способ моделирования экспериментального аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва

Формула изобретения

Способ моделирования аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва, характеризующийся тем, что через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей аденовирус типа 6, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 10000 ТЦД₅₀, при этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока, начиная с 7 суток после заражения.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболевания в экспериментальной офтальмологии.

При введении аденовируса под конъюнктиву глазного яблока кролика на 3-5 сутки происходило развитие аденовирусного конъюнктивита, ограниченного местом введения суспензии вируса (М.Т. Азнабаев, В.Б. Мальханов, Аденовирусные и хламидийные заболевания глаз, 1995, С.54-59).

При введении в переднюю камеру глаза кролика суспензии, содержащей аденовирус типа 6 или 8 (инфекционные титры соответственно 10⁴ и 10² ТДЦ _50/0,1 мл.), адаптированный к перевиваемой линии клеток НЕ_р-2 или HELA, гистологически развивался серозный ирит, который проходил к 28 суткам опыта (М.Т. Азнабаев, В.Б. Мальханов, Аденовирусные и хламидийные заболевания глаз, 1995, С.54-59).

Также показано развитие экспериментального аденовирусного увеита морских свинок при введении аденовируса типа 6 в переднюю камеру глаза. Гистологически выявляли поражения роговицы в зоне лимба, радужной оболочки, плоской части цилиарного тела. Воспалительные изменения в хориоидее были обнаружены лишь на 7 сутки после заражения (М.Т. Азнабаев, В.Б. Мальханов, Аденовирусные и хламидийные заболевания глаз, 1995, С.54-59).

Во всех выше изложенных экспериментальных работах поражение зрительного нерва при экспериментальных увеитах не происходило.

Наиболее близким аналогом изобретения является способ моделирования увеита аденовирусной этиологии, заключающийся в интраокулярном заражении экспериментального животного, отличающийся тем, что в переднюю камеру глаза экспериментального животного инсулиновой иглой вводят аденовирус в дозе, равной или превышающей 10 ³ ТДЦ_50/0,1 мл для перевиваемой культуры НЕр-2 с последующим исследованием сосудистой оболочки глаза с 14 по 28 день после заражения (заявка RU 97109970, опубликована 27.05.1999.).

При моделировании аденовирусной инфекции глаза экспериментальных животных, чем меньше размер глазного яблока, тем чаще развивается травматическое повреждение оболочек глазного яблока. Более того, во всех экспериментальных исследованиях для введения вируса простого герпеса использовалась инсулиновая игла больших размеров (не менее 22G), которая травмировала оболочки глаза и вызывала неспецифическую воспалительную реакцию.

Кроме того, при моделировании аденовирусной инфекции глазного яблока аденовирус типа 6 был адаптирован к клеткам перевиваемых клеток НЕ_р-2, HELA и вводился только под конъюнктиву, на роговицу или в переднюю камеру глаза. Эти способы не приводили к поражению зрительного нерва.

Задачей предлагаемого изобретения является создание модели экспериментального аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва, с высокой частотой его воспроизведения, наиболее приближенной к указанному заболеванию у человека и уменьшение вероятности травмирования оболочек глаза иглой.

Технический результат при использовании изобретения - повышение частоты и точности моделирования аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва, предотвращение развития не желательного сопутствующего травматического повреждения оболочек глаза.

Предлагаемый способ моделирования аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва, осуществляется следующим образом. Иглой 33 G кроликам породы шиншилла в стекловидное тело глаза через плоскую часть цилиарного тела вводят культуральную жидкость, содержащую аденовирус типа 6, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи в дозе 10000 ТЦЦ ₅₀. Проводят гистологические исследования удаленного глазного яблока, начиная с 7-х суток после заражения, которые позволяют изучить течение данного заболевания.

Десяти кроликам (20 глаза) породы шиншилла через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело обоих глаз иглой 33 G вводили по 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей 10000 ТЦД₅₀ аденовируса типа 6, адаптированного к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, полученной по стандартной методике [Вирусология. Методы: Пер. с англ // Под. ред. Б. Мейхи. - М.: Мир, 1988. - С.254-269.]. На 7 и 21 день произвели забой животных и проводили гистологические исследования удаленных глазных яблок. На 7-е сутки выявляли острый воспалительный процесс в цилиарном теле и зрительном нерве. В цилиарном теле наблюдали выраженный отек, диффузную воспалительную инфильтрацию, представленную нейтрофильными лейкоцитами, эозинофилами, моноцитами и лимфоцитами, местами наблюдали формирование абсцессов. Эпителий с признаками вакуолизации цитоплазмы, местами слущен. Одновременно в толще зрительного нерва, между нервными волокнами выявляли скопление отечной жидкости, очаги лимфоцитарной инфильтрации с примесью единичных нейтрофилов, а также периваскулярную инфильтрацию лимфоцитами и единичными лейкоцитами. В коллатеральных сосудах глазной артерии и вены зрительного нерва отмечено увеличение проницаемости их стенок, экссудация плазмы крови в периваскулярную зону и тканевые структуры. На 21-е сутки в гистологических срезах выявляли усиление воспалительной реакции в цилиарном теле, радужной оболочке и зрительном нерве. Степень инфильтрации воспалительными клетками цилиарного тела возросла. Усилилось полнокровие сосудов, определялись участки кровоизлияний. В цилиарном теле наблюдали диффузную инфильтрацию ткани лимфоцитами, моноцитами, единичными нейтрофилами, в области воспаления появились плазмоцитарные клетки. Клетки эпителия выглядели набухшими, с признаками вакуолизации, местами они были слущены. Эпителиальная выстилка разрушена, гомогенизирована. В плоской части цилиарного тела определялось изъязвление внутреннего ретинального слоя, была замечена инфильтрация клетками воспаления. В зрительном нерве выявлен очаг деструкции нервной ткани с массивным геморрагическим пропитыванием, кистозными расширениями, лимфоцитарно-макрофагальной инфильтрацией, дистрофически измененными нейроцитами.

Пример. Кролику № 9 породы шиншилла массой 2,15 кг через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело обоих глаз иглой 33 G вводили 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей 10000 ТЦД₅₀ аденовируса типа 6, адаптированного к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи. На 7 и 21 день произвели забой животных и провели гистологические исследования удаленных глазных яблок. На 7-е сутки выявляли острый воспалительный процесс в цилиарном теле и зрительном нерве. В цилиарном теле наблюдали выраженный отек, диффузную воспалительную инфильтрацию, представленную нейтрофильными лейкоцитами, эозинофилами, моноцитами и лимфоцитами, местами наблюдали формирование абсцессов. Эпителий с признаками вакуолизации цитоплазмы, местами слущен. Одновременно в толще зрительного нерва, между нервными волокнами выявляли скопление отечной жидкости, очаги лимфоцитарной инфильтрации с примесью единичных нейтрофилов, а также периваскулярную инфильтрацию лимфоцитами и единичными лейкоцитами. В коллатеральных сосудах глазной артерии и вены зрительного нерва отмечено увеличение проницаемости их стенок, экссудация плазмы крови в периваскулярную зону и тканевые структуры. На 21-е сутки развитию увеита соответствовали следующие гистологические изменения. Степень инфильтрации воспалительными клетками цилиарного тела возросла. Усилилось полнокровие сосудов, имелись участки кровоизлияний. В цилиарном теле наблюдали диффузную инфильтрацию ткани клетками воспаления, также наблюдали появление плазмоцитарных клеток. Эпителиальные клетки выглядели набухшими, с признаками вакуолизации, местами слущены. Эпителиальная выстилка разрушена, гомогенизирована. В плоской части цилиарного тела определялось изъязвление внутреннего ретинального слоя, была замечена инфильтрация клетками воспаления. В зрительном нерве выявлен очаг деструкции нервной ткани с массивным геморрагическим пропитыванием, кистозными расширениями, лимфоцитарно-макрофагальной инфильтрацией, дистрофически измененными нейроцитами.

Таким образом, предлагаемый способ моделирования аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва, позволяет создать модель, наиболее приближенную к данному заболеванию у человека. Кроме того, отсутствует травматическое повреждение оболочек глазного яблока и хрусталика.