способ диагностики синдрома инсулинорезистентности

Формула изобретения

Способ диагностики синдрома инсулинорезистентности, позволяющий выявлять метаболические изменения в организме, включающий исследование слюны больного, отличающийся тем, что к капле слюны больного добавляют каплю кристаллообразующего вещества - 0,9%-ный раствор хлорида натрия, выдерживают полученный препарат в течение 24 ч в горизонтальном положении при комнатной температуре, влажности 50-70%, вдали от прямых солнечных лучей и нагревательных приборов и исследуют под микроскопом, при этом по наличию в кристаллограмме округлых, неправильной формы кристаллов в поле зрения на фоне четких ромбовидных центров кристаллизации с расходящимися лучами, определяют наличие инсулинорезистентности, при отсутствии отдельных округлых, неправильной формы кристаллов на всем поле зрения судят об отсутствии инсулинорезистентности.

Описание изобретения к патенту

Предлагаемый способ относится к медицине, в частности к диагностике синдрома инсулинорезистентности.

Под инсулинорезистентностью понимают снижение биологического ответа к действию инсулина. Синдром инсулинорезистентности представляет комплекс метаболических нарушений, являющихся факторами риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, и включает ряд патологических состояний таких, как нарушение толерантности к глюкозе, абдоминальное ожирение, дислипидемия, артериальная гипертензия, гиперурикемия, гиперкоагуляция, микроальбуминемия, неалкогольная жировая болезнь печени.

В литературе синдром инсулинорезистентности известен под другими названиями: полиметаболический синдром (Avoraga Р., 1965 г.), метаболический трисиндром (Camus J., 1966 г.), синдром «изобилия» (Mthnert А., 1968 г.), синдром X (Reaven G., 1988 г.), смертельный квартет (Kaplan N., 1989 г.), метаболический синдром (Hanefeld М., 1991 г.), гормональный метаболический синдром (Bjortntorp Р., 1991 г,), смертельный секстет (Enzi G., 1994), метаболический сосудистый синдром (Hanefeld М., 1997 г.).

Существует несколько методов диагностики синдрома инсулинорезистентности:

1. Эугликемический инсулиновый клэмп

Пациенту одновременно проводят инфузию инсулина и глюкозы, чем больше глюкозы требуется ввести за единицу времени для поддержания стабильного уровня гликемии на фоне инфузии инсулина, тем больше пациент чувствителен к действию инсулина («Неалкогольная жировая болезнь печени в вопросах и ответах» Мехтиев С.Н., Мехтиева О.А., Зиновьева Е.Н. СПбГМУ им. академика И.П. Павлова, учебное пособие, 2011, стр.23).

Недостатки метода: инвазивен, неточность математических подсчетов, трудоемок, материальные затраты, причиняет неудобства больному.

2. Минимальная модель клэмпа

Метод основан на многократном определении уровня глюкозы и инсулина крови при проведении теста на толерантность к глюкозе, далее с помощью компьютерной обработки данных вычисляется индекс чувствительности к инсулину («Неалкогольная жировая болезнь печени в вопросах и ответах» Мехтиев С.Н., Мехтиева О.А., Зиновьева Е.Н. СПбГМУ им. академика И.П. Павлова, учебное пособие, 2011, стр.23).

Недостатки метода: инвазивен, неточность математических подсчетов, трудоемок, материальные затраты, причиняет неудобства больному.

3. Различные индексы для оценки синдрома инсулинорезистентности

Рассчитываются индексы по соотношению концентраций инсулина и глюкозы плазмы натощак и/или после пищевой нагрузки. Наиболее простым и часто применяемым в клинической практике является индекс HOMA-IR (Homeostasis Model Assessment), разработанный D. Matthews: HOMA-IR=ИРИ (мкЕд/мл)×ГПН (моль/л)/22,5, где ИРИ - иммунореактивный инсулин, ГПН - глюкоза плазмы натощак («Неалкогольная жировая болезнь печени в вопросах и ответах» Мехтиев С.Н., Мехтиева О.А., Зиновьева Е.Н. СПбГМУ им. академика И.П. Павлова, учебное пособие, 2011, стр.23, 24).

Чем выше индекс HOMA-IR, тем ниже чувствительность к инсулину и, следовательно, выше синдром инсулинорезистентности. Уровень HOMA-IR у здоровых лиц составляет менее 2. У пациентов с нарушениями углеводного обмена более 4.

Индекс QUICKI (Quantitave Insulin sensitivity Check Index) высчитывается по формуле: 1/(log(I0)+log(G0)), где I0 - базальное содержание инсулина крови (мкМЕ/мл), G0 - базальное содержание глюкозы в крови (мг/дл). («Лечащий врач», ноябрь, 2010, № 10, клинический разбор, Драпкина О.М., Корнеева О.Н., www.Ivrach.ru.).

Однако существенным препятствием для широкого использования индексов является дополнительные технические и профессиональные издержки, имеется ряд существенных недостатков:

- причиняются неудобства больному;

- сложность высчитывания индексов, особенно QUICKI;

- более длительная затрата времени, больше материальных затрат.

Ближайшим аналогом способа диагностики синдрома инсулинорезистентности можно считать способ диагностики метаболического синдрома, раскрытый в патенте RU 244298 С1 10.03.13 г., который не лишен вышеуказанных недостатков.

Цель данного изобретения - упрощение диагностики синдрома инсулинорезистентности.

Со второй половины XX века в биологии и медицине стали развиваться методы кристаллографии, связанные с идентификацией веществ по их кристаллической структуре. Первые сообщения о значении кристаллографического исследования в медицине появились в сороковые- пятидесятые годы. A. Selawry-Lippold (1952) провела исследование крови с кристаллообразующим веществом дигидратом хлорида меди 500 больных раком различной локализации и увидела ряд однотипных изменений в картине кристаллизации. В.Я. Неретин и В.А. Кирьяков (1977) считают, что кристаллографический метод позволяет обнаружить весьма тонкие изменения, которые происходят в спинномозговой жидкости при различных заболеваниях нервной системы. В МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского с 1980 г. изучались возможности кристаллографического метода исследования различных биологических жидкостей и субстратов в диагностике ряда патологических процессов. Использовались кристаллообразующие вещества: CuCl ₂ и NaCl. Изучались кристаллограммы смывов с биопсийного материала больных опухолевыми заболеваниями желудка, назального секрета больных аллергическим ринитом, больных механической желтухой при желчнокаменной болезни, калькулезном холецистите. В работе Д.Б. Каликштейна и соавторов (1981) описаны характеристики кристаллограмм мочи с добавлением к ней дигидрата хлорида меди больных с аллергическими состояниями, хроническим нефритом, опухолями почек. А.П. Калинин и соавт. (1987) изучили картину кристаллизации сыворотки крови без добавления кристаллообразующего вещества у здоровых лиц и эндокринологических больных. Установлены различия в картине кристаллизации крови здоровых и больных сахарным диабетом. Найдены отличия кристаллических структур сыворотки крови больных, обусловленные сахарным диабетом, катарактой, глаукомой. Л.А. Мороз и соавт. (1994) изучили особенности кристаллограмм сыворотки крови и морфоэритрограмм периферической крови у больных бронхиальной астмой («Кристаллографические методы исследования в медицине» Сборник научных трудов, МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, 1997 г.).

Сущность предлагаемого нами способа заключается в следующем. На предметное стекло наносят каплю биологического субстрата (слюны) и каплю кристаллообразующего вещества. После выдержки проводят микроскопию препарата на световом микроскопе. Любое изменение физико-химического состояния внутренней среды организма находит свое отражение в специфическом формообразовании структуры биожидкости и представляет нам суммарную, сжатую информацию о состоянии организма. На основании распределения кристаллических элементов и проводят диагностику синдрома инсулинорезистентности. Наличие синдрома инсулинорезистентности характеризуется появлением в микроскопическом препарате округлых, неправильной формы кристаллов (1) хлорида натрия на фоне четких ромбовидных центров кристаллизации (2) с расходящимися лучами (3) (Фиг.1). Отсутствие синдрома инсулинорезистентности характеризуется наличием в микроскопическом препарате только центров кристаллизации (2) с расходящимися лучами (3), без округлых отдельных кристаллов на всем поле зрения (Фиг.2).

Осуществляется способ следующим образом. Обезжиривают предметное стекло. На него наносят одну каплю слюны и одну каплю 0,9% раствора хлорида натрия (NaCl) Препарат выдерживают 24 часа в строго горизонтальном положении при комнатной температуре (20-25°C), влажности 50-70%, вдали от прямых солнечных лучей и нагревательных приборов. Проводят микроскопию препарата на световом микроскопе «Биолам» при увеличении 7X8.

Существенные признаки, характеризующие изобретение

Впервые:

- используется кристаллография слюны для определения синдрома инсулинорезистентности;

- использовано кристаллообразующее вещество - 0,9% хлорид натрия для выявления синдрома инсулинорезистентности;

- при наличии синдрома инсулинорезистентности в препарате появляются округлые неправильной формы разрозненные кристаллы;

- по количеству округлых неправильных кристаллов можно определить выраженность синдрома инсулинорезистентности.

Основные преимущества, характеризующие изобретение:

- простота метода;

- дешевизна, минимальные материальные затраты;

- быстрота выполнения кристаллографического исследования (через 24 часа получен результат);

- не трудоемок;

- неинвазивен;

- не причиняет неудобства больному;

- возможность выполнять повторные исследования, проводить контроль и коррекцию лечения.

Результаты исследований.

В отделениях эндокринологии, гепатологии, кардиологии, гастроэнтерологии Главного клинического военного госпиталя ФСБ России проведены исследования, изучены твердокристаллические структуры слюны у больных с сахарным диабетом 2 типа, ожирением I-IV степени, хроническим неалкогольным стеатогепатитом, гипертонической болезнью, ишемической болезнью сердца, хроническим гастродуоденитом (таб. 1). Клинический диагноз подтвержден лабораторными, инструментальными методами исследования, гистологическим исследованием ткани печени.

Таблица 1
Группы обследованных больных
Отделения	Число больных	инсулин	Индекс НОМА	Кристаллография слюны
эндокринология	50	повышен	более 5	Множественные округлые кристаллы на всем поле зрения
гепатология	10	повышен	более 4	Множественные округлые кристаллы на всем поле зрения
кардиология	5	повышен	более 4	Множественные округлые кристаллы на всем поле зрения
гастроэнтерология	50	норма	менее 2	Отсутствие округлых единичных кристаллов

Проведено изучение кристаллографии слюны у 115 больных, что подтверждено актом внедрения Главного клинического военного госпиталя ФСБ России от 27.12.11 г. № 441/11 «Способ диагностики синдрома инсулинорезистентности». В результате исследования была впервые выявлена связь между изменением количества кристаллов в препарате и показателями индекса НОМА, (таб.2).

Таблица 2
Динамика изменений индекса НОМА и кристаллографического исследования слюны на фоне лечения
Заболевания	Количество больных	Период наблюдения	Динамика индекса НОМА на фоне лечения	Динамика кристаллографического исследования слюны
Сахарный диабет 2 типа	30	6 мес.	Без динамики	Без динамики (много округлых кристаллов)
Ожирение	20	6 мес.	Снижение	Уменьшение количества округлых кристаллов, до единичных кристаллов
Неалкогольный стеатогепатит	10	6 мес.	Снижение	Уменьшение количества округлых кристаллов, до единичных кристаллов
Гипертоническая болезнь, ИБС	5	6 мес.	Снижение	Уменьшение количества округлых кристаллов, до единичных кристаллов

Данный способ прост в исполнении и позволяет выявить метаболические нарушения на раннем этапе.

Таким образом, предлагаемый нами способ диагностики синдрома инсулинорезистентности отличается от других способов тем, что, к капле слюны больного добавляют каплю кристаллообразующего вещества (0,9% раствор хлорида натрия), выдерживают полученный препарат в течение 24 часов в горизонтальном положении при комнатной температуре, нормальной влажности, вдали от прямых солнечных лучей и нагревательных приборов и исследуют под микроскопом, при этом по наличию в кристаллограмме округлых, неправильной формы кристаллов в поле зрения на фоне четких ромбовидных центров кристаллизации с расходящимися лучами, определяют наличие синдрома инсулинорезистентности. При отсутствии отдельных округлых, неправильной формы кристаллов, на всем поле зрения судят об отсутствии синдрома инсулинорезистентности. Это позволяет с минимизированными материальными затратами, простотой выполнения способа осуществлять диагностику метаболических нарушений организма.