способ коррекции эндотелиальной дисфункции

Формула изобретения

1. Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, характеризующийся тем, что в организм вводят одновременно активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной синтазе оксида азота в сочетании с активированной - потенцированной формой антител к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II.

2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе и активированную - потенцированную форму антител к C-концевому фрагменту AT ₁ рецептора ангиотензина II используют в виде активированного - потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.

3. Способ по п.2, характеризующийся тем, что водные или водно-спиртовые растворы активированных - потенцированных форм антител к эндотелиальной синтазе оксида азота и активированных - потенцированных форм антител к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II получены путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения из матричного раствора антител с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

4. Способ по п.1 или 2, характеризующийся тем, что активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной синтазе оксида азота и активированную - потенцированную форму антител к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений по гомеопатической технологии.

5. Способ по п.1 или 2, характеризующийся тем, что для коррекции L-Name-индуцированной эндотелиальной дисфункции у крыс, вызванной путем введения L-Name в дозе 12,5 мг/кг, используют одновременно активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной синтазе оксида азота в сочетании с активированной - потенцированной формой антител к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II в виде смеси растворов гомеопатических разведений C12, C30, C200.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, в частности кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции.

Из уровня техники известен способ коррекции эндотелиальной дисфункции смесью растворов гомеопатических разведений поликлональных антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека (RU 2306953, C1, A61K 39/395, 2007). Однако недостатком данного изобретения является то, что заявленный способ эффективен при эндотелиальной дисфункции, связанной с низким уровнем эндотелиальной NO-синтазы, и может не обеспечивать терапевтическую эффективность при эндотелиальной дисфункции с нормальной продукцией NO-синтазы.

Изобретение направлено на создание эффективного и безопасного способа коррекции эндотелиальной дисфункции, препятствующего возникновению воспаления стенки сосуда и развития эндотелиальной дисфункции.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе коррекции эндотелиальной дисфункции, характеризующемся тем, что в организм вводят одновременно активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной синтазе оксида азота в сочетании с активированной - потенцированной формой антител к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II.

При этом активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе и активированную - потенцированную форму антител к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II используют в виде активированного - потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.

Причем используют приготовленные в виде единого (комбинированного) лекарственного препарата - одной лекарственной формы смесь различных разведений антител к эндотелиальной NO-синтазе в сочетании со смесью различных разведений антител к - концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II, приготовленных по гомеопатической технологии.

Водные или водно-спиртовые растворы активированных потенцированных форм антител к эндотелиальной синтазе оксида азота и активированных - потенцированных форм антител к С-концевому фрагменту AT ₁ рецептора ангиотензина II могут быть получены путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения из матричного раствора антител с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

При этом активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной синтазе оксида азота и активированную - потенцированную форму антител к C-концевому фрагменту ATI рецептора ангиотензина II используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений по гомеопатической технологии.

Заявленный способ может быть использован для коррекции L-Name-индуцированной эндотелиальной дисфункции у крыс самцов линии Wistar на фоне внутрибрюшинного введения L-Name в дозе 12,5 мг/кг путем ежедневного введения 2 раза в сутки по 4,5 мл/кг (9 мл/кг/сут) внутрижелудочно смеси растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота в виде смеси растворов гомеопатических разведений С12, C30, С200 и по 4,5 мл/кг (9 мл/кг/сут) и смеси растворов гомеопатических разведений антител к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II в виде смеси растворов гомеопатических разведений С12, C30, С200.

Кроме того, активированная - потенцированная форма антител к эндотелиальной синтазе оксида азота и активированная - потенцированная форма антител к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II используется в виде смеси различных разведений, приготовленных по гомеопатической технологии, преимущественно в виде смеси трех растворов, приготовленных из матричного раствора, разведенного, соответственно, в 100¹², 100³⁰ и 100²⁰⁰ раз, что эквивалентно сотенным разведениям С12, C30, С200, приготовленным по гомеопатической технологии.

При коррекции эндотелиальной дисфункции возможно раздельное, но сочетанное и одновременное применение (введение в организм) активированной - потенцированной формы антител к эндотелиальной синтазе оксида азота и активированной - потенцированной формы антител к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II в виде двух отдельно приготовленных препаратов как в виде растворов, так и в твердых лекарственных формах (таблеток), каждый из которых содержит активированную - потенцированную форму сверхмалых доз антител к эндотелиальной NO-синтазе и, соответственно, активированную - потенцированную форму сверхмалых доз антител к С-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II.

Предложенное сочетание активированных - потенцированных форм антител к эндотелиальной NO-синтазе и к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II в лекарственном средстве (т.е. форм антител к эндотелиальной NO-синтазе и к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II, приготовленных по гомеопатической технологии потенцирования путем многократного разведения и внешнего механического воздействия - неоднократного вертикального встряхивания каждого разведения (см., например, В.Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29), которые обладают активностью, обусловленной технологией потенцирования, в фармакологических моделях и/или клинических методах коррекции эндотелиальной дисфункции) обеспечивает увеличение eNOS, приводит к блокаде ангиотензиновых рецепторов - 1 типа, устраняет эффекты ангиотензина II (превращению оксида азота в пероксинитрат, стимуляции синтез эндотелина, стимуляции выработки цитокинов, в результате чего не возникает воспаления в сосудистой стенке, гиперактивации ренин-ангиотензин альдестероновой системы (РААС)), приводящих к формированию эндотелиальной дисфункции.

Активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе и к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II приготовляют следующим образом. Для приготовления активированной - потенцированной формы действующих компонентов используют моноклональные или, преимущественно, поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам, описанным, например, в книге: Иммунологические методы, под ред. Г.Фримеля, М., «Медицина», 1987, с.9-33; или, например, в статье Laffly Е., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol. 14. - N1-2. P.33-55.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемыми в соответствии с изобретением веществами - антигенами: эндотелиальной NO-синтазой и к С-концевым фрагментом AT₁ рецептора ангиотензина II. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифические антисыворотки с высоким содержанием антител, которые используют для получения активированных - потенцированных форм. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток. Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение в индивидуальном виде проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.

Предпочтительным для приготовления активированной - потенцированной формы антител к эндотелиальной NO-синтазе и к С-концевому фрагменту AT ₁ рецептора ангиотензина II является использование поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе и к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II, которые в качестве матричного (первичного) раствора с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, используют для последующего приготовления активированной - потенцированной формы.

Предпочтительной для приготовления каждого компонента является использование смеси трех водно-спиртовых разведений первичного матричного раствора антител, разведенных, соответственно, в 100¹², 100 ³⁰, и 100²⁰⁰ раз, что соответствует сотенным разведениям С12, C30 и С200, приготовленным по гомеопатической технологии.

Поликлональные антитела к эндотелиальной NO-синтазе могут быть получены при использовании в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъюванта и цельной молекулы эндотелиальной NO-синтазы следующей последовательности:

1 MGNLKSVGQE PGPPCGLGLG LGLGLCGKQG PASPAPEPSR APAPATPHAP DHSPAPNSPT

61 LTRPPEGPKF PRVKNWELGS ITYDTLCAQS QQDGPCTPRR CLGSLVLPRK LQTRPSPGPP

121 PAEQLLSQAR DFINQYYSSI KRSGSQAHEE RLQEVEAEVA STGTIHLRES ELVFGAKQAW

181 RNAPRCVGRIQWGKLQVFDA RDCSSAQEMF TYICNHIKYA TNRGNLRSAITVFPQRAPGR

241 GDFRIWNSQL VRYAGYRQQD GSVRGDPANV EITELCIQHG WTPGNGRFDV LPLLLQAPDE

301 APELFVLPPE LVLEVPLGAP HTGVVRGPGL RWYALPAVSN MLLEIGGLEF SAAPFSGWYM

361 STEIGTRNLC DPHRYNILED VAVCMDLDTR TTSSLWKDKA AVEINLAVLH SFQLAKVTIV

421 DHHAATVSFM KHLDNEQKAR GGCPADWAWI VPPIYGSLPP VFHQEMVNYI LSPAFRYQPD

481 PWKGSATKGA GITRKKTFKE VANAVKISAS LMGTLMAKRV KATILYASET GRAQSYAQQL

541 GRLFRKAFDP RVLCMDEYDV VSLEHEALVL WTSTFGNGD PPENGESFAA ALMEMSGPYN

601 SSPRPEQHKS YKIRFNSVSC SDPLVSSWRR KRKESSNTDS AGALGTLRFC VFGLGSRAYP

661 HFCAFARAVD TRLEELGGER LLQLGQGDEL CGQEEAFRGW AKAAFQASCE TFCVGEEAKA

721 AAQDIFSPKR SWKRQRYRLS AQAEGLQLLP GLIHVHRRKM FQATVLSVEN LQSSKSTRAT

781 ILVRLDTAGQ EGLQYQPGDHIGISAPNRPG LVEALLSRVE DPPPPTESVA VEQLEKGSPG

841 GPPPSWVRDPRLPPCTVRQA LTFFLDITSP PSPRLLRLLS TLAEEPSEQQ ELETLSQDPR

901 RYEEWKLVRC PTLLEVLEQF PSVALPAPLL LTQLPLLQPR YYSVSSAPNA HPGEVHLTVA

961 VLAYRTQDGL GPLHYGVCST WLSQLKTGDP VPCFIRGAPS FRLPPDPYVP CILVGPGTGI

1021 APFRGFWQER LHDIESKGLQ PHPMTLVFGC RCSQLDHLYR DEVQDAQERG VFGRVLTAFS

1081 REPDSPKTYV QDILRTELAA EVHRVLCLER GHMFVCGDVT MATSVLQTVQ RILATEGDME

1141 LDEAGDVIGV LRDQQRYHEDIFGLTLRTQE VTSRIRTQSF SLQERHLRGA VPWAFDPPGP 1201 DTPGP

Возможно для получения поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе использование в качестве иммуногена (антигена) цельной молекулы эндотелиальной NO-синтазы следующей последовательности:

1 MGNLKSVAQE PGPPCGLGLG LGLGLCGKQG PATPAPEPSR APASLLPPAP EHSPPSSPLT

61 QPPEGPKFPR VKNWEVGSIT YDTLSAQAQQ DGPCTPRRCL GSLVFPRKLQ GRPSPGPPAP

121 EQLLSQARDF INQYYSSIKR SGSQAHEQRL QEVEAEVAAT GTYQLRESEL VFGAKQAWRN

181 APRCVGRIQW GKLQVFDARD CRSAQEMFTYICNHIKYATN RGNLRSAITV FPQRCPGRGD

241 FRIWNSQLVR YAGYRQQDGS VRGDPANVEI TELCIQHGWT PGNGRFDVLP LLLQAPDDPP

301 ELFLLPPELV LEVPLEHPTL EWFAALGLRW YALPAVSNML LEIGGLEFPA APFSGWYMST

361 EIGTRNLCDP HRYNILEDVA VCMDLDTRTT SSLWKDKAAV EINVAVLHSY QLAKVTIVDH

421 HAATASFMKH LENEQKARGG CPADWAWIVP PISGSLTPVF HQEMVNYFLS PAFRYQPDPW

481 KGSAAKGTGI TRKKTFKEVA NAVKISASLM GTVMAKRVKA TILYGSETGR AQS YAQQLGR

541 LFRKAFDPRV LCMDEYDVVS LEHETLWLW TSTFGNGDPP ENGESFAAAL MEMSGPYNSS

601 PRPEQHKSYKIRFNSISCSD PLVSSWRRKR KESSNTDSAG ALGTLRFCVF GLGSRAYPHF

661 CAFARAVDTR LEELGGERLL QLGQGDELCG QEEAFRGWAQ AAFQAACETF CVGEDAKAAA

721 RDIFSPKRSW KRQRYRLSAQ AEGLQLLPGL IHVHRRKMFQ ATIRSVENLQ SSKSTRATIL

781 VRLDTGGQEG LQYQPGDFflG VCPPNRPGLV EALLSRVEDP PAPTEPVAVE QLEKGSPGGP

841 PPGWVRDPRL PPCTLRQALT FFLDITSPPS PQLLRLLSTL AEEPREQQEL EALSQDPRRY

901 EEWKWFRCPT LLEVLEQFPS VALPAPLLLT QLPLLQPRYY SVSSAPSTHP GEIHLTVAVL

961 AYRTQDGLGP LHYGVCSTWL SQLKPGDPVP CFIRGAPSFR LPPDPSLPCILVGPGTGIAP

1021 FRGFWQERLH DIESKGLQPT PMTLVFGCRC SQLDHLYRDE VQNAQQRGVF GRVLTAFSRE

1081 PDNPKTYVQDILRTELAAEV HRVLCLERGH MFVCGDVTMA TNVLQTVQRI LATEGDMELD

1141 EAGDVIGVLR DQQRYHEDIF GLTLRTQEVT SRIRTQSFSL QERQLRGAVP WAFEPPGSDT

1201 NSP

Возможно для получения поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе использование в качестве иммуногена (антигена) синтетического пептида эндотелиальной NO-синтазы, выбранного, например, из следующих аминокислотных последовательностей:

1192-1195

PWAF

1189-1192:

GAVP

1185-1205:

RHLRGAVPWAF DPPGPDTPGP

1194-1205:

AF DPPGPDTPGP

1186-1196:

HLRGAVPWAF D

1186-1205:

HLRGAVPWAF DPPGPDTPGP

Перед отбором крови за 7-9 дней проводят 1-3 внутривенных инъекций для повышения уровня антител. В процессе иммунизации у кроликов отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства растворимых антигенов достигается через 40-60 дней после первой инъекции. После окончания первого цикла иммунизации кроликов в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию, включающую 1-3 внутривенные инъекции. Для получения антисыворотки из иммунизированных кроликов собирают кровь в центрифужную пробирку объемом 50 мл. С помощью деревянного шпателя удаляют со стенок пробирки образовавшиеся сгустки и помещают палочку в сгусток, образовавшийся в центре пробирки. Кровь помещают в холодильник (температура 4°C) на ночь. На следующий день удаляют сгусток, прикрепившийся к шпателю, и центрифугируют оставшуюся жидкость при 13000g в течение 10 мин. Супернатант (надосадочная жидкость) является антисывороткой. Полученная антисыворотка должна быть желтого цвета. Добавляют к антисыворотке 20% (весовая концентрация) NaN₃ до конечной концентрации 0,02% и хранят до использования в замороженном состоянии при температуре -20°C (или без добавления NaN ₃ - при температуре -70°C). Для выделения из антисыворотки антител к эндотелиальной NO-синтазе производят абсорбцию на твердой фазе в следующей последовательности:

1. 10 мл антисыворотки кролика разбавляют в 2 раза 0,15 М NaCl добавляют 6,26 г Na₂SO₄, перемешивают и инкубируют 12-16 ч при 4°C;

2. выпавший осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 10 мл фосфатного буфера и затем диализуют против того же буфера в течение ночи при комнатной температуре;

3. после удаления осадка центрифугированием раствор наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером;

4. фракцию антител определяют, измеряя оптическую плотность элюата при 280 нм.

Затем производят очистку антител, например, методом аффинной хроматографии путем прикрепления полученных антител к эндотелиальной NO-синтазе, который находится на нерастворимом матриксе с последующим элюированием концентрированными растворами соли.

Полученный, таким образом, буферный раствор поликлональных кроличьих антитела к эндотелиальной NO-синтазе, очищенных на антигене, с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл, используют в качестве матричного (первичного) раствора для последующего приготовления активированной - потенцированной формы по гомеопатической технологии.

Поликлональные антитела к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II могут быть получены аналогичным вышеуказанным способом, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов, например, адъювант и C-концевой фрагмент AT₁ рецептора ангиотензина II выбираемый, например, из следующей группы:

GKKFK RYFLQLLKYI PPKAKSHSNL STKMSTLSYR PSDNVSSSTK KPAPCFEVE

LNPF FYVFFGKNFK KYFLQLIKYI PPNVSTHPSL TTKMSSLSYR PPENIRLPTK KTAGSFDTE

QLLKYI PPKA

SSLSYR PPENIR

QLIKYI PPNVSTHP

SNL STKMSTLSYR PSDNVSSSTK KPAPCF

Возможно для получения поликлональных антител к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II использование в качестве иммуногена (антигена) C-концевой фрагмент рецептора ATI ангиотензина II человека с добавленным к N концу Цистеином (C):

CGKKF KRYFL QLLKY IPPKA KSHSN LSTKM STLSY RPSDN VSSST ККРАР CFEVE

Активированную - потенцированную форму каждого компонента готовят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части упомянутого матричного раствора в 9 частях (для десятичного разведения D) или в 99 частях (для сотенного разведения C) или в 999 частях (для тысячного разведения M) нейтрального растворителя с многократным вертикальным встряхиванием ("динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см., например, В.Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29).

Внешнюю обработку в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения C12 одну часть упомянутого матричного раствора антител к эндотелиальной NO-синтазе (или C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II) с концентрацией 3,0 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают - потенцируют полученное 1-е сотенное C1 разведение. Из 1-го сотенного С1 разведения приготовляют 2-е сотенное разведение С2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение С12. Таким образом, 12-е сотенное разведение С12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно в разных емкостях 12 раз 1-й части исходного матричного раствора антител к эндотелиальной NO-синтазе с концентрацией 3,0 мг/мл в 99 частях нейтрального растворителя, раствор, приготовленный разведением матричного раствора в 100 раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведений C30 и С200.

При использовании в качестве биологически активного жидкого компонента смеси различных, преимущественно сотенных, разведений действующего вещества, приготовленных по гомеопатической технологии, каждый компонент состава (например, С12, C30, С200) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до их предпоследнего разведения (соответственно, до получения СП, С29, С199) и затем вносят в соответствии с составом смеси в одну емкость по одной части каждого компонента и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения). При этом получают активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением матричного раствора, соответственно, в 10012, 10030 и 100200 раз, эквивалентной смеси сотенных разведений С12, C30 и С200, приготовленных по гомеопатической технологии.

Возможно использование действующего вещества в виде смеси других различных разведений, например, десятичных и/или сотенных, (D20, C30, С100 или С12, C30, С50 и т.д.), приготовленных по гомеопатической технологии, эффективность которых определяют экспериментально.

При потенцировании вместо встряхивания в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять внешнее воздействие ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Для проведения экспериментальных исследований были использованы поликлональные антитела, приготовленные по заказу специализированной биотехнологической фирмой.

Пример 1.

Для экспериментального исследования коррекции эндотелиальной дисфункции опыты проводили на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г, которые были разделены на 4 группы: 1 группа - контрольная, получала дистиллированную воду 9 мл/кг/сут (ежедневно, внутрижелудочное введение.), 2 группа - получала L-NAME (12,5 мг/кг), 3 группа - получала L-NAME (12,5 мг/кг)+ смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NOS человека - С12, C30, С200 (9 мл/кг/сут), 4 группа - получала L-NAME(12,5 мг/кг)+смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NOS человека - С12, C30, С200 (9 мл/кг/сут.)+смесью растворов гомеопатических разведений антител к C-концевому фрагменту ATi рецептора ангиотензина II - С12, C30, С200 (9 мл/кг/сут).

Эндотелиальную дисфункцию у крыс вызывали (моделировали) путем внутрибрюшинного введения N-нитро-L-аргинин метиловый эфира (L-NAME) в дозе 12,5 мг/кг/сут в течение 28 дней. На 29-й день от начала эксперимента под наркозом (тиопентал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика TSD104A и аппаратно-программного комплекса MP 100 производства Biopac System, Inc., США. Функциональные пробы: эндотелий зависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелий независимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

Степень развития эндотелиальной дисфункции оценивали с помощью коэффициента эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления артериального давления (АД) в ответ на введение нитропруссида (НП) к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение ацетилхолина (АХ).

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

Обработка полученных экспериментальных данных при проведении функциональных проб на эндотелийзависимое (ацетилхолин 40 мкг/кг в/в) и эндотелийнезависимое (нитропруссид 30 мг/кг в/в) расслабление сосудов у экспериментальных животных, позволила установить, что внутрибрюшинное введение L-Name в дозе 12,5 мг/кг в течение 28 дней вызывает повышение коэффициента эндотелиальной дисфункции до 3,5±0,5 усл.ед. (табл. 1), тогда как в контрольной группе животных (внутрижелудочное введение дистиллированной воды, в дозе 9 мл/кг/сут) КЭД составил 1,2±0,1 усл.ед.

В группе животных, которым в течение 28 дней вводили L-Name в дозе 12,5 мг/кг и внутрижелудочно смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека, в дозе 9 мл/кг - С12, C30, С200 в комплексе с смесью растворов гомеопатических разведений антител к C-концевому фрагменту AT₁ рецептора ангиотензина II - С12, C30, С200 КЭД составил - 1,8±0,2 усл.ед.

В группе животных, которым в течение 28 дней вводили L-Name в дозе 12,5 мг/кг и внутрижелудочно вводилась смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека (в дозе 9 мл/кг/сут) - С12, C30, С200 в комплексе со смесью растворов гомеопатических разведений антител к C-концевому фрагменту AT ₁ рецептора ангиотензина II (в дозе 9 мл/кг/сут) - С12, C30, С200 КЭД составил - 1,4±0,1, что достоверно ниже, чем в группе животных, которой вводили L-Name, и в группе животных с моно коррекцией смесью растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека в дозе 9 мл/кг - С12, C30, С200.

Таким образом, полученные результаты подтверждают возможность коррекции L-Name-индуцированной эндотелиальной дисфункции у крыс, вызванной введением L-Name в дозе 12,5 мг/кг, путем внутрижелудочного введения смеси растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека - С12, C30, С200 в комплексе со смесью растворов гомеопатических разведений антител к C-концевому фрагменту АТХ рецептора ангиотензина II - С12, C30, С200 в дозе 9 мл/кг каждой из них, что выражается в снижении КЭД в данной группе животных до уровня 1,4±0,1 усл.ед., близкого к уровню КЭД в контрольной группе животных - 1,2±0,1 усл.ед.

Полученные данные позволяют сделать вывод о возможности эффективной коррекции эндотелиальной дисфункции и у людей.

Таблица 1

Динамика показателей АД и коэффициента эндотелиальной дисфункции при моделировании L-Name-индуцированной эндотелиальной дисфункции и ее коррекции смесью растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота человека, в дозе 9 мл/кг - С12, C30, С200 в комплексе со смесью растворов гомеопатических разведений антител к C-концевому фрагменту рецептора ангиотензина II - С12, C30, С200 в дозе 9 мл/кг/сут.
Группы животных	Функциональная проба	САД, мм рт.ст.	ДАД, мм рт.ст	S сосудистой реакции при проведении ЭЗВД с АХ и ЭНВД с НП, усл.ед.	КЭД, усл. ед.
Контрольная (ежедневное, внутрижелудочное введение дистиллированной воды 9 мл/кг/сут)	Исходные	159,2±5,4	124,2±4,7
	АХ	96,9±6,7	52,0±3,0	3071,2±501,1	1,2±0,1
	НП	113,8±6,1	55±2,4	3617,2±560,1
Получавшие L-NAME (12,5 мг/кг)	Исходные	204,8±10*	164,2±5,9*
	АХ	111,3±7,4	64,7±4,3*	3700,2±536,9	3,5±0,5*
	НП	118,2±9,9	61,4±4,4	11922,8±1838,9*
L-NAME (12,5 мг/кг)+смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NOS человека - C12, C30, C200 (9 мл/кг/сут)	Исходные	230,1±8,8*	175,1±6,4*
	АХ	116,4±4,0*	73,5±3,5*	5826,0±801,2**	1,8±0,2**
	НП	108,1±4,6	60±3,6	9628,5±970,1*
L-NAME(12,5 мг/кг)+смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NOS человека - C12, C30, C200 (9 мл/кг/сут) +смесью растворов гомеопатических разведений антител к С-концевому фрагменту AT1 рецептора ангиотензина II - С12, C30, С200 (9 мл/кг/сут)	Исходные	213,6±4,6*	166,8±2,7*
	АХ	116,9±5,5*	73,3±3,4*	3295,3±201,4	1,4±0,1**
	НП	122,3±4,6	70,5±4,5*	4546,2±299,4**
Примечание: * - p<0,05 в сравнении с контрольной группой; ** - p<0,05 в сравнении с группой L-NAME. САД - систолическое артериальное давление, ДАД - диастолическое артериальное давление, S - площадь над кривой восстановления артериального давления при проведении фармакологических проб, КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции.