способ диагностики дирофиляриоза у животных и человека

Формула изобретения

1. Способ диагностики дирофиляриоза у животных и человека, включающий исследование крови, высушивание и микроскопирование, отличающийся тем, что смешивают кровь животных или человека с раствором разведенного столового уксуса из расчета 1:5, причем столовый уксус разводят в дистиллированной воде из расчета 345 мл дистиллированной воды и 4,75 мл столового уксуса, размешивают смесь с последующим ее отстаиванием в темном холодном месте, центрифугируют, а затем сливают надосадочную жидкость, добавляя 2-3 капли метиленового синего, и вновь центрифугируют, надосадочную жидкость сливают, а осадочную жидкость переносят на предметное стекло, готовят мазок, который после высушивания фиксируют над пламенем горелки и окрашивают одновременно растворами из метиленовой сини по Леффлеру и по Цилю в разведении в дистиллированной воде в соотношении 1:1:18, затем высушивают мазок при комнатной температуре и микроскопируют под увеличением с иммерсией (x1000) с определением вида возбудителя.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что после второго центрифугирования окрашивание мазка производят в течение 3 мин.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что фиксацию препарата проводят в течение 10 с над пламенем спиртовки.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области ветеринарии и в частности может быть использовано для диагностики личинок кровепаразитов у животных и человека.

Известен способ диагностики сыворотки крови, которую отстаивают и сразу же исследуют. При этом микроскопию крови производят под небольшим (х100) увеличением микроскопа. Кровь забирается у обследуемого животного [1, 2].

Основным существенным недостатком известного способа является невозможность обнаружения паразитов при низкой степени инвазии, кроме того невозможно осуществить видовую идентификацию паразита.

Наиболее близким аналогом заявляемого технического решения является Способ диагностики кровепаразитов, заключающийся в том, что берут 1 мл венозной крови обследуемого животного и 10 мл 1% раствора уксусной кислоты, смешивают кровь в такой пропорции и центрифугируют в течение 5 минут при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость смешивают, а осадок переносят на предметное стекло, где готовят мазок, высушивают при комнатной температуре, фиксируют в смеси Никифорова, окрашивают краской Романовского в течение 20-60 мин, промывают под проточной водой, высушивают и микроскопируют сначала по малым увеличением (х100), а при подозрении на паразита - по большим (х400) [3].

Основным существенным недостатком известного способа является невозможность определения личинок кровепаразитов при микроскопии без окрашивания препарата.

Основной задачей, решаемой настоящим Способом, является ускорение процесса диагностики, сокращение финансовых затрат и повышение достоверности за счет детальной идентификации возбудителя на разных стадиях заболевания.

Поставленная задача решается в изобретении за счет того, что смешивают кровь животных или человека, разведенного в столовом уксусе из расчета 1:5, за счет разведении реагентов в дистиллированной воде (столовый уксус, разводят в дистиллированной воде из расчета 345 мл дистиллированной воды и 4,75 мл столового уксуса.), размешивают смесь с последующим ее отстаиванием в темном холодном месте, центрифугируют ее, а затем сливают надосадочную жидкость, добавляя несколько капель метиленового синего и вновь центрифугируют ее, надосадочную жидкость сливают, а осадок переносят на предметное стекло, готовят мазок, который после высушивания, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают одновременно растворами из метиленовой сини по Леффлеру (исследуемый материал наносили на чистые обезжиренные предметные стекла, растирали на воздухе, а затем фиксировали над пламенем горелки в течение 1-2 мин. На фиксированный препарат наносили метиленовый синий по Леффлеру и проводили окраску в течение 3 мин) и по Цилю (наносили несколько капель основного фуксина Циля на фиксированный мазок и окрашивали препарат в течение 1-3 мин.), в разведении в дистиллированной воде в соотношении 1:1:18, а затем высушивают мазок при комнатной температуре и микроскопируют под увеличением с иммерсией (×1000) с определением вида возбудителя.

Кроме того поставленная Задача решается в изобретении за счет того, что после второго центрифугирования, окрашивание мазка производят в течение 3 минут, а фиксацию препарата проводят в течение 10 секунд над пламенем спиртовки.

Заявителю из проведенного патентно-информационного поиска, а также из практики аналогичной диагностики дирофиляриоза у животных или человека в ветеринарии не было известно о существовании способа, с идентичными существенными признаками. Исходя из приведенных выше доводов, предлагаемый Способ обладает критерием новизны для изобретения.

Указанные выше существенные признаки в совокупности решают одну задачу с получением технического эффекта - ускорение процесса диагностики при сокращении затрат на химический реагент и повышение достоверности диагностики за счет детальной идентификации возбудителя на различных стадиях заболевания. При этом каждый из существенных признаков предлагаемого решения необходим, а вместе взятые достаточны для реализации поставленной задачи.

При этом также между совокупностью существенных признаков и решаемой задачи существует причинно-следственная связь; существенные признаки являются причиной для следствия в виде решения задачи.

Все это подтверждает вывод о том, что заявляемое техническое решение соответствует критерию «Изобретательский уровень». Предлагаемое в качестве изобретения техническое решение может реализовываться с присущей ему совокупностью существенных признаков многократно с получением одного и того же технического результата, что подтверждает соответствие критерия «промышленная применимость».

Данное решение апробировано на малом инновационном предприятии - Общество с ограниченной ответственностью научно-производственное предприятие «Центр паразитологии».

Ниже приводятся результаты апробации:

Пример: В центрифужной пробирке смешивают кровь животных с раствором разведенного столового уксуса из расчета 1:5 (где 1-1 мл отобранной крови, а 5-5 мл водного раствора столовой уксусной кислоты). Полученную смесь размешивали стеклянной палочкой и отстаивали в темном холодном месте 30 минут. Затем производили центрифугирование в 2 этапа: сначала центрифугировали смесь в течение 3 мин, а затем после слива надосадочной жидкости, к осадку добавляли 2-3 капли метиленового синего, и центрифугировали еще раз осадок в течение 3 мин. Затем надосадочную жидкость сливали и переносили осадок на предметное стекло, где готовили влажный мазок. Мазок высушивали и фиксировали над пламенем горелки (спиртовки) в течение 10 секунд. После фиксации окрашивали мазок растворами из метиленовой сини по Леффлеру (исследуемый материал наносили на чистые обезжиренные предметные стекла, растирали на воздухе, а затем фиксировали над пламенем горелки в течение 1-2 мин. На фиксированный препарат наносили метиленовый синий по Леффлеру и проводили окраску в течение 3 мин) и по Цилю (наносили несколько капель основного фуксина Циля на фиксированный мазок и окрашивали препарат в течение 1-3 мин.) одновременно, разведенными в дистиллированной воде в соотношении 1:1:18, высушивали окрашенный мазок при комнатной температуре и подвергали микроскопии под большим увеличением с иммерсией (x1000), определяя вид возбудителя, приобретавшего бледно-голубой цвет с четкими контурами и внутренним содержимым.

Было обследовано 536 служебных собак, в т.ч. 67 собак оказались инвазированными. Экстенсивность инвазии составила 12,5±1,4%.

Основные преимущества заявляемого решения по сравнению с прототипом является: использование разведенного столового уксуса менее токсично для экспериментатора, менее дорогостояще и более быстрое при постановке диагноза.

Источники информации

1. Архипов И.А., Архипова Д.Р. Дирофиляриоз, М., 2004., 194 стр.

2. Новикова Т. Лабораторная диагностика эндопаразитов у собак и кошек, Москва, Аквариум, 2005, С.98.

3. Методические указания «Профилактика дирофиляриоза» МУ 3.2.1880-04, Москва, Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава РФ, 2004.