консервант для воды и корма

Формула изобретения

1. Антимикробная композиция для продления срока хранения воды, корма или кормовых компонентов, содержащая:

1-99 вес.% органических кислот в водном растворе, который представляет собой C₂:C₉ или С₃:С₉ смесь органических кислот, стабилизированном буфером до рН 1-5;

0-20% по весу терпенов и

0,5-10% поверхностно-активных веществ;

где концентрация С₉ кислоты составляет 2-20 вес.% на основе общего содержания органических кислот.

2. Антимикробная композиция по п.1, которая стабилизирована буфером до рН 1-3.

3. Антимикробная композиция по п.1, где поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20, полисорбат 80, полисорбат 40, полисорбат 60, полиглицериловый сложный эфир, полиглицерилмоноолеат, декаглицерилмонокаприлат, пропиленгликольдикаприлат, триглицеринмоностеарат, Tween 20, Span 20, Span 40, Span 60, Span 80, поверхностно-активные вещества на основе этоксилированного касторового масла или их смеси.

4. Антимикробная композиция по п.1, где концентрация поверхностно-активного вещества составляет 0,5-5 вес.%.

5. Антимикробная композиция по п.1, где терпен выбран из группы, включающей аллилдисульфид, цитраль, пинен, нерол, гераниол, карвакрол, эвгенол, карвон, анетол, камфору, ментол, лимонен, фарнезол, каротин, тимол, борнеол, мирцен, терпинен, линалоол или их смеси.

6. Антимикробная композиция по п.1, где терпен выбран из группы, включающей аллилдисульфид, тимол, цитраль, эвгенол, карвакрол и карвон или их смеси.

7. Антимикробная композиция по п.1, где содержание терпена составляет 0,5-10 вес.%.

8. Способ продления срока хранения воды, корма или кормовых компонентов, включающий этапы, на которых:

обрабатывают распылением или примешивают к воде, корму или кормовым компонентам эффективное количество композиции, содержащей 1-99 вес.% органических кислот в водном растворе, который представляет собой C₂ :C₉ или С₃:С₉ смесь органических кислот, стабилизированную буфером до рН 1-5;

0-20% по весу терпенов и

0,5-10% поверхностно-активных веществ;

где концентрация С₉ кислоты составляет 2-20 вес.%, на основе общего содержания органических кислот.

9. Способ по п.8, где композицию стабилизируют буфером до рН 1-3.

10. Способ по п.8, где поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20, полисорбат 80, полисорбат 40, полисорбат 60, полиглицериловый сложный эфир, полиглицерилмоноолеат, декаглицерилмонокаприлат, пропиленгликольдикаприлат, триглицеринмоностеарат, Tween 20, Span 20, Span 40, Span 60, Span 80, поверхностно-активные вещества на основе этоксилированного касторового масла или их смеси.

11. Способ по п.8, где концентрация поверхностно-активного вещества составляет 0,5-5 вес.%.

12. Способ по п.8, где терпен выбирают из группы, включающей аллилдисульфид, цитраль, пинен, нерол, гераниол, карвакрол, эвгенол, карвон, анетол, камфору, ментол, лимонен, фарнезол, каротин, тимол, борнеол, мирцен, терпинен, линалоол или их смеси.

13. Способ по п.8, где терпен выбирают из группы, включающей аллилдисульфид, тимол, цитраль, эвгенол, карвакрол и карвон или их смеси.

14. Способ по п.8, где содержание терпена составляет 0,5-10 вес.%.

15. Способ по п.8, где композиция является эффективной против бактерий, вирусов, микоплазм или грибов, присутствующих в питьевой воде, корме и кормовых компонентах.

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ продления срока хранения воды, корма и основных кормовых компонентов путем обработки распылением или примешивания смеси органических кислот, содержащей пеларгоновую кислоту.

ПРЕДПОСЫЛКИ

Болезни пищевого происхождения являются распространенными проблемами для миллионов людей во всем мире. Болезни пищевого происхождения вызываются многими различными микроорганизмами, включая инфекции Campylobacter spp., Shigella spp., Listeria monocytogenes, Yersenia enterolilica, Salmonella spp. и E. coli, которые распространены во многих странах. Статистика CDC (Центры по контролю за заболеваниями) в Соединенных Штатах свидетельствует, что 76 миллионов людей заболевают каждый год вследствие употребления недоваренного мяса, яиц, водных животных, имеющих панцирь, непастеризованных молочных продуктов и немытых овощей. Сельскохозяйственные животные являются главным источником серотипов Salmonella enterica, не являющихся серотипом typhi, которая вызывает приблизительно 1,4 миллиона заболеваний, 16400 госпитализаций и 580 смертей/год в США.

Сальмонелла представляет собой факультативный внутриклеточный патоген, способный заражать людей и животных, приводя в результате к инфекции. После проглатывания сальмонелла может выходить за пределы кишечника, может проникать из кишечника и может транспортироваться с кровью к внутренним органам (Henderson, S. et. al., 1999, Early events in the pathogenesis of avian salmonellosis, Infec. Immun. 67(7):3580-3586).

Большинство случаев сальмонеллеза у людей возникает вследствие употребления куриных яиц. Через два дня после того, как курам перорально вводят сальмонеллу, бактерии можно обнаружить в тканях селезенки, печени, сердца, желчного пузыря, тканях кишечника и различных участках яйцевода (Humphrey, T.J. et. al, 1994, Contamination of egg shell and contents with Salmonella enteritidis, Int. J. Food Microbiol 21 (1-2):31-40). Некоторые факторы, присутствующие в яйцах, помогают поддерживать более низкие уровни сальмонеллы в свежеснесенных яйцах (частота возникновения 0,6%) несмотря на то, что яйца из яйцевода этой же курицы показывали более высокие уровни сальмонеллы (частота возникновения 29%); эти факторы могут включать антитела, антибактериальные ферменты и железосвязывающие и ингибирующие бактериальную протеазу белки в желтке и белке яйца (Keller, L.H. et. al., 1995, Salmonella enteritidis colonization of the reproductive tract and forming and freshly laid eggs of chickens. Infec. Immun. 63(7):2443-2449).

Частота встречаемости Salmonella, Е. coli и Enterococcus варьирует в зависимости от типа ингредиентов, применяемых для производства корма для животных. Частота встречаемости Salmonella в пище на основе переработанного животного сырья (35%) выше, чем в пище на растительной основе (5%). Частота встречаемости E. coli сходна в продуктах питания как животного, так и растительного происхождения (40%), однако частота встречаемости Enterococcus составляет 80% для продуктов питания животного и 91% для растительного происхождения. Частота заражения Salmonella корма для животных выше в форме мешанки, чем в форме гранул. Грануляция при условиях высокой температуры и высокого давления снижает количество не только Salmonella, но также других бактерий. Проблема простой грануляции заключается в том, что не существует защиты против повторного заражения микробами корма перед его употреблением животным, как, например, при расфасовке в мешки, транспортировке и в кормораздатчиках.

Наличие случаев поноса у телят имеет экономическое значение. Более чем 90% случаев поноса у телят вызывается E. Coli, и Salmonella, и Clostridia. Известны профилактические способы, такие как (1) вакцинация матерей с целью пассивной передачи антител с молозивом; (2) применение иммунных добавок для заменителей молока; (3) применение пробиотиков для создания здоровой среды в желудочно-кишечном тракте и (4) изменения в хозяйствовании. Ни одно из этих защитных средств не является на 100% эффективным.

Частота возникновения диареи у новорожденных и отлученных поросят также очень высока. Опять же, E. coli и Salmonella являются главными микроорганизмами, способствующими диарее у свиней. Одним из предпочтительных способов профилактики этой проблемы является сегрегированный ранний отъем (SEW). Основной принцип раннего отъема заключается в том, что чем раньше поросят отлучат от свиноматки, тем меньше риск перекрестных заболеваний между свиноматкой и поросятами. Как в случаях поноса у телят, так и поросят предпочтительным способом лечения являются антибиотики.

Европейское союз (ЕС) наложил запрет на применение пяти антибиотиков, и FDA (Управление по контролю за пищевыми продуктами и лекарственными средствами США) в Соединенных Штатах наложило запрет на применение фторхинолонов для животных вследствие развития устойчивости к данному антибиотику. Устойчивость бактерий способствовала развитию продуктов, альтернативных антибиотикам. Все структуры ЕС наложили запрет на применение антибиотиков в качестве стимуляторов роста, и это распространяется на все страны, которые экспортируют мясо или его производные в ЕС.

Было разработано много продуктов для консервирования воды и корма для применений у животных, включая добавки в воду, такие как продукты четвертичного аммония, продукты на основе хлорита, хлорирование, диоксид хлора и органические кислоты (уксусная, сорбат, аскорбиновая, лимонная, муравьиная).

Способы консервирования корма включают тепловую обработку, органические кислоты, формальдегид, эфирные масла и облучение. Устранение Salmonella органическими кислотами требует высоких уровней обработки, что подразумевает высокие затраты для товарного животноводства. Облучение корма не выгодно экономически и не удобно потребителю. Натрия перкарбонат представляет собой сильный окислитель, который применяют в качестве антимикробного средства в корме при уровнях 1-2% от рациона.

Обработку хлоратом рекомендуют для E. coli и Salmonella, поскольку эти бактерии имеют фермент нитрат-редуктазу, который восстанавливает хлорат до хлорита, который имеет антимикробные свойства. Свиньи, которым ввели сальмонеллу, при введении ионов хлората с водой перед забоем имели пониженное число бактерий в содержимом кишечника и лимфатической ткани (Anderson, R.C. et. al. 2004, Effect of drinking-water administration of experimental chlorate ion preparations on Salmonella enterica serovar Typhimurium colonization in weaned and finished pigs. Vet. Res. Comm. 28(3): 179-189).

Органические кислоты были основной добавкой для снижения частоты возникновения инфекций пищевого происхождения. Применение жирных кислот с короткою, средней и длинной цепью, например, муравьиной, пропионовой, масляной, молочной, лимонной, яблочной и других, было, как показано, результативным в некоторых случаях. Короткоцепочечные жирные кислоты проявляют свою антимикробную активность вследствие того, что недиссоциированные RCOOH (неионизированные) кислотные группы являются проникающими сквозь липиды и, следовательно, могут пересекать микробную клеточную стенку и диссоциировать в более щелочной внутренней части микроорганизма (RCOOH RCOO^-+H⁺), делая протоплазму нестабильной для выживания. Применение органических кислот, особенно муравьиной и пропионовой кислоты, хорошо описано в данном уровне техники. Но пеларгоновая кислота известна только как гербицид и фунгицид для применений у растений, но не для консервирования воды и корма для животных.

Пеларгоновая кислота представляет собой встречающуюся в природе жирную кислоту, обнаруженную практически у всех видов животных и растений. Поскольку она содержит девять углеродных атомов, ее также называют нонановой кислотой с химической формулой СН₃(СН₂)₇СООН. Она находится на низких уровнях во многих обычных пищевых продуктах и легко разлагается в окружающей среде. Она представляет собой маслянистую бесцветную жидкость, которая застывает при низких температурах. Она имеет неприятный прогорклый запах и почти нерастворима в воде. Пеларгоновую кислоту используют в качестве неселективного гербицида. Scythe (57% пеларгоновой кислоты, 3% связанных жирных кислот и 40% инертного материала) является послевсходовым или сильнодействующим гербицидом широкого спектра, производимым Mycogen/Dow Chemicals. Гербицидный способ действия пеларгоновой кислоты обусловлен, во-первых, просачиванием через мембрану в темноте или на свету и, во-вторых, окислением в перекисное соединение, запускаемым радикалами, образуемыми на свету сенсибилизированным хлорофиллом, перемещенным из мембраны тилакоида (B. Lederer, Т. Fujimori, Y. Tsujino, K. Wakabayashi and P. Boger; Phytotoxic activity of middle-chain fatty acids II: peroxidation and membrane effects. Pesticide Biochemistry and Physiology 80:151-156).

Chadeganipour и Haims (Antifungal activities of pelargonic and capric acid on Microsporum gypseum Mycoses Vol.44, Number 3-4 pp 109-112, 2001) показали, что минимальная ингибирующая концентрация (МИК) для предотвращения роста M. gypseum на твердой среде составляла 0,02 мг/мл каприновой кислоты и 0,04 мг/мл для пеларгоновой кислоты. В жидкой среде она составила 0,075 мг/мл каприновой кислоты и 0,05 мг/мл пеларгоновой. Эти кислоты тестировали независимо и не в виде смеси.

N. Hirazawa и др. (Antiparasitic effect of medium-chain fatty acids against ciliated Crptocaryon irritans infestation in the red sea bream Pagrus major, Aquaculture, 198:219-228, 2001) обнаружили, что нонановая кислота, а также C₆-С₁₀ жирные кислоты были эффективными при борьбе с ростом паразита С. irritans, и что С₈ , С₉ и С₁₀ были более сильными.

Установлено, что Trichoderma harzianum, биорегулятор для растений какао, производит пеларгоновую кислоту в качестве одного из многих химических продуктов, и был эффективен для контроля развития и роста патогенов какао. (M. Aneja, T. Gianfagna and P. Hebbar, Trichoderma harzianum produces nonanoic acid, an inhibitor of spore germination and mycelial growth of two cacao pathogens, Physiological and Molecular Plant Pathology 67:304-307, 2005).

Опубликованная патентная заявка US 2004/0266852 раскрывает фунгицид для сельскохозяйственных применений, содержащий одну или несколько жирных кислот и одну или несколько органических кислот, отличных от жирной кислоты. В смеси органических кислот с жирной кислотой органическая кислота действует в качестве сильного синергиста для жирной кислоты как фунгицида.

Патент США № 5366995 раскрывает способ уничтожения грибковых и бактериальных инфекций у растений и повышения активности фунгицидов и бактерицидных средств у растений с помощью жирных кислот и их производных с составом, содержащим 80% пеларгоновой кислоты или ее солей для борьбы с грибами, поражающими растения. Используемые в первую очередь жирные кислоты имеют цепи из 9-18 углеродов.

Патент США № 5342630 раскрывает пестицид для применений у растений, содержащий неорганическую соль, которая увеличивает эффективность жирных кислот с цепью из 8-22 углеродов. Один из примеров показывает порошковый продукт с 2% пеларгоновой кислоты, 2% каприновой кислоты, 80% талька, 10% натрия карбоната и 5% калия карбоната.

Патент США № 5093124 раскрывает фунгицид и средство для уничтожения членистоногих для растений, содержащий альфа-монокарбоновые кислоты и их соли, обладающие пониженной фитотоксичностью. Предпочтительно, фунгицид с 9-10 углеродами в цепи по меньшей мере частично нейтрализуют активным щелочным металлом, таким как калий. Смесь содержит 40% активного ингредиента, растворенного в воде, и включает 10% пеларгоновой, 10% каприновой кислоты и 20% кокосовых жирных кислот, все из которых нейтрализуют гидроксидом калия.

Патент США № 6596763 раскрывает способ борьбы с кожными инфекциями, содержащий жирные кислоты с 6-18 углеродами в цепи или их производные.

Патент США № 6103768 и патент США № 6136856 раскрывают уникальную пригодность жирных кислот и производных для уничтожения существующих грибковых и бактериальных инфекций у растений. Этот способ не является профилактическим, но показывает эффективность при установленных инфекциях. Sharpshooter, коммерчески доступный продукт с 80% пеларгоновой кислоты, 2% эмульгатора и 18% поверхностно-активного вещества, показывает эффективность против Penicillium и Botrytis spp. Патент США № 6638978 раскрывает антимикробный консервант, содержащий сложный эфир глицерина и жирной кислоты, бинарную смесь жирных кислот (6-18 углеродов в цепи) и вторую жирную кислоту (6-18 углеродов в цепи), где вторая жирная кислота отличается от первой жирной кислоты, для консервирования пищи.

Документ WO 01/97799 раскрывает применение среднецепочечных жирных кислот в качестве антимикробных средств. Он показывает, что увеличение pH от 6,5 до 7,5 увеличивает МИК короткоцепочечных жирных кислот, содержащих 6-8 углеродные цепи.

Пеларгоновую кислоту применяют в качестве компонента в растворах для санитарной обработки поверхностей, контактирующих с пищей, в учреждениях, связанных с обработкой пищи. Продукт от EcoLab содержит 6,49% пеларгоновой кислоты в качестве активного ингредиента, который нужно применять в качестве дезинфицирующего средства для всех поверхностей, контактирующих с пищей (12 CFR 178.1010 b).

FDA разрешил пеларгоновую кислоту в качестве синтетического пищевого ароматизатора (21 CFR 172.515), в качестве вспомогательного вещества, производственного вспомогательного и дезинфицирующего средства, которое нужно использовать при контакте с пищей (12 CFR 178.1010 b) и при мойке или для облегчения очистки раствором щелочи фруктов и овощей (12 CFR 173.315).

Пеларгоновая кислота внесена в список USDA (Департамент сельского хозяйства США) в перечне разрешенных USDA веществ, 1990, раздел 5.14, Соединения для мойки фруктов и овощей (USDA list of Authorized Substances, 1990, section 5.14, Fruit and Vegetable Washing Compounds).

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ДАННОГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Целью данного изобретения является обеспечение антибактериальной композиции для продления срока хранения воды, корма или кормовых компонентов, содержащей: 1-99 вес. % органических кислот в водном растворе, который представляет собой C₂:C₉ или С₃:С₉ смесь органических кислот, стабилизированную буфером до pH=1-5; 0-20% по весу терпенов и 0,5-10% поверхностно-активных веществ; где концентрация C₉ кислоты составляет 2-20 вес.% на основе общего содержания органических кислот.

Другой целью данного изобретения является обеспечение способа продления срока хранения воды, корма или кормовых компонентов, включающего: обработку распылением или примешивание к воде, корму или основным кормовым компонентам эффективного количества композиции, содержащей 1-99 вес.% органических кислот в водном растворе, который представляет собой C₂:C₉ или C ₃:C₉ смесь органических кислот, стабилизированную буфером до pH 1-5; 0-20% по весу терпенов и 0,5-10% поверхностно-активных веществ; где концентрация C₉ кислоты составляет 2-20 вес.% на основе общего содержания органических кислот.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Определения:

Органическая кислота данного изобретения представляет собой соединение карбоновой кислоты с неразветвленной или разветвленной с C₁-C ₁₈ углеводородной цепью, например, муравьиную кислоту, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, масляную кислоту и пеларгоновую кислоту.

Раствор, стабилизированный буфером представляет собой таковой, который препятствует изменениям pH при добавлении небольших количеств кислоты или щелочи. Буферная емкость представляет собой количественную меру устойчивости буферного раствора к изменению pH при добавлении гидроксильных ионов. Буферные системы данного изобретения включают

HCl, натрия цитрат pH 1-5

Лимонная кислота, натрия цитрат pH 2,5-5,6

Уксусная кислота, натрия ацетат pH 3,7-5,6

NH₄Cl, NH₄OH pH от 1 до 11

Антимикробный терпен данного изобретения может быть аллилдисульфидом, цитралем, пиненом, неролом, гераниолом, карвакролом, эвгенолом, карвоном, анетолом, камфорой, ментолом, лимоненом, фарнезолом, каротином, тимолом, борнеолом, мирценом, терпиненом, линалоолом или их смесями. Предпочтительными терпенами являются аллилдисульфид, тимол, цитраль, эвгенол, карвакрол и карвон или их смеси.

Выражение эффективное количество соединения означает такое количество, которое способно выполнять функцию соединения, или свойство, для которого эффективное количество выражено, как, например, нетоксичное, но достаточное количество для обеспечения антимикробного эффекта. Таким образом, эффективное количество может быть определено специалистом в данной области с применением обычных методик.

Составы могут различаться не только по концентрации основных компонентов, т.е. органических кислот, но также по типу терпенов, типу поверхностно-активного вещества и концентрации воды, которые применяют. Данное изобретение можно модифицировать путем добавления или удаления терпенов и поверхностно-активных веществ из составов.

Выражение синергический эффект или синергизм означает улучшенное консервирующее действие, когда ингредиенты применяют в виде смеси, по сравнению с ожидаемым аддитивным эффектом на основе каждого компонента, применяемого отдельно.

Композиции данного изобретения содержат органические кислоты с 1-18 углеродами, содержащие эффективное количество смеси С ₂:С₉ или C₃:C₉, приводя в результате к синергическому консервирующему действию. В целом, водный раствор короткоцепочечных кислот стабилизируют буфером до pH 1-5, предпочтительно pH 1-3, затем C₉ (пеларгоновую) кислоту добавляют в количестве от 2 до 20 вес.% вместе с факультативными терпенами, и поверхностно-активными веществами, и другими добавками.

Антимикробные терпены, растительные экстракты или эфирные масла, содержащие терпены, можно применять в данном изобретении, также как и более очищенные терпены. Терпены являются коммерчески доступными или могут быть получены различными способами, известными в данном уровне техники, такими как экстракция растворителем или экстракция паром/дистилляция, или химически синтезированы.

Поверхностно-активное вещество может быть неионным, катионным или анионным. Примеры поверхностно-активных веществ включают полисорбат 20, полисорбат 80, полисорбат 40, полисорбат 60, полиглицериловый сложный эфир, полиглицерилмоноолеат, декаглицерилмонокаприлат, пропиленгликольдикаприлат, триглицеринмоностеарат, Tween 20, Span 20, Span 40, Span 60, Span 80, поверхностно-активные вещества на основе этоксилированного касторового масла или их смеси.

Вся композиция может содержать от 1% до 100% по весу органических кислот, предпочтительно 20-95%. Из компонента органических кислот 2-20% по весу представляют собой пеларгоновую кислоту, и остальные 98-80% по весу представляют собой уксусную кислоту, пропионовую кислоту или их смесь. Композиция может содержать 0-20% по весу терпенов, предпочтительно 0,5-10%, и 0-20% по весу поверхностно-активного вещества, предпочтительно 0,5-5%. Вся композиция может содержать 0-99 вес.% воды.

Данное изобретение эффективно против любых из этих классификаций инфекционных агентов, присутствующих в воде, корме и основных кормовых компонентах, в частности, бактерий, микоплазмы, вирусов и грибов. Примерами этих инфекционных агентов являются Staphylococcus aureus, Aspergillius fumigatus, Mycoplasma iowae, Sclerotinta homeocarpa, Rhizoctonia solani, Colletotrichum graminicola, Penicillum sp., Mycoplasma pneunmoniae, E.coli, Salmonella sp., Clostridia sp., Campylobacter sp. и другие. Композиции и способы данного изобретения эффективны для предотвращения многих, если не всех, этих инфекций у широкого ряда субъектов, включая людей, других млекопитающих и птиц.

Данное изобретение включает способ дезинфекции воды, корма и кормовых компонентов. Способ включает введение композиции с помощью разнообразных средств. Например, путем распыления на корм, распыления на воду, смешивания с питьевой водой, нанесения на поверхности, где вода и корм хранятся для дальнейшего использования или ежедневного употребления, добавления по каплям через стандартный медикатор или аппарат для дезинфекции воды, например, в стартовом, ростовом и финишном помещениях для животных.

Композицию данного изобретения можно безопасно и эффективно применять в качестве консерванта для воды и корма для всех промышленно выращиваемых животных, для потребления человеком и наружного применения, для животных-компаньонов и других животных, где низкая концентрация микробов желательна в источниках корма или воды.

Во всей данной заявке есть ссылки на различные публикации. Раскрытия этих публикаций таким образом включены ссылкой в их полноте в данную заявку.

ПРИМЕР 1 - Оценка органических кислот, стабилизированных буфером

Цель: Определить влияние pH на антимикробную активность уксусной и пропионовой кислот

Обработки:

1) Контроль (отрицательный контроль)

2) Муравьиная кислота : пропионовая кислота (соотношение 90:10; положительный контроль)

3) Уксусная кислота (pH 1)

4) Уксусная кислота (pH 2)

5) Уксусная кислота (pH 3)

6) Уксусная кислота (pH 4)

7) Уксусная кислота (pH 5)

8) Уксусная кислота (pH 6)

9) Уксусная кислота (pH 7)

10) Пропионовая кислота (pH 1)

11) Пропионовая кислота (pH 2)

12) Пропионовая кислота (pH 3)

13) Пропионовая кислота (pH 4)

14) Пропионовая кислота (pH 5)

15) Пропионовая кислота (pH 6)

16) Пропионовая кислота (pH 7)

Процедура:

Пропионовую и уксусную кислоты стабилизировали буферным раствором гидроксида аммония до показателей pH, находящихся в диапазоне от 1 до 7. Содержания кислот растворов, стабилизированных буфером, определяли путем вычисления весового соотношения для получения такого же содержания кислоты в тестовых растворах. Растворы добавляли к стерильной деионизированной воде, чтобы обеспечить 0,025%, 0,05%, 0,075% и 0,1% раствор кислоты. Показатели pH растворов в деионизированной воде записывали и указывали любые проблемы с растворимостью.

100 мкл культуры Salmonella typhimurium (ATTC 14028) в питательном бульоне добавили в каждую пробирку для разведения. После добавления пробирки подвергали обработке с помощью вортекс-мешалки и выдерживали. Через 4 и 24 часа после добавления инокулята 100 мкл раствора высеивали на стандартном слое питательной среды с агаром (слои питательной среды в трех повторностях). Слои питательной среды инкубировали при 37°C в течение 24 часов перед подсчетом. Минимальную эффективную дозу каждой кислоты определяли с помощью линейной регрессии.

Результаты:

Таблица 1.
Влияние стабилизации pH буфером на эффективность уксусной кислоты против сальмонеллы
Тестируемый продукт	Конц. продукта	Сальмонелла при временном интервале
		4 часа		24 часа
		КОЕ/г	% снижения	КОЕ/г	% снижения
Контроль	Нет данных	1505	0	1180	0

Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,025		203		87		0		100
Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,05		50		97		0		100
Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,075		20		99		0		100
Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,1		3		100		0		100
Уксусная pH 1	0,025		883		41		107		91
Уксусная pH 1	0,05		750		50		7		99
Уксусная pH 1	0,075		617		59		17		99
Уксусная pH 1	0,1		520		65		7		99
Уксусная pH 2	0,025		920		39		170		86
Уксусная pH 2	0,05		817		46		50		96
Уксусная pH 2	0,075		673		55		20		98
Уксусная pH 2	0,1		670		55		17		99
Уксусная pH 3	0,025		1100		27		300		75
Уксусная pH 3	0,05		843		44		117		90
Уксусная pH 3	0,075		927		38		90		92
Уксусная pH 3	0,1		873		42		43		96
Уксусная pH 4	0,025		1067		29		543		54
Уксусная pH 4	0,05		1167		22		407		66
Уксусная pH 4	0,075		1097		27		263		78
Уксусная pH 4	0,1		1167		22		183		84
Уксусная pH 5	0,025		1267		16		993		16
Уксусная pH 5	0,05		1533		0		873		26
Уксусная pH 5	0,075		1367		9		805		32
Уксусная pH 5	0,1		1300		14		597		49
Уксусная pH 6	0,025		1500		0		1167		1
Уксусная pH 6	0,05		1767		0		1400		0
Уксусная pH 6	0,075		1667		0		1400		0
Уксусная pH 6	0,1		1633		0		1433		0
Уксусная pH 7	0,025		1567		0		1300		0
Уксусная pH 7	0,05		1600		0		1433		0
Уксусная pH 7	0,075		1467		2		1433		0
Уксусная pH 7	0,1		1567		0		1500		0
Таблица 2.
Влияние стабилизации pH буфером на эффективность пропионовой кислоты против сальмонеллы
Тестируемый продукт		Конц. продукта		Сальмонелла при временном интервале
				4 часа				24 часа
				КОЕ/г		% снижения		КОЕ/г		% снижения
Контроль		Нет данных		1505		0		1180		0

Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,025		203	87		0	100
Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,05		50	97		0	100
Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,075		20	99		0	100
Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,1		3	100		0	100
Пропионовая pH 1	0,025		1200	20		133	89
Пропионовая pH 1	0,05		923	39		37	97
Пропионовая pH 1	0,075		530	65		23	98
Пропионовая pH 1	0,1		450	70		10	99
Пропионовая pH 2	0,025		1067	29		70	94
Пропионовая pH 2	0,05		733	51		10	99
Пропионовая pH 2	0,075		477	68		13	99
Пропионовая pH 2	0,1		380	75		7	99
Пропионовая pH 3	0,025		1467	2		190	84
Пропионовая pH 3	0,05		847	44		83	93
Пропионовая pH 3	0,075		973	35		60	95
Пропионовая pH 3	0,1		603	60		27	98
Пропионовая pH 4	0,025		1367	9		615	48
Пропионовая pH 4	0,05		1200	20		293	75
Пропионовая pH 4	0,075		943	37		187	84
Пропионовая pH 4	0,1		1167	22		163	86
Пропионовая pH 5	0,025		>1505	0		793	33
Пропионовая pH 5	0,05		1400	7		943	20
Пропионовая pH 5	0,075		1167	22		630	47
Пропионовая pH 5	0,1		817	46		557	53
Пропионовая pH 6	0,025		>1505	0		1450	0
Пропионовая pH 6	0,05		1400	7		1067	10
Пропионовая pH 6	0,075		>1505	0		1233	0
Пропионовая pH 6	0,1		1700	0		1333	0
Пропионовая pH 7	0,025		>1505	0		1667	0
Пропионовая pH 7	0,05		1700	0		1367	0
Пропионовая pH 7	0,075		>1505	0		1700	0
Пропионовая pH 7	0,1		1600	0		1367	0
Таблица 3.
Минимальные ингибирующие концентрации
Обработка		МИК через 4 часа			МИК через 24 часа
Муравьиная : пропионовая		0,067			<0,025
Уксусная, pH 1		0,129			0,065
Уксусная, pH 2		0,142			0,067
Уксусная, pH 3		0,176			0,073
Уксусная, pH 4		0,207			0,096
Уксусная, pH 5		0,238			0,210
Уксусная, pH 6		ND			ND

Уксусная, pH 7	ND	ND
Пропионовая, pH 1	0,131	0,066
Пропионовая, pH 2	0,120	0,064
Пропионовая, pH 3	0,149	0,069
Пропионовая, pH 4	0,237	0,091
Пропионовая, pH 5	0,170	0,165
Пропионовая, pH 6	ND	ND
Пропионовая pH 7	ND	ND
ND - МИК не может быть определена вследствие отсутствия эффекта при самой высокой интенсивности дозы.

Выводы: Стабилизация аммонийным буфером уксусной или пропионовой кислоты уменьшила эффективность продукта в отношении сальмонеллы. Точка перехода оказывается между pH 3-4.

ПРИМЕР 2 - Оценка отдельных органических кислот

Цель: Определить влияние длины углеродной цепи органических кислот на антимикробную активность

Обработки:

1) Контроль

2) Муравьиная кислота : пропионовая кислота (соотношение 90:10; положительный контроль)

3) Муравьиная кислота

4) Уксусная кислота

5) Пропионовая кислота

6) Масляная кислота

7) Валериановая кислота

8) Капроновая кислота

9) Энантовая кислота

10) Каприловая кислота

11) Пеларгоновая кислота

12) Лауриновая кислота

13) Калия гидроксид

Процедура:

В данном эксперименте оценивали воздействие свободных жирных кислот. Некоторые длинноцепочечные жирные кислоты (каприловая, пеларгоновая и лауриновая) не растворялись в воде, и KOH применяли для получения раствора этих кислот в воде (конечный раствор содержал равные количества по весу кислоты и KOH). Содержание кислоты в растворах определяли путем вычисления весового соотношения (вес кислоты/общий вес раствора, стабилизированного буфером). Растворы добавляли к стерильной деионизированной воде, чтобы обеспечить 0,025%, 0,05%, 0,075% и 0,1% растворы кислот. Показатель pH растворов в деионизированной воде записывали и указывали любые проблемы с растворимостью.

100 мкл культуры Salmonella typhimurium (ATTC 14028) в питательном бульоне добавляли в каждую пробирку для разведения. После добавления пробирки обрабатывали с помощью вортекс-мешалки и выдерживали. Через 4 и 24 часа после добавления инокулята 100 мкл раствора высеивали на агар (слои питательной среды в трех повторностях). Слои питательной среды инкубировали при 37°С в течение 24 часов перед подсчетом. Минимальную эффективную дозу каждой кислоты определяли с помощью линейной регрессии.

Таблица 4.
Воздействие органических кислот на сальмонеллу
Тестируемый продукт	Конц. продукта	Сальмонелла при временном интервале
		4 часа		24 часа
		КОЕ/г	% снижения	КОЕ/г	% снижения
Контроль		1600	0	1700	0
Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,025	160	90	0	100
Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,05	20	99	0	100
Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,075	0	100	0	100

Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,1		0	100		0	100
Муравьиная кислота	0,025		83	95		0	100
Муравьиная кислота	0,05		7	100		0	100
Муравьиная кислота	0,075		0	100		0	100
Муравьиная кислота	0,1		0	100		0	100
Уксусная кислота	0,025		917	43		80	95
Уксусная кислота	0,05		840	48		13	99
Уксусная кислота	0,075		677	58		10	99
Уксусная кислота	0,1		513	68		15	99
Пропионовая кислота	0,025		1167	27		170	90
Пропионовая кислота	0,05		900	44		40	98
Пропионовая кислота	0,075		877	45		25	99
Пропионовая кислота	0,1		773	52		30	98
Масляная кислота	0,025		1060	34		170	90
Масляная кислота	0,05		833	48		57	97
Масляная кислота	0,075		977	39		30	98
Масляная кислота	0,1		547	66		10	99
Валериановая кислота	0,025		1233	23		533	69
Валериановая кислота	0,05		1267	21		73	96
Валериановая кислота	0,075		990	38		37	98
Валериановая кислота	0,1		657	59		17	99
Капроновая кислота	0,025		1267	21		30	98
Капроновая кислота	0,05		1433	10		7	100
Капроновая кислота	0,075		523	67		0	100
Капроновая кислота	0,1		27	98		0	100
Энантовая кислота	0,025		1103	31		10	99
Энантовая кислота	0,05		0	100		0	100
Энантовая кислота	0,075		0	100		0	100
Энантовая кислота	0,1		0	100		0	100
Каприловая кислота/KOH	0,025		1567	2		1400	18
Каприловая кислота/KOH	0,05		1333	17		797	53
Каприловая кислота/KOH	0,075		1100	31		77	95
Каприловая кислота/KOH	0,1		0	100		0	100
Пеларгоновая кислота/KOH	0,025		7	100		0	100
Пеларгоновая кислота/KOH	0,05		0	100		0	100
Пеларгоновая кислота/KOH	0,075		0	100		0	100
Пеларгоновая кислота/KOH	0,1		0	100		0	100
Лауриновая кислота/KOH	0,025		670	58		20	99
Лауриновая кислота/KOH	0,05		0	100		0	100
Лауриновая кислота/KOH	0,075		0	100		0	100
Лауриновая кислота/KOH	0,1		0	100		0	100
KOH	0,025		0	100		0	100
KOH	0,05		0	100		0	100
KOH	0,075		0	100		0	100
KOH	0,1		0	100		0	100
Таблица 5.
Минимальная ингибирующая концентрация органических кислот против сальмонеллы
Обработка		МИК через 4 часа			МИК через 24 часа
Муравьиная кислота : пропионовая кислота		0,065			<0,025

Муравьиная кислота	0,064	<0,025
Уксусная кислота	0,129	0,064
Пропионовая кислота	0,166	0,066
Масляная кислота	0,142	0,066
Валериановая кислота	0,174	0,070
Капроновая кислота	0,103	0,063
Энантовая кислота	0,075	0,063
Каприловая кислота	0,109	0,090
Пеларгоновая кислота	0,063	<0,025
Лауриновая кислота	0,072	<0,025
Калия гидроксид	<0,025	<0,025

Выводы: Не было обнаружено прямой зависимости между эффективностью против сальмонеллы и длиной цепи органической кислоты. Это противоречит эффектам, приведенным для длины цепи кислоты и противогрибковой эффективности. Активность каприловой, пеларгоновой и лауриновой кислот нельзя сравнить с кислотами с более короткими цепями вследствие применения KOH.

ПРИМЕР 3 - Смеси органических кислот, стабилизированные буфером

Цель: На основании предыдущих исследований из длинноцепочечных органических кислот пеларгоновая, как наблюдали, является наиболее эффективной. Этот эксперимент должен определить, существует ли синергический эффект, когда стабилизированную буфером пропионовую или уксусную кислоту объединяют с пеларгоновой кислотой.

Тестируемые продукты:

1. Контроль

2. Муравьиная кислота : пропионовая кислота (соотношение 90:10, положительный контроль)

3. Уксусная кислота

4. Уксусная кислота : пеларгоновая кислота (80:20; вес/вес)

5. Уксусная кислота : пеларгоновая кислота (60:40; вес/вес)

6. Уксусная кислота : пеларгоновая кислота (40:60; вес/вес)

7. Уксусная кислота : пеларгоновая кислота (20:80; вес/вес)

8. Пропионовая кислота

9. Пропионовая кислота : пеларгоновая кислота (80:20; вес/вес)

10. Пропионовая кислота : пеларгоновая кислота (60:40; вес/вес)

11. Пропионовая кислота : пеларгоновая кислота (40:60; вес/вес)

12. Пропионовая кислота : пеларгоновая кислота (20:80; вес/вес)

13. Пеларгоновая кислота

Процедура: Пропионовую и уксусную кислоты стабилизировали буферным раствором гидроксида аммония до pH 3 и объединяли с пеларгоновой в вышеуказанных соотношениях. Содержание кислоты растворов, стабилизированных буфером, определяли путем вычисления весового соотношения (вес кислоты/общий вес раствора, стабилизированного буфером) и регулировали для обеспечения равного кислотного числа для каждой обработки. Вышеуказанные обработки добавляли к стерильной деионизированной воде, чтобы получить приблизительно 0,025%, 0,05%, 0,075% и 0,1% общего содержания кислоты в растворах. Показатели pH растворов в деионизированной воде записывали и указывали любые проблемы с растворимостью.

100 мкл культуры Salmonella typhimurium (ATTC 14028) в питательном бульоне добавили в каждую пробирку для разведения. После добавления пробирки обрабатывали с помощью вортекс-мешалки и выдерживали. Через 4 и 24 часа после добавления инокулята 100 мкл раствора высеивали на стандартный слой питательной среды с агаром (слои питательной среды в трех повторностях). Слои инкубировали при 37°С в течение 24 часов перед подсчетом. Минимальную эффективную дозу каждой кислоты определяли с помощью линейной регрессии.

Таблица 6.
Влияние пеларгоновой кислоты на эффективность уксусной или пропионовой против сальмонеллы
Тестируемый продукт	Конц. продукта	Сальмонелла при временном интервале
		4 часа		24 часа
		КОЕ/г	% снижения	КОЕ/г	% снижения
Контроль	Нет данных	1517	0	1344	0
Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,025	200	87	0	100
	0,05	67	96	0	100
	0,075	20	99	2	100
	0,1	10	99	0	100
100% пропионовой pH 3	0,025	1133	25	70	95
	0,05	880	42	17	99
	0,075	1133	25	20	99
	0,1	857	44	13	99
80% пропионовой pH 3:20% пеларгоновой	0,025	0	100	3	100
	0,05	0	100	0	100
	0,075	0	100	3	100
	0,1	0	100	0	100
60% пропионовой pH 3:40% пеларгоновой	0,025	0	100	0	100
	0,05	0	100	0	100
	0,075	0	100	3	100
	0,1	0	100	0	100
40% пропионовой pH 3:60% пеларгоновой	0,025	0	100	0	100
	0,05	0	100	0	100
	0,075	0	100	3	100
	0,1	0	100	0	100
20% пропионовой pH 3:80% пеларгоновой	0,025	0	100	0	100
	0,05	0	100	0	100
	0,075	0	100	3	100
	0,1	0	100	0	100
100% уксусной pH 3	0,025	943	38	123	92
	0,05	1007	34	120	92
	0,075	1007	34	77	95
	0,1	967	36	83	95
80% уксусной pH 3:20% пеларгоновой	0,025	0	100	0	100
	0,05	0	100	0	100
	0,075	0	100	3	100
	0,1	0	100	0	100
60% уксусной pH 3:40% пеларгоновой	0,025	0	100	0	100
	0,05	0	100	0	100
	0,075	0	100	3	100
	0,1	0	100	0	100

40% уксусной pH 3:60% пеларгоновой	0,025	0		100	0		100
	0,05	0		100	0		100
	0,075	0		100	3		100
	0,1	0		100	0		100
20% уксусной pH 3:80% пеларгоновой	0,025	0		100	0		100
	0,05	0		100	0		100
	0,075	0		100	0		100
	0,1	0		100	0		100
Пеларгоновая	0,025	0		100	0		100
	0,05	0		100	0		100
	0,075	0		100	0		100
	0,1	0		100	0		100
Таблица 7.
Минимальная ингибирующая концентрация пеларгоновой кислоты при смешивании с уксусной или пропионовой кислотой
Обработка			МИК через 4 часа			МИК через 24 часа
Муравьиная кислота : пропионовая кислота			0,067			<0,025
Пропионовая кислота			0,179			0,064
Пропионовая кислота : пеларгоновая кислота (80:20)			<0,025			0,063
Пропионовая кислота : пеларгоновая кислота (60:40)			<0,025			<0,025
Пропионовая кислота : пеларгоновая кислота (40:60)			<0,025			<0,025
Пропионовая кислота : пеларгоновая кислота (20:80)			0,025			<0,025
Уксусная кислота			0,171			0,068
Уксусная кислота : пеларгоновая кислота (80:20)			<0,025			<0,025
Уксусная кислота : пеларгоновая кислота (60:40)			<0,025			<0,025
Уксусная кислота : пеларгоновая кислота (40:60)			<0,025			<0,025
Уксусная кислота : пеларгоновая кислота (20:80)			<0,025			<0,025
Пеларгоновая кислота			<0,025			<0,025

Вывод: Добавление пеларгоновой кислоты к пропионовой или уксусной кислоте приводит в результате к увеличению эффективности.

ИССЛЕДОВАНИЕ 4

Пропионовую и уксусную кислоты стабилизировали буферным раствором гидроксида аммония до pH 3 и объединяли с пеларгоновой в указанных соотношениях. Содержание кислоты растворов, стабилизированных буфером, определяли путем вычисления весового соотношения (вес кислоты/общий вес раствора, стабилизированного буфером) и регулировали для обеспечения одинакового кислотного числа для каждой обработки. Вышеуказанные обработки добавляли к стерильной деионизированной воде, чтобы получить приблизительно 0,025% и 0,05% общего содержания кислоты в растворах. Показатели pH растворов в деионизированной воде записывали и указывали любые проблемы с растворимостью.

100 мкл культуры Salmonella typhimurium (ATTC 14028) в питательном бульоне добавляли в каждую пробирку для разведения. После добавления пробирки обрабатывали с помощью вортекс-мешалки и выдерживали. Через 4 и 24 часа после добавления инокулята 100 мкл раствора высеивали на стандартный слой питательной среды с агаром (слои питательной среды в трех повторностях). Слои инкубировали при 37°С в течение 24 часов перед подсчетом.

Таблица 8.
Влияние пеларгоновой кислоты на эффективность уксусной или пропионовой кислоты против сальмонеллы
Тестируемый продукт	Концентрация продукта	Сальмонелла при временном интервале
		4 часа		24 часа
		(КОЕ/г)	% снижения	(КОЕ/г)	% снижения
Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0,025	600	57	<10	100
	0,05	170	88	<10	100
100% пропионовой pH 3	0,025	990	29	130	91
	0,05	1000	29	50	96
99% пропионовой pH 3:1% пеларгоновой	0,025	1100	21	100	93
	0,05	620	56	<10	100
98% пропионовой pH 3:2% пеларгоновой	0,025	1100	21	60	96
	0,05	560	60	<10	100
95% пропионовой pH 3:5% пеларгоновой	0,025	780	44	<10	100
	0,05	50	96	<10	100

90% пропионовой pH 3:10% пеларгоновой	0,025	220	84	<10	100
	0,05	<10	100	<10	100
80% пропионовой pH 3:20% пеларгоновой	0,025	<10	100	<10	100
	0,05	<10	100	<10	100
100% уксусной pH 3	0,025	1000	29	60	96
	0,05	950	32	20	99
99% уксусной pH 3:1% пеларгоновой	0,025	1200	14	90	94
	0,05	820	41	<10	100
98% уксусной pH 3:2% пеларгоновой	0,025	1100	21	40	97
	0,05	710	49	<10	100
95% уксусной pH 3:5% пеларгоновой	0,025	690	51	<10	100
	0,05	40	97	<10	100
90% уксусной pH 3:10% пеларгоновой	0,025	280	80	<10	100
	0,05	<10	100	<10	100
80% уксусной pH 3:20% пеларгоновой	0,025	<10	100	<10	100
	0,05	<10	100	<10	100
Контроль		1400		1400

Вывод: Добавление пеларгоновой кислоты (1-20%) к пропионовой или уксусной кислоте приводит в результате к увеличению эффективности против сальмонеллы.

ИССЛЕДОВАНИЕ 5

Пропионовую, уксусную и пеларгоновую кислоты сами по себе или в комбинации, как перечислено, добавили к стерильной деионизированной воде, чтобы получить приблизительно 0,05%, 0,04%, 0,03%, 0,02% и 0,01% общего содержания кислоты в растворах. Показатели pH растворов в деионизированной воде записывали и указывали любые проблемы с растворимостью. 100 мкл культуры Salmonella typhimurium (ATTC 14028) в питательном бульоне добавили в каждую пробирку для разведения. После добавления пробирки обрабатывали с помощью вортекс-мешалки и выдерживали. Через 24 часа после добавления инокулята 100 мкл раствора высеивали на стандартный слой питательной среды с агаром (слои питательной среды в трех повторностях). Слои инкубировали при 37°C в течение 24 часов перед подсчетом.

Таблица 9.
Влияние пеларгоновой кислоты на эффективность уксусной или пропионовой кислоты против сальмонеллы
	Сальмонелла через 24 часа после обработки (КОЕ/г)
Тестируемый продукт (%)	0,05	0,04	0,03	0,02	0,01
Муравьиная кислота : пропионовая кислота (90:10)	0	10	20	60	500
Пеларгоновая кислота	850	1500	UD	1300	1400
Пропионовая кислота	560	910	810	870	1200
Уксусная кислота	1100	1100	UD	1100	UD
Проп/пеларгоновая (95/5)	0	30	240	360	1400
Уксусная/Пеларгоновая (95/5)	20	130	UD	940	1100
Контроль	1400
UD = невозможно определить

Вывод: Тест показал увеличенную эффективность при смешивании пропионовой/пеларгоновой (95/5) и уксусной/пеларгоновой (95/5) кислот через 24 часа после обработки.

ИССЛЕДОВАНИЕ 6

Каприновую кислоту (5%, 10% или 20%), разведенную в уксусной кислоте или пропионовой кислоте, тестировали для определения ее эффективности против сальмонеллы в корме.

Товарный корм для домашней птицы с внесенной Salmonella typhimurium (ATTC 14028) обработали 1 или 3 кг/т (метрическая тонна) растворов, перечисленных ниже. Через двадцать четыре часа после обработки 10 г корма добавили к 90 мл буфера Баттерфилда, перемешали и затем 100 мкл раствора высеивали на стандартный слой питательной среды с агаром (слои питательной среды в трех повторностях). Слои инкубировали при 37°C в течение 24 часов перед подсчетом.

Таблица 10.
Воздействие каприновой/уксусной кислот на сальмонеллу в корме
Обработка	КОЕ/г	% снижения
Контроль	5733
Муравьиная : уксусная (1 кг/тонна)	17	99,7
Уксусная кислота (1 кг/тонна)	3367	41,3
Уксусная кислота (3 кг/тонна)	2600	54,6
5% каприновой в уксусной кислоте (1 кг/тонна)	3200	44,2
5% каприновой в уксусной кислоте (3 кг/тонна)	3733	34,9
10% каприновой в уксусной кислоте (1 кг/тонна)	3233	43,6
10% каприновой в уксусной кислоте (3 кг/тонна)	2900	49,4

20% каприновой в уксусной кислоте (1 кг/тонна)	3200	44,2
20% каприновой в уксусной кислоте (3 кг/тонна)	4500	21,5
Таблица 11.
Воздействие каприновой/пропионовой кислот на сальмонеллу в корме
Обработка	КОЕ/г	% снижения
Контроль	4500
Муравьиная:проп 1 кг/тонна	4100	8,9
Муравьиная:проп 3 кг/тонна	2067	54,1
Проп кислота 1 кг/тонна	4633	0
Проп кислота 3 кг/тонна	5633	0
5% каприновой в пропионовой кислоте 1 кг/тонна	3233	28,2
5% каприновой в пропионовой кислоте 3 кг/тонна	3400	24,4
10% каприновой в пропионовой кислоте 1 кг/тонна	2367	47,4
10% каприновой в пропионовой кислоте 3 кг/тонна	4033	10,4
20% каприновой в пропионовой кислоте 1 кг/тонна	4067	9,6
20% каприновой в пропионовой кислоте 3 кг/тонна	3700	17,8

Добавление каприновой кислоты к уксусной или пропионовой кислоте при концентрациях 5-20%, как оказалось, не улучшает значительно эффективность органической кислоты против сальмонеллы в корме.

ИССЛЕДОВАНИЕ 7

Миристиновую кислоту (5%, 10% и 20%), разведенную в пропионовой кислоте, тестировали для определения ее эффективности против сальмонеллы в корме. Миристиновая кислота не растворялась в уксусной кислоте.

Товарный корм для домашней птицы с внесенной Salmonella typhimurium (ATTC 14028) обрабатывали 1 или 3 кг/т (метрическая тонна) растворов, перечисленных ниже. Через двадцать четыре часа после обработки 10 г корма добавили к 90 мл буфера Баттерфилда, перемешали и затем 100 мкл раствора высеивали на стандартный слой питательной среды с агаром (слои питательной среды в трех повторностях). Слои инкубировали при 37°С в течение 24 часов перед подсчетом.

Таблица 12.
Воздействие миристиновой/пропионовой кислот на сальмонеллу в корме
Обработка	КОЕ/г	% снижения
Контроль	40000	-
Муравьиная : проп 1 кг/т (метрическая тонна)	23533	41,17
Муравьиная : проп 3 кг/т (метрическая тонна)	7167	82,08

Проп кислота 1 кг/т (метрическая тонна)	3967	90,08
Проп кислота 3 кг/т (метрическая тонна)	233	99,42
5% миристиновой в пропионовой кислоте 1 кг/т (метрическая тонна)	7767	80,58
5% миристиновой в пропионовой кислоте 3 кг/т (метрическая тонна)	1500	69,25
10% миристиновой в пропионовой кислоте 1 кг/т (метрическая тонна)	22567	43,58
10% миристиновой в пропионовой кислоте 3 кг/т (метрическая тонна)	23333	41,67
20% миристиновой в пропионовой кислоте 1 кг/т (метрическая тонна)	22667	43,33
20% миристиновой в пропионовой кислоте 3 кг/т (метрическая тонна)	22967	42,58

Не наблюдали никакого полезного воздействия на эффективность, когда добавляли миристиновую кислоту при 5-20% к пропионовой кислоте, по сравнению со стандартной комбинацией пропионовой кислоты.

ИССЛЕДОВАНИЕ 8

Лауриновую кислоту (5%, 10%, 20%), разведенную пропионовой кислотой, тестировали для определения ее эффективности против сальмонеллы в корме.

Товарный корм для домашней птицы с внесенной Salmonella typhimurium (ATTC 14028) обрабатывали 1 или 2 кг/т (метрическая тонна) растворов, перечисленных ниже. Через двадцать четыре часа после обработки 10 г корма добавили к 90 мл буфера Баттерфилда, перемешали и затем 100 мкл раствора высеивали на стандартный слой питательной среды с агаром (слои питательной среды в трех повторностях). Слои инкубировали при 37°C в течение 24 часов перед подсчетом.

Таблица 13.
Воздействие лауриновой/пропионовой кислот на сальмонеллу в корме
Обработка	КОЕ/г	% снижения
Контроль	33333	-
Муравьиная : проп 1 кг/т (метрическая тонна)	24633	26,1
Муравьиная : проп 3 кг/т (метрическая тонна)	10500	68,5
Проп кислота 1 кг/т (метрическая тонна)	2567	92,3
Проп кислота 3 кг/т (метрическая тонна)	0	100,0
5% лауриновой в пропионовой кислоте 1 кг/т (метрическая тонна)	8767	73,7
5% лауриновой в пропионовой кислоте 3 кг/т (метрическая тонна)	433	98,7

10% лауриновой в пропионовой кислоте 1 кг/т (метрическая тонна)	7800	76,6
10% лауриновой в пропионовой кислоте 3 кг/т (метрическая тонна)	833	97,5
20% лауриновой в пропионовой кислоте 1 кг/т (метрическая тонна)	9100	72,7
20% лауриновой в пропионовой кислоте 3 кг/т (метрическая тонна)	2333	93,0

Не наблюдали никакого полезного эффекта, когда добавляли лауриновую кислоту (5-20%) к пропионовой кислоте по сравнению со стандартной комбинацией пропионовой кислоты.

Специалистам данной области техники будет очевидно, что ряд модификаций и вариаций можно произвести в данном изобретении без отклонения от объема данного изобретения. Предполагается, что описание и примеры рассматриваются только как иллюстративные с точным объемом и сущностью данного изобретения, указанными в следующей формуле изобретения.