способ раннего выявления дисметаболической нефропатии у детей 3-7 лет нефелометрическим методом

Формула изобретения

Способ раннего выявления дисметаболической нефропатии у детей 3-7 лет, заключающийся в том, что исследуют пробы мочи от 46 детей одновременно, в 96 луночный микропланшет в лунку 1 вносят 0,275 мл дистиллированной воды - отрицательный контроль планшета, в лунку 2 вносят 0,25 мл дистиллированной воды + 0,025 мл 10% водного раствора хлористого кальция - отрицательный контроль реактивов, в лунку 3 вносят 0,25 мл оксалата натрия + 0,025 мл дистиллированной воды, а в лунку 4 вносят 0,25 мл оксалата натрия + 0,025 мл 10% водного раствора хлористого кальция, где лунки 3 и 4 - положительный контроль; во все последующие лунки вносят пробы мочи по 0,25 мл, затем в нечетные лунки вносят по 0,025 мл дистиллированной воды, а во все четные - по 0,025 мл 10% водного раствора хлористого кальция, содержимое лунок микропланшета перемешивают, после чего определяют оптическую плотность проб мочи на микропланшетном ридере нефелометрическим методом при длине волны 620 нм, затем на основании построенной калибровочной кривой стандартного водного раствора оксалата натрия с концентрацией 13,4 г/л рассчитывают кристаллообразующую способность мочи по формуле:

Cоп=(Dn-Dn-1)·13,4/(D4-D3), где

D4 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с 10% раствором хлористого кальция,

D3 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с дистиллированной водой,

n - четные лунки микропланшета,

n-1 - нечетные лунки микропланшета,

D6 - оптическая плотность опытной пробы пациента № 1 с 10% раствором хлористого кальция,

D5 - оптическая плотность опытной пробы пациента № 1 с дистиллированной водой,

13,4 г/л - концентрация стандартного раствора оксалата натрия,

и при значении кристаллообразующей способности мочи выше 6,0 г/л относим конкретного ребенка к группе риска по формированию дисметаболической нефропатии.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно педиатрии, и может быть использовано для скрининга детей дошкольного возраста для раннего выявления у них дисметаболической нефропатии [1, 2, 4].

В качестве прототипа авторы предлагают качественный метод - тест на кальцифилаксию, рекомендованный в качестве скрининг-тестов МосОМКЗ НИИ педиатрии и детской хирургии Минздрава РФ в 1982 году [3].

Способ основан на том, что при добавлении к моче 10% водного раствора хлористого кальция (CaCl₂) образуется стабильная суспензия - нерастворимый осадок солей, присутствующих в моче пациентов с высоким риском развития почечной патологии, обменных нарушений. Мутность суспензии различной степени интенсивности свидетельствует не только о патологии, но и степени активности процесса кристаллообразования, которую можно выразить в численном эквиваленте. В норме помутнения не наблюдается.

Недостатком данного способа (прототипа) является то, что:

1) метод качественный и трудно судить о степени изменения состава мочи, приводящей к активному кристаллообразованию в каждом конкретном случае, а также врачу сложно следить за динамикой этих изменений при дальнейшем проведении оздоровительных и лечебных мероприятий.

2) данная методика выполняется в пробирках, поэтому пропускная способность лаборатории при выполнении данной методики низкая и не может быть использована для скрининга (обследования больших групп населения).

В предлагаемом авторами способе перечисленные недостатки устранены.

Задачей настоящего изобретения явилось создание нового неинвазивного количественного и пригодного для скрининга способа раннего выявления дисметаболической нефропатии у детей 3-7 лет нефелометрическим методом.

Технический результат изобретения заключается в том, что:

1) Для количественного определения интенсивности помутнения использовали стандартный водный раствор оксалата натрия с концентрацией 13,4 г/л для построения калибровочной кривой;

2) с целью увеличения пропускной способности лаборатории и пригодности способа для скрининга авторами предложено: выполнять исследование в 96-луночном микропланшете, что позволяет исследовать 92 пробы мочи (контроль и опыт) у 46 пациентов одновременно и восьмикратно сократить расход реактивов, таким образом снизить себестоимость анализа (фото № 1).

Заявленный технический результат достигается путем измерения значений оптических плотностей каждой лунки после взаимодействия мочи с 10% водным раствором хлорида кальция, в 96-луночном микропланщете фотометрически на микропланшетном ридере при длине волны 620 нм активность процесса кристаллообразования у 46 детей одновременно. В предлагаемой методике используются следующие готовые реактивы:

- Дистиллированная вода (Дистиллированная вода для инъекций в ампулах по 2 мл). ОАО «Дальхимфарм», Код АТХ [V07AB].

- Кальция хлорида гексагидрат 10% водный раствор (Раствор для внутривенного введения в ампулах по 10 мл с концентрацией 100 мг/мл), ФГУП «Армавирская биофабрика», рег № ЛСР-007953/08 (Код АТХ В05ХА07);

		7	8	3	4	9	0	5	6	1	2
		9	0	5	6	1	2	7	8	3	4
		1	2	7	8	3	4	9	0	5	6
		3	4	9	0	5	6	1	2	7	8
	0	5	6	1	2	7	8	3	4	9	0
1	2	7	8	3	4	9	0	5	6	1	2
3	4	9	0	5	6	1	2	7	8	3	4
5	6	1	2	7	8	3	4	9	0	5	6

В лунку 7 вносят 0,275 мл дистиллированной воды (контроль планшета).

В лунку 2 вносят 0,25 мл дистиллированной воды + 0,025 мл 10% водного раствора хлористого кальция (контроль реактивов).

Лунки 1 и 2 - это отрицательный контроль.

В лунку 3 вносят 0,25 мл оксалата натрия + 0,025 мл дистиллированной воды; в лунку 4 вносят 0,25 мл оксалата натрия + 0,025 мл 10% водного раствора хлористого кальция.

Лунки 3 и 4 - это положительный контроль (стандарт). На основании значений оптических плотностей строится калибровочная кривая.

Во все последующие лунки вносят пробы мочи пациентов: 5 и 6 - пробы пациента № 1, 7 и 8 - № 2 и т.д. (всего 46 обследованных за 1 раз).

Мочу вносят по 0,25 мл во все лунки, затем в нечетные вносят по 0,025 мл дистиллированной воды, а во все четные - по 0,025 мл 10% водного раствора хлористого кальция. Далее содержимое лунок микропланшета осторожно перемешивают, после чего измеряют значение оптических плотностей фотометрически на микропланшетном ридере (микропланшетном мультидетекторе Zenyth 1100 (Австрия)) при длине волны 620 нм (фото № 2).

Затем рассчитывают кристаллообразующую способность мочи в г/л по калибровочной кривой стандартного водного раствора оксалата натрия с концентрацией 13,4 г/л по формуле:

Соп=(Dn-Dn-1)·13,4/(D4-D3), где

D4 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с 10% раствором хлористого кальция,

D3 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с дистиллированной водой,

n - четные лунки микропланшета,

n-1 - нечетные лунки микропланшета,

D6 - оптическая плотность опытной пробы пациента № 1 с 10% раствором хлористого кальция,

D5 - оптическая плотность опытной пробы пациента № 1 с дистиллированной водой,

13,4 г/л - концентрация стандартного раствора оксалата натрия.

Определение биологических нормальных (референтных величин) проводилось в группе пациентов с медицинского осмотра в детском дошкольном учреждении (случайный выбор). Всего обследовано 112 клинически здоровых детей 3-7 лет.

Норма 0-6 г/л (рассчитанные авторами референтные величины).

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1

Амбулаторная карта № 13

Попов Денис, 4 года, обратился по поводу болей в животе, неприятных ощущений при мочеиспускании.

D4 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с 10% раствором хлористого кальция (D4=0,499),

D3 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с дистиллированной водой (D3=0,032),

D опыт пациента = 0,377,

D контроль пациента = 0,070,

Разница оптической плотности опыта и контроля пациента = 0,307.

Способность мочи к кристаллообразованию данного пациента = (0,377-0,070)·13,4/(0,499-0,032)=0,307·13,4/0,467=8,81 г/л

8,81>6

Ребенок отнесен в группу риска формирования дисметаболической нефропатии и направлен к нефрологу. Диагноз подтвердился.

Пример 2

Амбулаторная карта № 19

Зелинская Ксения, 5 лет, обратилась по поводу рецидивирующего вульвита.

D4 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с 10% раствором хлористого кальция (D4=0,499),

D3 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с дистиллированной водой (D3=0,032),

D опыт пациента = 0,827,

D контроль пациента = 0,219,

Разница оптической плотности опыта и контроля пациента = 0,608.

Способность мочи к кристаллообразованию данного пациента = (0,827-0,219)·13,4/(0,499-0,032)=0,608·13,4/0,467=17,4 г/л

17,4>6

Ребенок отнесен в группу риска формирования дисметаболической нефропатии и направлен к нефрологу. Диагноз подтвердился. Ребенку был выставлен диагноз: Вторичный дисметаболический пиелонефрит. В настоящее время наблюдается нефрологом.

Пример 3

Амбулаторная карта № 12

Федорова Маша, 5 лет, обратилась по поводу рецидивирующего вульвита.

D4 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с 10% раствором хлористого кальция (D4=0,499),

D3 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с дистиллированной водой (D3=0,032),

D опыт пациента = 0,084,

D контроль пациента = 0,076,

Разница оптической плотности опыта и контроля пациента = 0,008,

Способность мочи к кристаллообразованию данного пациента = (0,084-0,076)·13,4/(0,499-0,032)=0,008·13,4/0,467=0,23 г/л

0,23<6

Ребенок не относится в группу риска по формированию дисметаболической нефропатии. У ребенка выявлена аллергическая иммунопатология. Сенсибилизация к эпителию кошки. Наблюдается аллергологом.

Источники информации

1. Вельтищев, Ю.В. Дисметаболические нефропатии / Вельтищев, Ю.В., Юрьева Э.А // Детская нефрология / Под ред. М.С. Игнатовой, Ю.В. Вельтищева. - Л.: Медицина, 1989. С.276-292.

2. Игнатова М.С. Наследственные и врожденные нефропатии / Игнатова М.С. // Нефрология / Под ред. И.Е. Тареевой. - М.: Медицина. С.337-371.

3. Скрининг-тесты для диагностики метаболических нарушений при уронефрологических заболеваниях у детей. - Методические рекомендации составлены МосОМКЗ НИИ педиатрии и детской хирургии Минздрава РСФСР - М. - 1982. - 25 с.

4. Эммануэль В.Л. Лабораторная диагностика заболеваний почек. / Эммануэль В.Л.: Изд. 2-е, испр. и доп. - СПб. - Тверь: ООО Издательство «Триада», - 2006. - С.78.