Иммобилизованные ферменты или ферменты на носителях, иммобилизованные микробные клетки или микробные клетки на носителях, их получение: ...целлюлозой или ее производными – C12N 11/12

Носитель с шероховатой поверхностью и гидрофильными свойствами, имеющий сродство к культуре чайного гриба, обладающий биологической адсорбцией чайного гриба, слоями загружают в емкость открытого типа, перемежая слоями фрагментов пленки культуры чайного гриба Medusomyces Gisevii Lindau. Заливают питательный раствор с погружением носителя в него и выдерживают при принудительной аэрации при температуре 17-35°С для иммобилизации. При производстве напитка брожения готовят питательный раствор, фильтруют его, охлаждают до температуры 17-35°С и заливают в емкость открытого типа с помещенной в нее иммобилизованной культурой чайного гриба. Питательный раствор сбраживают при принудительной аэрации до достижения кислотности 3-7 ед. В качестве носителя используют измельченные куски веток, стружки, щепу древесины, а в качестве питательного раствора - сахар рафинированный - 5-12 масс.%, чай черный - 0,5-1,5 масс.% и воду питьевую - остальное. Изобретение позволяет обеспечить сокращение длительности процессов, повышение продуктивности и улучшение показателей напитка. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен фермент ловастатин эстераза, иммобилизованный на водонерастворимом твердом носителе, активированном бифункциональным агентом. При этом твердый носитель представляет собой модифицированную ди-(С _1-6алкил)амино-С_1-6 алкилцеллюлозу, в другом варианте твердый носитель представляет собой модифицированный амино-С_1-6алкил-три(С_1-6алкокси)силаном силикагель, а бифункциональный агент, активирующий твердый носитель, представляет собой O-сульфонат циануровой кислоты или галогенангидрид циануровой кислоты. В третьем варианте твердый носитель представляет собой агарозу, а бифункциональный агент представляет собой соединение, соответствующее формуле , как определено в формуле. Предложены способы (варианты) иммобилизации фермента ловастатин эстеразы на указанных водонерастворимых твердых носителях. Согласно способам при механическом перемешивании бифункциональный активирующий агент приводят в контакт с твердым носителем в растворителе. Активированный твердый носитель отделяют фильтрованием, затем сушат и суспендируют в водной смеси, содержащей фермент ловастатин эстеразу, с осуществлением иммобилизации фермента. Суспендированное вещество отделяют фильтрованием, промывают буферным раствором и сушат. Также предложен способ очистки симвастатина, включающий обработку раствора соли симвастатина, содержащего остаточное количество соли ловастатина, иммобилизованным ферментом ловастатин эстеразой, и предложен биокатализируемый проточный реактор со слоем для осуществления данного способа. Реактор включает корпус реактора (1) с внутренним пространством (2), соединенным с входом жидкости (3) и соединенным с выходом жидкости (4), во внутреннем пространстве находится перфорированная пластина, поддерживающая слой (5), содержащий фермент ловастатин эстеразу, иммобилизованный на водонерастворимом твердом носителе. Иммобилизованная ловастатин эстераза по изобретению проявляет по меньшей мере в 5 раз большую гидролитическую активность по отношению к ловастатину и солям ловастатина в присутствии симвастатина и солей симвастатина, чем к симвастатину и солям симвастатина. 17 з.п. ф-лы, 2 ил., 8 табл., 20 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ ферментативного гидролиза фосфорорганических соединений в почвогрунтах. В почвогрунт вносят биокатализатор - неочищенный полигистидинсодержащий полипептид со свойствами органофосфатгидролазы, полученный из штамма бактерий Escherichia coli ЦКМИБХ 29 и иммобилизованный на целлюлозосодержащем носителе. Биокатализатор вносят в концентрации 0,5-1,0 г/кг при pH 6,5-10,0 и температуре 15-40°С в почвогрунт, содержащий фосфорорганические соединения в концентрации до 850 мг/кг. Способ обеспечивает 100% разложение широкого спектра ФОС с высокой удельной скоростью гидролиза до 7,4 мг_фос /г_{биокат-ра}/ч. 1 ил., 8 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской, пищевой и сельскохозяйственной отраслях промышленности. Пищевую карбоксиметилцеллюлозу растворяют в подщелоченной дистиллированной воде с рН 9,5-10 и добавляют к фильтрату полученного раствора коллагеназы, выделенной из панкреаса крабов, или микробной коллагеназы, выделенной из Clostridium histolyticum с коллагеназной активностью не ниже 750-1000 ед./мг в виде порошка в присутствии 1-1,5% раствора поверхностно-активного вещества при интенсивном перемешивании со скоростью 3000-5000 об/мин. Образовавшуюся эмульсию охлаждают до 5-10°С, уменьшают рН реакционной смеси до 3,0-3,5 и оставляют на сутки в холодильнике. Выпавшие частицы отделяют из раствора и неоднократно добавляют к оставшимся частицам ацетатный буфер с рН 4-4,5 при перемешивании, затем выпавшие частицы, содержащие коллагеназу, отделяют и высушивают. Это позволяет уменьшить размер частиц иммобилизованной целлюлазы, что способствует увеличению скорости ферментативного процесса.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской, пищевой и сельскохозяйственной промышленности. Носитель - пищевую карбоксиметилцеллюлозу растворяют в буферном растворе или подщелоченной дистиллированной воде и фильтруют. К фильтрату добавляют порошок или концентрированный раствор нейтральной или щелочной протеазы в присутствии раствора поверхностно-активного вещества при интенсивном перемешивании в течение 60 мин. Образовавшуюся эмульсию охлаждают до 5-10°С, после чего рН реакционной смеси уменьшают до 3,0-3,5, оставляют на сутки в холодильнике и отделяют выпавшие частицы из раствора. К оставшимся частицам добавляют ацетатный буфер с рН 4-4,5 при перемешивании, затем выпавшие частицы отделяют и высушивают. Это позволяет уменьшить размер частиц иммобилизованной протеазы, что способствует увеличению скорости ферментативного процесса.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской, пищевой и сельскохозяйственной отраслях промышленности. Пищевую карбоксиметилцеллюлозу растворяют в буферном растворе или подщелоченной дистиллированной воде с рН 9,5-10 и добавляют к фильтрату полученного раствора панкреатической липазы или микробной липазы из культуры Aspergillus niger, или их смеси с активностью не ниже 100 ед./г в виде порошка в присутствии 1-1,5%-ного раствора поверхностно-активного вещества при интенсивном перемешивании со скоростью 4500-5000 об/мин. Образовавшуюся эмульсию охлаждают до 5-10°С, уменьшают рН реакционной смеси до 3,0-3,5 и оставляют на сутки в холодильнике. Выпавшие частицы отделяют из раствора и неоднократно добавляют к оставшимся частицам ацетатный буфер с рН 4-4,5 при перемешивании, затем выпавшие частицы, содержащие липазу, отделяют и высушивают. Это позволяет уменьшить размер частиц иммобилизованной липазы, что способствует увеличению скорости ферментативного процесса.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской, пищевой и сельскохозяйственной отраслях промышленности. Пищевую карбоксиметилцеллюлозу растворяют в буферном растворе или подщелоченной дистиллированной воде с рН 9,5-10 и добавляют к фильтрату полученного раствора целлюлазу, продуцируемую культурой Trichoderma reesei или культурой Trichoderma viride с активностью не ниже 50 ед/г в виде порошка в присутствии 1-1,5%-ного раствора поверхностно-активного вещества при интенсивном перемешивании со скоростью 4500-5000 об/мин. Образовавшуюся эмульсию охлаждают до 5-10°С, уменьшают рН реакционной смеси до 3,0-3,5 и оставляют на сутки в холодильнике. Выпавшие частицы отделяют из раствора и неоднократно добавляют к оставшимся частицам ацетатный буфер с рН 4-4,5 при перемешивании, затем выпавшие частицы, содержащие целлюлазу, отделяют и высушивают. Это позволяет уменьшить размер частиц иммобилизованной целлюлазы, что способствует увеличению скорости ферментативного процесса.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ -ФРУКТОФУРАНОЗИДАЗЫ

Способ включает оживление чистой культуры Klyuveromyces marxianus Y-303 по методу Коха, засев ее в чашки Петри с 2%-ным сусло-агаром при температуре 48-50°С. Чашки переворачивают вверх дном и выдерживают в течение 2-3 суток в термостате при температуре 28-30°С. Выросшие колонии переносят в чашку Петри с сусло-агаром для наращивания биомассы, затем на скосы с сусло-агаром. Проводят глубинное культивирование дрожжей в колбах емкостью 500 см ³, содержащих по 50 см³ пивного сусла в течение 47,5-48,5 ч при температуре 30°С. Выращенную биомассу смешивают с дистиллированной водой в соотношении 1:5, проводят автолиз при температуре 38-42°С в течение 59,5-60,5ч. Полученную ферментсодержащую смесь осаждают этиловым спиртом при рН 5,0 или ацетоном при рН 5,5. Проводят очистку -фруктофуранозидазы в 3 стадии: удаляют низкомолекулярные примеси гель-фильтрацией на колонке с сефадексом G-25, повышают чистоту ферментного препарата ионообменной хроматографией на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой, фракционируют на колонке с сефадексом G-150. Осуществляют концентрирование на мембране Amicon РМ-30 до 5 см³, направляют на лиофильную сушку при t=-30°C. Осуществляют иммобилизацию -фруктофуранозидазы на полимерном волокнистом сорбенте (анионите). Перед иммобилизацией сорбент обрабатывают 5%-ной соляной кислотой, дистиллированной водой, 5%-ным раствором едкого натра и снова водой. Каждая обработка длится 12 ч. Промытый сорбент дополнительно обрабатывают 95%-ным этиловым спиртом и снова водой. Готовят водный раствор -фруктофуранозидазы с содержанием 0,018-0,098 моль/дм ³ и инкубируют подготовленный сорбент. Способ позволяет получить иммобилизованный фермент в количестве 0,005-0,025 мг/г, обеспечить чистоту целевого продукта. 2 табл.

Изобретение относится к таким областям как биохимия, биофизика, медицинская диагностика и может быть использовано в качестве модели клеточной мембраны при исследовании механизма действия лекарственных мембранопротекторных препаратов, а также для создания активных элементов биосенсорных устройств. Сущность способа нанесения белковых пленок на твердую подложку основана на использовании в качестве иммобилизующего слоя для белковых молекул смешанного сложного эфира целлюлозы - ацетопивалината целлюлозы, который повышает степень упорядоченности молекул белка, увеличивает плотность заполнения белковой пленки и обеспечивает экономическую эффективность предлагаемого способа. 5 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и экологии, конкретно к системам на основе микроорганизмов, осуществляющих расщепление углеводородов, причем микроорганизмы иммобилизованы на целлюлозосодержащем носителе. Композиция для получения носителя микроорганизмов, расщепляющих углеводороды, состоит из целлюлозосодержащей основы, гидрофобизатора, эмульгатора и разбавителя, при соотношении компонентов (мас.ч.): целлюлозосодержащая основа 100; гидрофобизатор 10-20; эмульгатор 0-30; разбавитель 10-100. Получение носителя осуществляют приготовлением смеси гидрофобизатора, эмульгатора и разбавителя, а затем полученной смесью обрабатывают целлюлозосодержащую основу в течение 0,1-0,5 часа при 10-30°С с последующей сушкой в течение 6-48 часов при 20-30°С и далее в течение 0,5-2 часов при 75-120°С. Носитель иммобилизованных клеток микроорганизмов, получаемый согласно указанной последовательности операций, обладает сорбционной емкостью в отношении утлеводородразрушающих микроорганизмов, составляющей 10-50 мг биомассы на г носителя. 2 н.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к области генной инженерии и биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности. Предложен слитый белок бета-галактозидазы и целлюлозосвязывающего домена эндоглюканазы CelD из Anaerocellum thermophilium. Сконструирована рекомбинантная плазмидная ДНК pLACspCBD, обеспечивающая его экспрессию в клетках Е.coli. Получен штамм Е.coli - продуцент указанного слитого белка. Разработан способ получения данного слитого белка в иммобилизованном виде путем обработки целлюлозы гидролизатом указанного штамма Е.coli. Иммобилизованный слитый белок используют для ферментативного расщепления лактозы. Применение изобретения позволяет упростить переработку молочных продуктов. 5 н.п. ф-лы, 1 ил.