циклогексиламмониевая соль 2-[3-метил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)-1-этилксантинил-8-тио]уксусной кислоты, проявляющая антитромбоэмболическое действие

Формула изобретения

1. Циклогексиламмониевая соль 2-[3-метил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)-1-этилксантинил-8-тио]уксусной кислоты формулы

2. Соединение по п.1, проявляющее антитромбоэмболическое действие.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической химии и фармакологии, и может быть использовано для создания новых лекарственных средств профилактики тромбоэмболических состояний.

Прототипом и препаратом сравнения является пентоксифиллин (3,7-диметил-1-(5-оксогексил)ксантин), который длительно и успешно применяется в практической медицине и имеет доказанную эффективность в качестве средства профилактики и лечения тромбоэмболических заболеваний и осложнений (Hsu, C.Y. Pentoxifylline in acute nonhemorrhagic stroke. A randomized, placebo-controlled double-blind trial / C.Y.Hsu, J.W.Norris, E.L.Hogan, P.Bladin, H.B.Dinsdale, F.M.Yatsu, M.P.Earnest, P.Scheinberg, L.R.Caplan, H.R.Karp // Stroke. - 1988. - Vol.19. - № 6. - P.716-722. De Sanctis, M.T.Treatment of retinal vein thrombosis with pentoxifylline: a controlled, randomized trial / M.T. De Sanctis, M.R.Cesarone, G.Belcaro, L.Incandela e.a. // Angiology. - 2002. - № 53. - P.72-73).

Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, проявляющих антитромбоэмболическое действие.

Технический результат - получение вещества, проявляющего антитромбоэмболическое действие.

Сущность изобретения: циклогексиламмониевая соль 2-[3-метил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)-1-этилксантинил-8-тио]уксусной кислоты (Ia) формулы

проявляющая антитромбоэмболическое действие.

Заявляемое соединение синтезировали следующим образом.

Соединение Ia синтезируют из 8-бром-3-метил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)-1-этилксантина (Тиетанильная защита в синтезе 1-алкил-8-бром-3-метил-3,7-дигидро-1H-пурин-2,6-дионов / Ф.А.Халиуллин, Ю.В.Шабалина, P.M.Шарафутдинов // ЖОрХ. - 2010. - Т. 46, № 5. - С.698-701) в 2 стадии. При кипячении 8-бром-3-метил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)-1-этилксантина с 2-кратным мольным избытком тиогликолевой кислоты в водной среде в присутствии гидроксида калия образуется 2-[3-метил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)-1-этилксантинил-8-тио]уксусная кислота, взаимодействие которой с циклогексиламином в среде ацетона приводит к циклогексиламмониевой соли [3-метил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)-1-этилксантинил-8-тио]уксусной кислоты.

Пример 1. Синтез соединения Ia.

К раствору 0,84 г (15 ммоль) гидроксида калия в 50 мл воды добавляют 0,92 г (10 ммоль) тиогликолевой кислоты и 1,89 г (5 ммоль) 8-бром-3-метил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)-1-этилксантина, кипятят в течение 1 часа. Охлаждают, нейтрализуют 3,7% раствором хлористоводородной кислоты до рН 2. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой, сушат. Получают 1,52 г (78%) 2-[3-метил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)-1-этилксантинил-8-тио]уксусной кислоты. Т_пл 201-203°С (из воды).

Элементный анализ.

Найдено, %: С 40,2 Н 4,2 N 14,4 - C₁₃H₁₆N₄O₆ S₂

Вычислено, %: С 40,4 Н 4,1 N 14,6

ИК спектр (таблетки с KBr), , см^-1: 1133,6; 1312,0 (SO₂ вал.), 1650,6; 1658,5; 1666,3; 1671,6; 1693,6; 1699,1 (С=С вал., C=N вал., С=O вал.), 2380-3030 (acc. O-Н вал.).

Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃), , м.д.: 1,26 (3Н, т, J 7,0 Гц, СН₃), 3,55 (3Н, с, 3-СН₃), 4,06-4,18 (4Н, м, SCH₂ и 1-СН ₂), 4,35-4,44 (2Н, м, S(CH)₂), 5,17-5,28 (2Н, м, S(CH)₂), 5,53-5,66 (1Н, м, 7-СН).

К раствору 1,94 г (5 ммоль) 2-[3-метил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)-1-этилксантинил-8-тио]уксусной кислоты в 80 мл ацетона добавляют 0,64 г (6,5 ммоль) циклогексиламина. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают ацетоном, сушат. Получают 2,18 г (89%) соединения Ia. Т_пл 223-225°С (из диоксана).

Элементный анализ.

Найдено, %: С 46,8 Н 6,0 N 14,4 - C₁₉H₂₉N₅ O₆S₂

Вычислено, %: С 46,7 Н 6,2 N 14,6

ИК спектр (таблетки с KBr), , см^-1: 1135,5; 1320,1 (SO₂ вал.), 1661,5; 1698,6 (С-С вал., C=N вал., СО вал.), 2400-3150 (N ⁺H₃ вал.).

Спектр ЯМР ¹ H (DMSO-d₆), , м.д.: 1,09-1,31 (9Н, м, СН₃ и (СН₂ )₃), 1,51-1,91 (4Н, м, 2СН₂), 2,82-2,93 (1Н, м, NCH), 3,42 (3Н, с, 3-СН₃), 3,79 (2Н, с, SCH ₂), 3,94 (2Н, к, J 6,9 Гц, 1-СН₂), 4,50-4,61 (2Н, м, S(CH)₂), 5,00-5,11 (2Н, м, S(CH)₂ ), 5,52-5,65 (1Н, м, 7-СН). Заявляемое соединение представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в воде, при нагревании в этаноле и диметилсульфоксиде.

Острая токсичность.

Определение острой токсичности проводили по методу Deichman и Le Blanc (Саноцкий И.В. Методы определения токсичности и опасности химических веществ. - М.: Медицина, 1989. - 150 с.). Для этого крысам внутрибрюшинно вводили исследуемые соединения в нарастающих дозировках с шагом в 100 мг/кг. Наблюдение за лабораторными животными проводились в течение 2 недель после инъекции. За ЛД₅₀ принималась наименьшая доза, вызвавшая летальный исход.

Пример 2. Острая токсичность

При изучении ЛД₅₀ заявляемого соединения установлено, что его токсичность существенно меньше (в 2,4 раза) токсичности препарата сравнения: по классификации К.К.Сидорова при внутрибрюшинном введении он относится к IV классу опасности (малотоксичные) (таблица 1).

Антитромбоэмболическое действие соединения Ia.

Антитромбоэмболическое действие соединения Ia определяли на модели тромбоэмболии легочной артерии по методу DiMinno G. и Silver M.J. (DiMinno, G.S. Mouse antithrombotic assay: a simple method for the evaluation of antithrombotic agents in vivo. Potentiation of antithrombotic activity by ethyl alcohol / G.S.DiMinno // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1983. - V. 225. - P.57-60). В хвостовую вену мышей вводили смесь растворов коллагена и адреналина (0,5 мг/кг и 0,06 мг/кг соответственно). В качестве критерия эффективности исследуемых соединений отмечали количество выживших животных по сравнению с контрольной группой. За 1 час до моделирования тромбоэмболии внутрибрюшинно вводили исследуемые соединения в эквимолярных дозах: 70 мг/кг соединения Ia и 40 мг/кг пентоксифиллина. Контрольной группе мышей вводился физиологический раствор в аналогичных объемах. Статистическая обработка данных проводилась с помощью теста ².

Пример 3. Антитромбоэмболическое действие соединения Ia.

При изучении коллаген-адреналинового тромбоза соединение Ia и пентоксифиллин в разной степени уменьшали гибель животных.

При введении раствора, содержащего 0,5 мг коллагена и 0,06 мг адреналина из расчета на килограмм массы тела, в хвостовую вену животным контрольной группы, в течение уже первого часа после введения индукторов тромбоза наблюдали гибель животных. В первый час после инъекции гибель составляла 60% мышей, в первые 3 суток падеж составил 100%.

Пентоксифиллин уменьшал гибель мышей при моделировании тромбоэмболии легочной артерии по сравнению с контролем. Выживаемость составила 58,3%. Основной падеж пришелся на первые сутки после введения индукторов тромбоза. В экспериментальной группе у животных, получивших соединение Ia, гибель значимо меньше в сравнении с контролем и препаратом сравнения. Выживаемость составила 75,1%, основной падеж пришелся в первые сутки эксперимента (таблица 2).

Выживаемость животных в группе, получавших соединение Ia, значимо превышала таковую в контрольной группе и в 1,3 раза в группе у животных, получавших пентоксифиллин.

Таким образом, заявляемое соединение Ia оказывает выраженное антитромбоэмболическое действие, превышающее действие пентоксифиллина, и выгодно отличается более низкой токсичностью.

Таблица 1
Параметры токсичности препарата сравнения и заявляемого соединения
Соединение	ЛД50, мг/кг
Пентоксифиллин	250
Соединение Ia	>600

Таблица 2
Показатели выживаемости при моделировании тромбоэмболии легочных артерий, n=12
Соединение	Контроль	Пентоксифиллин	Соединение Ia	Р 2
Выживаемость, %	0,0	58,3*	75,1*	<0,05
Примечание: * - уровень статистической значимости различий признаков контрольной и опытной групп (P1<0,01); P2 - уровень статистической значимости различий признаков групп получавших пентоксифиллин и заявляемое соединение Ia