(4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты для лечения посттравматического стрессового расстройства
| Классы МПК: | A61K31/5377 не конденсированные и содержащие дополнительно гетероциклические кольца, например тимолол A61K45/00 Лекарственные препараты, содержащие активные ингредиенты, не отнесенные к группам 31/00 A61P25/00 Лекарственные средства для лечения нервной системы |
| Автор(ы): | ВОЙВОДЕ Том (US), МОРАН Марк (US) |
| Патентообладатель(и): | БАЙОТАЙ ТЕРАПИС, ИНК. (US) |
| Приоритеты: |
подача заявки:
2008-07-23 публикация патента:
10.12.2013 |
Предложены способ лечения посттравматического стрессового расстройства, способ улучшения устойчивости к проявлению хотя бы одного симптома посттравматического стрессового расстройства, способ диагностики посттравматического стрессового расстройства - все с применением (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты, фармацевтическая композиция на ее основе для лечения пациента, у которого диагностировано посттравматическое стрессовое расстройство. Показано устранение вызванной стрессом ангедонии и устранение АРЕС-индуцированного понижения двигательной активности под действием (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты. 4 н. и 17 з.п. ф-лы, 12 пр., 64 ил.
Формула изобретения
1. Способ лечения пациента, у которого диагностировано посттравматическое стрессовое расстройство, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
2. Способ по п.1, где указанный способ включает совместное введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного агента, выбранного из бензодиазепина, селективного ингибитора обратного захвата серотонина (SSRI), ингибитора обратного захвата серотонина-норэпинефрина (SNRI), ингибитора обратного захвата норэпинефрина (NRI), антагониста серотонин 5-гидрокситриптамина1А (5НТ1А), ингибитора дофамин 
-гидроксилазы, антагониста рецептора аденозина А2А, ингибитора моно-аминоксидазы (MAOI), блокатора натриевого (Na) канала, блокатора кальциевого канала, антагониста центрального и периферического альфа адренергического рецептора, агониста центрального альфа адренергического рецептора, антагониста центрального или периферического бета адренергического рецептора, антагониста рецептора NK-1, антагониста кортикотропин-высвобождающего фактора (CRF), атипичного антидепрессанта/антипсихотического средства, трициклического антидепрессанта, противосудорожного средства, антагониста глутаматов, агониста гамма-аминомасляной кислоты (GABA) и частичного агониста D2.
3. Способ по п.2, где по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой SSRI, выбранный из пароксетина, сертралина, циталопрама, эсциталопрама и флуоксетина; или где по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой SNRI, выбранный из дулоксетина, миртазапина и венлафаксина;
или где по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой NRI, выбранный из бупропиона и атомоксетина;
или где по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой ингибитор дофамин -гидроксилазы, выбранный из непикастата и дисульфирама;
или где по меньшей мере один дополнительный агент является антагонистом рецептора аденозина А2А истрадефиллином;
или где по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой блокатор натриевого канала, выбранный из ламотригина, карбамазепина, окскарбазепина и вальпроата;
или где по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой блокатор кальциевого канала, выбранный из ламотригина и карбамазепина;
или где по меньшей мере один дополнительный агент является антагонистом центрального и периферического альфа адренергического рецептора празозином;
или где по меньшей мере один дополнительный агент является агонистом центрального альфа адренергического рецептора клонидином;
или где по меньшей мере один дополнительный агент является антагонистом центрального или периферического бета адренергического рецептора пропранололом;
или где по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой атипичный антидепрессант/антипсихотическое средство выбранное из оланзепина, рисперидона и кветиапина;
или где по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой трициклический антидепрессант, выбранный из амитриптилина, амоксапина, дезипрамина, доксепина, имипрамина, нортриптилина, протиптилина и тримипрамина;
или где по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой противосудорожное средство, выбранное из ламотригина, карбамазепина, окскарбазепина, вальпроата, топирамата и леветирацетама;
или где по меньшей мере один дополнительный агент является антагонистом глутамата топираматом;
или где по меньшей мере один дополнительный агент является антагонистом GABA, выбранным из вальпроата и топирамата;
или где по меньшей мере один дополнительный агент является частичным агонистом D2 арипипразолом.
4. Способ по п.1, где указанный (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты уменьшает активность по меньшей мере одного рецептора A2A в организме пациента;
или где (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты модулирует передачу дофаминергического сигнала в организме пациента;
или где (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты понижает частоту возникновения по меньшей мере одного расстройства, сопутствующего посттравматическому стрессовому расстройству, выбранного из злоупотребления наркотиками, злоупотребления алкоголем и депрессии у пациента.
5. Способ по п.1, где пациент является ребенком или подростком.
6. Способ по п.1, где указанный (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты вводят пациенту один или два раза в день;
или где (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты вводят пациенту до или сразу же после травмирующего события.
7. Способ по п.1, где указанный способ включает: диагностирование у пациента посттравматического стрессового расстройства;
введение пациенту терапевтически эффективного количества (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты;
оценку по меньшей мере одного признака, симптома или комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства; и
определение улучшения состояния при посттравматическом стрессовом расстройстве, если применение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты уменьшило хотя бы один из признаков, симптомов и комплексов симптомов посттравматического стрессового расстройства.
8. Способ улучшения устойчивости пациента к проявлению хотя бы одного симптома посттравматического стрессового расстройства, включающий введение терапевтически эффективного количества (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
9. Способ по п.7 или 8, где указанный способ, кроме того, включает совместное введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного агента, выбранного из бензодиазепина, селективного ингибитора обратного захвата серотонина (SSRI), ингибитора обратного захвата серотонина-норэпинефрина (SNRI), ингибитора обратного захвата норэпинефрина (NRI), антагониста серотонин 5-гидрокситриптамина 1А (5НТ1А), ингибитора дофамин -гидроксилазы, антагониста рецептора аденозина А2А, ингибитора моноаминоксидазы (MAOI), блокатора натриевого (Na) канала, блокатора кальциевого канала, антагониста центрального и периферического альфа адренергического рецептора, агониста центрального альфа адренергического рецептора, антагониста центрального или периферического бета адренергического рецептора, антагониста рецептора NK-1, антагониста кортикотропин-высвобождающего фактора (CRF), атипичного антидепрессанта/антипсихотического средства, трициклического антидепрессанта, антиконвульсанта, антагониста глутаматов, агониста гамма-аминомасляной кислоты (GABA) и частичного агониста D2.
10. Способ по пп.1, 7 или 8, где указанный (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты снижает по меньшей мере частоту или интенсивность проявления хотя бы одного признака посттравматического стрессового расстройства у пациента;
или где (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты снижает по меньшей мере частоту или интенсивность проявления хотя бы одного симптома указанного посттравматического стрессового расстройства у пациента;
или где (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты снижает по меньшей мере частоту или интенсивность проявления хотя бы одного комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства у пациента, где комплекс симптомов выбран из повторяющегося события/вторжения, избегания/оцепенения и гиперактивности.
11. Способ по п.1, где повторяющееся событие/вторжение включает по меньшей мере одно из таких проявлений, как повторяющиеся и навязчивые воспоминания о травмирующем событии, повторяющиеся и беспокоящие сны, посвященные травмирующему событию, действия или ощущения, соответствующие тому, как если бы травматическое событие повторялось, ощущение беспокойства при воспоминаниях о травмирующем событии и физиологическая реактивность при воспоминаниях о травмирующем событии.
12. Способ по п.11, где физиологическая реактивность включает по меньшей мере одно из таких проявлений, как аномальное дыхание, аномальная скорость или ритм сердечных сокращений, аномальное кровяное давление, аномальное функционирование по меньшей мере одного из конкретных чувств и аномальное функционирование по меньшей мере одного из органов чувств.
13. Способ по п.11, где по меньшей мере одно из конкретных чувств выбрано из зрения, слуха, осязания, обоняния, вкуса и рассудка; или где по меньшей мере один из органов чувств выбран из глаз, ушей, кожи, носа, языка и глотки.
14. Способ по п.1, где избегание/оцепенение включает по меньшей мере одно из таких проявлений, как попытки избежать мыслей или ощущений, связанных с травмирующим событием, попытки избежать определенных действий или ситуаций, неспособность вспоминать о травмирующем событии или его аспектах, заметное снижение интереса к серьезной деятельности, ощущение отчужденности и отстраненности от окружающих, ограниченный диапазон эмоций, чувство ограниченности перспектив на будущее, социальная тревожность и тревожность, связанная с незнакомой обстановкой.
15. Способ по п.1, где гиперактивность включает по меньшей мере одно из таких проявлений как трудности с засыпанием или поддержанием сна, раздражительность или вспышки гнева, затрудненная концентрация, сверхнастороженность, чрезмерная реакция вздрагивания и тревожность от потенциально угрожающего воздействия.
16. Способ по пп.1, 7 или 8, где по меньшей мере один из признаков, симптомов или комплексов симптомов посттравматического стрессового синдрома диагностируют или оценивают с применением по крайней мере одного из таких тестов, как Шкала для клинической диагностики PTSD (CAPS), Шкала для клинической диагностики PTSD часть 2 (CAPS-2), Шкала для клинической диагностики PTSD у детей и подростков (CAPS-CA), Шкала оценки влияния травмирующего события (IES), Шкала оценки влияния травмирующего события - пересмотренная (IES-R), Шкала общего клинического впечатления (CGI), Шкала общего клинического впечатления - тяжесть заболевания (CGI-S), Шкала общего клинического впечатления - улучшение (CGI-I), Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка (DGRP), Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка - улучшение (DGRP-I), Шкала Гамильтона для оценки тревожности (НАМ-А), Структурированное интервью для PTSD (SI-PTSD), PTSD интервью (PTSD-I), Шкала симптомов PTSD (PSS-I), Международное нейро-психологическое мини-интервью (MINI), Шкала Монтгомери-Асберга для оценки депрессии (MADRS), Опросник депрессии Века (BDI), Шкала депрессии Гамильтона (HAM-D), Шкала Гамильтона для оценки депрессии переработанная (RHRSD), Большой опросник для больных депрессией (MDI), Шкала депрессии для пожилых людей (GDS-30) и Индекс детской депрессии (CDI).
17. Способ по п.1, где (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты значительно изменяет сумму баллов по меньшей мере одного из тестов CAPS, CAPS-2, CAPS-СА, IES, IES-R, CGI, CGI-S, CGI-I, DGRP, DGRP-I, HAM-A, SI-PTSD, PTSD-I, PSS-I, MADRS, BDI, HAM-D, RHRSD, MDI, GDS-30 и CDI;
или где (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты значительно уменьшает итоговую сумму баллов по сравнению с исходной суммой баллов по меньшей мере в одном из тестов CAPS, CAPS-2, IES, IES-R и НАМА;
или где (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты значительно увеличивает долю пациентов, реагирующих на лечение, согласно тесту CGI-I и имеющих результат CGI-I по крайней мере 1 (очень сильное улучшение) и 2 (значительное улучшение);
или где (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты значительно увеличивает долю пациентов, реагирующих на лечение, согласно тесту DGRP-I и имеющих результат DGRP-I по крайней мере 1 (очень сильное улучшение) и 2 (значительное улучшение);
или где общая сумма баллов по меньшей мере 65 по крайней мере в одном из тестов CAPS и CAPS-2 указывает на посттравматическое стрессовое расстройство;
или где общий результат по меньшей мере 18 в тесте HAM-A указывает на тревожное расстройство;
или где результат не менее 3 по крайней мере в одном из тестов CGI-I и DGRP-I указывает на посттравматическое стрессовое расстройство.
18. Способ диагностики посттравматического стрессового расстройства у пациента, включающий:
введение пациенту терапевтически эффективного количества (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты/оценку выраженности по меньшей мере одного признака, симптома или комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства; и
диагностирование посттравматического стрессового расстройства у пациента, если применение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты уменьшает хотя бы один из признаков, симптомов и комплексов симптомов посттравматического стрессового расстройства.
19. Способ по п.1 или 18, где пациент является ребенком, подростком или взрослым.
20. Способ по п.1, 7 или 8, где указанный (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты снижает по меньшей мере частоту или интенсивность проявления хотя бы одного симптома указанного посттравматического стрессового расстройства у пациента, где признак или симптом выбран из дезорганизованного или возбужденного поведения, повторяющейся игры, в которой отражаются определенные аспекты травмирующего события, пугающих снов с отсутствием узнаваемого содержания, а также реконструкции травмирующего события.
21. Фармацевтическая композиция для лечения пациента, у которого диагностировано посттравматическое стрессовое расстройство, содержащая терапевтически эффективное количество (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в комбинации с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым наполнителем.
Описание изобретения к патенту
ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Настоящая заявка согласно 35 U.S.C. § 119(с) испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США № 60/935 035 «(4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты для лечения посттравматического стрессового расстройства», поданной 23 июля 2007 г, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки во всей своей полноте.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение в основном относится к способам лечения посттравматического стрессового расстройства и более конкретно к способам лечения посттравматического стрессового расстройства с использованием (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты. Кроме того, в изобретении разработаны способы улучшения устойчивости пациентов с использованием (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты. Помимо этого, в числе прочего, разработаны способы диагностики посттравматического стрессового расстройства у пациента.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Тревожные расстройства являются наиболее часто встречающимися расстройствами из числа психиатрических заболеваний, вызывающими тяжелые потери в экономике. Помимо генерализованного тревожного расстройства, эта группа заболеваний охватывает посттравматическое стрессовое расстройство, паническое расстройство, обсессивно-компульсивное расстройство, а также социальные и другие фобии.
Посттравматическое стрессовое расстройство может быть тяжелым и хроническим, причем в некоторых исследованиях выдвигается мысль о том, что на протяжении жизни оно встречается у 1,3%-7,8% от общего числа населения. Посттравматическое стрессовое расстройство, как правило, возникает после тяжелых, травмирующих психику событий. Эти события могут включать, например, боевые действия, террористические акты, физическое насилие, сексуальное насилие, дорожно-транспортные происшествия и природные катастрофы. Реакция на такие события может включать сильный страх, ощущение беспомощности или ужаса. Большинство людей восстанавливаются после травмирующих событий и возвращаются к нормальной жизни. В противоположность этому у жертв посттравматического стрессового расстройства симптомы сохраняются и могут ухудшаться со временем, мешая вернуться к нормальной жизни.
В настоящее время основой лечения посттравматического расстройства является психотерапия. Способы лечения включают когнитивно-поведенческую терапию, экспозиционную терапию, а также десенсибилизацию и коррекцию переработки информации с помощью движений глазных яблок. Медикаментозное лечение может улучшать эффективность психотерапии. Селективные ингибиторы обратного захвата серотонина (SSRIs), такие как сертралин (Zoloft®) и пароксетин (Paxil®) являются единственными лекарственными препаратами, одобренными для лечения PTSD Управлением по контролю за пищевыми продуктами и лекарственными средствами. С использованием SSRI связаны многие нежелательные побочные эффекты и особенности. К ним относятся необходимость уделять внимание взаимодействию лекарственных средств между собой, побочное воздействие на желудочно-кишечный тракт, побочное влияние на сексуальную сферу, суицидальное мышление, анксиогенные эффекты и замедленное начало действия. Некоторые трициклические антидепрессанты (TCAs) и ингибиторы моноамин оксидазы (MAOIs), по-видимому, обладают определенной эффективностью, но переносимость их пациентами низка из-за высокой частоты проявления побочных эффектов. MAOIs предъявляют определенные требования по ограничению рациона питания и с ними связаны случаи аллергии. TCAs проявляют антихолинергическое и сердечно-сосудистое побочное действие. Ламотригин, являющийся блокатором натриевого канала, проявлял определенную эффективность при лечении посттравматического стрессового расстройства в небольшом исследовании с плацебо-контролем. Трудность применения ламотригина заключается в необходимости титрования и опасности развития синдрома Стивена Джонсона, т.е. угрожающей жизни сыпи, что делает его неудачным кандидатом для терапевтического применения.
Существует необходимость в разработке способов лечения посттравматического стрессового расстройства, которые являются безопасными и эффективными.
Аденозин и его рецепторы выполняют разнообразные функции в модулировании различных видов активности центральной нервной системы. Действие аденозина в качестве нейромедиатора опосредуется рецепторами аденозина, которые относятся к семейству рецепторов, сопряженных с G-белком. Существует четыре рецептора аденозина, а именно A1, A2A, A2B , A3, известных к настоящему времени. Активация рецепторов аденозина под действием аденозина инициирует механизмы передачи сигнала. Каждый из подтипов рецепторов аденозина обычно характеризовали эффекторной системой аденилат циклазы, в которой в качестве вторичного мессенджера участвует циклический аденомонофосфат (cAMP). Рецепторы A1 и A3 связываются с белками Gi и ингибируют аденилат циклазу, что приводит к уменьшению клеточных уровней cAMP, тогда как рецепторы A2A и A2B связываются с белками Gs и активируют аденилат циклазу, что приводит к увеличению содержания cAMP в клетках.
Рецепторы A1 широко распространены в тканях мозга, тогда как распределение рецепторов A2B и A3 менее ясно. Рецепторы A2A в изобилии встречаются в отдельных областях мозга, таких как полосатое тело, центр удовольствия и обонятельный бугорок, что согласуется с предполагаемой ролью этих рецепторов в модулировании передачи нервных импульсов. Эти области мозга принимают участие в управлении эмоциями, подкреплении условных рефлексов и ощущении удовольствия и, следовательно, играют ключевую роль в управлении превращением мотивации в действие. Кроме того, передача сигнала аденозина может косвенно модулировать передачу дофаминергического сигнала. (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты является антагонистом рецептора A2A.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В изобретении разработаны способы лечения пациента, у которого диагностировано посттравматическое стрессовое расстройство. Эти способы включают введение пациенту терапевтически эффективного количества (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
Кроме того, в изобретении разработаны способы лечения посттравматического стрессового расстройства у пациента. Эти способы включают диагностику пациента с посттравматическим стрессовым расстройством; введение пациенту терапевтически эффективного количества (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты; осуществление оценки по меньшей мере одного признака, симптома или комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства; и определения улучшения состояния пациента с посттравматическим стрессовым синдромом, если применение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты уменьшило хотя бы один признак, симптом и комплекс симптомов посттравматического стрессового расстройства.
Помимо этого разработаны способы улучшения устойчивости пациента. Эти способы включают введение терапевтически эффективного количества (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
Далее в изобретении разработаны способы диагностики посттравматического стрессового расстройства у пациентов. Эти способы включают введение пациенту терапевтически эффективного количества (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты и осуществление оценки по меньшей мере одного признака, симптома или комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства; и диагностирование у пациента посттравматического стрессового расстройства, если применение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты уменьшило по меньшей мере один из признаков, симптомов или комплексов симптомов посттравматического стрессового расстройства. В некоторых вариантах осуществления пациент является ребенком, подростком или взрослым.
ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг.1 показано устранение APEC-индуцированного понижения двигательной активности у крыс.
На фиг.2 показаны результаты (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в тесте на стресс у крыс, вызванный вынужденным плаванием.
На фиг.3 показано устранение вызванной стрессом ангедонии у крыс при действии (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
На фиг.4 показаны результаты теста на дифференциальное подкрепление низкой скорости (30 сек) у крыс.
На фиг.5 показаны результаты теста в приподнятом плюс-лабиринте у крыс.
На фиг.6 показаны результаты теста на пассивное избегание у крыс.
На фиг.7 показана структура (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
На фиг.8 показаны условия исследования связывания радиоактивных лигандов.
На фиг.9 показано сродство (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты к рецепторам A1, A2A, A2B и A3 различных видов животных.
На фиг.10 показаны необработанные данные, кривые и результаты расчетов для потока ионов Ca2+ под действием рецептора аденозина для человеческого рецептора аденозина A1-G 16 в клетках CHO, измеренного с помощью FLIPR (1).
На фиг.11 показаны необработанные данные, кривые и результаты расчетов для потока ионов Ca2+ под действием рецептора аденозина для человеческого рецептора аденозина A1-G 16 в клетках CHO, измеренного с помощью FLIPR (2).
На фиг.12 показаны необработанные данные, кривые и результаты расчетов для потока ионов Ca2+ под действием рецептора аденозина для человеческого рецептора аденозина A1-G 16 в клетках CHO, измеренного с помощью FLIPR (3).
На фиг.13 показаны необработанные данные, кривые и результаты расчетов для потока ионов Ca2+ под действием рецептора аденозина для человеческого рецептора аденозина A1-G 16 в клетках CHO, измеренного с помощью FLIPR (4).
На фиг.14 показаны необработанные данные, кривые и результаты расчетов для потока ионов Ca2+ под действием рецептора аденозина для человеческого рецептора аденозина A1-G 16 в клетках CHO, измеренного с помощью FLIPR (5).
На фиг.15 показаны необработанные данные, кривые и результаты расчетов для потока ионов Ca2+ под действием рецептора аденозина для человеческого рецептора аденозина A1-G 16 в клетках CHO, измеренного с помощью FLIPR (6).
На фиг.16 показаны необработанные данные, кривые и результаты расчетов для потока ионов Ca2+ под действием рецептора аденозина для человеческого рецептора аденозина A2A-G 16 в клетках CHO, измеренного с помощью FLIPR (1).
На фиг.17 показаны необработанные данные, кривые и результаты расчетов для потока ионов Ca2+ под действием рецептора аденозина для человеческого рецептора аденозина A2A-G 16 в клетках CHO, измеренного с помощью FLIPR (2).
На фиг.18 показаны необработанные данные, кривые и результаты расчетов для потока ионов Ca2+ под действием рецептора аденозина для человеческого рецептора аденозина A2A-G 16 в клетках CHO, измеренного с помощью FLIPR (3).
На фиг.19 показаны необработанные данные, кривые и результаты расчетов для потока ионов Ca2+ под действием рецептора аденозина для человеческого рецептора аденозина A2A-G 16 в клетках CHO, измеренного с помощью FLIPR (4).
На фиг.20 показаны необработанные данные, кривые и результаты расчетов для потока ионов Ca2+ под действием рецептора аденозина для человеческого рецептора аденозина A2A-G 16 в клетках CHO, измеренного с помощью FLIPR (5).
На фиг.21 показаны необработанные данные, кривые и результаты расчетов для потока ионов Ca2+ под действием рецептора аденозина для человеческого рецептора аденозина A2A-G 16 в клетках CHO, измеренного с помощью FLIPR (6).
На фиг.22 показаны общие методики анализов связывания.
На фиг.23 показаны общие методики анализов связывания.
На фиг.24 показаны общие методики анализов связывания.
На фиг.25 показаны общие методики анализов связывания.
На фиг.26 показаны условия экспериментов.
На фиг.27 показаны условия экспериментов.
На фиг.28 показаны условия экспериментов.
На фиг.29 показаны условия экспериментов.
На фиг.30 показаны условия экспериментов.
На фиг.31 показаны условия экспериментов.
На фиг.32 показаны условия экспериментов.
На фиг.33 представлены общие методики ферментных анализов.
На фиг.34 представлены экспериментальные условия ферментных анализов.
На фиг.35 представлены экспериментальные условия ферментных анализов.
На фиг.36 представлены экспериментальные условия ферментных анализов.
На фиг.37 показаны средние значения результатов для (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в анализах связывания.
На фиг.38 показаны средние значения результатов для (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в анализах связывания.
На фиг.39 показаны средние значения результатов для (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в анализах связывания.
На фиг.40 показаны средние значения результатов для (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в анализах связывания.
На фиг.41 показаны средние значения результатов для (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в анализах связывания.
На фиг.42 показаны средние значения результатов для (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в анализах связывания.
На фиг.43 показаны средние значения результатов для (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в анализах связывания.
На фиг.44 показаны значения IC50 и Ki, полученные в анализах связывания.
На фиг.45 показаны значения IC50 и Ki, полученные в анализах связывания.
На фиг.46 показаны значения IC50 и Ki, полученные в анализах связывания.
На фиг.47 показаны значения IC50 и Ki, полученные в анализах связывания.
На фиг.48 показаны значения IC50 и Ki, полученные в анализах связывания.
На фиг.49 показаны средние значения результатов для (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в ферментных анализах.
На фиг.50 показаны средние значения результатов для (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в ферментных анализах.
На фиг.51 показаны значения IC50 и EC50 для каждого из эталонных соединений.
На фиг.52 показаны значения IC50 и EC50 для каждого из эталонных соединений.
На фиг.53 показаны значения IC50 и EC50 для каждого из эталонных соединений.
На фиг.54 показаны значения IC50 и EC50 для каждого из эталонных соединений.
На фиг.55 показано, что (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты статистически значимо и дозозависимо устраняло APEC-индуцированный дефицит двигательной активности по сравнению с контрольными соединениями со значениями ID50 и ID90, равными 0,5 мг/кг и 3,4 мг/кг, соответственно.
На фиг.56 показано, что пероральное введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты самкам крыс статистически значимо и дозозависимо уменьшало среднюю общую продолжительность неподвижности по сравнению с контрольными соединениями. Аналогичный результат был получен при введении дезипрамина (100 мг/кг перорально) - трициклического антидепрессанта, использованного в качестве лекарственного средства сравнения.
На фиг.57 показана зависимость коэффициента ангедонии от периода стресса.
На фиг.58 показаны результаты теста на дифференциальное подкрепление низкой скорости (30 секунд) у крыс.
На фиг.59 показаны корректные реакции среди экспериментальных групп.
На фиг.60 показаны средние значения (+/-SEM) времени пребывания в открытых ответвлениях лабиринта (a), числа заходов в открытые ответвления (b), расстояния, пройденного в открытых ответвлениях (c) и расстояния, преодолеваемое за секунду в закрытых ответвлениях (d) для животных, получавших хлордиазепоксид (10 мг/кг перорально), носитель или (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты (дозировки 3,10 и 30 мг/кг перорально). Статистический анализ, тест Даннетта: *p<0,05 **p<0,01 относительно носителя и (-тест: #p<0,05 ## p<0,01 ### p<0,001 относительно носителя.
На фиг.61 показано влияние на время пребывания в открытых ответвлениях (сек) 10 мг/кг хлордиазепоксида (CDZ 10), носителя (veh) и (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в дозировках 3, 10 и 30 мг/кг в приподнятом плюс-лабиринте.
На фиг.62 показано влияние на число входов в открытые ответвления 10 мг/кг хлордиазепоксида (CDZ 10), носителя (veh) и (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в дозировках 3, 10 и 30 мг/кг в приподнятом плюс-лабиринте.
На фиг.63 показано расстояние, пройденное в открытых ответвлениях (см), при введении 10 мг/кг хлордиазепоксида (CDZ 10), носителя (veh) и (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в дозировках 3, 10 и 30 мг/кг в приподнятом плюс-лабиринте.
На фиг.64 показано влияние на скорость передвижения в открытых ответвлениях (см/с) 10 мг/кг хлордиазепоксида (CDZ 10), носителя (veh) и (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в дозировках 3, 10 и 30 мг/кг в приподнятом плюс-лабиринте.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящей заявке предполагается, что приведенные ниже термины и фразы имеют указанные значения, за исключением тех случаев, когда контекст, в котором они употребляются, указывает на другое толкование.
В настоящем описании термин «(4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты» включает сам (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты, а также его фармацевтически приемлемые соли.
«Фармацевтически приемлемые соли» включают, не ограничиваясь перечисленным, соли с неорганическими кислотами, например, гидрохлорид, фосфат, дифосфат, гидробромид, сульфат, сульфинат, нитрат и т.п.; а также соли с органическими кислотами, например, малат, малеат, фумарат, тартрат, сукцинат, цитрат, ацетат, лактат, метансульфонат, п-толуолсульфонат, 2-гидроксиэтилсульфонат, бензоат, салицилат, стеарат и алканоаты, например, ацетат, HOOC-(CH2) n-COOH, где n равно 0-4 и подобные соли.
Кроме того, если соединение получено в форме кислотно-аддитивной соли, свободное основание может быть получено подщелачиванием раствора соли кислоты. Наоборот, если продукт представляет собой свободное основание, то аддитивная соль, в частности фармацевтически приемлемая аддитивная соль, может быть получена растворением свободного основания в подходящем органическом растворителе и обработкой раствора кислотой в соответствии с общеизвестными методиками получения кислотно-аддитивных солей из основных соединений. Специалист в данной области техники должен быть знаком с различными методиками синтеза, которые могут применяться для получения нетоксичных, фармацевтически приемлемых аддитивных солей.
В настоящем описании термин «лечение» относится к любому способу, в результате применения которого по меньшей мере один признак, симптом или комплекс симптомов заболевания или расстройства изменяется в благоприятном направлении, так что предупреждается или откладывается начало, снижается заболеваемость или частота проявления, уменьшается тяжесть или интенсивность, замедляется развитие, предотвращаются рецидивы или облегчаются симптомы или сопутствующие симптомы заболевания или расстройства. Например, при посттравматическом стрессовом расстройстве, лечение расстройства в некоторых вариантах осуществления может вызывать уменьшение по меньшей мере либо интенсивности, либо частоты появления по крайней мере одного из признаков, симптомов или комплексов симптомов посттравматического стрессового расстройства.
В настоящем описании фраза «диагностировано посттравматическое стрессовое расстройство (PTSD)» относится к пациенту, у которого диагностирован по меньшей мере один признак, симптом или комплекс симптомов, характерный для посттравматического стрессового расстройства, т.е. психиатрического расстройства, начавшегося вследствие травмирующего события. Не ограничивающие примеры таких травмирующих событий включают военные действия, террористические акты, физическое насилие, сексуальное насилие, дорожно-транспортные происшествия или природные катастрофы.
The Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders-IV-Text revised (DSM-IV-TR) (Диагностическое и статистическое руководство по умственным расстройствам-IV-текст переработанное), т.е. руководство для профессионалов в области ментального здоровья, в котором перечислены категории и критерии умственных расстройств, классифицирует посттравматическое стрессовое расстройство, как тревожное расстройство. Согласно DSM-IV-TR, диагноз PTSD может быть поставлен, если:
1. Пациент пережил, стал свидетелем или столкнулся с событием или событиями, которые включали или несли в себе угрозу смерти или серьезной травмы, или с угрозой физической неприкосновенности себе или другим людям, и реакция на эти события включала сильный страх, беспомощность или ужас.
2. Вследствие травмирующего события пациент ощутил по меньшей мере 1 симптом повторяющегося события/вторжения, 3 симптома избегания/оцепенения и 2 симптома гиперактивности, причем продолжительность этих симптомов составляет более 1 месяца; и
3. Указанные симптомы вызывают клинически значимое расстройство или нарушение в социальной, профессиональной или другой важной области деятельности.
В некоторых вариантах осуществления, если расстройство пациента удовлетворяет критериям DSM-IV-TR, у пациента диагностируют посттравматическое стрессовое расстройство. В некоторых вариантах осуществления, если у пациента имеется по меньшей мере один признак, симптом или комплекс симптомов посттравматического стрессового расстройства, у пациента диагностируют посттравматическое стрессовое расстройство. В некоторых вариантах осуществления для определения степени выраженности признака, симптома или комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства используют специальный тест, и диагностируют посттравматическое стрессовое расстройство на основании результатов теста. В некоторых вариантах осуществления количество баллов, набранных в тесте, используют для диагностирования или оценки признака, симптома или комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства.
Как используется в настоящем описании термин «шкала» относится к способу измерения степени выраженности по меньшей мере одного признака, симптома или комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства у пациента. В некоторых вариантах осуществления, шкала может представлять собой собеседование или опросный лист. Не ограничивающими примерами шкал являются Шкала для клинической диагностики PTSD (CAPS), Шкала для клинической диагностики PTSD часть 2 (CAPS-2), Шкала для клинической диагностики PTSD у детей и подростков (CAPS-CA), Шкала оценки влияния травмирующего события (IES), Шкала оценки влияния травмирующего события - пересмотренная (IES-R), Шкала общего клинического впечатления (CGI), Шкала общего клинического впечатления - тяжесть заболевания (CGI-S), Шкала общего клинического впечатления - улучшение (CGI-I), Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка (DGRP), Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка - улучшение (DGRP-I), Шкала Гамильтона для оценки тревожности (HAM-A), Структурированное интервью для PTSD (SI-PTSD), PTSD интервью (PTSD-I), Шкала симптомов PTSD (PSS-I), Международное нейропсихологическое мини-интервью (MINI), Шкала Монтгомери-Асберга для оценки депрессии (MADRS), Опросник депрессии Бека (BDI), Шкала депрессии Гамильтона (HAM-D), Шкала Гамильтона для оценки депрессии переработанная (RHRSD), Большой опросник для больных депрессией (MDI), Шкала депрессии для пожилых людей (GDS-30) и Указатель детской депрессии (CDI).
Как используется в настоящем описании термины «признак» и «признаки» относятся к объективным данным о расстройстве. В некоторых вариантах осуществления признак может являться физиологическим проявлением или реакцией, связанной с расстройством. В некоторых вариантах осуществления термин «признак» может относиться к частоте и ритму сердцебиения, температуре тела, типу и частоте дыхания, кровяному давлению. В некоторых вариантах осуществления признаки могут быть связаны с симптомами. В некоторых вариантах осуществления признаки могут указывать на симптомы.
Как используется в настоящем описании термин «симптом» и «симптомы» относятся к субъективным признакам, которые характеризуют расстройство. Термин «симптомы посттравматического стрессового расстройства» может относиться, не ограничиваясь этим, например, к повторяющимся и назойливым воспоминаниям о травмирующем событии, повторяющимся и беспокоящим снам, посвященным травмирующему событию, действиям или ощущениям, как будто травмирующее событие повторяется, ощущению беспокойства при воспоминаниях о травмирующем событии, физиологической реактивности при воспоминаниях о травмирующем событии, попыткам избежать мыслей или ощущений, связанных с травмирующим событием, попыткам избежать определенных действий или ситуаций, неспособности вспоминать о травмирующем событии или его аспектах, заметному снижению интереса к серьезной деятельности, ощущению отчужденности и отстраненности от окружающих, ограниченному диапазону эмоций, чувству ограниченности перспектив на будущее, социальной тревожности, тревожности в незнакомой обстановке, трудностям с засыпанием или поддержанием сна, раздражительности или вспышкам гнева, затрудненной концентрации, сверхнастороженности и чрезмерной реакции вздрагивания. В некоторых вариантах осуществления, потенциально угрожающее воздействие может вызывать гиперактивность или тревожность. В некоторых вариантах осуществления физиологическая реактивность проявляется по меньшей мере в одном из таких явлений, как аномальное дыхание, аномальная скорость или ритм сердечных сокращений, аномальное кровяное давление, аномальное функционирование отдельных видов чувствительности и аномальное функционирование органа чувств. В некоторых вариантах осуществления ограниченный диапазон эмоций характеризуется уменьшенным или ограниченным диапазоном или интенсивностью ощущений или же может иметь место демонстрация эмоций, и чувство ограниченности перспектив в будущем может проявляться в форме мыслей, что у пациента не будет карьеры, брака, детей или нормальной продолжительности жизни. В некоторых вариантах осуществления, у детей и подростков могут иметься симптомы посттравматического стрессового расстройства, как, например, не ограничиваясь перечисленным, дезорганизованное или возбужденное поведение, повторяющаяся игра, в которой отражаются определенные аспекты травмирующего события, пугающие сны с отсутствием узнаваемого содержания, а также реконструкция травмирующего события.
Как используется в настоящем описании термин «комплекс симптомов» относится к набору признаков, симптомов или набору признаков и симптомов, которые сгруппированы по причине их взаимосвязи друг с другом или их совместного проявления. Например, в некоторых вариантах осуществления посттравматическое стрессовое расстройство характеризуется тремя комплексами симптомов: повторяющегося события/вторжения, избегания/оцепенения и гиперактивности.
Как используется в настоящем описании термин «повторяющееся событие/вторжение» относится по меньшей мере к одному случаю повторяющихся и навязчивых воспоминаний о травмирующем событии, повторяющихся и беспокоящих снов, посвященных травмирующему событию, действий или ощущений, соответствующим тому, как будто травматическое событие повторяется, ощущения беспокойства при воспоминаниях о травмирующем событии, физиологической реактивности при воспоминаниях о травмирующем событии. В некоторых вариантах осуществления физиологическая реактивность проявляется по меньшей мере в одном из таких явлений, как аномальное дыхание, аномальная скорость или ритм сердечных сокращений, аномальное кровяное давление, аномальное функционирование отдельных видов чувствительности и аномальное функционирование органа чувств.
Как используется в настоящем описании термин «избегание/оцепенение» относится по меньшей мере к одному случаю попыток избежать мыслей или ощущений, связанных с травмирующим событием, попыток избежать определенных действий или ситуаций, неспособности вспоминать о травмирующем событии или его аспектах, заметного снижения интереса к серьезной деятельности, ощущения отчужденности и отстраненности от окружающих, ограниченного диапазона эмоций, чувства ограниченности перспектив на будущее. Ограниченный диапазон эмоций характеризуется уменьшенным или ограниченным диапазоном или интенсивностью ощущений или может иметь место демонстрация ощущений. Чувство ограниченности перспектив в будущем может проявляться в форме мыслей, что у пациента не будет карьеры, брака, детей или нормальной продолжительности жизни. Избегание/оцепенение также может проявляться в социальной тревожности и тревожности в незнакомой обстановке.
Как используется в настоящем описании термин «гиперактивность» относится по меньшей мере к одному случаю трудностей с засыпанием или поддержанием сна, раздражительности или вспышек гнева, затрудненной концентрации, сверхнастороженности и чрезмерной реакции вздрагивания. Потенциально угрожающее воздействие может вызывать гиперактивность или тревожность.
Как используется в настоящем описании термин «значительно» относятся к совокупности наблюдений или событий, которые слишком тесно связаны между собой, чтобы это можно было приписать случайности. Например, в некоторых вариантах осуществления словосочетания «статистически значимо изменяется», «статистически значимо уменьшается» и «статистически значимо увеличивается» относятся к изменениям или эффектам, которые нельзя признать случайными. В некоторых вариантах осуществления статистические методы могут применяться для определения того, можно ли назвать результат того или иного наблюдения «статистически значимым» изменением, уменьшением, увеличением или модификацией. В некоторых вариантах осуществления «количество баллов», которым оценивается посттравматическое стрессовое расстройство, может статистически значимо изменяться, например, при лечении посттравматического стрессового расстройства.
Пациент, у которого диагностировано посттравматическое стрессовое расстройство, может ощущать себя настороженным, взволнованным и сильно обеспокоенным. Депрессия, тревожность, панические приступы и биполярное расстройство часто связаны с посттравматическим стрессовым расстройством. Также обычными являются злоупотребление алкоголем и наркотиками. В некоторых вариантах осуществления, расстройства, сопутствующие посттравматическому стрессовому расстройству, могут включать, например, но не ограничиваясь этим, депрессию, злоупотребление алкоголем и злоупотребление наркотиками.
Как используется в настоящем описании термин «Шкала для клинической диагностики PTSD (CAPS)» относится к тесту для диагностирования и оценки выраженности посттравматического стрессового синдрома. CAPS представляет собой структурированное интервью, состоящее из 30 пунктов, которое соответствует критерию DSM-IV для PTSD. Были разработаны различные версии этого теста.
Как используется в настоящем описании термин «Шкала для клинической диагностики PTSD-часть 1 (CAPS-1)» означает версию CAPS, предназначенную для оценки текущего PTSD и PTSD, имевших место в прошлом, и этот тест известен также как CAPS-DX (для диагностики).
Как используется в настоящем описании термин «Шкала для клинической диагностики PTSD-часть 2 (CAPS-2)» относится к версии CAPS, применяемой для оценки симптомного статуса пациента с посттравматическим стрессовым расстройством в течение одной недели, и этот тест именуется также CAPS-SX (для определения симптомов).
Как используется в настоящем описании термин «Шкала для клинической диагностики PTSD у детей и подростков (CAPS-CA)» относится к версии CAPS, разработанной для детей и подростков.
Как используется в настоящем описании термин «Шкала оценки влияния травмирующего события (IES)» относится к тесту, разработанному Mardi Horowitz, Nancy Wilner и William Alvarez для определения субъективного ощущения стресса, связанного с конкретным событием. Тест основан на оценке своего состояния самим пациентом и может применяться для осуществления оценок на протяжении некоторого времени с целью наблюдения за состоянием пациента.
Как используется в настоящем описании термин «Шкала оценки влияния травмирующего события - пересмотренная (IES-R)» относится к переработанному тесту IES, предложенному Daniel S. Weiss и Charles Marmar для оценки комплекса симптомов гиперактивности PTSD.
Как используется в настоящем описании термин «Шкала общего клинического впечатления (CGI)» относится к тесту для проведения психиатрических обследований. С пациентами проводится беседа, и CGI применяется для определения тяжести заболевания (CGI-S), общего улучшения (CGI-I) и коэффициента эффективности.
Как используется в настоящем описании термин «Шкала общего клинического впечатления - тяжесть заболевания (CGI-S)» относится к способу оценки текущих симптомов пациента. Как правило, оценка осуществляется по семибалльной шкале от балла 1 (нормальное состояние) до балла 7 (исключительно тяжелая степень заболевания). Тяжесть заболевания пациента сравнивают с тяжестью заболевания других пациентов. Например, баллы CGI-S могут применяться для определения состояния пациента после лечения (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амидом 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты, и можно сравнить количество баллов до лечения с количеством баллов после лечения.
Как используется в настоящем описании термин «Шкала общего клинического впечатления - улучшение (CGI-I)» относится к сравнению текущего состояния пациента с его исходным состоянием. Как правило, сравнение осуществляется по семибалльной шкале от 1 (очень значительное улучшение) до 7 (очень значительное ухудшение). Баллы CGI-I могут применяться для определения, например, улучшения состояния при посттравматическом стрессовом расстройстве как реакции на лечение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амидом 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
Как используется в настоящем описании термин «коэффициент эффективности» имеет отношение к количеству баллов, набранному по шкале CGI и сравнивает исходное состояние пациента с соотношением полученной пользы от лечения и тяжести побочных эффектов. Как правило, значение коэффициента выражается по четырехбалльной шкале от 1 (эффект отсутствует) до 4 (превосходный терапевтический эффект). При исследовании посттравматического стрессового расстройства, с помощью коэффициента эффективности можно было бы оценивать, например, соотношение риск-польза при лечении таким препаратом, как (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
Как используется в настоящем описании термин «Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка (DGRP)» относится к тесту, позволяющему измерить тяжесть и улучшение для каждого из трех комплексов симптомов PTSD: повторяющегося события/вторжения, избегания/оцепенения и гиперактивности, а также общую тяжесть PTSD.
Как используется в настоящем описании термин «Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка - улучшение (DGRP-I)» относится к тесту, применяемому для того, чтобы отличить пациентов, реагирующих на лечение (1 по шкале DGRP-I (очень сильное улучшение) и 2 (значительное улучшение)), от пациентов, не реагирующих на лечение (DGRP-I>2), например, лечение посттравматического стрессового расстройства с помощью (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
Как используется в настоящем описании термин «Шкала Гамильтона для оценки тревожности (HAM-A)» относится к шкале, разработанной Max Hamilton в 1959 для диагностики и количественной оценки симптомов тревожности и посттравматического стрессового расстройства. Она состоит из 14 разделов, каждый из которых определяется рядом симптомов. Не было разработано стандартизованных тестовых вопросов для получения информации у пациентов или конкретных поведенческих указаний для определения количества баллов по каждому разделу. Каждый раздел оценивается по 5-балльной шкале от 0 (симптом отсутствует) до 4 (тяжелая степень). Разделы включают оценку тревожного настроения, страхов, интеллектуальных эффектов, соматических жалоб, например, на мускулатуру, сердечно-сосудистых симптомов, напряженности, бессонницы, депрессивного настроения, жалобы на работу соматосенсорной системы, дыхательных симптомов, желудочно-кишечных симптомов, симптомов, относящихся к вегетативной нервной системе, симптомов, относящихся к мочеполовой системе и поведения во время проведения теста. Например, уменьшение баллов по шкале HAM-A указало бы на улучшение течения расстройства, например, посттравматического стрессового расстройства.
Как используется в настоящем описании термины «Структурированное интервью для PTSD (SI-PTSD), PTSD интервью (PTSD-I), Шкала симптомов PTSD (PSS-I), Международное нейропсихологическое мини-интервью (MINI), Шкала Монтгомери-Асберга для оценки депрессии (MADRS), Опросник депрессии Бека (BDI), Шкала депрессии Гамильтона (HAM-D), Шкала Гамильтона для оценки депрессии переработанная (RHRSD), Большой опросник для больных депрессией (MDI), Шкала депрессии для пожилых людей (GDS-30) и Указатель детской депрессии (CDI)» относятся к дополнительным тестам для диагностики, оценки, определения выраженности признака, симптома или комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства, тревожности или депрессии.
Как используется в настоящем описании термин «баллы» относится к набранному количеству баллов по меньшей мере по одному разделу или параметру, определяемому в тесте, который предназначен для оценки по меньшей мере одного признака, симптома или комплекса симптомов, относящихся к психиатрическим симптомам, тревожности или посттравматическому стрессовому расстройству. В некоторых вариантах осуществления количество баллов измеряет частоту, интенсивность или тяжесть признака, симптома, комплекса симптомов, связанного симптома или влияния на повседневную жизнь посттравматического стрессового расстройства.
Как используется в настоящем описании термин «итоговое количество баллов» относится к количеству баллов, набранному во время или после лечения в тесте, предназначенном для оценки посттравматического стрессового расстройства.
Как используется в настоящем описании термин «исходное количество баллов» относится к количеству баллов, набранному перед началом лечения в тесте, предназначенном для оценки посттравматического стрессового расстройства.
Как используется в настоящем описании термин «общее количество баллов» относится к сумме баллов в тесте, предназначенном для оценки посттравматического стрессового расстройства. В некоторых вариантах осуществления общая сумма баллов представляет собой сумму баллов, относящихся по меньшей мере к одному из симптомов, комплексов симптомов, связанных симптомов, влияний на повседневную жизнь, эффективностей или улучшений.
Как используется в настоящем описании термин «рецидив» относится к повторному появлению или ухудшению по меньшей мере одного из симптомов заболевания или расстройства у пациента.
Как используется в настоящем описании фраза «терапевтически эффективное количество» относится к количеству, достаточному для того, чтобы обеспечить терапевтический эффект, относящийся по меньшей мере к одному признаку, симптому или связанному симптому заболевания, расстройства или состояния. Например, в некоторых вариантах осуществления это заболевание, расстройство или состояние представляет собой PTSD.
Как используется в настоящем описании фраза «улучшение устойчивости» относится к увеличению способности пациента переживать травмирующее событие без заболевания посттравматическим стрессовым расстройством или с менее выраженной симптоматикой, или с меньшим нарушением обычной активности в повседневной жизни. В некоторых вариантах осуществления, улучшение устойчивости может уменьшать симптомы посттравматического стрессового расстройства.
Как используется в настоящем описании термин «совместное введение» относится к режиму введения первого агента, который частично совпадает с режимом введения второго агента, или к одновременному введению первого агента и второго агента. Режим введения характеризуется количеством вводимого препарата, частотой и продолжительностью введения. Два режима введения частично совпадают, если между началом первого введения и началом второго введения первого агента, осуществляется введение второго агента.
Как используется в настоящем описании термин «агент» относится к веществам, в число которых входят, не ограничиваясь перечисленным, химические соединения, например, малые молекулы или сложные органические соединения, белки, например, антитела или фрагменты антител, или белки, включающие фрагменты антител, или генетические конструкты, которые выполняют в организме функции ДНК или мРНК.
Как используется в настоящем описании термин «активность рецептора A2A» относится по меньшей мере к одному виду активности, вызванному рецептором A2A. Например, но не ограничиваясь этим, такая активность может представлять собой активность аденилат циклазы, увеличение уровней cAMP и поток ионов кальция.
Как используется в настоящем описании термин «модулирует» относится к изменению или преобразованию активности, функции или свойства. Например, агент может модулировать уровни какого-либо фактора путем повышения или понижения уровней этого фактора.
Как используется в настоящем описании термин «дофаминергическая передача сигнала» относится к передаче сигнала, вызываемого дофамином и его воздействием на различные виды нейронной активности. Существует пять известных дофаминергических рецепторов, а именно два D1-подобных рецептора (D1 и D5) и три D2-подобных рецептора (D2, D3 и D4). Связывание дофамина с D1-подобными рецепторами стимулирует аденил циклазу и связывание с D2-подобными рецепторами ингибирует аденил циклазу. Дофаминергическая передача сигнала вызывает изменения в нейронной активности, включающие, но не ограничиваясь этим, изменения в поведении, познавательной способности, двигательной активности, мотивации и поощрении, сне, настроении, внимании и обучении.
В настоящем изобретении разработаны способы лечения пациентов, у которых диагностировано посттравматическое стрессовое расстройство. Эти способы включают введение пациенту терапевтически эффективного количества (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
В некоторых вариантах осуществления, способ по настоящему изобретению дополнительно включает совместное введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного агента, выбранного из бензодиазепина, селективного ингибитора обратного захвата серотонина (SSRI), ингибитора обратного захвата серотонина-норэпинефрина (SNRI), ингибитора обратного захвата норэпинефрина (NRI), антагониста серотонин 5-гидрокситриптамина1А (5HT1A), ингибитора дофамин -гидроксилазы, антагониста рецептора аденозина A2A, ингибитора моноаминоксидазы (MAOI), блокатора натриевого (Na) канала, блокатора кальциевого канала, антагониста центрального и периферического альфа адренергического рецептора, агониста центрального альфа адренергического рецептора, антагониста центрального или периферического бета адренергического рецептора, антагониста рецептора NK-1, антагониста кортикотропин-высвобождающего фактора (CRF), атипичного антидепрессанта/антипсихотического средства, трициклического антидепрессанта, антиконвульсанта, антагониста глутаматов, агониста гамма-аминомасляной кислоты (GABA) и частичного агониста D2.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой SSRI, выбранный из пароксетина, сертралина, циталопрама, эсциталопрама и флуоксетина.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой SNRI, выбранный из дулоксетина, миртазапина и венлафаксина.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой NRI, выбранный из бупропиона и атомоксетина.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой ингибитор дофамин -гидроксилазы, выбранный из непикастата и дисульфирама.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент является антагонистом рецептора аденозина A2A истрадефиллином.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент является блокатором натриевого канала, выбранным из ламотригина, карбамазепина, окскарбазепина и вальпроата.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент является блокатором кальциевого канала, выбранным из ламотригина и карбамазепина.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент является антагонистом центрального и периферического альфа адренергического рецептора празозином.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент является агонистом центрального альфа адренергического рецептора клонидином.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент является антагонистом центрального или периферического бета адренергического рецептора пропранололом.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой атипичный антидепрессант/антипсихотическое средство выбранное из оланзепина, рисперидона и кветиапина.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой трициклический антидепрессант, выбранный из амитриптилина, амоксапина, дезипрамина, доксепина, имипрамина, нортриптилина, протиптилина и тримипрамина.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент представляет собой противосудорожное средство, выбранное из ламотригина, карбамазепина, окскарбазепина, вальпроата, топирамата и леветирацетама.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент является антагонистом глутамата топираматом.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент является антагонистом GABA, выбранным из вальпроата и топирамата.
В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один дополнительный агент является частичным агонистом D2 арипипразола.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты снижает проявление по меньшей мере одного вида активности рецептора A2A в организме пациента.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты модулирует передачу дофаминергического сигнала в организме пациента.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты понижает по меньшей мере частоту или интенсивность проявления хотя бы одного признака посттравматического стрессового расстройства у пациента.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты понижает по меньшей мере частоту или интенсивность проявления хотя бы одного симптома посттравматического стрессового расстройства у пациента.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты понижает по меньшей мере частоту или интенсивность проявления хотя бы одного комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства у пациента, где комплекс симптомов выбран из повторяющегося события/вторжения, избегания/оцепенения и гиперактивности.
В некоторых вариантах осуществления повторяющееся событие/вторжение включает по меньшей мере одно из следующего: повторяющиеся и навязчивые воспоминания о травмирующем событии, повторяющиеся и беспокоящие сны, посвященные травмирующему событию, действия или ощущения, соответствующие тому, как если бы травматическое событие повторялось, ощущение беспокойства при воспоминаниях о травмирующем событии и физиологическая реактивность при воспоминаниях о травмирующем событии.
В некоторых вариантах осуществления физиологическая реактивность включает по меньшей мере одно из следующего: аномальное дыхание, аномальная скорость или ритм сердечных сокращений, аномальное кровяное давление, аномальное функционирование по меньшей мере одного из конкретных чувств и аномальное функционирование по меньшей мере одного из органов чувств. В некоторых вариантах осуществления упомянутое по меньшей мере одно из конкретных чувств выбрано из зрения, слуха, осязания, обоняния, вкуса и рассудка. В некоторых вариантах осуществления упомянутый по меньшей мере один из органов чувств выбран из глаз, ушей, кожи, носа, языка и глотки.
В некоторых вариантах осуществления избегание/оцепенение включает по меньшей мере одно из следующего: попытки избежать мыслей или ощущений, связанных с травмирующим событием, попытки избежать определенных действий или ситуаций, неспособность вспоминать о травмирующем событии или его аспектах, заметное снижение интереса к серьезной деятельности, ощущение отчужденности и отстраненности от окружающих, ограниченный диапазон эмоций, чувство ограниченности перспектив на будущее, социальная тревожность и тревожность связанная с незнакомой обстановкой.
В некоторых вариантах осуществления гиперактивность включает по меньшей мере одно из следующего: трудности с засыпанием или поддержанием сна, раздражительность или вспышки гнева, затрудненную концентрацию, сверхнастороженность, чрезмерную реакцию вздрагивания и тревожность от потенциально угрожающего воздействия. В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты не снижает физическую способность пациента адекватно и быстро реагировать на потенциально угрожающее воздействие.
В некоторых вариантах осуществления пациент является ребенком или подростком. В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты понижает по меньшей мере частоту или интенсивность хотя бы одного признака или симптома посттравматического стрессового расстройства у пациента, где признак или симптом выбран из дезорганизованного или возбужденного поведения, повторяющейся игры, в которой отражаются определенные аспекты травмирующего события, пугающих снов с отсутствием узнаваемого содержания, а также реконструкции травмирующего события.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты понижает частоту возникновения по меньшей мере одного расстройства, сопутствующего посттравматическому стрессовому расстройству, выбранного из злоупотребления наркотиками, злоупотребления алкоголем и депрессии у пациента.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты вводят пациенту один или два раза в день.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты не вызывает по меньшей мере одного из следующих явлений: дремоты, усталости или изменения умственных и физических способностей.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты вводят пациенту до или сразу же после травмирующего события.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из признаков, симптомов или комплексов симптомов посттравматического стрессового расстройства диагностируют или оценивают с применением по крайней мере одного из таких тестов, как Шкала для клинической диагностики PTSD (CAPS), Шкала для клинической диагностики PTSD часть 2 (CAPS-2), Шкала для клинической диагностики PTSD у детей и подростков (CAPS-CA), Шкала оценки влияния травмирующего события (IES), Шкала оценки влияния травмирующего события - пересмотренная (IES-R), Шкала общего клинического впечатления (CGI), Шкала общего клинического впечатления - тяжесть заболевания (CGI-S), Шкала общего клинического впечатления - улучшение (CGI-I), Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка (DGRP), Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка - улучшение (DGRP-I), Шкала Гамильтона для оценки тревожности (HAM-A), Структурированное интервью для PTSD (SI-PTSD), PTSD интервью (PTSD-I), Шкала симптомов PTSD (PSS-I), Международное нейропсихологическое мини-интервью (MINI), Шкала Монтгомери-Асберга для оценки депрессии (MADRS), Опросник депрессии Бека (BDI), Шкала депрессии Гамильтона (HAM-D), Шкала Гамильтона для оценки депрессии переработанная (RHRSD), Большой опросник для больных депрессией (MDI), Шкала депрессии для пожилых людей (GDS-30) и Указатель детской депрессии (CDI). В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты значительно изменяет сумму баллов по меньшей мере одного из тестов CAPS, CAPS-2, CAPS-CA, IES, IES-R, CGI, CGI-S, CGI-I, DGRP, DGRP-I, HAM-A, SI-PTSD, PTSD-I, PSS-I, MADRS, BDI, HAM-D, RHRSD, MDI, GDS-30 и CDI. В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты значительно уменьшает итоговую сумму баллов по сравнению с исходной суммой баллов по меньшей мере одного из тестов CAPS, CAPS-2, IES, IES-R и HAMA. В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты значительно увеличивает долю пациентов, реагирующих на лечение согласно тесту CGI-I, имеющих результат CGI-I по крайней мере 1 (очень сильное улучшение) и 2 (значительное улучшение). В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты значительно увеличивает долю пациентов, реагирующих на лечение, согласно тесту DGRP-I, имеющих результат DGRP-I по крайней мере 1 (очень сильное улучшение) и 2 (значительное улучшение). В некоторых вариантах осуществления общая сумма баллов по меньшей мере 65 по крайней мере в одном из тестов CAPS и CAPS-2 указывает на посттравматическое стрессовое расстройство. В некоторых вариантах осуществления общий результат теста HAM-A по меньшей мере 18 указывает на тревожное расстройство. В некоторых вариантах осуществления результат не менее 3 по крайней мере в одном из тестов CGI-I и DGRP-1 указывает на посттравматическое стрессовое расстройство.
Кроме того, в изобретении разработаны способы лечения посттравматического стрессового расстройства у пациента. Эти способы включают диагностирование у пациента посттравматического стрессового расстройства; введение пациенту терапевтически эффективного количества (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты; оценку по меньшей мере одного признака, симптома или комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства; и определение улучшения состояния при посттравматическом стрессовом расстройстве, если применение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты уменьшило хотя бы один из признаков, симптомов и комплексов симптомов посттравматического стрессового расстройства.
В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению дополнительно включают совместное введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного агента, выбранного из бензодиазепина, селективного ингибитора обратного захвата серотонина (SSRI), ингибитора обратного захвата серотонина-норэпинефрина (SNRI), ингибитора обратного захвата норэпинефрина (NRI), антагониста серотонин 5-гидрокситриптамина1А (5HT1A), ингибитора дофамин -гидроксилазы, антагониста рецептора аденозина A2A, ингибитора моноаминоксидазы (MAOI), блокатора натриевого (Na) канала, блокатора кальциевого канала, антагониста центрального и периферического альфа адренергического рецептора, агониста центрального альфа адренергического рецептора, антагониста центрального или периферического бета адренергического рецептора, антагониста рецептора NK-1, антагониста кортикотропин-высвобождающего фактора (CRF), атипичного антидепрессанта/антипсихотического средства, трициклического антидепрессанта, противосудорожного средства, антагониста глутаматов, агониста гамма-аминомасляной кислоты (GABA) и частичного агониста D2.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты понижает по меньшей мере частоту или интенсивность хотя бы одного признака посттравматического стрессового расстройства у пациента.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты понижает по меньшей мере частоту или интенсивность проявления хотя бы одного симптома посттравматического стрессового расстройства у пациента.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты понижает по меньшей мере частоту или интенсивность проявления хотя бы одного комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства у пациента, где комплекс симптомов выбран из повторяющегося события/вторжения, избегания/оцепенения и гиперактивности. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из признаков, симптомов или комплексов симптомов посттравматического стрессового синдрома диагностируют или оценивают с использованием по крайней мере одного из таких тестов, как Шкала для клинической диагностики PTSD (CAPS), Шкала для клинической диагностики PTSD часть 2 (CAPS-2), Шкала для клинической диагностики PTSD у детей и подростков (CAPS-CA), Шкала оценки влияния травмирующего события (IES), Шкала оценки влияния травмирующего события - пересмотренная (IES-R), Шкала общего клинического впечатления (CGI), Шкала общего клинического впечатления - тяжесть заболевания (CGI-S), Шкала общего клинического впечатления - улучшение (CGI-I), Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка (DGRP), Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка - улучшение (DGRP-I), Шкала Гамильтона для оценки тревожности (HAM-A), Структурированное интервью для PTSD (SI-PTSD), PTSD интервью (PTSD-I), Шкала симптомов PTSD (PSS-I), Международное нейропсихологическое мини-интервью (MINI), Шкала Монтгомери-Асберга для оценки депрессии (MADRS), Опросник депрессии Бека (BDI), Шкала депрессии Гамильтона (HAM-D), Шкала Гамильтона для оценки депрессии переработанная (RHRSD), Большой опросник для больных депрессией (MDI), Шкала депрессии для пожилых людей (GDS-30) и Указатель детской депрессии (CDI).
Кроме того, в изобретении разработаны способы улучшения устойчивости пациента. Эти способы включают введение терапевтически эффективного количества (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления указанные способы, кроме того, включают совместное введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного агента, выбранного из бензодиазепина, селективного ингибитора обратного захвата серотонина (SSRI), ингибитора обратного захвата серотонина-норэпинефрина (SNRI), ингибитора обратного захвата норэпинефрина (NRI), антагониста серотонин 5-гидрокситриптамина1А (5HT1A), ингибитора дофамин -гидроксилазы, антагониста рецептора аденозина A2A, ингибитора моноаминоксидазы (MAOI), блокатора натриевого (Na) канала, блокатора кальциевого канала, антагониста центрального и периферического альфа адренергического рецептора, агониста центрального альфа адренергического рецептора, антагониста центрального или периферического бета адренергического рецептора, антагониста рецептора NK-1, антагониста кортикотропин-высвобождающего фактора (CRF), атипичного антидепрессанта/антипсихотического средства, трициклического антидепрессанта, противосудорожного средства, антагониста глутаматов, агониста гамма-аминомасляной кислоты (GABA) и частичного агониста D2.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты снижает по меньшей мере частоту или интенсивность проявления хотя бы одного признака посттравматического стрессового расстройства у пациента.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты снижает по меньшей мере частоту или интенсивность проявления хотя бы одного симптома посттравматического стрессового расстройства у пациента.
В некоторых вариантах осуществления (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты снижает по меньшей мере частоту или интенсивность проявления хотя бы одного комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства у пациента, где комплекс симптомов выбран из повторяющегося события/вторжения, избегания/оцепенения и гиперактивности. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из признаков, симптомов или комплексов симптомов посттравматического стрессового синдрома диагностируют или оценивают с использованием по крайней мере одного из таких тестов, как Шкала для клинической диагностики PTSD (CAPS), Шкала для клинической диагностики PTSD часть 2 (CAPS-2), Шкала для клинической диагностики PTSD у детей и подростков (CAPS-CA), Шкала оценки влияния травмирующего события (IES), Шкала оценки влияния травмирующего события - пересмотренная (IES-R), Шкала общего клинического впечатления (CGI), Шкала общего клинического впечатления - тяжесть заболевания (CGI-S), Шкала общего клинического впечатления - улучшение (CGI-I), Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка (DGRP), Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка - улучшение (DGRP-I), Шкала Гамильтона для оценки тревожности (HAM-A), Структурированное интервью для PTSD (SI-PTSD), PTSD интервью (PTSD-I), Шкала симптомов PTSD (PSS-I), Международное нейропсихологическое мини-интервью (MINI), Шкала Монтгомери-Асберга для оценки депрессии (MADRS), Опросник депрессии Бека (BDI), Шкала депрессии Гамильтона (HAM-D), Шкала Гамильтона для оценки депрессии переработанная (RHRSD), Большой опросник для больных депрессией (MDI), Шкала депрессии для пожилых людей (GDS-30) и Указатель детской депрессии (CDI).
Помимо перечисленного, в изобретении разработаны способы диагностирования посттравматического стрессового расстройства у пациента. Эти способы включают введение пациенту терапевтически эффективного количества (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты и оценку выраженности по меньшей мере одного признака, симптома или комплекса симптомов посттравматического стрессового расстройства; и диагностирование у пациента посттравматического стрессового расстройства, если применение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты уменьшает хотя бы один из признаков, симптомов или комплексов симптомов посттравматического стрессового расстройства. В некоторых вариантах осуществления пациент является ребенком, подростком или взрослым.
Оценку посттравматического стрессового расстройства (PTSD) и влияния руфинамида и других видов терапии на лечение и профилактику расстройства можно проводить с использованием различных тестов. Этим тестами, например, являются, не ограничиваясь перечисленным, Шкала для клинической диагностики PTSD (CAPS), Шкала для клинической диагностики PTSD часть 2 (CAPS-2), Шкала для клинической диагностики PTSD у детей и подростков (CAPS-CA), Шкала оценки влияния травмирующего события (IES), Шкала оценки влияния травмирующего события - пересмотренная (IES-R), Шкала общего клинического впечатления (CGI), Шкала общего клинического впечатления - тяжесть заболевания (CGI-S), Шкала общего клинического впечатления - улучшение (CGI-I), Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка (DGRP), Шкала общей оценки PTSD университета Дьюка - улучшение (DGRP-I), Шкала Гамильтона для оценки тревожности (HAM-A), Структурированное интервью для PTSD (SI-PTSD), PTSD интервью (PTSD-I), Шкала симптомов PTSD (PSS-I), Международное нейропсихологическое мини-интервью (MINI), Шкала Монтгомери-Асберга для оценки депрессии (MADRS), Опросник депрессии Бека (BDI), Шкала депрессии Гамильтона (HAM-D), Шкала Гамильтона для оценки депрессии переработанная (RHRSD), Большой опросник для больных депрессией (MDI), Шкала депрессии для пожилых людей (GDS-30) и Указатель детской депрессии (CDI). Оценка состояния больного осуществляется, как правило, с помощью бесед или опросных листов. В некоторых вариантах осуществления используются не все части теста. В некоторых вариантах осуществления тесты применяют для диагностики и оценки признаков, симптомов, связанных симптомов или влияния PTSD на повседневную жизнь. В некоторых вариантах осуществления один или несколько тестов применяются для диагностики, оценки или подтверждения посттравматического стрессового расстройства у пациента. В некоторых вариантах осуществления тесты будут определять степень выраженности признаков, симптомов, комплексов симптомов за счет количественного выражения по крайней мере частоты или интенсивности проявления признаков, симптомов или комплексов симптомов.
Примерами тестов для оценки выраженности посттравматического стрессового расстройства являются версии CAPS, включая CAPS, CAPS-1 и CAPS-2, которые выражают в баллах 17 основных симптомов PTSD по следующим пунктам:
1. Повторяющиеся и навязчивые воспоминания о травмирующем событии
2. Ощущение беспокойства при воспоминаниях о травмирующем событии
3. Действия или ощущения, соответствующие тому, как будто травмирующее событие повторяется
4. Повторяющиеся и беспокоящие сны, посвященные травмирующему событию
5. Попытки избежать мыслей или ощущений, связанных с травмирующим событием
6. Попытки избежать определенных действий или ситуаций
7. Неспособность вспоминать о травмирующем событии или его аспектах
8. Заметное снижение интереса к серьезной деятельности
9. Ощущение отчужденности и отстраненности от окружающих
10. Ограниченный диапазон эмоций
11. Чувство ограниченности перспектив на будущее
12. Трудности с засыпанием или поддержанием сна
13. Раздражительность или вспышки гнева
14. Затрудненная концентрация
15. Сверхнастороженность
16. Чрезмерная реакции вздрагивания
17. Физиологическая реактивность
Кроме того, имеется ряд вопросов, позволяющих оценить влияние симптомов на социальную или профессиональную деятельность или повседневную жизнь, улучшение симптомов с момента проведения предыдущего теста CAPS, общую адекватность реакций, общую тяжесть PTSD, а также частоту и интенсивность проявления связанных симптомов. Для этого предназначены следующие пункты:
18. Влияние на социальные функции
19. Влияние на профессиональную деятельность
20. Общее улучшение (с момента предыдущего тестирования)
21. Оценка адекватности
22. Общее улучшение
23. Чувство вины за совершенные или не совершенные действия
24. Комплекс вины выжившего
25. Склонность к убийствам
26. Разочарование в авторитетах
27. Чувство безнадежности
28. Нарушения памяти
29. Уныние и депрессия
30. Чувство ошеломленности
Для оценки частоты повторения симптомов специалист, проводящий собеседование, следует стандартным вопросам, при необходимости уточняя или перефразируя их. Стандартными вопросами, в качестве примера, а не ограничения, являются: «Были ли у Вас когда-нибудь нежелательные воспоминания о травмирующем событии?», «На что они были похожи?», «Что Вы вспоминали?». Если необходимо перефразировать вопрос интервьюер может спросить, например: «Возникали ли они когда-либо, когда Вы бодрствовали или только во сне?» или «Как часто у Вас возникали эти воспоминания в последний месяц (неделю)?» Балл 0 указывает на полное отсутствие, 1 означает один или два раза, 2 означает один или два раза в неделю, 3 означает несколько раз в неделю и 4 означает ежедневно или почти ежедневно.
Для оценки интенсивности проявления симптомов интервьюер может задавать стандартные вопросы, например, не ограничиваясь указанными: «Насколько сильное беспокойство или дискомфорт причиняют Вам эти воспоминания?», «Способны ли Вы удалить их из своего сознания и думать о чем-либо еще?» «Насколько трудно Вам попытаться сделать это?», «До какой степени они мешают Вашей жизни?». Балл 0 означает отсутствие, 1 означает легкое, минимальное беспокойство или нарушение деятельности, 2 соответствует умеренной степени проявления, беспокойство явно присутствует, но им еще можно управлять, некоторое нарушение деятельности, 3 означает тяжелую степень, значительное беспокойство, трудно избавиться от воспоминаний, значительное нарушения деятельности, и балл 4 означает исключительно тяжелую степень, беспокойство полностью выводит из нормального состояния, невозможно избавиться от воспоминаний, невозможно продолжать какую-либо деятельность.
В некоторых вариантах осуществления применяемое правило подсчета баллов считает симптом присутствующим, если его частота равна 1 или более и интенсивность равна 2 или более. В других вариантах осуществления тяжесть проявления симптома рассчитывают путем суммирования баллов по частоте и интенсивности для каждого из симптомов.
В некоторых вариантах осуществления подсчитывают общее или суммарное количество баллов по всем пунктам версии CAPS. В некоторых вариантах осуществления подсчитывают суммарный результат для каждого комплекса симптомов. В некоторых вариантах осуществления подсчитывают суммарный результат для основных симптомов PTSD. В некоторых вариантах осуществления итоговый результат сравнивают с исходным результатом для определения изменения степени тяжести посттравматического стрессового расстройства. В некоторых вариантах осуществления значительное уменьшение итогового числа баллов по сравнению с исходным числом баллов считается улучшением состояния при PTSD. В некоторых вариантах осуществления общий результат тестов CAPS, CAPS-1, CAPS-2 или CAPS-CA, превышающий 65 указывает на наличие PTSD.
Другим примером является тест IES, в котором оценка происходит по 15 пунктам: 7 пунктов посвящены оценке навязчивых симптомов, и 8 пунктов посвящены оценке симптомов избегания. В пунктах, рассчитанных на самооценку, задаются вопросы, как часто оказывается верным каждый из следующих комментариев: Я думал об этом, когда не намеревался делать этого, Я избегал состояния расстройства, когда я думал или вспоминал об этом, Я пытался удалить эти воспоминания из своей памяти, У меня были проблемы с засыпанием или сном, из-за мыслей об этом или соответствующих зрительных образов, которые приходили ко мне в сознание, У меня были приступы сильных эмоций по поводу этого события, Я видел сны об этом событии, Я пытался не вспоминать об этом, Есть чувство, как будто это не происходило или не было на самом деле, Я пытался не говорить об этом, Картины этого неожиданно появляются в моем сознании, Другие вещи удерживают меня от мыслей об этом, Я знаю, что у меня по-прежнему осталась масса эмоций по этому поводу, но я игнорировал их, Я пытаюсь не думать об этом, Любое воспоминание опять вызывает эмоции по этому поводу и Мои эмоции являлись видом оцепенения. Ответы на приведенные вопросы, как правило, оцениваются по четырехбалльной шкале: 0 (полностью отсутствует), 1 (редко), 3 (иногда) и 5 (часто). Итоговая сумма баллов дает общую оценку тяжести симптомов или общий субъективный стресс. Было предложено считать, что результат от 0 до 8 баллов находится в субклиническом диапазоне, 9-25 является диапазоном легкой степени расстройства, 26-43 является диапазоном умеренной степени расстройства и более 44 соответствует диапазону тяжелой формы стресса.
В некоторых вариантах осуществления рассчитывают общий или суммарный результат по всем пунктам теста IES. В некоторых вариантах осуществления рассчитывают общую сумму баллов для каждого из комплексов симптомов. В некоторых вариантах осуществления итоговую сумму баллов сравнивают с исходной суммой баллов для определения изменения тяжести PTSD. В некоторых вариантах осуществления снижение итогового результата на 30% по сравнению с исходным считается улучшением состояния при PTSD.
Тест IES-R, который является переработкой IES, отличается от IES тем, что исходный пункт IES разбит на части, а именно: У меня были проблемы с засыпанием или сном - превратился в два пункта: У меня были проблемы с засыпанием и У меня были проблемы со сном, а также добавлением к пунктам IES еще шести пунктов. Этими дополнительными пунктами являются: Я чувствовал себя раздраженным и сердитым, Я был нервным и легко пугался, Я обнаружил, что действую и чувствую себя так, как-будто я снова попал в то время, У меня были проблемы с концентрацией, Воспоминания об этом вызывают у меня физические реакции, такие как потение, затрудненное дыхание, тошноту или сердцебиение и Я чувствовал себя внимательным или настороженным. Баллы в системе подсчета также меняются от 0 (полностью отсутствует), 1 (незначительно), 2 (умеренно), 3 (хорошо заметно) и до 4 (исключительно сильно выражено).
В некоторых вариантах осуществления рассчитывают общий или суммарный результат по всем пунктам теста IES-R. В некоторых вариантах осуществления рассчитывают общую сумму баллов для каждого из комплексов симптомов. В некоторых вариантах осуществления итоговую сумму баллов сравнивают с исходной суммой баллов для определения изменения тяжести посттравматического стрессового расстройства. В некоторых вариантах осуществления значительное снижение итогового результата теста IES-R по сравнению с исходным считается улучшением состояния при посттравматическом стрессовом расстройстве.
В тесте DGRP-I эффективность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты при лечении посттравматического стрессового расстройства может быть оценена путем определения увеличения доли пациентов, реагирующих на лечение, согласно DGRP-I, т.е. имеющих результат DGRP-I, равный 1 (очень значительное улучшение) или 2 (значительное улучшение). В некоторых вариантах осуществления сумма баллов теста DGRP-I не менее 3 указывает на посттравматический стресс.
В тесте CGI эффективность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты при лечении посттравматического стрессового расстройства может быть оценена с помощью CGI-S, CGI-I и коэффициента эффективности. Например, в некоторых вариантах осуществления увеличение доли пациентов, реагирующих на лечение согласно CGI-I, т.е. имеющих результат 1 (очень значительное улучшение) или 2 (значительное улучшение), после лечения указывает на эффективность лечения. В некоторых вариантах осуществления результат теста CGI-I не менее 3 указывает на посттравматическое стрессовое расстройство. В некоторых вариантах осуществления коэффициент эффективности согласно CGI может измерять эффективность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты при лечении посттравматического стрессового расстройства.
В тесте HAMA-A для оценки тревожности или посттравматического стрессового расстройства как правило рассчитывают общую или итоговую сумму баллов по всем пунктам HAM-A. В некоторых вариантах осуществления итоговый результат сравнивают с исходным результатом HAM-A для определения изменения степени выраженности тревожности и посттравматического стрессового расстройства. В некоторых вариантах осуществления значительное уменьшение итогового результата по сравнению с исходным результатом HAM-A считается улучшением состояния при тревожности и посттравматическом стрессовом расстройстве. В некоторых вариантах осуществления общая сумма баллов в тесте HAM-A не менее 18 указывает на наличие тревожности и посттравматического стрессового расстройства.
Фармацевтически приемлемые формы (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты включают формы кислот, оснований, простых и сложных эфиров енолов, сложных эфиров, гидратов, сольватов и пролекарств. Производные выбирают таким образом, чтобы их фармакокинетические свойства превосходили хотя бы по одной характеристике соответствующий нейтральный агент. Производные (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты можно получать перед включением их в состав фармацевтической композиции.
Как правило (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемые производные должны вводиться в терапевтически эффективных количествах, либо сами по себе, либо в комбинации с другим терапевтическим агентом. Фармацевтические композиции должны применяться, например, для лечения посттравматического стрессового расстройства.
Терапевтически эффективное количество (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемой формы может изменяться в широких пределах в зависимости от тяжести посттравматического стрессового расстройства, возраста и относительного состояния здоровья субъекта, эффективности применяемого соединения и других факторов. В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество составляет от примерно 0,1 миллиграмма на кг (мг/кг) массы тела в день до примерно 50 мг/кг массы тела в день. В других вариантах осуществления это количество составляет от примерно 1,0 до примерно 10 мг/кг/день. Следовательно, в некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество для человека массой 70 составит от примерно 7,0 до примерно 3500 мг/день, тогда как в других вариантах осуществления оно составит примерно от 70 до 700 мг/день.
Рядовой специалист в области лечения таких заболеваний будет способен установить терапевтически эффективное количество (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты, необходимое для лечения посттравматического стрессового расстройства без излишнего экспериментирования и опираясь на личные знания и содержание настоящей заявки. В основном, в качестве примера и не ограничиваясь перечисленным, (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты должен вводиться в виде фармацевтических композиций одним из следующих путей: пероральным, системным (например, трансдермальным, интраназальным или с помощью суппозитория) или парентеральным (например, внутримышечным, внутривенным или подкожным). Композиции, в качестве примера и не ограничиваясь перечисленным, могут иметь форму таблеток, пилюль, капсул, полутвердых веществ, порошков, составов с продолжительным высвобождением, растворов, суспензий, эликсиров, аэрозолей или любых других подходящих композиций, и в них, как правило, входит (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в комбинации по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым наполнителем. Приемлемыми наполнителями, в качестве примера и не ограничиваясь перечисленным, являются нетоксичные вещества, содействующие введению и не оказывающие неблагоприятного влияния на терапевтическую пользу от действия активного соединения. Такими наполнителями могут являться, например, любые твердые, жидкие, полутвердые или, в случае аэрозольных композиций, газообразные наполнители, которые, как правило, имеются в распоряжении специалиста в данной области техники.
Твердые фармацевтические наполнители включают, в качестве примера и не ограничиваются перечисленными, крахмал, целлюлозу, тальк, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат магния, стеарат натрия, моностеарат глицерина, хлорид натрия, порошок обезжиренного молока и т.п. Жидкие и полутвердые наполнители могут быть выбраны, например, и не ограничиваются перечисленными, из воды, этанола, глицерина, пропиленгликоля и различных масел, включая нефтяные масла, масла животного, растительного или синтетического происхождения (например, арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.д.). Предпочтительные жидкие носители, особенно для растворов, предназначенных для инъекций, включают, в качестве примера и не ограничиваются перечисленными, воду, солевой раствор, водную декстрозу и гликоли. Для диспергирования соединений в форме аэрозоля могут применяться сжатые газы. Инертными газами, подходящими для этой цели, являются, в качестве примера и не ограничиваются указанными, азот, диоксид углерода, закись азота и т.п.
Фармацевтические препараты по настоящему изобретению помимо указанных компонентов могут содержать, в качестве примера и не ограничиваются перечисленным, консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, смачивающие средства, эмульгаторы, подсластители, красители, вкусоароматические добавки, соли для изменения осмотического давления, буферные компоненты, маскирующие агенты или антиоксиданты. В некоторых вариантах осуществления они могут содержать и другие терапевтически полезные вещества. Другие подходящие фармацевтические носители и их составы описаны в A.R. Alfonso Remington's Pharmaceutical Sciences 1985, 17th ed. Easton, Pa.: Mack Publishing Company.
Количество (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в композиции может меняться в широких пределах в зависимости, например, от типа состава, размера разовой дозы, вида наполнителей и других факторов, известных специалисту в области фармацевтических наук. Как правило, итоговая композиция будет содержать от 10 масс.% до 90 масс.% соединения по настоящему изобретению, предпочтительно от 25 масс.% до 75 масс.%, причем остальное будут составлять наполнитель или наполнители. Предпочтительно, фармацевтическую композицию вводят в виде дозированной лекарственной формы в случае продолжительного лечения или в виде дозированной лекарственной формы в большом количестве на усмотрение врача, если конкретно необходимо облегчить симптомы заболевания.
(4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты или его фармацевтически приемлемую форму вводят одновременно, до или после введения одного или нескольких из указанных выше агентов.
Далее изобретение дополнительно иллюстрируется следующими не ограничивающими примерами.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Проводили клиническое исследование для демонстрации эффективности и переносимости (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты при лечении посттравматического стрессового расстройства (PTSD).
План исследования включал 8-недельное рандомизованное, с двойной анонимностью, плацебо-контролируемое испытание (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты для лечения PTSD.
После подписания формы информированного согласия и проверки на соответствие критериям включения/исключения, пациентов случайным образом разбивали на группы, получавшие (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты или плацебо в течение 8-недельного периода. Во время исследования фармацевт сохранял информацию о рандомизации и проверял порядок распределения плацебо или (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в виде одинаковых таблеток. Симптомы, побочные эффекты и соблюдение рекомендаций пациентами оценивали каждые две недели.
На основе симптоматики и проявления побочных эффектов, исследователь мог увеличить дозу препарата, прибавляя по 20-40 мг в случае хорошей переносимости, до достижения максимальной терапевтической пользы. Введение препаратов производили один раз в день, за исключением тех случаев, когда лучше переносились два приема в течение дня. Соблюдение лечения оценивали путем подсчета количества пилюль на 4-й и 8-й неделях.
Эффективность определяли с помощью по меньшей мере одного из следующих тестов:
Общая оценка функционирования (GAF)
Шкала для клинической диагностики PTSD (CAPS)
Шкала общего клинического впечатления - тяжесть заболевания (CGI-S)
Шкала общего клинического впечатления - улучшение (CGI-I)
Шкала травмы Дэвидсона (DTS)
Шкала Гамильтона для оценки тревожности (HAM-A)
Шкала Монтгомери-Асберга для оценки депрессии (MADRS)
Шкала оценки итогов лечения PTSD (TOP-8)
Критериями включения субъекта в исследование были:
Диагноз PTSD, который был подтвержден Международным нейропсихологическим мини-интервью (MINI) и CAPS
Возраст 13 лет или старше
Отсутствие пагубной привязанности или зависимости от каких-либо химических веществ (за исключением никотина и кофеина) в течение предыдущих 4-х недель
Не употреблялись психотропные препараты в течение предыдущих 2-х недель (4-х недель в случае флуоксетина)
Нормальные с клинической точки зрения физическое состояние и результаты лабораторных исследований (допускались результаты тестов на деятельность печени (LFTs) до 2,5 раз превышающие нормальные)
Женщины, способные забеременеть, должны были применять одобренные медициной способы контрацепции, такие как презервативы, противозачаточные пилюли, Депо-Провера или противозачаточные колпачки со спермицидами
Подписание документа об информированном согласии
Мужчина или женщина любой расы или этнического происхождения
Критериями исключения субъекта из исследования были:
Имевшие место в прошлом случаи биполярного расстройства I, психотических или когнитивных расстройств
Активные мысли о самоубийстве, убийстве или наличие психоза
Отмеченная в прошлом чувствительность к (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амиду 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты
Нестабильное общее состояние здоровья
Результат
6 при ответе на вопрос № 10 MARDS относительно мыслей о самоубийстве
Беременные женщины, женщины планирующие беременность или кормящие грудью во время исследования.
Для того чтобы выйти из числа исследуемых необходимо выполнение только одного из приведенных ниже критериев. Этим критериями являются:
Завершение исследования
Тяжелые и непереносимые побочные эффекты при приеме (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты или плацебо
Резкое усиление мыслей о самоубийстве, об убийстве или психотических симптомов
Ухудшение симптомов, характеризуемое результатом 7 (очень значительное ухудшение) теста CGI-I
Прямое требование пациента о выходе из исследования
Необходимость применения дополнительных психотропных препаратов помимо исследуемого или вспомогательных препаратов, указанных в протоколе исследования, для регулирования психиатрических симптомов субъектов
За время исследования у субъекта наступала беременность
По мнению исследователя дальнейшее продолжения участия в исследовании не соответствовало интересам пациента.
Пример 2
Проводили клиническое исследование для демонстрации эффективности и переносимости (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты при профилактике PTSD.
План исследования включал неограниченное во времени, рандомизованное, с двойной анонимностью и плацебо-контролем испытание (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты для профилактики PTSD. После подписания документа об информированном согласии и проверки на соответствие критериям пациентов случайным образом разбивали по группам, которые получали (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты или плацебо в течение 8 недель.
Во время исследования фармацевт сохранял информацию о рандомизации и проверял порядок распределения плацебо или (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в виде одинаковых таблеток. Симптомы, побочные эффекты и соблюдение рекомендаций пациентами оценивали каждые две недели.
На основе симптоматики и проявления побочных эффектов, исследователь мог увеличить дозу препарата, прибавляя по 20-40 мг в случае хорошей переносимости, до достижения максимальной терапевтической пользы. Введение препаратов производили один раз в день, за исключением тех случаев, когда лучше переносились два приема в течение дня. Приверженность лечению оценивали путем подсчета количества пилюль на 4-й и 8-й неделях.
Эффективность определяли с помощью по меньшей мере одного из следующих тестов:
Общая оценка функционирования (GAF)
Шкала для клинической диагностики PTSD (CAPS)
Шкала общего клинического впечатления - тяжесть заболевания (CGI-S)
Шкала общего клинического впечатления - улучшение (CGI-I)
Шкала травмы Дэвидсона (DTS)
Шкала Гамильтона для оценки тревожности (HAM-A)
Шкала Монтгомери-Асберга для оценки депрессии (MADRS)
Шкала оценки итогов лечения PTSD (TOP-8)
Руководство по диагностике и статистике IV (DSM-IV)
Критериями включения субъекта в исследование были:
Отсутствие PTSD, подтвержденное MINI и CAPS
Возраст 13 лет или старше
Отсутствие пагубной привязанности/зависимости от каких-либо химических веществ (за исключением никотина и кофеина) в течение предыдущих 4-х недель
Не употреблялись психотропные препараты в течение предыдущих 2-х недель (4-х недель в случае флуоксетина)
Нормальные с клинической точки зрения физическое состояние и результаты лабораторных исследований (допускались результаты тестов на деятельность печени (LFTs) до 2,5 раз превышающие нормальные)
Женщины, способные забеременеть, должны были применять одобренные медициной способы контрацепции (такие как применение презервативов, противозачаточных пилюль, Депо-Провера или противозачаточных колпачков со спермицидами)
Подписание документа об информированном согласии
Мужчина или женщина любой расы или этнического происхождения
Критериями исключения субъекта из исследования были:
Имевшие место в прошлом случаи PTSD
Имевшие место в прошлом случаи биполярного расстройства I, психотических или когнитивных расстройств
Активные мысли о самоубийстве, убийстве или наличие психоза
Отмеченная в прошлом чувствительность к (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амиду 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты
Нестабильное общее состояние здоровья
Результат
6 при ответе на вопрос № 10 MARDS относительно мыслей о самоубийстве
Беременные женщины, женщины планирующие беременность или кормящие грудью во время исследования.
Для того чтобы выйти из числа исследуемых необходимо выполнение только одного из приведенных ниже критериев. Этим критериями являются:
Завершение исследования
Тяжелые и непереносимые побочные эффекты при приеме (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты или введении плацебо
Резкое усиление мыслей о самоубийстве, убийстве или психотических симптомов
Появление признаков или симптомов, совместимых с диагнозом PTSD
Прямое требование пациента о выходе из исследования
Необходимость применения дополнительных психотропных препаратов помимо исследуемого или вспомогательных препаратов, указанных в протоколе исследования, для регулирования психиатрических симптомов субъектов
За время исследования у субъекта наступала беременность
По мнению исследователя дальнейшее продолжения участия в исследовании не соответствовало интересам пациента.
Пример 3
Проводили клиническое исследование для демонстрации эффективности и переносимости комбинированной терапии с использованием (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты при лечении посттравматического стрессового расстройства (PTSD).
План исследования включал 8-недельное рандомизованное, с двойной анонимностью, плацебо-контролируемое испытание (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты для лечения PTSD. После подписания формы информированного согласия и проверки на соответствие критериям включения/исключения, пациентов случайным образом разбивали на группы, получавшие либо (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты либо плацебо в течение 8-недельного периода. Кроме того, в комбинации с (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амидом 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты или плацебо пациенты могли получать терапевтически эффективные дозы празозина, вальпроата, карбамазепина или топирамата.
Во время исследования фармацевт сохранял информацию о рандомизации и проверял порядок распределения плацебо или (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в виде одинаковых таблеток. Симптомы, побочные эффекты и соблюдение рекомендаций пациентами оценивали каждые две недели. На основе симптоматики и проявления побочных эффектов, исследователь увеличивал дозу препарата, прибавляя по 20-40 мг в случае хорошей переносимости, до достижения максимальной терапевтической пользы. Введение препаратов производили один раз в день, за исключением тех случаев, когда лучше переносились два приема в течение дня. Приверженность лечению оценивали путем подсчета количества пилюль на 4-й и 8-й неделях.
Эффективность определяли с помощью по меньшей мере одного из следующих тестов:
Общая оценка функционирования (GAF)
Шкала для клинической диагностики PTSD (CAPS)
Шкала общего клинического впечатления - тяжесть заболевания (CGI-S)
Шкала общего клинического впечатления - улучшение (CGI-I)
Шкала травмы Дэвидсона (DTS)
Шкала Гамильтона для оценки тревожности (HAM-A)
Шкала Монтгомери-Асберга для оценки депрессии (MADRS)
Шкала оценки итогов лечения PTSD (TOP-8)
Критериями включения субъекта в исследование были:
Диагноз PTSD, подтвержденный MINI и CAPS
Возраст 13 лет или старше
Отсутствие пагубной привязанности/зависимости от каких-либо химических веществ (за исключением никотина и кофеина) в течение предыдущих 4-х недель
Не употреблялись психотропные препараты в течение предыдущих 2-х недель (4-х недель в случае флуоксетина)
Нормальные с клинической точки зрения физическое состояние и результаты лабораторных исследований (допускались результаты тестов на деятельность печени (LFTs) до 2,5 раз превышающие нормальные)
Женщины, способные забеременеть, должны были применять одобренные медициной способы контрацепции (применение презервативов, противозачаточных пилюль, Депо-Провера или противозачаточных колпачков со спермицидами)
Подписание документа об информированном согласии
Мужчина или женщина любой расы или этнического происхождения
Критериями исключения субъекта из исследования были:
Имевшие место в прошлом случаи биполярного расстройства I, психотических или когнитивных расстройств
Активные мысли о самоубийстве, убийстве или наличие психоза
Отмеченная в прошлом чувствительность к (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амиду 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты
Нестабильное общее состояние здоровья
Результат
6 при ответе на вопрос № 10 MARDS относительно мыслей о самоубийстве
Беременные женщины, женщины планирующие беременность или кормящие грудью во время исследования.
Для того чтобы выйти из числа исследуемых необходимо выполнение только одного из приведенных ниже критериев. Этим критериями являются:
Завершение исследования
Тяжелые и непереносимые побочные эффекты при приеме (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты или плацебо
Резкое усиление мыслей о самоубийстве, об убийстве или психотических симптомов
Ухудшение симптомов, характеризуемое результатом 7 (очень значительное ухудшение) теста CGI-I
Прямое требование пациента о выходе из исследования
Необходимость применения дополнительных психотропных препаратов помимо исследуемого или вспомогательных препаратов, указанных в протоколе исследования, для регулирования психиатрических симптомов субъектов
За время исследования у субъекта наступала беременность
По мнению исследователя дальнейшее продолжения участия в исследовании не соответствовало интересам пациента.
Пример 4
Проводили клиническое исследование для демонстрации эффективности и переносимости (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты при лечении посттравматического стрессового расстройства (PTSD) у детей.
План исследования включал 8-недельное рандомизованное, с двойной анонимностью, плацебо-контролируемое испытание (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты для лечения PTSD.
После подписания формы информированного согласия и проверки на соответствие критериям включения/исключения, пациентов случайным образом разбивали на группы, получавшие либо (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты либо плацебо в течение 8-недельного периода. Во время исследования фармацевт сохранял информацию о рандомизации и проверял порядок распределения плацебо или (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в виде одинаковых таблеток. Симптомы, побочные эффекты и соблюдение рекомендаций пациентами оценивали каждые две недели. На основе симптоматики и проявления побочных эффектов, исследователь мог увеличить дозу препарата, прибавляя по 20-40 мг в случае хорошей переносимости, до достижения максимальной терапевтической пользы. Введение препаратов производили один раз в день, за исключением тех случаев, когда лучше переносились два приема в течение дня. Приверженность лечению оценивали путем подсчета количества пилюль на 4-й и 8-й неделях.
Во время посещений клиники пациенты получали поддерживающее руководство сотрудников клиники. На случай непредвиденных обстоятельств исследователь был доступен по телефону в течение 24 часов в день. При необходимости встречи с пациентами могли происходить чаще.
Эффективность определяли с помощью по меньшей мере одного из следующих тестов:
Общая оценка функционирования (GAF)
Шкала для клинической диагностики PTSD (CAPS)
Шкала для клинической диагностики PTSD (CAPS-CA)
Шкала общего клинического впечатления - тяжесть заболевания (CGI-S)
Шкала общего клинического впечатления - улучшение (CGI-I)
Шкала травмы Дэвидсона (DTS)
Шкала Гамильтона для оценки тревожности (HAM-A)
Шкала Монтгомери-Асберга для оценки депрессии (MADRS)
Шкала оценки итогов лечения PTSD (TOP-8)
Критериями включения субъекта в исследование были:
Диагноз PTSD, подтвержденный MINI и CAPS
Возраст 12 лет или моложе
Отсутствие пагубной привязанности или зависимости от каких-либо химических веществ (за исключением никотина и кофеина) в течение предыдущих 4-х недель
Не употреблялись психотропные препараты в течение предыдущих 2-х недель (4-х недель в случае флуоксетина)
Нормальные с клинической точки зрения физическое состояние и результаты лабораторных исследований (допускались результаты тестов на деятельность печени (LFTs) до 2,5 раз превышающие нормальные)
Женщины, способные забеременеть, должны были применять одобренные медициной способы контрацепции, такие как применение презервативов, противозачаточных пилюль, Депо-Провера или противозачаточных колпачков со спермицидами
Подписание документа об информированном согласии
Мужчина или женщина любой расы или этнического происхождения
Критериями исключения субъекта из исследования были:
Имевшие место в прошлом случаи биполярного расстройства I, психотических или когнитивных расстройств
Активные мысли о самоубийстве, убийстве или наличие психоза
Отмеченная в прошлом чувствительность к (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амиду 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты
Нестабильное общее состояние здоровья
Результат
6 при ответе на вопрос № 10 MARDS относительно мыслей о самоубийстве
Беременные женщины, женщины планирующие беременность или кормящие грудью во время исследования.
Для того чтобы выйти из числа исследуемых необходимо выполнение только одного из приведенных ниже критериев. Этим критериями являются:
Завершение исследования
Тяжелые и непереносимые побочные эффекты при приеме (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты или плацебо
Резкое усиление мыслей о самоубийстве, об убийстве или психотических симптомов
Ухудшение симптомов, характеризуемое результатом 7 (очень значительное ухудшение) теста CGI-I
Прямое требование пациента о выходе из исследования
Необходимость применения дополнительных психотропных препаратов помимо исследуемого или вспомогательных препаратов, указанных в протоколе исследования, для регулирования психиатрических симптомов субъектов
За время исследования у субъекта наступала беременность
По мнению исследователя дальнейшее продолжения участия в исследовании не соответствовало интересам пациента.
Пример 5
Проводили исследования in vitro и in vivo для изучения специфичности, селективности и активности (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты. В исследовании in vitro изучали связывание и функциональную инактивацию рецепторов A2A и неспецифическое взаимодействие с другими сайтами связывания. В исследованиях in vivo изучали эффективность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в противодействии поведенческим эффектам, вызываемым рецептором A2A, и его эффективность в нескольких животных моделях депрессии, тревожности и познавательной способности.
Анализ связывания радиолиганда показал, что (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты обладает высоким сродством к человеческому рецептору A2A (pKi 8,3) с приблизительно 230, 110 и 260-кратной селективностью по сравнению с рецепторами hA1, hA2B и hA3 соответственно. Кроме того, (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты имеет высокое сродство к рецепторам A2A крыс (pKi 7,7), собак (pKi 7,9) и обезьян (pKi 8,3).
Дополнительные исследования связывания радиолигандов позволили оценить селективность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в отношении более, чем 67 рецепторов, транспортеров нейромедиаторов и ионных каналов. (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты обладает 1900-кратной селективностью в отношении рецептора A2A по сравнению с другими исследованными мишенями (за исключением транспортера аденозина, в случае которого (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты продемонстрировал 55% замещение при концентрации 10 мкМ). Клеточные биологические анализы 16 ферментных мишеней показали, что (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты обладает 1900-кратной селективностью в отношении рецептора A2A по сравнению с другими исследованными мишенями, причем было обнаружено лишь ингибирование фермента фосфодиэстеразы (IV) (88% при 10 мкМ).
Функциональный анализ позволил оценить способность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты противодействовать потоку ионов Ca2+ в клетках hA2A-G 16-CHO, стимулированному NECA (неспецифическим агонистом рецептора аденозина). (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты ингибировал реакции, опосредованные A2A, с величиной pIC50 , равной 8,83 (наклон кривой - коэффициент Хилла 0,6). (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой противодействовал потоку ионов Ca2+ в клетках hA1-G
16-CHO, стимулированному NECA с pIC50, равной 5,22 (наклон кривой - коэффициент Хилла 0,7). Эти данные показывают, что в проведенном анализе (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты продемонстрировал более чем 4000-кратную селективность в отношении рецептора hA 2A, по сравнению с hA1.
APEC (2-[(2-аминоэтиламино)карбонилэтил-фенил-этиламино]-5'-этилкарбоксамидо-аденозин), являющийся агонистом рецептора A2A, снижает спонтанную двигательную активность дозозависимым образом. Вызванное APEC снижение двигательной активности ослабляют селективными антагонистами рецептора A2A, но не селективными антагонистами рецептора A1. Оценивали способность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты препятствовать снижению двигательной активности у крыс, вызванному APEC, для определения его силы и эффективности in vivo в качестве селективного антагониста рецептора A2A.
Пероральное (po) введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты крысам Wistar значительно уменьшало индуцированный APEC недостаток двигательной активности по сравнению с контрольными особями, при значениях ID50 и ID90, равных 0,5 и 3,4 мг/кг соответственно (фиг.1). Этот тест подтверждает in vivo эффективность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты при пероральном введении, а также его селективность, как антагониста рецептора A2A.
Самцам крыс Wistar перорально вводили (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в дозировках от 0,3 до 10 мг/кг с последующей подкожной инъекцией 0,01 мг/кг APEC. Контрольным животным вводили только носитель или носитель и APEC. Животных помещали в плексигласовые тестовые клетки, снабженные матрицей фотоэлементов, соединенных с компьютером, и фиксировали двигательную активность в течение 15 мин. Данные представляли в виде среднее значение ±SEM (стандартная ошибка среднего) для 8 животных в группе. Введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты значительно снижало вызванный APEC дефицит двигательной активности, подтверждая его эффективность как селективного антагониста рецептора A2A. *p<0,05 согласно критерию Манна-Уитни.
Антидепрессантную активность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты исследовали с использованием трех признанных моделей депрессии: теста на стресс, вызванный вынужденным плаванием, теста на вызванную стрессом ангедонию и теста на дифференциальное подкрепление низкой скорости (30 сек) (DLR 30). Все тесты проводили на крысах Wistar.
Тест на стресс, вызванный вынужденным плаванием, основан на том, что при помещении в воду, после первоначального периода энергичной активности, грызуны принимают характерное неподвижное положение, совершая лишь минимальные движения, необходимые для того, чтобы оставаться на плаву. Сокращение времени неподвижности считается показателем потенциальных антидепрессантных свойств данного лекарственного препарата.
Пероральное введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты самкам крыс значительно уменьшало среднюю величину общей продолжительности неподвижности в тесте на стресс, вызванный вынужденным плаванием, дозозависимым образом по сравнению с контрольными животными (фиг.2). Аналогичные результаты получали для дезипрамина (100 мг/кг po), причем в качестве препарата сравнения использовали TCA.
Самкам крыс Wistar перорально вводили (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в дозировках 3, 10 и 30 мг/кг за 2 часа до теста на вынужденное плавание. Трициклический антидепрессант дезипрамин использовали в качестве препарата сравнения в дозировке 100 мг/кг р.о. Данные выражали в виде среднего значения ± SEM для 8 животных в группе. При введении (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты наблюдалось дозозависимое уменьшение продолжительности неподвижности. *p<0,05 согласно t-критерию Стьюдента.
В тесте на вызванную стрессом ангедонию животным вживляли электрод в область мозга, которая, согласно известным данным, принимает участие в ощущении поощрения или удовольствия. Этот электрод дает животным возможность стимулировать самих себя (самостимулирующее поведение). Затем животных в течение нескольких недель последовательно подвергали действию различных умеренных, периодических и непредсказуемых факторов стресса (т.е. помещение в ограниченное пространство, лишение пищи и/или воды, обращение цикла свет/темнота). В результате порог самостимулирования начинал последовательно увеличиваться, и это означало, что чувствительность животного к поощрению последовательно уменьшается. Это трактуется как последовательное развитие ангедонии, т.е. потери заинтересованности или удовольствия от повседневной жизни, что является признаком депрессии.
После трехнедельного действия различных умеренных, периодических и непредсказуемых факторов стресса, самцам крыс постоянно вводили (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты или носитель путем интраперитонеальной (ip) инъекции один раз в день в течение трех недель. Самостимулирующее поведение фиксировали два раза в неделю, следя за развитием вызванной стрессом ангедонии, которую определяли как % изменения порога самостимулирования (коэффициент ангедонии).
Животные, которым вводили (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты возвращались к нормальным уровням чувствительности к поощрению после одной-двух недель введения препарата (фиг.3), тогда как подвергшиеся стрессу животные, получавшие носитель, оставались невосприимчивыми к удовольствиям в течение трех недель после тестирования. Эти результаты дополнительно подтверждают антидепрессантные свойства (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
После действия различных умеренных, периодических и непредсказуемых факторов стресса в течение 3 недель, самцам крыс Wistar, у которых развилась ангедония, ежедневно интраперитонеально вводили (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в дозировках 1 или 3 мг/кг в течение 3 недель. Контрольным животным вводили только носитель. Самостимулирующее поведение фиксировали дважды в неделю, чтобы наблюдать за развитием ангедонии, которую определяли как % изменения порога самостимулирования (который произвольно устанавливали на уровне 15 попыток стимулирования в минуту=коэффициент ангедонии). Данные выражали в виде среднее значение±стандартная ошибка среднего для 7-8 животных в группе. Введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты вызывало значительное уменьшение коэффициента ангедонии через 1-2 недели по сравнению с контрольными животными. *p<0,05 согласно результатам трехфакторного анализа ANOVA и последующего применения непарного t-критерия (фиг.3).
Тест на дифференциальное подкрепление низкой скорости (DLR) использовали не только для оценки потенциальных антидепрессантных свойств препарата, но и для оценки его анксиолитического потенциала. Животных обучали отвечать на определенные воздействия нажатием на рычаг. Обычные антидепрессанты, например, TCAs, увеличивают время между нажатиями, тем самым уменьшая скорость реагирования. Кроме того, они увеличивают число дополнительных реакций, т.е. повторных нажатий на рычаг в течение по меньшей мере 30 секунд после исходного нажатия на рычаг. Противоположные результаты наблюдаются в случае атипичных антидепрессантов, таких как номифензин, и в случае бензодиазепин-подобных анксиолитиков.
Пероральное введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты самцам крыс вызывало увеличение среднего общего числа реакций и уменьшение среднего времени между реакциями, причем этот эффект зависел от дозы (фиг.4). Введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты также было связано с уменьшением числа дополнительных реакций.
Эти данные показывают, что (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты ведет себя как атипичный антидепрессант и, кроме того, демонстрирует анксиолитические свойства.
Анксиолитические свойства (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты исследовали с использованием приподнятого плюс-лабиринта, который широко применяется как модель тревожности и основан на природном стремлении грызунов избегать открытого пространства и высоты. Животных помещали в центр приподнятого лабиринта, включающего два закрытых и два открытых ответвления. Время проведенное в открытых ответвлениях лабиринта вместе с числом случаев, когда животные заходили в открытые ответвления лабиринта, считается показателем уровня неофобной тревожности этих животных.
Пероральное введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты самцам крыс приводило к значительному дозозависимому увеличению количества времени, проводимого в открытых ответвлениях приподнятого плюс-лабиринта, по сравнению с контрольными животными (которым вводили носитель) (фиг.5). Соотношение входов в открытые ответвления и расстояний, пройденных в открытых ответвлениях, также значительно увеличивалось после введения (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты. Аналогичный результат наблюдался для хлордиазепоксида, применявшегося в качестве препарата сравнения. Таким образом, этот тест подтверждает анксиолитические свойства (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
Для получения данных, показанных на фиг.5, самцам крыс Sprague-Dawley вводили (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты po в дозировках 3, 10 и 30 мг/кг, хлордиазепоксид po в дозировке 10 мг/кг или носитель. Уровни тревожности определяли по времени, проведенному в открытых ответвлениях лабиринта, и по преодоленному в них расстоянию. Данные выражали в виде среднее значение ± SEM для 12 животных в группе. (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты вызывал дозозависимое увеличение количества времени, проводимого в открытых ответвлениях лабиринта, числа передвижений по открытым ответвлениям и расстояния, пройденного в открытых ответвлениях, подтверждая, тем самым, свой анксиолитический потенциал. p*<0,05 по данным ANOVA с последующим применением критерия Бонферрони. Фиг.5: SEM: стандартная ошибка среднего. Результаты основаны на данных для 11 животных. Использовали только животных, ранее демонстрировавших стабильные результаты в тесте DRL 30. Каждую особь использовали в качестве контроля для самой себя, и вводили тестируемый (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты во всех дозировках (3, 10 и 30 мг/кг) или носитель. Данные анализировали с использованием парного t-критерия. (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты проявил себя как анксиолитик или атипичный антидепрессант, вызывая дозозависимое увеличение среднего общего количества реакций и уменьшая среднего времени между реакциями.
Тест на пассивное избегание у крыс использовали для оценки потенциального действия (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты по улучшению когнитивной способности. Этот тест основан на обучении грызунов избегать неприятных событий (электрического удара) путем сдерживания нормального поведения и тестировании этих животных через определенные промежутки времени после обучения на сохранение полученных навыков.
Взрослых крыс в тесте на спуск с площадки обучали избегать электрического удара в стопы лап за счет того, что они не покидали пластмассовую площадку. (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты вводили животным перорально сразу же после обучения. Амнезию вызывали путем подкожного (sc) введения скополамина сразу же после обучения.
Введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты приводило к обращению вызванного скополамином дефицита памяти, которое являлось дозозависимым и статистически значимым при самой высокой из испытанных доз (100 мг/кг po) (фиг.6). Таким образом, эти данные показывают, что (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты демонстрирует свойство усиливать когнитивные способности крыс в тесте на пассивное избегание.
Методика получения данных, представленных на фиг.6, заключалась в следующем: взрослых крыс (n=16/группу) обучали избегать электрического удара в ступни ног за счет того, что они не покидали пластмассовую площадку в тесте на спуск с площадки. Сразу же после обучения животным перорально давали (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в дозировках 3, 10, 30 и 100 мг/кг или носитель. Амнезию вызывали подкожным введением скополамина в концентрации 1 мг/кг сразу же после обучения. Сохранение полученных навыков в памяти, измеренное как % крыс, демонстрировавших правильную реакцию, оценивали через 2 часа после обучения. (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты вызывал дозозависимое обращение дефицита памяти, вызванное скополамином, что дает основание предположить наличие у этого соединения свойства улучшать познавательную способность. *p,0,05 согласно одностороннему критерию хи-квадрат Пирсона.
Пример 6
Описанные в примере исследования проводили с целью изучить in-vitro фармакологический профиль (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты с точки зрения его сродства к рецептору A2A и профиль его селективности (в отношении других рецепторов аденозина различных видов и профиль CEREP). Кроме того, оценивали способность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты блокировать активацию агониста на рецепторе A2A (и рецепторе A1 для определения селективности). На фиг.7 приведена структура (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
На начальной стадии растворяли (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в ДМСО в концентрации 20 мМ. Последующие разбавления осуществляли в аналитическом буфере при максимальной конечной концентрации ДМСО 1,25% в анализе связывания радиолигандов и 0,3% в анализе FLIPR. В диапазоне концентраций, использованных в анализах, не наблюдалось влияния ДМСО на связывание радиолигандов или анализы FLIPR.
Рекомбинантные рецепторы аденозина A1 (человеческий hA1; крысиный rA1), A2A (человеческий hA2A; крысиный rA2A), A 2B (человеческий hA2B) и A3 (человеческий hA3; собачий dA3) экспрессировали в клетках яичника китайского хомячка (CHO), применяя систему экспрессии на основе вируса semliki forest. Крысиные мембраны, содержащие рецептор A3 (rA3), приобретали у Receptor Biology Inc.(USA). Для выделения собачьих (порода Бигль, самцы) рецепторов A1 (dA1) и A2A (dA2A) получали мозговую ткань, иссекали ткани коры (dA 1) и полосатого тела (dA2A) и замораживали при -80°C до приготовления препаратов мембран. Ткани полосатого тела (mA1 и mA2A) и коры (mA3 ) мозга обезьян иссекали и замораживали при -80°C до приготовления препаратов мембран. Осадки различных рецепторных клеток или иссеченные области тканей животных обрабатывали путем гомогенизации (Polytron) осадка/ткани в буфере для гомогенизации (50 мМ Tris-CL pH 7,4, 10 мМ ЭДТУ), затем центрифугировали полученные суспензии при 47800 g в течение 15 мин при 4°C. Полученный осадок повторно суспендировали в буфере для гомогенизации и затем еще раз центрифугировали (в тех же условиях). Осадок вновь суспендировали в буфере (10 мМ Tris-Cl, ЭДТУ 2 мМ, pH 7,4 и аденозин деаминаза 0,5 Ед/мл), инкубировали при 37°C в течение 15 мин и снова центрифугировали. Полученный осадок ресуспендировали в смеси Tris 10 мМ, ЭДТУ 2 мМ и 10% сахарозы. Определяли концентрацию белка, препараты мембран делили на аликвоты и хранили при -80°C до дальнейшего использования.
Все исследования связывания радиоактивных лигандов выполняли в 96-луночных планшетах в присутствии радиолигандов (фиг.8) и (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в 10 концентрациях (в диапазоне 10 мкМ - 0,03 нМ). Разбавление (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в аналитическом буфере осуществляли с использованием лабораторной автоматизированной рабочей станции Beckman Biomek 2000. Неспецифическое связывание определяли, используя родственный ксантинамин или NECA. Каждая лунка содержала мембранный белок (в различных концентрациях), 0,5 мг гранул Ysi-поли-L-лизин SPA (во всех анализах SPA не применялось фильтрование, см. фиг.8) и 0,1 U аденозин деаминазы в конечном объеме 200 мкл буфера A или B (состав буфера A: 50 мМ Tris, 120 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 2 мМ CaCl2 и 10 мМ MgCl2 (pH 7,4); состав буфера B: 50 мМ Tris, 1 мМ ЭДТУ и 10 мМ MgCl2 (pH 7,4)). Все анализы проводили в двух экземплярах и повторяли по меньшей мере два раза. Аналитические планшеты инкубировали в течение различных периодов времени при комнатной температуре и затем центрифугировали (SPA) или фильтровали (см. фиг.8). В случае применения фильтрования, реакции прерывали быстрым вакуумным фильтрованием через фильтры GF/C, которые предварительно пропитывали в течение по меньшей мере 30 минут в PEI (полиэтиленимин; 0,3%), с последующим промыванием ледяным буфером Tris (50 мМ, pH 7,4) 5×0,4 мл. Для обоих типов планшетов, в которых использовались как SPA, так и фильтрование, связывание лиганда определяли с использованием сцинтилляционного счетчика Packard Topcount.
Усредняли значения CPM для каждого парного опыта с одинаковой концентрацией конкурирующего соединения (y1) и затем рассчитывали % специфического связывания (((y1-не специфическое связывание)/(общее связывание не специфическое))×100). Строили графики % специфического связывания, используя программу построения кривых XLfit, которая осуществляла итерационное нанесение данных с использованием алгоритма Левенберга-Марквардта. Уравнение, примененное для анализа конкурентного связывания по одному сайту, имело вид y=A+((BA)/(1+((x/C)D))), где y означал % специфического связывания, A являлось минимальным значением y, B являлось максимальным значением y, C означало IC50, x представлял собой log10 концентрации конкурирующего соединения, и D означало наклон кривой (коэффициент Хилла). На основе полученных кривых определяли IC50 (концентрация ингибитора при которой происходит замещение 50% специфически связанного радиолиганда) и коэффициент Хилла. Константу сродства (Ki) рассчитывали с применением уравнения Ченга-Пруссоффа Ki=(IC50/1+([L]/Kd), где [L] означает концентрацию радиолиганда и Kd представляет собой константу сродства радиолиганда. Значение Ki кроме того выражали логарифмически в виде pKi. Расшифровка условных обозначений на фиг.8 является следующей: R (рекомбинантный); T (ткань); RT (комнатная температура); буфер A: 50 мМ Tris, 120 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 2 мМ CaCl2 и 10 мМ MgCl2 (pH 7,4); буфер B: 50 мМ Tris, 1 мМ ЭДТУ и 10 мМ MgCl2 (pH 7,4); RL (радиолиганд); NS (неспецифическое связывание); SPA (сцинтилляционный анализ пространственной близости).
Клетки CHO устойчиво экспрессирующие смешанный G-белок G 16, трансфицировали человеческими плазмидами, кодирующими человеческие рецепторы A1 или A2A. На основе функциональных реакций, обнаруживаемых FLIPR, выбирали стабильные клеточные линии. Стабильные клетки клонировали с помощью ограниченного разбавления, получая моноклональные клеточные линии, устойчиво экспрессирующие либо G
16 и либо человеческий рецептор A1 (клон 12), либо человеческий рецептор A2A (клон 34).
Стабильные клеточные линии выращивали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), содержащей 10% сыворотку телят, инактивированную нагреванием (FBS), 1% пенициллин-стрептомицин, 1% L-глутамат, 1% незаменимые аминокислоты при 37°C в инкубаторе с содержанием CO2 10% и 95% влажностью.
В день, предшествующий анализу, клетки помещали в черные 96-луночные планшеты при плотности 50000 клеток/лунку, причем каждая лунка имела прозрачное донышко для осмотра клеток и измерения флуоресценции. Плотность клеток была достаточной для образования конфлюентного монослоя на следующий день. Для каждого эксперимента готовили свежий сбалансированный солевой раствор Хэнкса без фенолового красного, содержавший 20 мм HEPES (pH 7,3) и 2,5 мМ пробенецид (аналитический буфер). Разбавления в аналитическом буфере осуществлялись с применением лабораторной автоматизированной рабочей станции Beckman Biomek 2000. Буфер для введения красителя содержал Fluo-4-AM в конечной концентрации 2мМ (растворенный в ДМСО и плуроновоой кислоте) в аналитическом буфере. Из лунок удаляли имевшуюся в них поддерживающую среду, в каждую лунку добавляли 100 мкл буфера с красителем и инкубировали в течение примерно 60 мин при 37°C в атмосфере 5% CO2 при влажности 95%. После однократного введения красителя, клетки тщательно промывали аналитическим буфером на устройстве для промывания клеток Embla с целью удаления всего несвязанного красителя. В каждой лунке оставляли ровно 100 мкл аналитического буфера.
Условия анализа соответствовали описанным ранее Porter et al., Brit.J.Pharmacol.128, 13-20, 1999 и Patel et al., Brit.J.Pharm. 138, 671-677, 2003. Вкратце, каждый из 96-луночных планшетов, содержащий клетки с красителем, помещали в выдвижную панель прибора FLIPR и устанавливали интенсивность лазерного излучения на подходящий уровень (для получения нижних значений приблизительно 10000 единиц флуоресценции). Добавление агонистов осуществляли в течение 10 с во время измерения флуоресценции. Для исследования антагонистов клетки преинкубировали в течение 10 минут до экспериментов. Регистрировали максимальный полученный флуоресцентный сигнал и нормализовали его по положительному контролю 10 мкМ NECA, который присутствовал на каждом планшете в двух экземплярах. На каждом 96-луночном планшете две лунки содержали положительный контроль (10 мкМ NECA) и в двух лунках находился отрицательный контроль (чистый аналитический буфер). Для получения фармакологических характеристик все данные нормализовали по результатам для лунок с положительным контролем, величина сигнала которых принималась за 100%. Каждую кривую зависимости сигнала от концентрации агониста строили, используя логистическое уравнение с четырьмя параметрами из Microsoft Excel XLFit, имевшее следующий вид: Y=Минимум+((Максимум-Минимум)/(1+10(LogEC50-X)nH )). Эффективность соединения определяли, исходя из максимальной величины. Концентрацию агониста, которая обеспечивала половину максимального отклика, представляли величиной EC50 , логарифм которой давал значение pEC50. Уравнение, примененное для анализа конкурентного связывания по одному сайту, имело вид y=A+((B-A)/(1+((x/C)D))), где y означал % специфического связывания, A являлось минимальным значением y, B являлось максимальным значением y, C означало IC50 (концентрацию, при которой имело место 50% ингибирование стимуляции, вызванной агонистом), x представлял собой log10 концентрации конкурирующего соединения и D означало наклон кривой (коэффициент Хилла).
Еще одну группу экспериментов по связыванию радиолигандов проводили для оценки селективности (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в отношении более чем 67 рецепторов, транспортеров нейромедиаторов и ионных каналов. Кроме того, проводили клеточные биологические исследования на 16 ферментных мишенях для оценки селективности (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
(4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты обладает высоким сродством к человеческому рецептору A2A (Ki 5±0,5 нМ; pKi 8,31±0,04) при селективности приблизительно 270, 140 и 314 раз по отношению к рецепторам hA 1 (Ki: 1332±106 нМ; pKi: 5,88±0,04), hA2B (Ki: 700±55 нМ; pKi: 6,16±0,03) и hA3 (Ki: 1572±134 нМ; pKi: 5,81±0,04) соответственно, на основании данных, включающих необработанные значения dpm (число распадов в минуту), IC50, Ki, pKi и анализ коэффициента Хилла. Коэффициент Хилла для каждого анализа показывал, что была помечена единая однородная совокупность сайтов связывания. Исследования связывания с рецепторами различных видов животных также продемонстрировали, что (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты обладает высоким сродством к рецепторам A2A крыс (pKi 7,7), собак (pKi 7,9) и обезьян (pKi 7,9) при хорошей селективности в отношении других рецепторов тех же видов животных (см. фиг.9).
Данные отражают значения pKi±SEM (n), где pKi представляет собой десятичный логарифм константы сродства (Ki) и SEM представляет собой стандартную ошибку среднего (где n>2), и n представляет собой число анализов. Детали индивидуальных данных приведены в приложении 1 в разделе 6.1.
В ходе функционального анализа оценивали способность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты противодействовать потоку ионов Ca2+ в клетках hA2A-G 16-CHO, стимулированному NECA (неспецифическим агонистом рецептора аденозина). (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты ингибировал A2A-опосредованные реакции с pIC50 8,79±0,06 (наклон Хилла 0,6). (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты противодействовал потоку ионов Ca2+ в клетках hA1-G
16-CHO, стимулированному NECA, с pIC50 в диапазоне от <5 до 5,22. Хотя антагонизм рецептору hA1 находился на пределе обнаружения, полученные данные показывают, что в этом функциональном анализе (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты продемонстрировал >4000-кратную селективность в отношении рецептора hA2A по сравнению с рецептором hA1 (см. фиг.10-21).
В другой серии опытов по связыванию радиоактивных лигандов оценивали селективность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты по отношению к более чем 67 рецепторам, транспортерам нейромедиаторов и ионным каналам. (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты обладал 1900-кратной селективностью в отношении рецептора A2A по сравнению с другими исследованными мишенями, за исключением транспортера аднозина, в случае которого (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты продемонстрировал 55% замещение при концентрации 10 мкМ. (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты продемонстрировал 1900-кратную селективность в отношении рецептора A2A по сравнению с другими мишенями, хотя при концентрации 10 мкМ наблюдалось 88% ингибирование для фермента фосфодиэстеразы (IV).
(4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты является мощным антагонистом рецептора A2A с отличным профилем селективности.
Целью этого исследования было изучение результатов (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в различных in vitro анализах связывания рецепторов и ферментных анализах. См. фиг.22-25 для ознакомления с общими методиками анализов связывания. См. фиг.26-32 для ознакомления с условиями проведения экспериментов в анализах связывания. См. фиг.37-43 для ознакомления с результатами.
Специфическое связывание лиганда с рецепторами определяют как разницу между общим связыванием и неспецифическим связыванием, измеренным в присутствии избытка немеченого лиганда.
Результаты выражены в процентах от контрольного специфического связывания и в процентах ингибирования от контрольного специфического связывания, полученного в присутствии (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты. Индивидуальные и средние значения представлены в разделе результатов. Значения IC50 (концентрации, вызывающие половину максимального ингибирования, вызванного контрольным специфическим связыванием) и коэффициентов Хилла (nH) определяли с помощью нелинейного регрессионного анализа кривых конкурентного связывания, используя подбор кривых по уравнению Хилла.
Константы ингибирования (Ki) рассчитывали, исходя из уравнения Ченга-Пруссоффа (K i=IC50/(1+(L/KD)), где L = концентрация радиолиганда в анализе, и KD=сродство радиолиганда к рецептору).
См. фиг.44-48 для ознакомления со значениями IC50 и Ki в анализах связывания.
Результаты ферментных анализов выражены в процентах от контрольных значений и в процентах изменения контрольных значений, полученных в присутствии (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
Индивидуальные и средние величины приведены в разделе результатов.
Значения IC50 (концентрации, вызывающие половину максимального ингибирования от контрольных значений) и коэффициентов Хилла (nH) определяли с помощью нелинейного регрессионного анализа кривых концентрация-реакция используя подбор кривых по уравнению Хилла. См. фиг.33 для ознакомления с общими методиками и фиг.34-36 для ознакомления с условиями экспериментов ферментных анализов.
В каждом эксперименте соответствующее соединение сравнения тестировали в условиях конкуренции с (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амидом 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты для оценки возможности применения анализа. Соединения тестировали при нескольких концентрациях (для определения величин IC50 или EC50) и данные сравнивали с историческими значениями, имеющимися в базе данных компании Cerep.
Средние значения результатов для (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты суммированы на фиг.49, 50 и 53.
Значения IC50 и Ki для каждого соединения сравнения приведены на фиг.51, 52 и 54. Каждая из этих величин находится в пределах приемлемых отклонений от средних исторических значений ± 0,5 логарифмических единиц.
Пример 7
В данном исследовании изучается действие (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в тесте на уменьшение двигательной активности, вызванное APEC. APEC (2-[(2-аминоэтиламино)карбонилэтил-фенил-этиламино]-5'-этилкарбоксамидоаденозин) является агонистом рецептора A2A, который уменьшает спонтанную двигательную активность дозозависимым образом. Вызванное APEC уменьшение двигательной активности ослабляют с помощью селективных антагонистов рецептора A2A, но не селективных антагонистов рецептора A1 (Martson HM et al. Pharmacological characterization simple behavioral response mediated selectively by central adenosine A1 receptors, using in vivo and in vitro techniques. J.Pharm Exp Ther. 1998; 285:1023-1030).
Оценивали способность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты блокировать вызванное APEC понижение двигательной активности у крыс с целью определения силы его действия in vivo и его эффективности в качестве селективного антагониста рецептора A2A (Фиг.55).
Использовали взрослых самцов крыс Wistar (HanBrl: Wist(SPF)RCC) массой примерно 140-200 г. Животных поселяли группами по четыре особи в клетки Macrolon Type 3 (810 см 2) с подстилкой из опилок. Водопроводная вода и стандартный лабораторный корм (Ratte Alleinfutter, extrudat № 3436; Provimikliba Kaiseraugst, Switzerland) были постоянно доступны животным, за исключением времени проведения тестирования. Группы из четырех животных содержались в режиме цикла 12:12 ч свет-темнота, причем свет включали в 6 часов утра. Постоянно поддерживалась комнатная температура (21-23°C) и влажность (55-65%). По завершении тестирования крыс умерщвляли посредством вдыхания CO2. Использованные методики экспериментов получили предварительное одобрение центра комитета защиты животных кантона Базель, основанное на строгом соблюдении федерального и местного законодательства по содержанию и использованию животных в опытах. Эти методики согласовывались с этическими принципами и рекомендациями по проведению научных опытов над животными, данными Швейцарской Академией Медицинских Наук и Швейцарской Академией Наук.
За двигательной активностью животных следили с помощью системы Digiscan Animal Activity Monitoring (модель RXYZCM Omnitech Electronics, Columbus, Ohio). Тестовые боксы были изготовлены из плексигласа (41×41×28 см; ширина × длина × высота) и содержали в себе тонкий слой подстилки из опилок. Каждая исследуемая группа состояла из 16-24 крыс. За два часа до регистрации двигательной активности крысам перорально вводили (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в дозировках 0,3, 1, 3, 10 мг/кг и затем через 110 минут осуществляли подкожную инъекцию 0,01 мг/кг APEC. Контрольные животные получали только носитель или носитель и APEC. Через десять минут после введения APEC животных помещали в тестовые клетки, где фиксировали активность их движения в горизонтальной плоскости в течение 15 мин.
(4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты суспендировали в 0,3% растворе Tween 80 в дистиллированной воде и APEC в 0,3% растворе Tween 80 в 0,9% солевом растворе. (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты вводили перорально (p.o.) (принудительное кормление) и APEC подкожно (s.c.). Объем инъекции составлял 5 мл/кг массы тела. Дозировки относятся к препарату в форме свободного основания.
Данные анализировали способом ANOVA Краскела-Валлиса с последующим применением U-критерия Манна-Уитни. Значения p менее 0,05 считались значимыми.
(4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты статистически значимо и дозозависимым образом обращал вызванный APEC недостаток двигательной активности по сравнению с контрольными животными при значениях ID50 и ID90, равных 0,5 мг/кг и 3,4 мг/кг соответственно.
Данные на фиг.55 представлены в виде среднее значение±SEM для 16-24 животных в группе. *p<0,05 согласно критерию Манна-Уитни.
Пероральное введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты статистически значимо обращало вызванный APEC недостаток двигательной активности при значениях ID50 и ID90, равных 0,5 мг/кг и 3,4 мг/кг соответственно. Эти данные служат доказательством, подтверждающим, что (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты эффективно ингибирует аденозиновые рецепторы мозга A2A после перорального введения.
Пример 8
В настоящем исследовании изучено антидепрессантно-подобное действие (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в тесте на стресс, вызванный вынужденным плаванием, у крыс. Тест на стресс, вызванный вынужденным плаванием у крыс, основан на том, что при помещении в воду после начального периода энергичной активности грызуны принимают характерное неподвижное положение, осуществляя только минимальные движения, необходимые для того, чтобы остаться на плаву. Уменьшение времени неподвижности считается показателем потенциальных антидепрессантных свойств конкретного исследуемого препарата (Porsolt RD et al. Behavioural despair in rats: a new model sensitive to antidepressant treatments. Eur.J.Pharmacol. 1978; 47:379-391).
Использовали взрослых самок крыс Wistar (HanBrl: WIST(SPF)RCC Füllinsdorf) массой примерно 100-130 г. Животных поселяли группами по четыре особи в клетки Macrolon Type 3 (810 см2) с подстилкой из опилок. Водопроводная вода и стандартный лабораторный корм (Ratte Alleinfutter, экструдат № 3436; Provimikliba Kaiseraugst, Switzerland) были постоянно доступны животным, за исключением времени проведения тестирования. Группы из четырех животных содержались в режиме цикла 12:12 ч свет-темнота, причем свет включали в 6 часов утра. Постоянно поддерживалась комнатная температура (21-23°C) и влажность (55-65%). По завершении тестирования крыс умерщвляли посредством вдыхания CO2. Использованные методики экспериментов получили предварительное одобрение центра комитета защиты животных кантона Базель, основанное на строгом соблюдении федерального и местного законодательства по содержанию и использованию животных в опытах. Эти методики согласовывались с этическими принципами и рекомендациями по проведению научных опытов над животными, данными Швейцарской Академией Медицинских Наук и Швейцарской Академией Наук.
Животных, не участвовавших в подобных опытах, индивидуально принуждали к плаванию в вертикальных плексигласовых цилиндрах (высота 40 см; диаметр 17,5 см), содержавших 15-см слой воды с температурой 23-24°C. Через 15 минут животных вынимали из воды, давали обсохнуть под горячей лампой и возвращали в клетки, где они жили. Через 24 часа их снова помещали в цилиндры и измеряли общую продолжительность неподвижности в течение 5-минутного теста. Считали, что крыса является неподвижной, если она пассивно плавала в воде в немного согнутом, но вертикальном положении, причем ее голова была немного выше поверхности воды.
(4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты суспендировали в 0,3% растворе Tween 80 в дистиллированной воде. (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты вводили перорально (р.о.) (принудительное кормление) за 24 ч, 16 ч и 2 ч до проведения теста. Объем инъекции составлял 5 мл/кг массы тела. Дозировки относятся к препарату в форме свободного основания.
Данные анализировали с применением непарного t-критерия Стьюдента. Значения p менее 0,05 считались значимыми.
На фиг.56 показано, что пероральное введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты статистически значимо и дозозависимым образом уменьшало среднюю общую продолжительность неподвижности по сравнению с контрольными животными. Аналогичные результаты получали для дезипрамина (100 мг/кг р.о.), т.е. трициклического антидепрессанта, использованного в качестве препарата сравнения. Данные представлены в виде среднее значение±SEM для групп из 8 животных. *p<0,05 согласно t-критерию Стьюдента. Пероральное введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты статистически значимо и дозозависимым образом уменьшало среднюю общую продолжительность неподвижности в тесте на стресс, вызванный вынужденным плаванием, у крыс. Эти данные предоставляют in vivo доказательство потенциальных антидепрессантных свойств (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты после перорального введения.
Пример 9
В этом исследовании изучали потенциальное антидепрессантное действие (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в тесте на ангедонию у крыс, вызванную хроническим умеренным стрессом. Методика исследования повторяла описанную Moreau, J.-L.,Bourson., Jenck, F., Martin, J.R. and Mortas, P. (1994) Curative effects of the atypical antidepressant mianserin in the chronic mild stress-induced anhedonia model of depression. J.Psychiatr. Neurosci.19, 51-56 и Moreau, J.-L., Scherschlicht, R., Jenck, F., and Martin, J.R. (1995) Chronic mild stress-induced anhedonia model of depression: sleep abnormalities and curvative effects of electroshock treatment. Behav.Pharmacol. 5, 682-687.
Использовали самцов-альбиносов крыс Wistar (HanBrl: WIST(SPF), RCC Ltd, Füllinsdorf, Switzerland) масса которых в начале эксперимента составляла примерно 350 г. После операции животных содержали индивидуально в контейнерах Macrolon Type III (за исключением временного группового поселения, как части стрессового режима) в стандартных лабораторных условиях (12 ч цикл свет/темнота с включением света в 6:00 утра, температура 21-23°C) при свободном доступе к пище (Kliba Miihlen, Kaiseraugst, Switzerland) и водопроводной воде. Животных, подвергаемых стрессу, и контрольных животных поселяли в одинаковые помещения, если не указано иное. Использованные методики экспериментов получили предварительное одобрение центра комитета защиты животных кантона Базель, основанное на строгом соблюдении федерального и местного законодательства по содержанию и использованию животных в опытах. Эти методики согласовывались с этическими принципами и рекомендациями по проведению научных опытов над животными, данными Швейцарской Академией Медицинских Наук и Швейцарской Академией Наук.
Животным проводили обезболивание 5% гидрохлоридом кетамина натрия (90 мг/кг i.p.) и 2% ксилазином (10 мг/кг i.p.) и вводили бупренорфин (Temgesic, 0,03 мг/кг s.c.). Проверяли биполярные электроды из нержавеющей стали (MS 303/3, Plastics One Inc., Roanoke, VA, USA), пропуская через них ток при погружении в солевой раствор. Если утечку тока можно было наблюдать визуально по появлению на электроде маленьких пузырьков, электрод выбрасывали. Осуществляли одностороннюю стереотаксическую имплантацию электродов с нормальной изоляцией в мезолимбическую систему на уровне вентральной области покрышки среднего мозга (2 мм вперед от лямбды, 0,3 мм в сторону от серединного шва и 8,5 мм внутрь от поверхности черепа). Кончики электродов находились на расстоянии примерно 0,5 мм друг от друга в спинно-брюшной плоскости. Электроды имплантировали перпендикулярно горизонтальной плоскости и режущую пластину регулировали так, чтобы лямбда и брегма размещались в одной и той же горизонтальной плоскости. Электродную сборку закрепляли на черепе четырьмя-пятью винтами из нержавеющей стали и самополимеризующейся смолой. После операции животных держали в тепле до полного пробуждения и затем осуществляли подкожную инъекцию 0,03 мг/кг бупренорфина для уменьшения послеоперационной боли. До начала обучения животным давали по меньшей мере 5 дней на послеоперационное восстановление.
Для осуществления процедуры самостимулирования вентральной области покрышки (VTSS) использовали тестовые камеры, состоявшие из плексигласовых коробок (30×25~25см) с отверстием (2,5 см в диаметре), расположенным на боковой стенке в 5 см над полом. Крысы могли прерывать сходящийся световой пучок, вводя в него свой нос, для начала электрического стимулирования мозга. Биполярное стимулирование (0,5 с последовательность монофазных прямоугольных импульсов длительностью 0,1 мс) осуществлялось с помощью стимулятора постоянного тока, управляемого персональным компьютером, который также регистрировал ответную реакцию. На стадии обучения каждую крысу помещали в тестовую камеру и обучали вводить нос в световой поток для поощрения внутричерепным электрическим стимулированием. Частоту поддерживали на уровне 70 Гц, и силу тока поддерживали на таком уровне, который давал возможность каждой отдельной крысе сохранять максимальную интенсивность реакции без наблюдаемых нарушений моторики. Обучение продолжали до достижения устойчивой реакции. Затем определяли пороговый уровень VTSS поведения, как описано ранее. Вкратце, осуществляли пошаговое изменение частоты стимулирования в большую и меньшую сторону с шагом 10 Гц до достижения критерия интенсивности реакции (который был установлен на уровне 15 введений носа в световой поток в течение минуты). Интенсивность стимулирования сохраняли на ранее найденном уровне для достижения максимальной интенсивности реакции у каждой отдельной крысы. Животных тестировали 2 минуты на каждом уровне частоты и регистрировали число введений носа в световой поток. Среднюю интенсивность реакции рассчитывали для каждого уровня частоты. В отсутствии стимулирования мозга интенсивность реакции была обычно ниже 10 движений носа в минуту (и никогда не превышала 15). Поэтому пороговое значение определяли как среднее для увеличивающихся и уменьшающихся частот, установив его на уровне 15 движений носа в минуту.
Режим стресса каждую неделю состоял из ряда непредсказуемых умеренных факторов стресса, как, например, многократные помещения животных на 1 час в маленькие клетки (24×10×9 см), сопровождающееся звучанием звонка каждые 10 минут, один период непрерывного освещения в течение всей ночи, один период лишения пищи и воды на всю ночь сразу же после которого следовал 2 часовой период ограниченного доступа к пище (в клетку насыпали 18 гранул пищи по 45 мг), один период лишения воды на всю ночь сразу же после которого животные находились 1 ч рядом с пустой бутылкой, один период группового пребывания в течение ночи в мокрой клетке (на подстилку из опилок выливали 100 мл воды). Кроме того, животных держали на обращенном цикле свет/темнота с вечера пятницы до утра понедельника.
Эксперименты начинали, когда пороговое значение самостимулирования отдельных крыс менялось менее чем на 15% за три последовательных ежедневных сеанса тестирования. Три группы животных по 7-8 крыс в каждой подвергали режиму хронического умеренного стресса и две группы по 6 животных в каждой оставляли в состоянии покоя. С 25 до 46 дня эксперимента двум группам животных, подвергавшихся стрессу, вводили (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты (1 или 3 мг/кг i.p.), тогда как третьей группе крыс, подвергавшихся стрессу, осуществляли инъекции солевого раствора. В тот же период времени двум группам животных, не подвергавшихся стрессу, вводили (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты (3 мг/кг i.p.) или солевой раствор, соответственно. Пороговые уровни ICSS определяли по утрам дважды в неделю и сравнивали пороговые значения, полученные для каждой группы в каждый день тестирования. Результаты выражали в виде процентных изменений порога ICSS, представляющих собой коэффициент ангедонии (чем выше порог ICSS, тем сильнее ангедония).
Данные анализировали с применением двухфакторного дисперсионного анализа повторных измерений, который в подходящих случаях дополняли сравнениями данных по отдельным дням, выполненными в соответствии с непарным t-критерием. Значения p меньше 0,05 принимались в качестве статистически значимых.
Во всех трех группах, где животные подвергались стрессу, наблюдалось статистически значимое увеличение коэффициента ангедонии, вызванное стрессом (% изменения порога самостимулирования вентральной области покрышки) [F(12,91)=8,89, ~~0,05; F(12,91)=12,54, ~~0,05 соответственно]. Когда животным, подвергавшимся стрессу, на 25-46 дни периода стресса вводили 1 или 3 мг/кг (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты, увеличившийся коэффициент ангедонии возвращался на исходные уровни контрольных животных (у животных восстанавливался нормальный уровень чувствительности к поощрению) через одну-две недели введения, в то время, как у подвергавшихся стрессу животных, получавших носитель, сохранялась ангедония. При сравнении групп, получавших препарат и носитель, был обнаружен явный лечебный анти-ангедонический эффект (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты [F(12,156)=2,28, p=0,05]. См. фиг.57. Данные представлены в виде среднее значение±SEM для групп из 7-8 животных. p*<0,05 согласно 2-факторному анализу ANOVA для повторных измерений с последующим применением непарного t-критерия.
Эти данные показывают, при что введении (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты (1,3 мг/кг i.p. один раз в день) животным, пребывавшим в состоянии стресса и вызванной им ангедонии, вызванная стрессом ангедония полностью прекращалась. Эти результаты демонстрируют потенциальные антидепрессантные свойства (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
Пример 10
В этом исследовании изучали антидепрессантное/анксиолитическое действие (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в тесте на дифференциальное подкрепление низкой скорости-30 секунд (DRL-30) у крыс. Методика соответствует описанной в работах Richards JB, Seiden LS. A quantitative interrespose-time analysis of DRL performance differentiates similar effects of the antidepressant desipramine and novel anxiolytic gepirone. J Exp Anal Behav. 1991; 56: 173-192. Stephens DN, Voet B. Differential effects of anxiolytic and non-anxiolytic benzodiazepine receptor ligands on performance of a differential reinforcement of low rate (DRL) schedule. Behav Pharmacol. 1994; 5:4-14. Типичные антидепрессанты увеличивают время между реакциями, соответственно, понижая частоту реагирования. Кроме того, они увеличивают количество подкреплений. Противоположные эффекты наблюдаются для бензодиазепиноподобных анксиолитиков или для атипичных антидепрессантов.
Использовали взрослых самцов крыс Sprague-Dawley (Charles River, France) массой примерно 350 г. Животных поселяли по одному в клетки Macrolon Type 3 (810 см2) с подстилкой из опилок и древесных стружек. У животных был неограниченный доступ к водопроводной воде и ограниченный доступ (15 г в день) к стандартному лабораторному корму (Ratte Alleinfutter, extrudat No 3436; Provimikliba Kaiseraugst, Switzerland). Группы из четырех животных содержались в режиме цикла 12:12 ч свет-темнота, причем свет включали в 6 часов утра. Постоянно поддерживалась комнатная температура (22±2°C) и влажность (55-65%). Использованные методики экспериментов получили предварительное одобрение центра комитета защиты животных кантона Базель, основанное на строгом соблюдении федерального и местного законодательства по содержанию и использованию животных в опытах. Эти методики согласовывались с этическими принципами и рекомендациями по проведению научных опытов над животными, данными Швейцарской Академией Медицинских Наук и Швейцарской Академией Наук.
Проводили тест на дифференциальное подкрепление низкой скорости-30 секунд (DRL-30). Устройство для проведения теста состояло из стандартного звукоизолированного ящика Skinner (28×21×21 см) (MED Associates Inc.), снабженного освещением, одним рычагом и дозатором пищевых гранул (45 мг пищевых гранул). Рычаг располагался на левой стороне емкости с пищей, соединенной с дозатором. Ящики Skinner были соединены с программирующей системой (Kestrel Software, Conclusive Solutions, Harlow, UK), которая автоматически управляла экспериментом и собирала данные.
В первую очередь проводили сеанс освоения крысами навыка нажатия на рычаг в экспериментальной камере в соответствии с фиксированным режимом числа реакций и подкреплений (FR1). Подкрепление состояло в подаче в камеру гранул пищи (45 мг Noyes Pellt formula P
, NH, USA) после каждого нажатия на рычаг. После стадии освоения навыка нажатия на рычаг, животным устраивали повторные сеансы тренировки в соответствии с режимом дифференциального подкрепления низкой скорости (DRL). В этом режиме поощрялись только реакции, следующие после определенной задержки (подкрепляемые реакции). Реакции, которые происходили до окончания времени задержки не подкреплялись, и повторно запускали отсчет времени задержки для следующей реакции. Задержку постепенно увеличивали с 5 секунд до 30 секунд (DRL-30) для достижения устойчивого уровня показателей животных в режиме DRL-30 в конце стадии обучения до начала тестирования препарата. Каждый сеанс обучения продолжался 15 минут. За 2 часа до каждого сеанса животным осуществляли p.o. введение дистиллированной воды. Помимо гранул, употребляемых в пищу в ящике Skinner, каждое животное ежедневно получало 15 г пищи в собственной клетке (в 5 часов вечера).
Во время каждого сеанса регистрировали три параметра: общее число реакций, количество подкреплений (нажатий на рычаг, которые имели место не менее чем через 30 секунд после предыдущего нажатия) и среднее время между реакциями (среднее время ожидания, прошедшее между последовательными нажатиями на рычаг).
Тестирование препаратов проводили на животных, которые достигали стабильных исходных показателей DRL-30 на протяжении двух последовательных недель. Сеансы тестирования препарата проводили дважды в неделю, причем между двумя сеансами тестирования осуществляли по меньшей мере два сеанса обучения без введения препарата. Каждое животное использовали в качестве контроля для самого себя и получали данные для всех выбранных доз препарата и контрольные данные в отдельных сеансах тестирования. Порядок введения и дозировку препарата определяли согласно процедуре рандомизации для обеспечения равномерного распределения различных режимов введения во времени. Каждое животное все время тестировали в одном и том же ящике Skinner, в одном и том же порядке и в одно и то же время дня. Тестирование являлось слепым. Тестирование проводили на 11 животных. (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты суспендировали в 0,3% растворе Tween 80 в дистиллированной воде. Действие (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты оценивали при p.o. введении (принудительное кормление) 3, 10 и 30 мг/кг за 2 часа до тестирования. Объем инъекции составлял 5 мл/кг массы тела. Дозы указаны для препарата в форме свободного основания.
Данные анализировали с использованием одностороннего парного t-критерия.
На фиг.58 показано, что пероральное введение (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты (3, 10 и 30 мг/кг) самцам крыс статистически значимо и дозозависимым образом увеличивало число реакций и уменьшало среднее время между реакциями. Кроме того, имелась тенденция к уменьшению числа подкреплений. У крыс, обученных ранее до достижения устойчивых результатов в тесте DRL-30, (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты (3, 10, 30 мг/кг p.o.) статистически значимо и дозозависимо увеличивал число реакций и уменьшал среднее время между реакциями. Также имелась тенденция к уменьшению числа подкреплений. Эти данные наводят на мысль о наличии либо определенной анксиолитической активности, либо свойств, напоминающих свойства атипичных антидепрессантов.
Пример 11
В этом эксперименте исследовали эффективность (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты при пероральном введении для обращения вызванной скополамином амнезии при решении задачи по пассивному избеганию.
Использовали взрослых самцов крыс Wistar (HanBrl: WIST(SPF); RCC Füllinsdorf) массой примерно 94-113 г. Животных поселяли группами по четыре особи в клетки Macrolon Type 3 (810 см2) с подстилкой из опилок. Водопроводная вода и стандартный лабораторный корм (Ratte Alleinfutter, extrudat No 3436; Provimikliba Kaiseraugst, Switzerland) были постоянно доступны животным, за исключением времени проведения тестирования. Группы из четырех животных содержались в режиме цикла 12:12 ч свет-темнота, причем свет включали в 6 часов утра. Постоянно поддерживалась комнатная температура (21-23°C) и влажность (55-65%). По завершении тестирования крыс умерщвляли посредством ингалирования CO2. Использованные методики экспериментов получили предварительное одобрение центра комитета защиты животных кантона Базель, основанное на строгом соблюдении федерального и местного законодательства по содержанию и использованию животных в опытах. Эти методики согласовывались с этическими принципами и рекомендациями по проведению научных опытов над животными, данными Швейцарской Академией Медицинских Наук и Швейцарской Академией Наук.
Обучение пассивному избеганию проводили в тестовой камере (40×31×29 см), которая включала решетчатый пол, изготовленный из стержней из нержавеющей стали, через которые можно было непрерывно пропускать постоянный ток, вызывающий электрический удар (1,1 мА). Пластмассовая платформа толщиной 0,5 см (15×15 см) располагалась на решетке в одном их углов. Каждый сеанс обучения начинался с помещения крысы на платформу, причем на окружающую решетку подавали электричество. Когда крыса спускалась с платформы на решетку, она автоматически получала электрический удар ступней лап, и быстро возвращалось на платформу. Затем крысу несколько раз слегка подталкивали на решетку, до тех пор, пока она не начинала активно сопротивляться, показывая, тем самым, что она обучилась связи между спуском на решетчатый пол и электрическим ударом ступней. Все животные, демонстрировавшие явные признаки вызванного препаратом ослабления моторики/седативного эффекта, не принимали участия в тестировании. Тест на сохранение в памяти проводили в том же устройстве, причем каждую крысу помещали на пластиковую платформу, окруженную решеткой (через которую не пропускали электрический ток). Спуск на платформу в течение первых 60 сек теста или отсутствие в дальнейшем сопротивления при осторожном сталкивании на решетчатый пол расценивалось как отсутствие проявления избегания (и, следовательно, доказательство амнезии). Тестирование осуществляли между 7 часами утра 3 часами дня. Экспериментатор, наблюдавший за животными, при проведении оценки сохранения в памяти прошлого опыта не был осведомлен о введенных животным препаратах.
Сразу же после приобретения навыка пассивного избегания, крысам альтернативно давали одну из следующих комбинаций препаратов, которые вводили одновременно:
1) носитель (sc) + носитель (po)
2) 1 мг/кг скополамин·HBr (sc) + носитель (po)
3) 1 мг/кг скополамин·HBr (sc) + (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в дозировках 3, 10, 30 или 100 мг/кг (po).
Через два часа после обучения и следовавшего за ним введения препаратов, оценивали каждую крысу на сохранение реакции пассивного избегания в описанном выше тесте. Данные, полученные для крыс, которые сразу же после обучения получали носитель (sc) + носитель (po) определяли собой базовый уровень сохранения в памяти в отсутствии скополаминовой амнезии (не включены в статистический анализ). N=16 на группу.
Препарат (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты готовили непосредственно перед применением в носителе, состоявшем из 0,3% (объем/объем) раствора Tween-80 в растворе (0,9%) NaCl, и обрабатывали ультразвуком (Model Digital S, Transsonic). Объем инъекции составлял 5 мл/кг массы тела. Указанные дозировки относились к лекарственному соединению в форме свободного основания. Перед применением готовили свежий раствор скополамина гидробромида в 0,3% (объем/объем) Tween-80 - NaCl (0,9%) (объем инъекции 2 мг/кг, sc).
Статистическую оценку этих (все или ничего) данных осуществляли с применением двухстороннего критерия хи-квадрат Пирсона (Statview for Windows 92/98; версия 5.0.1) для сравнения относительной доли крыс, получавших скополамин, которые демонстрировали нарушение сохранения в памяти в каждом из режимов введения исследуемого препарата, с тем же параметром, наблюдавшимся после введения носителя. Значение p 0,05 или менее считали статистически значимым.
На фиг.59 показано, что среди крыс, обученных пассивному избеганию, значительно большая относительная доля крыс, получавших после обучения (sc) + носитель (po), демонстрировала сохранение навыка на 2 часа позднее, чем крысы, получавшие скополамин (sc) + носитель (po), а именно 81,25% против 12,5% соответственно. Значительно большая доля животных (43,75%; p<0,05), получавших скополамин вместе с пероральным введением 100 мг/кг (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты демонстрировала сохранение навыка пассивного избегания, по сравнению с группой получавшей скополамин, наряду с пероральным введением носителя.
Приведенные данные представляют собой количество правильных реакций (% от числа животных; N=16 на группу). *p<0.05 согласно критерию хи-квадрат (двухстороннему).
Пример 12
В эксперименте использовали взрослых самцов крыс Sprague Dawley массой примерно 200 г на момент начала эксперимента. Их поселяли в группах по четыре особи в клетки Macrolon Type 3 (810 см2) с подстилкой из опилок. Животных содержали при 12:12 ч цикле свет-темнота, причем свет включали в 6 часов утра, при свободном доступе к водопроводной воде и пище (Promikliba Kaiseraugst, Switzerland). Поддерживали постоянную комнатную температуру (21-23°C) и влажность (55-65%).
Приподнятый плюс-лабиринт состоял из двух открытых ответвлений, которые были перпендикулярны двум закрытым ответвлениям (каждое ответвление имело ширину 10 см × длину 50 см), исходящим из небольшой открытой центральной области. Описанный лабиринт был изготовлен из серой поливинилхлоридной пластмассы и помещен на высоте 50 см от пола. Открытые ответвления, которые находились друг напротив друга, были огорожены стенкой, высотой 48 см. Лабиринт размещали в звукоизолированной комнате для наблюдений с регулируемым освещением (200 люкс на центральной платформе плюс-лабиринта). Крыс тестировали в случайном порядке. Тест начинался с помещения животного на центральную площадку мордой к открытому ответвлению. Продолжительность теста составляла 5 минут. Для чистки лабиринта перед помещением следующего животного применяли 70% этанол.
Плюс-лабиринт помещали в середине пространства, огороженного черным материалом, причем за животными наблюдали с помощью видеокамеры, находящейся в закрытом контуре, смонтированном над лабиринтом. Анализ поведения проводили с использованием компьютеризованной системы (Ethovision, Noldus Information Technology, The Netherlands).
Каждая группа состояла из 9-12 животных. Каждое животное использовали только в одном эксперименте. Крысам вводили либо (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты в дозировках 3,10 и 30 мг/кг, носитель (0,3% Tween 80/0,9% NaCl) или хлордиазепоксид 10 мг/кг в качестве положительного контроля. После введения препаратов крыс закрывали в маленьких клетках без опилок и воды. Через час их помещали в плюс-лабиринт.
Параметром, выбранным для отражения анксиолитической активности препарата, являлось время (сек), проведенное в открытых ответвлениях, расстояние (см), пройденное в открытых ответвлениях и число переходов с центральной платформы в открытые ответвления. Параметром, использованным для количественного отображения двигательной активности, являлось расстояние, преодолеваемое за секунду (скорость) в закрытых ответвлениях.
(4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты и хлордиазепоксид суспендировали в дистиллированной воде, содержавшей 0,3% Tween 80/ 0,9% NaCl. Соединения вводили перорально (принудительное кормление) в объеме 5 мл/кг массы тела. Контрольные животные получали эквивалентные по объему инъекции носителя.
Статистический анализ для (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты проводили с использованием однопараметрического дисперсионного анализа (ANOVA), с последующим применением апостериорного критерия Даннетта. Значения p менее 0,05 считались статистически значимыми. Действие хлордиазепоксида анализировали с применением t-критерия.
(4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты вызывал дозозависимое увеличение времени, проведенного в открытых ответвлениях, пройденной в них дистанции и числа заходов в эти открытые ответвления (фиг.60-64). Самая низкая доза, которая позволяла добиться статистически значимых изменений, составляла 10 мг/кг (заходы в открытые ответвления) и 30 мг/кг (время, проведенное в открытых ответвлениях, и пройденное расстояние). (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты увеличивал также скорость в закрытых ответвлениях, что имело статистическую значимость при дозировках 10 и 30 мг/кг, аналогично хлордиазепоксиду. Максимальный эффект для всех измеренных параметров наблюдался при 30 мг/кг.
В тесте в приподнятом плюс-лабиринте, (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амид 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты статистически значимо и дозозависимо увеличивал время, проведенное в открытых ответвлениях лабиринта, пройденное расстояние и количество заходов в открытые ответвления. Эти результаты дают in vivo доказательство анксиолитических свойств (4-метокси-7-морфолин-4-ил-бензотиазол-2-ил)амида 4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоновой кислоты.
Рядовому специалисту в соответствующей области техники должно быть легко понятно, что возможны другие подходящие модификации и адаптации способов и применений, описанных в настоящей заявке, и они могут быть сделаны без выхода за пределы объема изобретения или каких-либо вариантов его осуществления. Хотя изобретение было описано применительно к определенным вариантам осуществления, не предполагается, что изобретение ограничено конкретными описанными формами, но, напротив, имеется в виду, что изобретение охватывает такие альтернативы, модификации и эквиваленты, которые могут быть включены в объем изобретения и соответствуют его сути, которые определены нижеследующей формулой изобретения.
Класс A61K31/5377 не конденсированные и содержащие дополнительно гетероциклические кольца, например тимолол
Класс A61K45/00 Лекарственные препараты, содержащие активные ингредиенты, не отнесенные к группам 31/00
Класс A61P25/00 Лекарственные средства для лечения нервной системы
