способ диагностики острой ожоговой токсемии у детей

Формула изобретения

Способ диагностики острой ожоговой токсемии у детей, отличающийся тем, что определяют в сыворотке крови больного количество лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности CD3⁺; CD4 ⁺; CD8⁺, интерферон (INF ) и интерлейкин 4 (IL-4); при снижении в 1,5 сигмальном интервале CD3⁺ до 51,7-59,9%; CD4⁺ - 20,3-31,1%; CD8⁺ - 13,8-19,6% и при повышении в 1,5 сигмальном интервале IL-4 в популяциях клеток CD4⁺ до 22,3-27,7%, IL-4 в клетках CD8⁺ - 27,4-31,6% и INF в клетках CD8⁺ - 13,2-18,0% ставят диагноз острой ожоговой токсемии у детей.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно, к иммунологической лабораторной диагностике и может быть использовано для постановки диагноза острой ожоговой токсемии у детей.

До настоящего времени одной из наиболее сложных проблем здравоохранения является ожоговая патология, имеющая медицинскую и социально-экономическую значимость. Дети по сравнению со взрослыми чаще подвержены ожоговому травматизму и представляют собой особую группу риска. Они не способны распознавать и оценивать опасность окружающей среды, и поэтому в большей степени подвержены ожоговому травматизму. Термические ожоги у детей являются частым видом травм и составляют 10-50% детского бытового травматизма [Карваял Х.Ф. Ожоги у детей / Карваял Х.Ф., Парке Д.Х. - Пер. с англ. - М.: Медицина. - 1990. - 512 с.; Нуштаев И.А. Социально-медицинские аспекты ожогов у детей / И.А.Нуштаев, Нуштаев А.В. // Детская хирургия. - 1999. - № 2. - С.22-24.].

По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) и Детского фонда ООН (ЮНИСЕФ), в мире от термических травм смертность у детей занимает 3-е место среди всех травматических факторов, после аварий на дорогах и утопления [Всемирный доклад о профилактике детского травматизма. - Всемирная организация здравоохранения и ЮНИСЕФ. -, Женева, 2008. - 39 с.]. В настоящее время летальность в результате ожогов у детей в стационарах России составляет около 1,2% [Алексеев А.А. Актуальные вопросы организации и состояние медицинской помощи пострадавшим от ожогов в Российской Федерации / Алексеев А.А., Лавров В.А. - II съезд комбустиологов России 2-5 июня 2008 года. Сборник научных трудов. - Москва. - 2008. - С.3-5]. При оценке летальности по периодам ожоговой болезни, в стадии острой ожоговой токсемии умирает наибольшее количество больных и достигает 45,5% [Будкевич Л.И., Воздвиженский С.И., Окатьев B.C., Степанович В.В. Летальность при термических поражениях у детей: состояние, причины и пути ее снижение. // Российский вестник перинатологии и педиатрии.-2004. - № 4. - С.51-54.].

В настоящее время имеются единичные работы, посвященные изучению состояния иммунной системы у детей с термическими поражениями [Воздвиженский С.И. Прогностическое значение изменений иммунной системы у детей с термическими поражениями / С.И.Воздвиженский, А.П.Продеус, Т.С.Астамиров // Мат. науч. конф. «Актуальные проблемы травматологии и ортопедии», проводимой в рамках международного форума «Человек и травма». - Нижний Новгород, 2001. - С.189; Артемьев С.А. Состояние иммунитета и его коррекция стресспротекторами у детей с тяжелой ожоговой травмой / С.А. Артемьев, Н.И. Камзалакова, Г.В. Булыгин, И.П. Назаров // Сибирский медицинский журнал. - 2006. - № 6. - С.53-54].

Всесторонний анализ иммунных нарушений, происходящих в организме больных с термическими поражениями, позволяет оценить тяжесть патогенетических изменений в организме, поставить объективный диагноз заболевания на основании иммунологических сдвигов в организме, а также оптимизировать проведение патогенетической терапии, снизить количество осложнений и летальность заболеваний.

Известен способ диагностики острой ожоговой токсемии на основании клинико-лабораторных исследований (повышение температуры тела, лейкоцитоз со сдвигом формулы влево, анемию, снижение белка крови за счет альбуминов, расстройство водно-электролитного баланса, нарушение моторной функции кишечника, расстройство функций ЦНС) [Пахомов С.П. Хирургия ожогов у детей. - Нижний Новгород. - 1997. С. 207]. Недостатками данного способа являются: субъективность оценки клинических данных и низкая достоверность диагностики за счет неполного объема лабораторного обследования пациента.

Описан способ диагностики ожоговой токсемии [патент RU № 2424521 от 20.07.2011 г.] по результатам исследования физико-химических свойств сыворотки крови больного. Предложенный способ трудоемок, требует специально обученный персонал и использование сложных математических расчетов. Данный метод неприемлем для использования в клинических лабораториях медицинских учреждений.

В качестве прототипа выбран способ диагностики острой ожоговой токсемии у детей [Cytokine expression profile over time in severely burned pediatric patients // Shock. - 2006. - Vol.26. - № 1. - P.13-19]. Способ основан на оценке иммунного статуса у больных детей. При повышении концентрации в сыворотке крови цитокинов IL-1 , IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12 p70, IL-13, IL-17, колониестимулирующих факторов, гранулоцита (G-CSM), макрофагального гранулоцита (GM-CSM), IFN-g, белока хемоаттрактанта моноцита 1 (МСР-1), макрофагального воспалительного белока 1 (MIP-1D и TNF) в сыворотке крови. Недостатками данного способа являются: трудоемкость проведения исследования сывороток крови, дороговизна реактивов, недостаточная специфичность и чувствительность, т.к. концентрация цитокинов в сыворотке зависит от плазмопотери при ожогах.

Задачей настоящего изобретения является повышение объективности, достоверности и точности диагностики в ранние сроки заболевания на основании оценки показателей иммунологических маркеров острой ожоговой токсемии у детей.

Технический результат - простой, не требующий больших материальных затрат и основан на исследовании лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности CQ3⁺, CD4⁺; CD8⁺ , интерферон (INF ) и интерлейкин 4 (IL-4), наиболее активно реагирующих при патогенетических изменениях в организме при острой ожоговой токсемии у детей. Техническое творчество включает анализ иммунологических тестов, характеризующих нарушения в иммунном статусе у ожоговых больных, и выбор наиболее существенных тестов, характеризующих патологический процесс при острой ожоговой токсемии у детей. Для оценки признаков острой ожоговой токсемии у детей использовали диапазон среднего квадратического отклонения в 1,5* от среднего арифметического значения (М), т.к. этот диапазон является наиболее предпочтительным при данной патологии [Патент RU № 2134419 от 10.08.1999].

Технический результат предложенного нами способа основан на результатах анализа патогенетических и иммунологических сдвигов в организме больного. В сыворотке крови определяют количество лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности CD3⁺; CD4⁺; CD8⁺ , интерферон (INF ) и интерлейкин 4 (IL-4), а диагноз острой ожоговой токсемии у детей ставят на основании снижения в 1,5 сигмальном интервале CD3⁺ до 51,7-59,9%; CD4⁺ - 20,3-31,1%; CD8⁺ - 13,8-19,6% и повышения в 1,5 сигмальном интервале IL-4 в популяциях клеток CD4⁺ до 22,3-27,7%, IL-4 в клетках CD8⁺ - 27,4-31,6% и INF в клетках CD8⁺ - 13,2-18,0%.

Технический результат достигается тем, что согласно изобретения определяют в сыворотке крови больного количество лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности CD3⁺; CD4 ⁺; CD8⁺, интерферон (INF ) и интерлейкин 4 (IL-4); при снижении в 1,5 сигмальном интервале CD3⁺ до 51,7-59,9%; CD4⁺ - 20,3-31,1%; CD8⁺ - 13,8-19,6% и при повышении в 1,5 сигмальном интервале IL-4 в популяциях клеток CD4⁺ до 22,3-27,7%, IL-4 в клетках CD8⁺ - 27,4-31,6% и INF в клетках CD8⁺ - 13,2-18,0% ставят диагноз острой ожоговой токсемии у детей.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образам. Забор крови у детей проводят в утренние часы на 3-7-е сутки после получения травмы. Определяют в сыворотке крови количество лимфоцитов с помощью панели моноклональных антител к поверхностным антигенам CD3, CD4, CD8 стандартным методом [Розенберг В.Я., Бутыльский А.Н. // Возрастные особенности иммунного статуса здоровых жителей Забайкалья // Иммунология. - 2007. - № 3. - С.177-180]. Внутриклеточные цитокины интерлейкин 4 (IL-4) и интерферон (INF ) определяют также стандартным методом [Лагерева Ю.Г., Богданова Л.В., Дружинина А.Ю., Меньшикова С.В., Бейкин Я.Б. // Содержание Т-лимфоцитов первого и второго порядка у детей разных возрастных групп. // Уральский медицинский журнал. - 2006. - № 5. - С.3-7]. Диагностику острой ожоговой токсемии у детей проводят по содержанию лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности CD3⁺; CD4⁺; CD8⁺, интерферону (INF ) и интерлейкину 4 (IL-4). Снижение CD3⁺ в 1,5 сигмальном интервале до 51,7-59,9%; CD4⁺ - 20,3-31,1%; CD8⁺ - 13,8-19,6% и повышение IL-4 в популяциях клеток CD4⁺ в 1,5 сигмальном интервале до 22,3-27,7%, IL-4 в клетках CD8⁺ в интервале - 27,4-31,6% и INF в клетках CD8⁺ в интервале - 13,2-18,0% свидетельствует об острой ожоговой токсемии у детей.

Примеры практического использования предлагаемого способа.

Пример 1.

Больной С-н Н.С. в возрасте 1 года (ист. б-ни № 34685) поступил в ожоговое отделение ГБУЗ ТО «ОКБ № 1» по поводу ожога горячей водой на площади 25% поверхности тела (ожог туловища, верхних конечностей, кистей, промежности, нижних конечностей, стоп II-III^аб степени) в состоянии тяжелого ожогового шока.

Забор крови провели в утренние часы, на 3-е сутки после получения травмы. Определяли в сыворотке крови содержание лимфоцитов с помощью панели моноклональных антител к поверхностным антигенам CD3, CD4, CD8 по методу В.Я.Розенберга с соавт. (2007). Внутриклеточные цитокины интерлейкин 4 (IL-4) и интерферон (INF ) определяли по методу Ю.Г. Лагеревой с соавт. (2006).

В 1,5 сигмальном интервале у больной определили в крови: CD3+53%; CD4⁺ 30%; CD8⁺ 18%; IL-4/4-24%; IL-4/8-28%, INF /8-15,9%, что свидетельствует об острой ожоговой токсемии. На 5-е сутки после получения ожога у больной диагностирована клинически выраженная картина острой ожоговой токсемии.

На основании клинических и иммунологических данных проведен комплекс лечебной терапии. Через 26 суток больной выписан в удовлетворительном состоянии из стационара.

Пример 2.

Больной Л-ин А.П. 13 лет (ист. б-ни № 32141) поступил в ожоговое отделение ГБУЗ ТО «ОКБ № 1» по поводу ожога пламенем на площади 45% поверхности тела (туловища, промежности, нижних конечностей, стоп II-III ^аб степени) в состоянии тяжелого ожогового шока.

Забор крови провели в утренние часы на 3-е сутки после получения травмы. Определили содержание лимфоцитов с помощью панели моноклональных антител к поверхностным антигенам CD3, CD4, CD8 по методу В.Я.Розенберга с соавт. (2007). Внутриклеточные цитокины интерлейкин 4 (IL-4) и интерферон (INF ) определяли по методу Ю.Г. Лагеревой с соавт. (2006).

В 1,5 сигмальном интервале у больного определили в крови: CD3⁺ 52%; CD4⁺ 24%; CD8⁺ 18%; IL-4/4-23%; IL-4/8-28,4%, INF /8-15,6%, что свидетельствует об острой ожоговой токсемии. На 5-е сутки после получения ожога у больного диагностирована клинически выраженная картина острой ожоговой токсемии.

На основании клинических и иммунологических данных больному назначено патогенетическое лечение и комплекс лечебно-оздоровительных процедур. На 26-е сутки больной выписан из стационара в удовлетворительном состоянии.

Приведенные примеры иллюстрируют возможность применения данного способа для диагностики острой ожоговой токсемии у детей.

Способ диагностики острой ожоговой токсемии у детей апробирован на базе ожогового отделения ГБУЗ ТО «ОКБ № 1». Под наблюдением находился 21 больной в возрасте от 1 до 17 лет с ожоговой поверхностью площади тела 15-45%.

В таблице 1 представлены данные обследования здоровых детей и больных с острой ожоговой токсемией в возрасте от 1 до 17 лет.

Преимущества предложенного способа по сравнению с прототипом представлены в таблице 2.

Предложенный способ лабораторной диагностики острой ожоговой токсемии у детей легко воспроизводим, не требует больших материальных затрат, в ранние сроки позволяет поставить диагноз заболевания, сокращает время проведения лабораторных исследований по сравнению с прототипом и выполним в условиях медицинских учреждений. Предложенный способ позволяет диагностировать острую ожоговую токсемию у детей в 95-100% случаев.

Общий экономический эффект на обследование 100 больных с ожоговой болезнью по сравнению с прототипом составил 352500 рублей.

Таблица 1
Иммунологические показатели (в %) у здоровых детей и больных острой ожоговой токсемией в возрасте от 1 года до 17 лет (n=21)
Иммунологические показатели	Здоровые дети М±m	Больные М±m		Граничное значение (±1,5 )
				Минимальное	Максимальное
CD3+	75,7±0,9	55,8±0,7	2,7	51,7	59,9
CD4+	43,2±0,8	25,7±1,4	3,6	20,3	31,1
CD8+	26,7±0,8	16,7±0,9	1,9	13,8	19,6
INF /8+	8,3±1,5	15,6±0,4	1,6	13,2	18,0
IL-4/4	1,1±0,4	23,5±0,7	1,8	22,3	27,7
IL-4/8	0,5±0,2	29,5±0,6	1,4	27,4	31,6