способ криоконсервации семени петухов

Формула изобретения

Способ криоконсервации семени петухов, характеризующийся тем, что семя петухов разбавляют в 5 раз в среде, которая содержит 100 см³ дистиллированной воды, 6 г лактозы, 0,58 г лимонной кислоты, 1 г трис-оксиметил-аминометана, 10 см³ желтка куриного яйца, 5 см³ глицерина, при этом температура семени и среды 18-20°C, затем разбавленное семя выдерживают 2 часа в холодильнике с температурой 2-5°C и после замораживают гранулами объемом по 0,2 мл на охлажденной до температуры жидкого азота фторопластовой пластине и помещают в жидкий азот.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области птицеводства, в частности к способам длительного хранения семени петухов в функциональном состоянии.

Известен способ криоконсервации семени петухов (Курбатова А.Д., Царенко Р.Г., Мавродиной Т.Г. (в кн. Курбатов А.Д., Платов Е.М., Корбан Н.В. и др. Криоконсервация спермы сельскохозяйственных животных, Ленинград, ВО Агропромиздат, 1988, стр.213-221), предусматривающий получение семени методом абдоминального массажа, сбор его в семяприемник при температуре 15-20°C и разлив во флаконы с последующим добавлением среды определенного состава. Однако данный способ отличается высокой трудоемкостью и, кроме того, обеспечивает снижение качественных характеристик семени вследствие неблагоприятного физиологического воздействия на сперматозоиды в процессе криоконсервации.

Известен способ криоконсервации семени петухов с использованием среды Лейк (Lake P., Stewart G. Preservation of fowl semen in liquid nitrogen -an improved method. Brit Poultry Science, 1978, vol.19, No 2, p.187-194), однако данный способ требует наличия специального оборудования (программный замораживатель, запаиватель ампул, центрифуга), что удорожает процесс замораживания, и проведения многошаговых длительных манипуляций при оттаивании, что увеличивает влияние субъективного фактора на жизнеспособность спермиев после оттаивания. Кроме того, центрифугирование заморожено-оттаянных сперматозоидов отрицательно сказывается на жизнеспособности сперматозоидов.

Известен способ криоконсервации семени быков в открытых гранулах объемом по 0,2 мл на охлажденной до температуры жидкого азота фторопластовой пластине (Ющенко Н.П., Семаков В.Г, Левин К.Л. Замораживание спермы быков в гранулах без применения сухого льда. Молочное и мясное скотоводство, 1968, № 5, с.36-37), однако данный способ предусматривает использование среды, оптимизированной для семени быков производителей, и в силу особенностей состава семени не может обеспечивать поддержание качественных характеристик семени при его тиражировании на другие виды животных.

Известна синтетическая среда для разбавления семени птиц, содержащая антибиотик Клафоран (Патент РФ 2210338. Синтетическая среда для разбавления семени птиц) и способ санации семени птиц введением в среду для разбавления тилозин тартрата (Патент РФ 2391940. Способ санации спермы петухов), однако среды, используемые в вышеназванных способах, могут быть использованы только для хранения семени в охлажденном состоянии и не пригодны для криоконсервации семени.

Известна синтетическая среда для замораживания спермы быков (Патент РФ 2323701. Синтетическая среда для замораживания спермы быков), содержащая трис-(гидроксиметил)-аминометан и лимонную кислоту, однако компоненты данной среды не сбалансированы для криоконсервации семени петухов.

Известен способ криоконсервации семени животных (Патент РФ 2393816. Способ подготовки спермы животных-производителей к ее использованию), предусматривающий использование в составе среды для замораживания трис-(гидроксиметил)-аминометана, лимонной кислоты и лактозы, однако применение данного способа неприемлемо для петухов из-за несоответствия режимов обработки спермы разных видов животных.

Известен способ криоконсервации спермы сельскохозяйственной птицы (Патент РФ 2054904. Способ обработки спермы сельскохозяйственной птицы), который включает разбавление спермы при ее последующем охлаждении, введение криопротектора, эквилибрацию с последующим замораживанием - оттаиванием, взятый в качестве прототипа. Однако недостатком данного способа является отсутствие в среде для замораживания средств, придающих ей буферность, что необходимо, во-первых, для нейтрализации кислой среды желтка, во вторых для стабилизации pH при смещении реакции среды в щелочную сторону из-за разного подавления констант диссоциации основных катионов и анионов, входящих в состав разбавленного семени. Такое смещение реакции среды ведет к высокой упорядоченности мембранных липидов, к снижению устойчивости их при криогенных воздействиях и, как следствие, к снижению качественных характеристик семени.

Задача изобретения - усилить защитные качества среды для криоконсервации семени и тем самым повысить качественные характеристики заморожено-оттаянного семени петухов и упростить процедуру криоконсервации и оттаивания семени.

Технический результат изобретения достигается способом криоконсервации семени петухов, характеризующимся тем, что семя петухов разбавляют в 5 раз в среде, которая содержит 100 см³ дистиллированной воды, 6 г лактозы, 0,58 г лимонной кислоты, 1 г трис-оксиметил-аминометана. 10 см³ желтка куриного яйца, 5 см³ глицерина, при этом температура семени и среды 18-20°C, затем разбавленное семя выдерживают 2 часа в холодильнике с температурой 2-5°C и после замораживают гранулами объемом по 0,2 мл на охлажденной до температуры жидкого азота фторопластовой пластине и помещают в жидкий азот.

Пример выполнения

Предлагаемый нами способ был использован для криоконсервации семени петухов генофондного стада ГНУ ВНИТИП Россельхозакадемии. Готовили среду для криоконсервации семени петухов следующего состава: (на 100 см³ дистиллированной воды - лактозы - 6,0 г, лимонной кислоты - 0,58 г, трис-оксиметил-аминометана - 1,0 г, желтка куриного яйца - 10 см³, глицерина - 5 см³). Семя петухов непосредственно после взятия разбавляли в 5 раз приведенной выше средой при температуре семени и среды 18-20°C. Разбавленное семя помещали в холодильник в условия 2-5°C и выдерживали 2 часа. Затем семя замораживали гранулами объемом по 0,2 мл на охлажденной до температуры жидкого азота фторопластовой пластине и помещали в жидкий азот для хранения. Оттаивание семени производили путем погружения гранулы в 3% раствор лимоннокислого натрия объемом 2 мл, нагретого до температуры 38-40°C.

Результаты оценки качественных характеристик заморожено-оттаянного семени приведены в таблице.

Показатель	Предлагаемый способ	Контроль (прототип)
Число голов петухов	10	10
Подвижность сперматозоидов в свежевзятом семени	80±2,3	80±1,8
Показатели после замораживания оттаивания
Подвижность, %	42,7±3,8	34,2±2,9
Сохранность акросом, %	92,1±0,9	85,4±1,4
Оплодотворяемость	89,4±2,2	82,5±3,1

Испытания показали, что предложенный способ по сравнению с контролем позволяет повысить качественные характеристики семени петухов после замораживания-оттаивания: подвижность сперматозоидов - на 8,5%, сохранность акросом - на 6,7% и оплодотворваемость - на 6,9%.

Изобретение применимо в птицеводстве и в биотехнологии, в частности в научно-исследовательских лабораториях, занимающихся сохранением генетических ресурсов сельскохозяйственной птицы.