фармацевтические композиции на основе ипидакрина и их применение для лечения и профилактики нарушений целостности кости

Формула изобретения

1. Применение ипидакрина для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата, связанных с нарушением целостности кости.

2. Применение по п.1, где заболеваниями опорно-двигательного аппарата, связанными с нарушением целостности кости, являются переломы, в том числе замедление костной консолидации, замедленное образование костной мозоли, замедленное сращение переломов, патологический перелом, перелом костей не срастающийся, псевдоартроз.

3. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата, связанных с нарушением целостности кости, содержащая в качестве активного компонента ипидакрин в эффективном количестве от 3 до 300 мг на дозу и фармацевтически приемлемые наполнители, представляющая собой таблетку или капсулу.

Описание изобретения к патенту

Область техники

Изобретение относится к области медицины, а именно - к хирургии, травматологии, ортопедии, клинической биохимии, фармакологии, геронтологии. Изобретение основано на применении ипидакрина в качестве самостоятельного или комбинированного терапевтического средства для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата, связанных с нарушением целостности кости, и может применяться в клинике для лечения таких заболеваний, как переломы, в том числе замедление костной консолидации, замедленное образование костной мозоли, замедленное сращение переломов, патологический перелом, перелом костей не срастающийся, псевдоартроз.

Уровень техники

Известны фармацевтические композиции, содержащие ипидакрин (Аксамон, Амиридин, Нейромидин), однако они используются с другим назначением, а именно - для лечения заболеваний периферической нервной системы, в том числе моно- и полинейропатия, полирадикулопатия, миастения и миастенический синдром различной этиологии; заболевания ЦНС, в том числе бульбарные параличи и парезы; восстановительный период органических поражений ЦНС, сопровождающихся двигательными и/или когнитивными нарушениями; атония кишечника (лечение и профилактика). Аналогичными по применению являются композиции, содержащие ипидакрин, заявляемые в патентах US RE 42,327, US 7,834,053.

Известны фармацевтические композиции, содержащие ипидакрин, однако они используются с другим назначением, - в качестве противовоспалительных средств (патенты US 8,003,632, US 8,158,627, US 8,003,632).

Известны фармацевтические композиции, содержащие ипидакрин, также использующиеся для лечения специфических воспалительных заболеваний, таких как артриты, системные склерозы, панникулиты, язвенные колиты, коллагенозы, другие системные воспалительные заболевания (патент US 6,358,941). Применение ипидакрина для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата, связанных с нарушением целостности кости, в известном уровне технике отсутствует.

Таким образом, применение фармацевтических композиций на основе ипидакрина для лечения заболеваний, связанных с нарушением целостности кости, предложено авторами впервые.

Постановка задачи

Техническим результатом заявленного изобретения является расширение применения ипидакрина в составе фармацевтических композиций для лечения и профилактики заболеваний опорно-двигательного аппарата, связанных с нарушением целостности кости.

Другой задачей является создание эффективных фармацевтических композиций на основе ипидакрина, предназначенных для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата, связанных с нарушением целостности кости.

Возможность осуществления изобретения

Ипидакрин является обратимым ингибитором холинестеразы и предназначен, согласно инструкции, для лечения заболеваний центральной и периферической системы, таких как невриты, полиневриты, полирадикулопатии, миастении, деменция, болезнь Альцгеймера, энцефалопатии различного генеза. Все вышеперечисленные заболевания объединены общей причиной, а именно - нарушением нейро-синаптической передачи из-за снижения уровня либо активности ацетилхолина, являющегося одним из важнейших нейромедиаторов в нервной системе.

Ацетилхолин является субстратом фермента холинестеразы - фермента, осуществляющего гидролиз холина или ацетилхолина. Холинэстераза присутствует во всех холинергических синапсах. Процесс расщепления ацетилхолина холинестеразой ведет к снижению концентрации субстрата, что делает невозможным или ослабляет нейро-синаптическую передачу импульса в нервной и мышечной тканях. Клинически это проявляется как деменция, мышечная слабость, нарушение глубокой и поверхностной чувствительности и т.п.

Холинестераза и ацетилхолин формируют холинергическую систему, в которой присутствуют также ацетилхолиновые рецепторы: мускариновые и никотиновые (Pohanka, 2011). Они широко распространены в нервной и мышечной ткани, что опосредует проявление действие ацетилхолина в указанных системах.

Недавние исследования показали, что ацетилхолин играет важную роль не только в нервной или мышечной ткани. В последнее время обсуждается роль ацетилхолина в метаболизме остеобластов - клеток костной ткани, сохранение активности которых способствует укреплению кости и препятствует остеопорозу. Ацетилхолин индуцирует пролиферацию остеобластов и снижает активность щелочной фосфатазы через взаимодействие с никотиновыми и мускариновыми рецепторами, экспрессируемыми остеобластами (Sato et al., 2010). Наличие никотиновых и мускариновых рецепторов в остеобластах свидетельствует о вовлечении ацетилхолина в пролиферацию и дифференцировку остеобластов.

На модели животных с переломом кости продемонстрирована взаимосвязь между транскрипцией рецепторных ацетилхолиновых субъединиц под влиянием костного морфогенного белка, ВМР-2, выполняющего, в свою очередь, важную роль при заживлении костной ткани, активации остеобластов (En-Nosse et al., 2009). Этот пример также доказывает вовлечение холинергической системы, присутствующей в остеобластах, в процесс восстановления кости.

Неожиданный побочный эффект был получен из исследования в процессе приема ингибитора холинестеразы, денепезила, у пожилых на фоне т.н. «соматопаузы»: на фоне приема препарата повышался уровень инсулино-подобного фактора роста 1 типа (IGF-I) (Obermayr yet al., 2005). А этот ростовой фактор, в свою очередь, стимулирует повышение плотности кости, улучшающее ее минерализацию (Vandenput et al., 2012). Взаимосвязь между снижением уровня IGF-I и повышением риска остеопороза и переломов установлена и в ряде других работ (Scacchi et al., 2008; Lombardi et al., 2005; Ohlsson et al., 2011; Rosen, 1997). Таким образом, молекулярный механизм укрепления костной ткани ингибиторами холинестеразы выражается опосредованно через активацию инсулиноподобного фактора роста, обладающего, в свою очередь, анаболическими свойствами, в том числе и в отношении костной ткани.

В клиническом исследовании проведено изучение взаимосвязи между приемом ингибиторов ацетилхолинестеразы и риском переломов у пожилых пациентов (Tamimi et al., 2012). До этого исследования было известно, что ингибирование рецепторов к ацетилхолину приводило к снижению массы костной ткани и повышению риска переломов, при этом ничего не было известно о том, каков молекулярный механизм регуляции метаболизма костной ткани под действием ацетилхолина и его рецепторов, как влияет активация холинергической системы на метаболизм кости у пожилых и на ее заживление. В данное исследование было вовлечено 80 пациентов с болезнью Альцгеймера, которым для лечения деменции назначали традиционные ингибиторы холинестеразы (такие, как донепезил и ривастигмин). Необходимо отметить, что данные пациенты находятся в группе риска по развитию остеопороза. В исследовании было продемонстрировано, что в группах пациентов, получавших ингибиторы холинестеразы, риск перелома шейки бедра был существенно снижен. Полученные данные свидетельствуют о том, что ингибиторы холинестеразы опосредуют защитные механизмы, обеспечивающие профилактику переломов и остеопороза.

Описанное выше исследование коренным образом меняет представление о возможностях холинергических систем в отношении костной ткани. И, хотя молекулярные механизмы указанных эффектов в настоящее время изучены недостаточно, приведенные данные убедительно свидетельствуют о возможности применения ингибиторов холинестеразы для лечения и профилактики переломов.

В открытых источниках можно найти противоречивую информацию о том, что ингибиторы холинестеразы, наоборот, могут увеличивать частоту переломов, способствовать нарушению целостности кости. Однако данная информация является следствием выводов, полученных от других наблюдений. Так, например, наблюдения за пожилыми пациентами, принимающими для лечения деменции ингибиторы холинестеразы, показали, что такие пациенты часто падают в обмороки. Это, в свою очередь, приводит к падениям, и нередко - к перелому шейки бедра, что и приводит к инвалидности. Поэтому у пациентов, принимающих ингибиторы холинестеразы, количество обращений по поводу этой проблемы существенно выше (Gill et al., 2009). Разумеется, вывод из таких наблюдений может быть сделан только в отношении повышения риска обморочных состояний, связанных с приемом ингибиторов холинестеразы, а корреляция между частотой переломов кости и приемом указанных препаратов является недоказанной.

Таким образом, указанные примеры демонстрируют вовлечение ингибиторов холинестеразы, ацетилхолина и его рецепторов в процессы ремоделинга костной ткани, в восстановление целостности кости, в активацию и пролиферацию остеобластов - основных клеток костной ткани, обеспечивающих ее прочность.

На этом основании авторы предполагают, что препараты на основе ипидакрина, являющегося ингибитором холинестеразы, могут быть использованы для лечения и профилактики переломов кости, в том числе и у пожилых.

При лечении патологий опорно-двигательного аппарата от применения ипидакрина возникает дополнительный эффект. Поскольку мишенями ипидакрина является нервная ткань, процесс восстановления двигательной активности невозможен без активации нейро-мышечной передачи в месте поражения. В этой связи применение ипидакрина оправдано по следующим причинам: ипидакрин, как нейромедиатор, восстанавливает проведение нервного импульса, стимулирует нервно-мышечную передачу, усиливает сократимость мускулатуры и при этом оказывает умеренный анальгетический эффект. Поэтому ипидакрин может применяться как самостоятельно, так и в составе комбинированной терапии для лечения указанных патологий.

Усилению терапевтического эффекта при лечении нарушений целостности кости способствует также применение нестероидных противовоспалительных средств (НПВС). Хорошо известно, что применение НПВС способствует снижению провоспалительной реакции и снижению болевого синдрома. Это облегчает движение травмированной конечности и способствует улучшению трофики тканей и дополнительно способствует улучшению нервно-мышечной передачи, что, в свою очередь, ускоряет процесс реабилитации пациентов с переломами. Таким образом, НПВС целесообразно применять совместно с ипидакрином в составе фармацевтических композиций.

Постановка задачи и раскрытие изобретения

Задачей изобретения является расширение применения ипидакрина для лечения и профилактики заболеваний опорно-двигательного аппарата, характеризующихся нарушениями целостности кости.

Другой задачей является создание эффективных фармацевтических композиций на основе ипидакрина.

Термины и определения

Термин «нарушение целостности кости» означает любые заболевания, выбранные из группы (не ограничивающей объема изобретения): переломы, в том числе замедление костной консолидации, замедленное образование костной мозоли, замедленное сращение переломов, патологический перелом, перелом костей не срастающийся, псевдоартроз.

Термин «нестероидные противовоспалительные средства» означает препараты, выбранные из группы противовоспалительных и анальгетических средств, не ограничивающих объема изобретения: флупиртин, производные кислоты салициловой, в том числе кислота ацетилсалициловая (аспирин), ацетил салицилат лизина, комбинированный препарат; производные пиразолона, в том числе анальгин, фенилбутазон, бутадион; производные антраниловой кислоты, в том числе мефенамовая и флуфенамовая кислоты, натрия мефенаминат; производные пропионовой кислоты, в том числе: кетопрофен, фенопрофен, фенбуфен, беноксапрофен, супрофен, пирпрофен, флурбипрофен, инфопрофен, тиапрофеновая кислота, оксапрозин, ибупроксам, дексибупрофен, флуноксапрофен, алминопрофен, декскетопрофен, напроксцинод, ибупрофен, напроксен, кетотифен, сургам, флурбипрофен; производные уксусной кислоты, в том числе диклофенак, диклофенак-натрий, индометацин, сулиндак, набуметон, толметин, зомепирак, алклофенак, бумадизон, этодолак, лоназолак, фентиазак, ацеметацин, дифенпирамид, оксаметацин, проглуметацин, кеторолак, ацеклофенак, буфексамак, диклофенак; бутилпиразолидоны, в том числе фенилбутазон, мофебутазон, оксифенбутазон, клофезон, кебузон; производные оксикамов, в том числе пироксикам, лорноксикам, мелоксикам, теноксикам, дроксикам; производные кислоты изоникотиновой, в том числе амизон; производные коксибов, в том числе целекоксиб, рофекоксиб, валдекоксиб, парекоксиб, эторикоксиб, лумиракоксиб; фенаматы, в том числе мефенамовая кислота, толфенамовая кислота, флуфенамовая кислота, меклофенамовая кислота; производные других химических групп и комбинированные препараты, такие как этодолак, набуметон, месулид, реопирин, копацил, диклокаин, нифлумовая кислота, азапропазон, глюкозамин, бензидамин, мукартрин, проквазон, орготеин, нимесулид, фепразон, диацереин, морнифлумат, тенидап, оксацепрол, хондроитина сульфат.

Термин «фармацевтическая композиция» означает композицию в твердой или жидкой лекарственной форме, в том числе таблетированной, капсулированной форме (в твердых желатиновых капсулах), в виде саше, в том числе пролонгированного действия, а также в виде раствора для инъекций, раствора для приема внутрь, сироп, содержащую в качестве основного биологически активного вещества ипидакрин в эффективном количестве от 3 до 300 мг на дозу, дополнительно содержащую фармацевтически приемлемые наполнители.

Термин «фармацевтически приемлемый наполнитель» означает разрешенное в фармакологической промышленности вспомогательное средство, необходимое для улучшения таблетируемости, сыпучести, препятствия слеживаемости, гигроскопичности, таких как гидроксипропилметилцеллюлоза, МКЦ 102, кремния диоксид коллоидный, магния стеарат; иные традиционные фармацевтические наполнители, не ограничивающие объема изобретения.

Краткое описание чертежей

Фиг.1. Сравнительный анализ субъективных симптомов в процессе реабилитации пациентов с травмой верхней конечности на фоне приема традиционного лечения и лечения с применением фармацевтической композиции, содержащей ипидакрин (комбинированное лечение). По оси ординат отложены частоты встречаемости изучаемых признаков. Условные обозначения: А - облегчение боли; Б - ликвидация боли; В - восстановление чувствительности; С - снижение скованности движения; Д - улучшение качества жизни.

Примеры осуществления изобретения

С целью иллюстрации эффектов ипидакрина для лечения заболеваний, связанных с нарушением целостности кости, приводятся следующие примеры, не ограничивающие объема изобретения.

Пример 1. Получение фармацевтических композиций, содержащих ипидакрин

Фармацевтические композиции таблетированные (в том числе пролонгированного действия) на основе ипидакрина создаются стандартным способом прямого прессования. Перемешивают все компоненты (кроме магния стеарата) до гомогенной порошкообразной смеси, используя Y-образный смеситель или аналогичное оборудование. Затем добавляют магния стеарат и полученную смесь перемешивают в течение 2 минут. Полученную таблетмассу передают на таблетирование (диаметр таблеток 10 мм или 11 мм в соответствии с ОСТ 64-072-89, с риской и фаской) при давлении 9-10 КН.

Фармацевтические композиции в капсулах создаются стандартными технологическими приемами путем смешивания активных и вспомогательных ингредиентов в нужной пропорции и дальнейшего капсулирования.

Фармацевтические композиции жидких лекарственных форм также создаются стандартными технологическими приемами путем смешивания активных и вспомогательных ингредиентов в нужной пропорции и дальнейшего розлива.

Фармацевтическая композиция № 1 (содержание на 1 таблетку массой 100 мг):

Активное вещество:

Ипидакрин 3 мг

Фармацевтически приемлемые наполнители:

Гидроксипропилметилцеллюлоза 35 мг

МКЦ 60 мг

Кремния диоксид коллоидный 1 мг

Магния стеарат 1 мг

Фармацевтическая композиция № 2 (содержание на 1 таблетку массой 250 мг):

Активное вещество:

Ипидакрин 40 мг

Фармацевтически приемлемые наполнители:

Гидроксипропилметилцеллюлоза 75 мг

МКЦ 128,74 мг

Кремния диоксид коллоидный 3,13 мг

Магния стеарат 3,13 мг

Фармацевтическая композиция № 3 (содержание на 1 таблетку массой 600 мг):

Активное вещество:

Ипидакрин 150 мг

Фармацевтически приемлемые наполнители:

Гидроксипропилметилцеллюлоза 188 мг

МКЦ 250 мг

Кремния диоксид коллоидный 6 мг

Магния стеарат 6 мг

Фармацевтическая композиция № 4 (содержание на 1 таблетку массой 1000 мг):

Активное вещество:

Ипидакрин 300 мг

Фармацевтически приемлемые наполнители:

Гидроксипропилметилцеллюлоза 280 мг

МКЦ 400 мг

Кремния диоксид коллоидный 10 мг

Магния стеарат 10 мг

Фармацевтическая композиция № 5 (содержание на 1 капсулу массой 230 мг):

Активное вещество:

Ипидакрин 40 мг

Фармацевтически приемлемые наполнители:

МКЦ 140 мг

Кремния диоксид коллоидный 2 мг

Магния стеарат 2 мг

Фармацевтическая композиция № 6 (содержание на 1 таблетку пролонгированного действия массой 400 мг)

Активное вещество:

Ипидакрин 60 мг

Фармацевтически приемлемые наполнители:

МКЦ 216 мг

Кремния диоксид коллоидный 2 мг

Гидроксипропилметилцеллюлоза 120 мг

Магния стеарат 2 мг

Фармацевтическая композиция № 7 (содержание на 1 капсулу массой 550 мг)

Активное вещество:

Ипидакрин - 30 мг

Флупиртина малеат - 300 мг

Фармацевтически приемлемые наполнители:

кальция гидрофосфата дигидрат - 212 мг

коповидон - 4 мг

магния стеарат - 3,5 мг

кремния диоксид коллоидный - 0,5 мг

Фармацевтическая композиция № 8 (содержание на 1 таблетку массой 450 мг)

Активное вещество:

Ипидакрин - 30 мг

Флупиртина малеат - 300 мг

Фармацевтически приемлемые наполнители:

кремния диоксид коллоидный - 4,4 мг

карбоксиметилкрахмал натрия (тип А) - 17,6 мг

магния стеарат - 4,4 мг

МКЦ - 93,6 мг

Пример 2. Оценка влияния ипидакрина на заживление кости на модели экспериментального перелома у животных

В эксперимент были вовлечены половозрелые крысы породы Wistar, по массе 190-210 г, без видимых признаков какой-либо патологии. Было сформировано 2 группы, опытная и контрольная, в каждой - по 12 особей.

Изучение специфической фармакологической активности ипидакрина проводилиось на модели создания искусственного повреждения на большеберцовой кости крысы под анестезией. Обезболивание осуществляли анестетиком дроперидолом из расчета 0,3 мл на одно животное. Разрезали кожу и после препарирования мягких тканей наносили повреждение кости путем перекусывания участка диафиза кости; размер повреждения составил 3×3×3 мм.

Опытной группе животных вводили ипидакрин в дозе, соответствующей аналогу максимальной терапевтической дозы для человека, составляющей, согласно инструкции, 200 мг. С учетом межвидового пересчета доз, для животных она составила 17 мг/кг веса тела животного. Контрольная группа животных получала воду для инъекций в эквимолярном объеме.

Каждые 10 дней по 4 животных подвергались эвтаназии (на 10, 20 и 30 день эксперимента), для анализа процесса репарации отбирались образцы кости. В каждом образце кости методом RT-PCR анализировалась транскрипционная активность таких генов, как костный морфогенный белок-2 (BMP-2), a специфических цитокинов, являющихся маркерами процессов «репарации-остеопороза» костной ткани, а именно - RANKL и OPG. ВМР-2 является белком, участвующим в репарации костной ткани, а соотношение цитокинов RANKL/OPG характеризует уровень метаболизма костной ткани: превышение RANKL над OPG свидетельствует о процессах резорбции в костной ткани, превышение OPG над RANKL, - наоборот, об активации остеобластов, укреплении прочности кости.

Праймеры изучаемых генов были следующие:

BMP-2:

5'-CCAACCATGGATTCGTGGTG-3',

5'-GGTACAGCATCGAGATAGCA-3'

RANKL

5'-TCCCATCTGGTTCCCATAAA-3'

5'-GGTGCTTCCTCCTTTCATCA-3'

OPG

5'-TTCCGGAAACAGTGAATCAA-3'

5'-CGCTGTTTTCACAGAGGTCA-3'

Детекцию продуктов амплификации ДНК проводили с помощью электрофореза в 1,5%-ном агарозном геле с содержанием 1%-ного бромистого этидия. Продукты RT-PCR были оценены полуколичественно. Согласно полученным данным, в опытной группе наблюдается тенденция к повышению уровня BMP-2, OPG и снижению RANKL в течение более короткого времени, чем в контрольной группе животных (Таблица 1).

Таблица 1
Оценка экспрессии генов ВМР-2, OPG и RANKL (нормализованный RNA сигнал, полуколичественная RT-PCR, M±SE)
	10 день	20 день	30 день
RANKL, опыт	0,5±0,04	0,3±0,01	0,1±0,08
OPG, опыт	1,7±0,02	1,9±0,17	2,0±0,04
BMP-2, опыт	1,7±0,04	1,9±0,15	1,95±0,12
RANKL, контр	0,1±0,01	0,15±0,05	0,13±0,08
OPG, контр	1,5±0,03	1,6±0,06	1,8±0,03
BMP-2, контр	1,6±0,03	2,4±0,15	2,9±0,16

Пример 3. Применение фармацевтической композиции, содержащей ипидакрин, в процессе реабилитации пациентов с травмой верхней конечности

Оценка влияния ипидакрина на течение реабилитационного периода у пациентов с переломом верхней конечности проводилась с использованием фармацевтической композиции № 6, содержащей ипидакрин в разовой дозе 0,06 г. Пациенты были разделены на две группы. Одна группа применяла традиционный подход к лечению, заключающийся в соблюдении покоя поврежденной конечности, а во второй группе традиционный лечебный подход дополнялся применением фармацевтической композицией № 6 однократно в разовой дозе 0,06 г. В каждой группе было по 10 пациентов. В процессе лечения пациентам было предложено отмечать в специально разработанной анкете субъективные симптомы, которые они ощущали. Они касались облегчения и ликвидации боли в зоне поврежденной конечности при движении, расстройства чувствительности, скованности движения, качества жизни. Сравнительные результаты проведенного исследования показаны на Фиг.1.

Согласно полученным данным, на фоне применения фармацевтической композиции № 6, содержащей ипидакрин, у пациентов с переломом верхней конечности фиксировалось существенное улучшение проведения нервного импульса по волокнам нервов плечевого сплетения, восстанавливалась чувствительность, проявлялся ноотропный эффект, наблюдалась регрессия неврологической симптоматики, а именно - улучшение показателей проведения по периферическим нервам, увеличение силы и объема движения в паретических конечностях, увеличение амплитуды сокращений мышцы.

Список цитируемой литературы

- En-Nosse M, Hartmann S, Trinkaus К, Alt V, Stigler В, Heiss С, Kilian O, Schnettler R, Lips KS. Expression of non-neuronal cholinergic system in osteoblast-like cells and its involvement in osteogenesis. Cell Tissue Res. 2009 Nov; 338 (2): 203-15. Epub 2009 Oct 10.

- Gill SS, Anderson GM, Fischer HD, Bell CM, Li P, Normand SL, Rochon PA. Syncope and its consequences in patients with dementia receiving cholinesterase inhibitors: a population-based cohort study. Arch Intern Med. 2009 May 11; 169 (9): 867-73.

- Lombardi G, Tauchmanova L, Di Somma C, Musella T, Rota F, Savanelli MC, Colao A. Somatopause: dismetabolic and bone effects. J Endocrinol Invest. 2005; 28(10 Suppl): 36-42.

- Obermayr RP, Mayerhofer L, Knechtelsdorfer M, Mersich N, Huber ER, Geyer G, Tragl KH. The age-related down-regulation of the growth hormone/insulin-like growth factor-1 axis in the elderly male is reversed considerably by donepezil, a drug for Alzheimer's disease. Exp Gerontol. 2005 Mar; 40 (3): 157-63.

- Ohlsson C, Mellstrom D, Carlzon D, Orwoll E, Ljunggren O, Karlsson MK, Vandenput L. Older men with low serum IGF-1 have an increased risk of incident fractures: the MrOS Sweden study. J Bone Miner Res. 2011 Apr; 26 (4): 865-72.

- Pohanka M. CHOLINESTERASES, A TARGET OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub. 2011 Sep; 155 (3): 219-230.

- Rosen CJ. Insulin-like growth factor-I and parathyroid hormone: potential new therapeutic agents for the treatment of osteoporosis. Expert Opin Investig Drugs. 1997 Sep;6(9): 1193-8.

- Sato T, Abe T, Chida D, Nakamoto N, Hori N, Kokabu S, Sakata Y, Tomaru Y, Iwata T, Usui M, Aiko K, Yoda T. Functional role of acetylcholine and the expression of cholinergic receptors and components in osteoblasts. FEBS Lett. 2010 Feb 19; 584 (4): 817-24.

- Scacchi M, Danesi L, Cattaneo A, Valassi E, Pecori Giraldi F, Argento C, D'Angelo E, Mirra N, Carnelli V, Zanaboni L, Tampieri B, Cappellini MD, Cavagnini F. Bone demineralization in adult thalassaemic patients: contribution of GH and IGF-I at different skeletal sites. Clin Endocrinol (Oxf). 2008 Aug; 69 (2): 202-7.

- Tamimi I, Ojea T, Sanchez-Siles JM, Rojas F, Martin I, Gormaz I, Perez A, Dawid-Milner MS, Mendez L, Tamimi F. Acetylcholinesterase inhibitors and the risk of hip fracture in Alzheimer's disease patients: A case-control study. J Bone Miner Res. 2012 Jul; 27 (7): 1518-27.

- Vandenput L, Sjogren K, Svensson J, Ohlsson C. The role of IGF-1 for fracture risk in men. Front Endocrinol (Lausanne). 2012; 3: 51.