Инструменты или способы для размножения или оплодотворения: .для эмбриотрансплантации – A61D 19/04

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к клеточной инженерии. Способ предусматривает извлечение ооцит-кумулюсных комплексов из яичников, культивирование их до стадии метафазы II, совместное культивирование ооцитов и сперматозоидов, культивирование оплодотворенных яйцеклеток. Причем дополнительно вводят фолликулостимулирующий и лютеинизирующий гормон в виде комбинированного препарата Менопур, эстрадиол, гепарин, кофеин и антибиотик. Культивирование проводят на базовой среде. Извлечение ооцит-кумулюсных комплексов из яичников, получают от живых овец под наркозом путем пунктирования фолликулов яичников при проведении лапаротомии, причем предварительно производят стимуляцию суперовуляции. В среду созревания добавляют препарат Менопур, концентрация обоих компонентов, входящих в состав препарата, составляет 0,075 МЕ/мл, а эстрадиол добавляют в среду созревания в концентрации 10 мкг/мл. Для оплодотворения используют свежеполученную сперму баранов. Для капацитации спермиев барана и в состав среды оплодотворения добавляют комбинацию гепарина в количестве 5 ЕД/мл и кофеина в количестве 0,2 мг/мл. Культивирование и оплодотворение осуществляют в четырехлуночных чашках Петри в 500 мкл питательной среды под 200 мкл парафинового масла. Использование способа позволит повысить доли выхода ооцитов, достигших метафазы II, оплодотворенных ооцитов, достигших эмбрионального развития до стадии морулы/бластоцисты in vitro. 2 з.п. ф-лы, 11 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ включает овариэктомию животных после убоя, транспортировку яичников, извлечение ооцит-кумулюсных комплексов путем аспирации содержимого фолликулов, промывание комплексов и их культивирование в среде, не покрытой маслом, в присутствии сывороточного гонадотропина жеребых кобыл, хорионического гонадотропина человека и 5% эстральной сыворотки крупного рогатого скота. При этом для получения ооцитов используют фолликулы диаметром от 2 до 8 мм. После извлечения ооцит-кумулюсные комплексы немедленно помещают в промывную среду, содержащую 0.5 мМ изобутилметилксантина, для синхронизации реинициации мейоза. Перед культивированием проводят селекцию ооцитов на основании их морфологической оценки. Все процедуры изоляции, промывания и селекции комплексов выполняют в среде, содержащей 0.5 мМ изобутилметилксантина. Ооцит-кумулюсные комплексы культивируют в среде, модифицированной введением 50 нг/мл бычьего пролактина. Изобретение позволяет повысить долю созревших in vitro ооцитов до 95.4%, а также их способность к дальнейшему развитию. 1 табл.

Контейнер 10 содержит сосуд (21), вмещающий биологическую среду, половые клетки и/или один или более эмбрионов. Сосуд (21) имеет проницаемую для СО₂ стенку, проницаемое для СО₂ уплотнение (28) и укупорочное средство (30) для избирательного доступа во внутреннюю полость сосуда. Буферная камера (60) для обогащенного СО₂ воздуха по меньшей мере частично окружает сосуд и образована оболочкой (61). Буферная камера сообщается с проницаемой для СО₂ стенкой. Такое выполнение контейнера особенно предназначено для интравагинального выращивания, при этом проницаемое уплотнение (28) предотвращает проникновение вагинальных секреций в буферную камеру. Буферная камера (60) нормализует водный рН в сосуде после того, как контейнер удаляют из обогащенной СО₂ окружающей среды. Все это позволяет избежать негативных последствий в течение долгого периода выращивания эмбриона (эмбрионов). 52 з.п. ф-лы, 19 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ включает отделение яичников от животных после убоя, их транспортировку, извлечение ооцитов из яичников, культивирование их до стадии метафазы II, подготовку спермы хряка, совместное культивирование ооцитов и сперматозоидов и культивирование оплодотворенных яйцеклеток. При этом яичники отделяют от неподвергнутых ошпарке животных не позднее 30 минут с момента их обездвиживания. Яичники трансплантируют в физиологическом растворе, не содержащем антибиотики при 35-37°С в течение 1 часа. Ооциты получают из яичников путем рассечения видимых антральных фолликулов. Полученные ооциты разделяют на группы по количеству окружающих слоев кумулюсных клеток, а именно, на ооциты, окруженные 4-5 слоями кумулюсных клеток, 2-3 слоями и 1 слоем кумулюсных клеток. Каждую группу ооцитов культивируют в среде, содержащей 10 IU хорионического гонадотропина человека. Для оплодотворения ооцитов in vitro используют эякуляторную сперму хряков, разбавленную глюкозо-хелато-цитратно-сульфатным разбавителем, отмытую от семенальной плазмы, разбавленную средой mTBM и проинкубированную в течение 25 минут в условиях инкубатора при 5% CO ₂ и 38.5°С. Полученные зиготы культивируют в среде NCSU-23, не содержащей феноловый красный, обогащенной 0.1% аминокислот в течение 6-7 дней; в первые трое суток культивирования в среду NCSU-23 дополнительно вводят 0.17 мМ Na-пирувата и 2.75 мМ Na-лактата. Изобретение позволяет повысить выход зрелых ооцитов до 80%, их оплодотворяемость in vitro до 77%, при этом стадии морулы/бластоцисты достигали до 25,7% эмбрионов. 1 табл.

Изобретение относится к способам культивирования in vitro овариальных фолликулов для биологических исследований. Способ включает последовательные стадии: обеспечение сосуда для культивирования in vitro; выделение фолликула из яичника млекопитающего, содержащего, по меньшей мере: клетки theca или клетки pre-theca, гранулезные клетки и ооцит; при необходимости, первую стадию культивирования с использованием не содержащей масло первой среды, ингибирующей прикрепление; вторую стадию культивирования с использованием не содержащей масло второй среды, обеспечивающей прикрепление; и получение зрелого фолликула. Способ обеспечивает получение ооцитов с высокой эффективностью оплодотворения. Способ позволяет проводить оценку влияния внешних факторов на ооциты. 5 табл., 10 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии. Целью изобретения является разработка способа, обеспечивающего повышение уровня приживляемости пересаженных ранних эмбрионов после их трансплантации от овец-доноров к овцам-реципиентам. Технический результат достигается с помощью способа трансплантации эмбрионов у овец. Способ включает индивидуальный подбор овец-доноров к овцам-реципиентам со сходным антигенным составом групп крови, соответствующим величине индекса антигенного сходства r_а=от 0,51 до 1,00, где r _а - индекс антигенного сходства. При этом индекс антигенного сходства определяют по формуле:

Изобретение относится к области искусственного осеменения животных. Продукт для искусственного оплодотворения содержит обработанные сушкой вымораживанием до уровня влажности менее 1% сперматозоид с нарушенной мембраной или головку сперматозоида, ядро которых сохранило генетическую целостность, достаточную для оплодотворения. Причем после регидратации и микроинъекции в изолированный ооцит указанные головки сперматозоида оплодотворяют изолированный ооцит. При этом сохраненная генетическая целостность достаточна для оплодотворения с получением живого потомства. Способы получения продукта для искусственного оплодотворения и оплодотворения ооцитов включают сбор живых зрелых сперматозоидов, суспензирование сперматозоидов в физиологической среде для суспензирования, замораживание суспензии сперматозоидов для получения замороженных сперматозоидов, высушивание замороженных сперматозоидов или головок сперматозоидов под вакуумом до уровня влажности менее 1%, регидратацию сперматозоидов или головок сперматозоидов с нарушенной мембраной и отбор тех из них, которые имеют сохранившее генетическую целостность ядро. Отобранные сперматозоиды или головки сперматозоидов используют для оплодотворения изолированного ооцита с получением живого потомства. Способ и продукт позволяют получить живое потомство, 5 н. и 34 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 таб.