20	5	5*	20	5*	10
Гентамицина сульфат	2.5	1.25	0.63 *	2.5	1.25	1.25
*Различия между повторами достоверны при р=0,95

Таблица 2
Противомикробная активность эфирного масла из семян робинии псевдоакации по отношению к штаммам грамположительных бактерий
Исследуемый образец	МПК (мкг/мл) по отношению к
	В-1919 Bacillus Mesentericum-3	Staphylococcus aureus	Staphylococcus aureus 209	Staphylococcus aureus MRSA
Робиния псевдоакация	5*	0,63	0,63*	5
Гентамицина сульфат	1.25	0.63	0.63 *	0.63
*Различия между повторами достоверны при р=0,95