способ экспресс-оценки качества и биологической ценности кумыса

Формула изобретения

1. Способ оценки качества и биологической ценности кумыса, включающий проведение индуцированной хемилюминесценции путем добавления к 10 мл напитка 1 мл раствора инициатора свободнорадикальных реакций, измерение светосуммы свечения и максимальной светимости методом хемилюминесцентного анализа на «Хемилюминомере ХЛ-003» в течение 5 минут, отличающийся тем, что в качестве инициатора свободнорадикальных реакций добавляют 1·10^-1 М раствора азодиизобутиронитрила, при значениях светосуммы свечения в пределах 0,86-1,0 у.е. или 1,91-2,43 у.е. и максимальной светимости в пределах 0,52-0,62 у.е. или 1,51-2,33 у.е. продукт оценивают как сохранивший качество и биологическую ценность.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что измерение проводят при температуре 20°С.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что перед определением кумыс выдерживают в течение 5-10 минут при комнатной температуре в открытом виде для удаления углекислого газа.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к методам оценки качества и биологической ценности кисломолочных продуктов, и может быть использовано для контроля качественных характеристик кумыса.

Известны следующие способы оценки качества кумыса:

1. Определением титруемой кислотности кумыса по ГОСТ-3624: метод основан на нейтрализации кислых соединений, содержащихся в кумысе, щелочью с применением индикатора фенолфталеина [Молоко и молочные продукты. Общие методы анализа. - М.: ИПК Издательство стандартов, 2001. - С.24-25; 99-100]. Недостатком данного способа является то, что на показатели титруемой кислотности влияет широкий спектр факторов: состав рационов, порода, возраст, индивидуальные особенности, лактационный период и состояние минерального обмена животных.

2. Проведением органолептического анализа (ГОСТ Р52974-2008. Кумыс. Технические условия). Недостатком данного способа является то, что образующиеся в кисломолочных продуктах на начальной стадии окисления перекиси и гидроперекиси существенно не влияют на органолептические свойства, но в силу токсичности способствуют разрушению жирорастворимых витаминов и полиненасыщенных жирных кислот.

3. Регистрацией сверхслабого свечения, сопровождающего окислительные реакции в модельной тест-системе, содержащей липопротеиды при добавлении кисломолочных продуктов [Лазарева О.Н. Свободнорадикальные процессы и антиокислительные свойства молока и кисломолочных прдуктов. Автореф. дис. канд. биол. наук. - Омск, 2008. - 22 с.]. Инициирование процессов перекисного окисления липидов проводят путем добавления в систему 1 мл 50 мМ раствора сернокислого железа.

Недостатком этого метода является то, что им оцениваются не качественные характеристики кисломолочных продуктов, а их антиокислительные свойства по способности к ингибированию свободнорадикального перекисного окисления липидов в модельной тест-системе.

В результате биохимических изменений, происходящих в кумысе при созревании, на фоне побочных процессов могут развиваться пороки - маслянокислый, уксуснокислый, аммиачный. Биологическая ценность кумыса обусловлена высоким содержанием полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), среди которых преобладают линолевая, арахидоновая и особенно линоленовая кислота [Гильмутдинова Л.Т., Кудаярова P.P., Янтурина Н.Х. Уникальный состав кобыльего молока - основа лечебных свойств кумыса. - 2011. - № 3. - С.74-79]. Окисление ПНЖК как в цельном молоке, так и в кумысе протекает по свободнорадикальному механизму с образованием конечных продуктов - альдегидов, кетонов, гидроперекисей. Окисление ненасыщенных жирных кислот происходит при действии неблагоприятных факторов - неправильной технологической подготовке кобыльего молока, хранении кумыса с нарушенными условиями, длительном хранении и т.д. Окисление липидов кумыса наряду с накоплением токсических перекисей снижает его биологическую ценность. В этой связи встает вопрос о разработке экспресс-методов оценки состояния свободнорадикального окисления липидов кумыса, критериев контроля качественных характеристик кумыса.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению является способ экспресс-оценки качества и биологической ценности молока, заключающийся в том, что проводят железоиндуцированную хемилюминесценцию с добавлением к 10 мл молока 1 мл 5·10^-2 М раствора сернокислого железа, измеряют светосумму свечения продукта методом хемилюминесцентного анализа на «Хемилюминомере ХЛ-003» в течение 5 минут при температуре среды 25°С, значениях pH молока от 6,55 до 6,75. Определяют светосумму и максимальную светимость хемилюминесценции, при их значениях соответственно менее 3,5 у.е. и менее 0,85 у.е. продукт оценивают как сохранивший качество и биологическую ценность [патент РФ № 2402764, 2010].

Недостатком данного метода является то, что сернокислое железо, рекомендованное авторами в качестве инициатора свободнорадикальных реакций, неэффективно при применении по этому назначению в кумысе, содержащем, как известно, ингредиенты с антиоксидантной активностью, в частности углекислый газ (CO₂) и этанол (С₂Н ₅ОН), концентрации которых увеличиваются в связи с интенсификацией молочнокислого и спиртового брожения на этапе хранения [Инихов Г.С. Биохимия молока и молочных продуктов. - М.: Пищевая промышленность, 1970. - С.173-174].

Кроме того, кумыс отличается сравнительно высокой концентрацией и других видов биоантиоксидантов (НАД·Н₂, молочной кислоты, ацетил-КоА, АТФ, каталазы, витамина Е и С), ингибирующих процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) [Гильмутдинова Л.Т., Кудаярова P.P., Янтурина Н.Х. Уникальный состав кобыльего молока - основа лечебных свойств кумыса. - 2011. - № 3. - С.74-79].

Задачей изобретения является разработка способа экспресс-оценки интенсивности реакций свободнорадикального окисления липидов кумыса методом хемилюминесцентного анализа.

Технический результат при использовании изобретения - повышение достоверности способа за счет определения интенсивности реакций перекисного окисления липидов, биологически активных веществ в составе кумыса.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе оценки качества и биологической ценности кумыса, включающем проведение индуцированной хемилюминесценции путем добавления к 10 мл напитка 1 мл раствора инициатора свободнорадикальных реакций, измерение светосуммы свечения и максимальной светимости методом хемилюминесцентного анализа на «Хемилюминомере ХЛ-003» в течение 5 минут, согласно изобретению в качестве инициатора свободнорадикальных реакций добавляют 1·10^-1 М раствора азодиизобутиронитрила, при значениях светосуммы свечения в пределах 0,86-1,0 у.е. или 1,91-2,43 у.е. и максимальной светимости в пределах 0,52-0,62 у.е. или 1,51-2,33 у.е. продукт оценивают как сохранивший качество и биологическую ценность. При этом измерение проводят при температуре 20°С, а перед определением кумыс выдерживают в течение 5-10 минут при комнатной температуре в открытом виде для удаления углекислого газа.

Изобретение иллюстрируется следующими фигурами: на фиг.1 представлено влияние инициатора (1 мл) на светимость кумыса: I - 1·10^-1 М раствор азодиизобутиронитрила (АИБН); II - 5·10^-2 М раствор сернокислого железа; III - 1·10^-2 М раствор бромида меди; на фиг.2 - запись хемилюминесценции кумыса в зависимости от сроков хранения: I-серия - 1-е сутки хранения (контроль); II-серия - на 3-й сутки хранения; III-серия - на 5-е сутки хранения; на фиг.3 - запись хемилюминесценции кумыса в зависимости от режимов хранения: I-серия - 1-е сутки хранения (контроль); II-серия - на 3-й сутки хранения; III-серия - на 5-е сутки хранения.

Предлагаемый способ экспресс-оценки качества и биологической ценности кумыса осуществляется следующим образом. Настраивают прибор хемилюминомер ХЛ-003 по программе: «Мешалка - быстро», «Термостат - выключен», «Время измерения - 5 минут», при температуре среды 20°С, значениях кислотности кумыса 80 до 110°Т определяют светосумму и максимальную светимость азодиизобутиронитрил-индуцированной хемилюминесценции и при значениях светосуммы свечения в пределах 0,86-1,0 у.е. или 1,91-2,43 у.е. и максимальной светимости в пределах 0,52-0,62 у.е. или 1,51-2,33 у.е. продукт оценивают как сохранивший качество и биологическую ценность. Перед определением кумыс выдерживают в течение 5-10 минут при комнатной температуре в открытом виде для удаления углекислого газа.

Как видно из данных, представленных на фиг.1, при использовании 5·10^-2 М раствора сернокислого железа в качестве инициатора процессов ПОЛ в кумысе, запись хемилюминесценции (ХЛ) представлена сплошной линией (кривая II), где отсутствует амплитуда быстрой вспышки. При введении в тест-систему с кумысом другого инициатора - 1·10^-2 М раствора бромида меди - запись ХЛ также представлена в виде сплошной линии (кривая III). При введении в среду инкубации 1·10^-1 М раствора АИБН запись ХЛ представлена в виде характерной одногорбой кривой, где после введения АИБН наблюдается амплитуда быстрой вспышки (кривая I), которая отражает интенсификацию процессов ПОЛ кумыса в модельной тест-системе, генерирующей процессы образования активных форм кислорода (АФК).

Пример 1.

Исходные данные для исследования кумыса: I-серия - 1-е сутки хранения (контроль); II-серия - на 3-й сутки хранения; III-серия - на 5-е сутки хранения.

Исследования проводили на хемилюминомере XJI-003, настроенном по программе: «Мешалка - быстро», «Термостат - выключен», «Время измерения - 5 минут». Температура кумыса 20°С, кислотность от 80 до 110°Т. Свечение индуцировали добавлением к 10 мл исследуемого кумыса 1 мл 1·10^-1 М раствора АИБН. Результаты оценивали по светосумме хемилюминесценции, которая является интегральным показателем процессов перекисного окисления липидов [Фархутдинов P.P., Тевдорадзе С.И. Методики исследования хемилюминесценции биологического материала на хемилюминомере XJI-003 // Методы оценки антиоксидантной активности биологически активных веществ лечебного и профилактического назначения: Сб. докл. М.: Изд -во РУДН, 2005. - С.147-155]. Прибор хемилюминомер ХЛ-003 на дисплее компьютера выводит кривые записи хемилюминесценции, отражающие интенсивность процессов сверхслабого свечения кумыса, зависящих в свою очередь от скорости реакций свободнорадикального окисления липидов кумыса. Записи хемилюминесценции различных проб кумыса представлены на фиг.2, а цифровые данные приведены в таблице 1.

Кривая I отражает интенсивность процессов окисления в кумысе на 1-е сутки хранения. Как видно из фиг.2, положение кривой II, отражающей интенсивность процессов сверхслабого свечения кумыса на 3-й сутки хранения, ниже относительно кривой I. Как видно из таблицы 1, кривой II соответствуют меньшие относительно кривой I значения светосуммы, спонтанной светимости, амплитуды быстрой вспышки и максимальной светимости. Аналогичным образом следует интерпретировать положение кривой III относительно кривой I и II. Анализируемые показатели таблицы 1 приняты как нормативные, т.е. соответствуют качественному продукту.

Как видно из данных, представленных в таблице 1, с увеличением сроков хранения кумыса снижаются показатели хемилюминесценции. Так, среднеарифметические значения светосуммы свечения в I-й серии (1-е сутки) опытов составили 2,17±0,26 у.е., во II-й (3-й сутки) - 1,57±0,11 у.е. (p 0,05), в III-й (5-е сутки) - 0,93±0,07 у.е. (p 0,001). Аналогичным образом изменяются и значения максимальной светимости: в 1-е сутки анализируемый показатель составил 1,92±0,41 у.е., на 3-й - 0,95±0,08 у.е. (p 0,05), а на 5-е - 0,57±0,05 у.е. (p 0,01).

Снижение светосуммы ХЛ и максимальной светимости в III-й серии опытов на 57,1% и 70,3% соответственно относительно аналогичных показателей в I-й серии свидетельствует о торможении процессов окисления липидов кумыса за счет значительного увеличения концентраций субстратов, относящихся к антиоксидантам, в частности углекислого газа (CO₂) и этанола (C ₂H₅OH).

Пример 2.

Изучение процессов перекисного окисления липидов кумыса жирностью 1% при комнатной температуре хранения (t=20±2°С).

При исследовании ХЛ использовали кумыс трех видов:

- I-серия - 1-е сутки хранения (контроль);

- II-серия - на 3-и сутки хранения;

- III-серия - на 5-е сутки хранения.

В таблице 2 представлены основные параметры ХЛ трех сравниваемых между собой видов кумыса при несоблюдении регламентированных условий температурного режима хранения, а графическое изображение - на фиг.3. Полученные данные показывают, что показатели ХЛ в кумысе на 3-и сутки хранения (II-я серия) выше относительно аналогичных показателей ХЛ кумыса в I-й серии (1-е сутки хранения). Так, если во II-й серии опытов образцов светосумма свечения составила 6,20±0,43 у.е. (p 0,001), спонтанная светимость - 0,93±0,07 у.е. (p 0,001), амплитуда вспышки - 1,89±0,14 у.е., максимальная светимость - 2,36±0,58 у.е., то в I-й серии эти показатели соответственно составили 2,17±0,26 у.е., 0,54±0,02 у.е., 1,77±0,59 у.е. и 1,92±0,41 у.е.

В кумысе, хранившемся в течение 5-и суток при температуре 20±2°С (III-серия опытов), в значительной мере возрастают анализируемые параметры ХЛ относительно контроля (I-я серия). Так, если в контроле значение светосуммы составляло 2,17±0,26 у.е., спонтанной светимости - 0,54±0,02 у.е., амплитуда вспышки - 1,77±0,59 у.е., максимальной светимости - 1,92±0,41 у.е., то на 5-е сутки хранения аналогичные показатели соответственно составили - 8,22±1,07 у.е. (p 0,001), 0,15±0,04 у.е. (p 0,001), 2,56±0,72 у.е. и 4,58±0,60 у.е. (p 0,01).

Таким образом, в ходе исследований установлено, что при относительно высоких температурных режимах хранения (20±2°С) в значительной мере возрастает интенсивность реакций свободнорадикального окисления полиненасыщенных жирных кислот в составе липидов кумыса, что, в свою очередь, снижает показатели качества и биологической ценности продукта.

Таблица 1
Показатели хемвлюминесценпии кумыса жирностью 1% при температуре хранения 4±2°С (М±m; n=10)
Серия	Кислотность °Т	Показатели хемилюминесценции (у.е.)
		светосумма	спонтанная светимость	амплитуда вспышки	максимальная светимость
I-серия (1-есутки)	80	2,17±0,26	0,54±0,02	1,77±0,72	1,92±0,41
II-серия (3-е сутки)	90	1,57±0,11	0,76±0,08	1,34±0,34	0,95±0,08
III-серия (5-е сутки)	110	0,93±0,07	0,71±0,05	1,02±0,12	0,57±0,05
- различие с контролем статистически значимо (p 0,05) - различие с контролем статистически значимо (p 0,01) - различие с контролем статистически значимо (p 0,001)

Таблица 2
Показатели хемилюминесценции кумыса жирностью 1% при температуре хранения 20±2 С (М±m; n=10)
Серия	Кислотность °T	Показатели хемилюминесценции (у. е.)
		светосумма	спонтанная светимость	амплитуда вспышки	максимальная светимость
I-серия	80	2,17±0,26	0,54±0,02	1,77±0,59	1,92±0,41
II-серия	100	6,20±0,43	0,93±0,07	1,89±0,14	2,36±0,58
III-серия	118	8,22±1,07	0,15±0,04	2,56±0,72	4,58±0,60
- различие с контролем статистически значимо (p 0,01) - различие с контролем статистически значимо (p 0,001)