Получение азотсодержащих органических соединений: .альфа- или бета-аминокислоты – C12P 13/04

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой способ получения L-аминокислоты, включающий культивирование микроорганизма, относящегося к семейству Enterobacteriaceae, обладающего способностью продуцировать L-аминокислоту и модифицированного так, чтобы повысить активности глицериндегидрогеназы и дигидроксиацетонкиназы, в среде, содержащей глицерин в качестве источника углерода, для продуцирования и накопления L-аминокислоты в среде или в клетках, и сбор L-аминокислоты из среды или клеток, причем активности глицериндегидрогеназы и дигидроксиацетонкиназы повышают путем увеличения количества копий генов, кодирующих указанные ферменты, или замещения промотора для этих генов более сильным промотором, и ген дигидроксиацетонкиназы кодирует белок, выбранный из группы, состоящей из: а) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; и б) белка, содержащего аминокислотную последовательность, гомологичную не менее чем на 95% аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4, и белок имеет активность дигидроксиацетонкиназы. Изобретение позволяет получать на повышенном уровне L-аминокислоты при использовании указанного микроорганизма, в котором дигидроксиацетонкиназа использует АТФ в качестве донора фосфата. 13 з.п. ф-лы, 6 табл., 4 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, модифицированной таким образом, что экспрессия по крайней мере одного гена каскада образования флагелл и клеточной подвижности усилена. Изобретение позволяет получать L-аминокислоты с высокой степенью эффективности. 17 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл., 10 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Представлена бактерия семейства Enterobacteriaceae - продуцент L-аспарагиновой кислоты, модифицированная таким образом, что указанная бактерия содержит аспартатдегидрогеназу. Предложен способ получения L-аспарагиновой кислоты, включающий выращивание указанной бактерии в питательной среде и выделение из культуральной жидкости L-аспарагиновой кислоты. Изобретение позволяет получить L-аспарагиновую кислоту в увеличенном количестве. 2 н. и 19 з.п. ф-лы, 28 ил., 22 табл., 10 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана бактерия-продуцент L-аргинина и L-цитруллина, принадлежащая к роду Escherichia, модифицированная таким образом, что экспрессия гена pepА, кодирующего аминопептидазу А, ослаблена. Предложен способ получения L-аминокислоты, выбранной из L-аргинина и L-цитруллина, включающий выращивание указанной модифицированной бактерии в питательной среде для продукции и секреции указанной L-аминокислоты в культуральную жидкость и выделение указанной L-аминокислоты из культуральной жидкости. Изобретение позволяет получить L-аргинин и L-цитруллин в увеличенном объеме. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Представлена мутантная аденилатциклаза, имеющая аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:2, в котором остаток L-лизина в положении, соответствующем положению 432 в SEQ ID NO:2, замещен на остаток L-глутамина, и вариант мутантной аденилатциклазы, имеющей аминокислотную последовательность, представленную как SEQ ID NO:2, в котором остаток L-лизина в положении, соответствующем положению 432 в SEQ ID NO:2, замещен на остаток L-глутамина, содержащего делецию, вставку, добавление и/или замену одного или нескольких аминокислотных остатков и обладающего активностью аденилатциклазы в соответствии с последовательностью, представленной в SEQ ID NO:2. Представлена ДНК, кодирующая мутантную аденилатциклазу. Преставлена бактерия семейства Enterobacteriaceae, содержащая ДНК, кодирующую мутантную аденилатциклазу, - продуцент протеиногенной L-аминокислоты. Раскрыт способ получения протеиногенной L-аминокислоты, включающий выращивание бактерии в питательной среде, содержащей в качестве основного источника углерода этанол и/или глицерин, и выделение указанной L-аминокислоты из культуральной жидкости. Изобретение позволяет получать L-аминокислоту с высокой степенью эффективности. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 3 табл., 10 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Представлена бактерия-продуцент диаминомонокарбоновой L-аминокислоты, выбранной из L-лизина, L-аргинина, L-орнитина и L-цитруллина, принадлежащая к семейству Enterobacteriaceae, модифицированная таким образом, что в указанной бактерии ослаблена экспрессия одного или нескольких генов, кодирующих транспортер лизина/аргинина/орнитина, и одного или нескольких генов, кодирующих транспортер гистидина, представленных кластером argT-hisJQMP. Предложен способ получения диаминомонокарбоновой L-аминокислоты, включающий: выращивание указанной бактерии в питательной среде, вызывающее продукцию и секрецию указанной L-аминокислоты в культуральную жидкость, и выделение указанной L-аминокислоты из культуральной жидкости. Изобретение позволяет получать указанную диаминомонокарбоновую L-аминокислоту в большем объеме. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 2 табл., 5 пр.

Настоящее изобретение относится к области биохимии. Представлен белок, способный придавать бактерии семейства Enterobacteriaceae устойчивость к ингибированию роста L-цистеином и выбранный из группы, состоящей из: (а) белка, представленного в SEQ ID NO: 2 или его варианта; и (в) белка, представленного в SEQ ID NO: 4 или его варианта; а также представлен фрагмент ДНК, кодирующий указанный белок. Описана бактерия-продуцент L-аминокислоты семейства Enterobacteriaceae, содержащая указанный фрагмент ДНК. Предложен способ получения L-аминокислоты, включающий культивирование указанной бактерии в питательной среде и выделение указанной L-аминокислоты из культуральной жидкости. Изобретение позволяет увеличить выход продуцируемой L-аминокислоты. 4 н. и 8 з.п. ф-лы, 12 табл., 1 ил., 8 пр.

Настоящее изобретение относится к биохимии. Представлена бактерия семейства Enterobacteriaceae - продуцент L-цистеина, модифицированная таким образом, что в ней усилена экспрессия: одного или нескольких генов кластера cysDNC, участвующих в активации сульфата; или одного или нескольких генов кластера cysDNC, участвующих в активации сульфата и гена cysQ, участвующего в деградации аденозин-3'-фосфат-5'-фосфосульфата (PAPS). Предложены способы получения L-цистеина, L-цистина, S-сульфоцистеина и тиазолидинового производного L-цистеина, включающие: выращивание указанной бактерии в питательной среде, содержащей сульфат; и выделение, соответственно, L-цистеина, L-цистина, S-сульфоцистеина или тиазолидинового производного L-цистеина из культуральной жидкости. Изобретение позволяет увеличить выход указанных продуктов. 5 н. и 15 з.п. ф-лы, 2 табл., 5 ил., 6 пр.

Настоящее изобретение относится к биохимии. Описана бактерия - продуцент L-цистеина, относящаяся к роду Pantoea или Escherichia семейства Enterobacteriaceae, модифицированная таким образом, что в ней усилена экспрессия одного или более генов, выбранных из группы, состоящей из кодирующих глутаредоксины генов grxC и grxB, и гена, кодирующего глутатионредуктазу {gorA). Предложен способ получения L-цистеина, включающий выращивание указанной бактерии в питательной среде, содержащей тиосульфат, и выделение L-цистеина из культуральной жидкости. Изобретение позволяет увеличить выход L-цистеина. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 4 табл., 4 ил., 5 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу получения продукта реакции, катализируемой белком, обладающим активностью 2-оксоглутарат-зависимого фермента, такого как (2S,3R,4S)-4-гидрокси-L-изолейцин или его соль и 4-гидрокси-L-пролин или его соль, с использованием бактерии, принадлежащей к роду, выбранному из группы, состоящей из Escherichia, Corynebacterium, Arthrobacter, Aspergillus и Bacillus, трансформированной фрагментом ДНК, содержащим ген, кодирующий белок, обладающий активностью 2-оксоглутарат-зависимого фермента, при этом указанная бактерия модифицирована таким образом, что: ген, кодирующий 2-оксоглутаратдегидрогеназу, инактивирован или ген, кодирующий 2-оксоглутаратдегидрогеназу, и ген, кодирующий аминотрансферазу аминокислот с разветвленной цепью, инактивированы. Изобретение позволяет получать (2S,3R,4S)-4-гидрокси-L-изолейцин или его соль и 4-гидрокси-L-пролин или его соль с высокой степенью эффективности. 4 н. и 10 з.п. ф-лы, 6 ил., 9 табл., 9 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. L-аминокислоту, такую как L-лизин, получают путем культивирования бактерий, относящихся к роду Escherichia, способных продуцировать L-лизин, и модифицированных для повышения ацетил-СоА синтазной активности. Изобретение позволяет получать L-лизин с высокой степенью эффективности. 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение раскрывает способ конструирования рекомбинантной бактерии, принадлежащей к роду Pantoea, способ конструирования рекомбинантной бактерии, принадлежащей к роду Pantoea - продуцента L-аминокислоты, бактерию, принадлежащую к роду Pantoea, полученную указанным способом, а также способ получения L-аминокислоты с использованием указанной бактерии. Изобретение позволяет повысить продуцирование L-аминокислот. 5 н. и 7 з.п. ф-лы, 7 ил., 5 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения L-аминокислоты, принадлежащей к семейству глутамата; или L-валина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, которая модифицирована таким образом, что активность глутаматдегидрогеназы в указанной бактерии увеличена. Изобретение позволяет получить L-аминокислоту, принадлежащую к семейству глутамата, или L-валин, с высокой степенью эффективности. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл.

Крахмалсодержащее растительное сырье смешивают с водой, измельчают до размера частиц не более 0,2 мм гидромеханоакустическим способом в две стадии с выдержкой между стадиями в течение 20-120 мин при температуре 45-50°С и перемешивании. От полученной суспензии отделяют частицы твердой фазы центрифугированием, а крахмально-белковую суспензию собирают в емкость. Сгущенную суспензию разводят водой до концентрации СВ 5-7% и обрабатывают гидромеханоакустическим способом, затем повторно отделяют частицы твердой фазы центрифугированием с получением крахмально-белковой суспензии и сгущенной суспензии. Полученные крахмально-белковые суспензии объединяют, выдерживают при перемешивании и температуре 45-50°С в течение 10-20 мин и центрифугируют с получением крахмала А и фугата. Остаточную суспензию подщелачивают, выдерживают при перемешивании и температуре 45-50°С в течение 10-20 мин и центрифугируют с получением крахмала В и белковой суспензии. Последнюю разделяют центрифугированием на две фракции: глютен и нативный раствор, затем крахмал А и крахмал В объединяют, вносят термостабильную -амилазу и проводят гидролиз. Затем добавляют глюкоамилазу с получением ферментолизата крахмала, а глютеновую фракцию гидролизуют, внося протеолитический фермент с получением раствора аминокислот. Нативный раствор упаривают с получением растительного экстракта и конденсата, который возвращают в процесс переработки растительного сырья. Изобретение обеспечивает длительное хранение полученных растворов компонентов без потери их качества.

Для приготовления питательной среды используют микроорганизмы, которые выращивают на минеральной среде, поддерживающей рост этого организма, причем по существу все из ассимилируемых атомов являются изотопно-меченными, для получения меченой биомассы. Полученную биомассу подвергают автолизу для получения меченого автолизата. Эта биомасса может быть дополнительно экстрагирована органическим растворителем для получения липидов. Делипидированную биомассу гидролизуют для получения меченых аминокислот и других питательных веществ, которые используют вместе с автолизатом, экстрагированными липидами и дополнительными компонентами для приготовления питательной среды для выращивания клеток млекопитающих или насекомых в культуре для синтеза биомолекул. Полученная биомолекула является мембранным белком млекопитающего, в частности, в котором 20-100% атомов водорода в этом белке являются тотально замещенными изотопом ²Н. Однородное мечение стабильными изотопами позволяет определить трехмерную структуру биомолекулы, такой как мембранный белок млекопитающего, например, ЯМР-спектроскопией. 6 н. и 24 з.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ продукции полезного метаболита путем ферментации смеси первичного источника углерода и вторичного источника углерода с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, модифицированной таким образом, что потоки для утилизации первичного источника углерода, такого как углеводы или глицерин, и вторичного источника углерода, такого как этанол, в указанной бактерии разделены. Способ включает культивирование бактерии в питательной среде и выделение метаболита из культуральной жидкости, причем бактерия обладает усиленной экспрессией мутантной алкогольдегидрогеназы, устойчивой к аэробной инактивации, усиленной экспрессией мутантного гена rthA, придающего устойчивость к высоким концентрациям треонина, делецией гена, кодирующего треониндегидрогеназу, и способна к продукции полезного метаболита, выбранного из группы, состоящей из глутамата, пролина, треонина, лизина, аспартата, аспарагина, метионина, серина, валина, лейцина, изолейцина, цистеина, аргинина и пиримидинов, путем ферментации смеси первичного источника углерода, такого как углеводы или глицерин, и вторичного источника углерода, такого как этанол, и дополнительно модифицирована таким образом, что потоки углеводов или глицерина и этанола разделены путем ослабления экспрессии гена(-ов), кодирующего(-их) пируваткиназу. Изобретение позволяет получать полезные метаболиты с высокой степенью эффективности. 12 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-аминокислоты. Способ включает выращивание микроорганизма, принадлежащего к семейству Enterobacteriaceae и способного к продукции L-аминокислоты, в питательной среде, и выделение указанной L-аминокислоты из культуральной жидкости. При этом указанный микроорганизм модифицирован путем введения фрагмента ДНК, включающего промотор регулона pho и структурный ген, кодирующий фермент биосинтеза L-аминокислоты, лигированный за промотором таким образом, что ген экспрессируется под контролем данного промотора. А активность фермента биосинтеза L-аминокислоты увеличивается при экспрессии гена под промотором, и при этом содержание фосфора в среде таково, что происходит индукция указанного промотора. Изобретение позволяет получать L-аминокислоты с высокой степенью эффективности. 11 з.п. ф-лы, 4 ил., 7 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, которая модифицирована таким образом, что ген ygiD в указанной бактерии инактивирован. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, которая модифицирована таким образом, что ген yncD в указанной бактерии инактивирован. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-аминокислоты, включающий выращивание бактерии и выделение указанной L-аминокислоты из культуральной жидкости. При этом бактерия-продуцент представляет собой бактерию, принадлежащую к роду Escherichia, содержащую ДНК, включающую ген, кодирующий фермент бактерии, который влияет на биосинтез указанной L-аминокислоты, и транскрибируемый фрагмент ДНК, кодирующий пептид SsrA. Изобретение касается также способа получения сложного эфира низших алкилов -L-аспартил-L-фенилаланина, включающего выращивание вышеуказанной бактерии в питательной среде, выделение L-фенилаланина, и синтез сложного эфира низшего алкила -L-аспартил-L-фенилаланина из аспарагиновой кислоты или ее производных и полученного L-фенилаланина. Изобретение позволяет получать L-аминокислоты и сложные эфиры низших алкилов -L-аспартил-L-фенилаланина с высокой степенью эффективности. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 5 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ придания бактерии, принадлежащей к роду Methylophilus, ауксотрофности по L-аминокислоте, включающий следующие стадии: А) введение в бактерию фрагмента ДНК, содержащего ген, кодирующий гетерогенную пермеазу, которая обладает способностью импортировать указанную L-аминокислоту в клетку бактерии; и Б) блокирование пути биосинтеза указанной L-аминокислоты в указанной бактерии. Изобретение относится также к способу получения L-аминокислот путем культивирования полученной бактерии. Изобретение позволяет получать L-аминокислоты с высокой степенью эффективности. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 3 ил., 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина или L-аргинина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, которая модифицирована таким образом, что ген chaC или оперон chaBC инактивированы в указанной бактерии. Изобретение позволяет получать L-треонин или L-аргинин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, которая модифицирована таким образом, что в указанной бактерии оперон ycbPONME инактивирован. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н.и 1 з.п. ф-лы, 2 ил, 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, которая модифицирована таким образом, что ген msbA в указанной бактерии инактивирован. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, которая модифицирована таким образом, что содержит глицеринкиназу, в которой ингибирование фруктозо-1,6-дифосфатом по типу обратной связи ослаблено, и указанная глицеринкиназа содержит замену, по крайней мере, одной аминокислоты на другую в области, соответствующей положениям с 233 по 235 в аминокислотной последовательности глицеринкиназы дикого типа, представленной в SEQ ID NO:4. Изобретение позволяет получать L-аминокислоты с высокой степенью эффективности. 11 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, которая модифицирована таким образом, что ген tolC в указанной бактерии инактивирован. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии рода Escherichia, причем бактерия модифицирована таким образом, что активность алкогольдегидрогеназы, кодируемой геном adhE, у этой бактерии увеличена. Изобретение позволяет получать L-аминокислоты с высокой степенью эффективности. 4 н. и 15 з.п. ф-лы, 5 ил., 6 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, которая модифицирована таким образом, что ген rcsA в указанной бактерии инактивирован. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения 4-гидроксиизолейцина или его соли. Данный способ включает стадии взаимодействия биокатализатора с ацетальдегидом, -аминомасляной кислотой и -кетомасляной кислотой в водном растворе, при этом указанный катализатор активно катализирует реакцию получения 4-гидрокси-L-изолейцина из ацетальдегида и -кетомасляной кислоты в присутствии -аминомасляной кислоты как донора аминогруппы; и выделения 4-гидроксиизолейцина. Изобретение позволяет получать 4-гидроксиизолейцин с высокой степенью эффективности. 13 з.п. ф-лы, 11 ил., 9 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой мутантную ацетолактатсинтазу бактерий (AHAS I), в которой L-аминокислота в позиции 17, 30 и/или 33 в малой субъединице природной ацетолактатсинтазы из Escherichia coli заменена на другую L-аминокислоту или несколько L-аминокислот встроены в указанную позицию или позиции, и ингибирование валином по типу обратной связи в указанной субъединице ослаблено. Изобретение касается также фрагмента ДНК, кодирующего указанную ацетолактатсинтазу, которым трансформируют бактерию рода Escherichia для получения разветвленной L-аминокислоты. Изобретение позволяет получать разветвленные L-аминокислоты с высокой степенью эффективности. 5 н. и 12 з.п. ф-лы, 8 ил., 5 табл.