Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: .....инсулины – C12N 15/17
Патенты в данной категории
АНАЛОГИ ИНСУЛИНА, УСТОЙЧИВЫЕ К ПРОТЕАЗАМ
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к новым аналогам инсулина, и может быть использовано в медицине. Получают аналог инсулина, в котором по меньшей мере две гидрофобные аминокислоты заменены гидрофильными аминокислотами по сравнению с родительским инсулином и где A-цепь аналога инсулина содержит по меньшей мере одну мутацию и B-цепь содержит по меньшей мере одну мутацию по сравнению с родительским инсулином, при этом по меньшей мере одна мутация в А-цепи находится в одном или более сайтах расщепления, выбранных из группы, состоящей из A13-14, A14-15 и A19-20, и по меньшей мере одна мутация в В-цепи находится в одном или более сайтах расщепления, выбранных из группы, состоящей из B2-3, B6-7, B9-10, B10-11, B13-14, B14-15, B16-17, B22-23, B24-25, B25-26, и где аминокислота в положении B30 удалена. Аналог инсулина используют в составе фармацевтической композиции для лечения или профилактики гипергликемии, сахарного диабета 1 или 2 типа. Изобретение позволяет получить аналог инсулина с повышенной стабильностью в отношении одного или более протеолитических ферментов по сравнению с родительским инсулином. 6 н. и 38 з.п. ф-лы, 4 ил., 5 табл., 11 пр. |
2524150 патент выдан: опубликован: 27.07.2014 |
|
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pHIG05, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК С ПРОИНСУЛИНОМ Glargine ЧЕЛОВЕКА, КЛЕТКА Escherichia coli, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДНОЙ ДНК pHIG05, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli JM109/pHIG05-ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО БЕЛКА С ПРОИНСУЛИНОМ Glargine ЧЕЛОВЕКА
Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pHIG05, направляющую синтез гибридного белка человека с проинсулином Glargine человека, содержащую ДНК, кодирующую гибридный белок с проинсулином Glargine человека размером 134 а.о. с аминокислотной последовательностью, представленной на фиг.2, содержащей аминокислотные последовательности лидерного пептида, в виде N-концевого фрагмента гамма-интерферона человека, соединенного с проинсулином Glargine пептидным линкером. На основе рекомбинантной плазмиды pHIG05 получен штамм Escherichia coli JM109/pHIG05 - продуцент гибридного белка с проинсулином Glargine, зарегистрированный в ФГУП ГосНИИгенетики ВКПМ под номером В-11408. Использование заявляемых изобретений позволяет упростить технологию выделения инсулина Glargine и повысить его выход. 3 н. и 1 з.п.ф-лы, 2 ил., 2 пр. |
2515115 патент выдан: опубликован: 10.05.2014 |
|
РЕКОМБИНАТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК рНI03 КОДИРУЮЩАЯ, ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК С ПРОИНСУЛИНОМ ЧЕЛОВЕКА, КЛЕТКА Escherichia coli, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДНОЙ ДНК рНI03, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli JM109/pHI03-ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО БЕЛКА-ПРЕДШЕСТВЕННИКА ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА
Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pHI03, направляющую синтез гибридного белка человека с проинсулином человека, содержащую ДНК, кодирующую гибридный белок с проинсулином человека размером 134 а.о. с аминокислотной последовательностью, представленной на фиг.2, содержащей аминокислотные последовательности лидерного пептида, в виде N-концевого фрагмента гамма-интерферона человека, соединенного с проинсулином человека пептидным линкером. На основе рекомбинантной плазмиды pHI03 получен штамм Escherichia coli JM109/pHI03-продуцент гибридного белка с проинсулином, зарегистрированный в ФГУП ГосНИИгенетики ВКПМ под номером В-11409. Использование заявляемых изобретений позволяет упростить технологию выделения инсулина человека и повысить его выход. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр. |
2515061 патент выдан: опубликован: 10.05.2014 |
|
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pHILP07, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК С ПРОИНСУЛИНОМ Lispro ЧЕЛОВЕКА, КЛЕТКА Escherichia coli, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДНОЙ ДНК pHILP07, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli JM109/pHILP07-ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО БЕЛКА С ПРОИНСУЛИНОМ Lispro ЧЕЛОВЕКА
Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pHILP07, направляющую синтез гибридного белка человека с проинсулином Lispro человека, содержащую ДНК, кодирующую гибридный белок с проинсулином Lispro человека размером 134 а.о. с аминокислотной последовательностью, представленной на фиг.2, содержащей аминокислотные последовательности лидерного пептида в виде N-концевого фрагмента гамма-интерферона человека, соединенного с проинсулином Lispro пептидным линкером. На основе рекомбинантной плазмиды pHILP07 получен штамм Escherichia coli JM109/pHILP07 - продуцент гибридного белка с проинсулином Lispro, зарегистрированный в ФГУП ГосНИИгенетики ВКПМ под номером В-11410. Изобретение позволяет упростить технологию выделения инсулина Lispro и повысить его выход. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр. |
2514480 патент выдан: опубликован: 27.04.2014 |
|
АНАЛОГИ ИНСУЛИНОПОДОБНОГО ФАКТОРА РОСТА-1 (IGF-1), СОДЕРЖАЩИЕ АМИНОКИСЛОТНУЮ ЗАМЕНУ В ПОЛОЖЕНИИ 59
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к новому пептидному аналогу инсулиноподобного фактора роста-1 (IGF-1), содержащему аминокислотную замену метионина в положении 59 на Asn, Leu, Nle, Ile, Arg, A6c, Glu, Trp или Tyr, а также другие дополнительные замены, вставки и делеции. Указанный пептид или его фармацевтически приемлемую соль используют в составе фармацевтической композиции для лечения IGF-1-опосредованных заболеваний, а также в способе лечения низкорослости. Изобретение позволяет получить аналог-агонист IGF-1, обладающий повышенной биологической активностью по сравнению с нативным IGF-1. 3 н. и 14 з.п. ф-лы, 2 табл. |
2511577 патент выдан: опубликован: 10.04.2014 |
|
СТАБИЛИЗИРОВАННЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ ИНСУЛИНОПОДОБНОГО ФАКТОРА РОСТА
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению модифицированных белков IGF-1, и может быть использовано в медицине. Сконструирован полипептид, содержащий человеческий белок-предшественник IGF-1, в котором аминокислоты G1, Р2 и ЕЗ удалены в результате делеции или аминокислота Е3 удалена в результате делеции и в котором аминокислота R37 изменена на аланин и аминокислоты R71 и R72 удалены в результате делеции. При этом отщепление Е-пептида от IGF-1 с помощью протеазы снижено в результате указанных модификаций. Полученный полипептид используют для лечения заболевания костно-мышечной системы, диабета, состояний, ассоциированных с гибелью нейронов, анемии, хронического обструктивного заболевания легких и ожогового поражения. Изобретение позволяет получить стабилизированные полипептиды, содержащие модифицированную последовательность предшественника IGF-1, в которых снижено встречающееся в естественных физиологических условиях отщепление Е-пептида от IGF1. 13 н. и 8 з.п. ф-лы, 12 ил., 1 табл., 82 пр. |
2477287 патент выдан: опубликован: 10.03.2013 |
|
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО С-ПЕПТИДА ПРОИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к генной и белковой инженерии, и касается способа получения рекомбинантного с-пептида человека. Представленный способ включает культивирование штамма-продуцента Escherichia coli, разрушение бактериальных клеток дезинтеграцией, отделение «телец включения», содержащих гибридный белок, их растворение в буфере, содержащем мочевину и дитиотреитол, ренатурацию и очистку ренатурированного гибридного белка, его расщепление трипсином и карбоксипептидазой В, разделение хроматографией на SP-сефарозе с последующей очисткой и получением целевого продукта. Представленный способ позволяет получать с-пептид с высоким выходом и с чистотой не менее 95% из отходов, образующихся в процессе получения рекомбинантного инсулина человека. 4 табл., 6 пр. |
2451750 патент выдан: опубликован: 27.05.2012 |
|
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ГЕННОЙ ТЕРАПИИ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ТРЕБУЮЩИХ СТИМУЛЯЦИИ РЕГЕНЕРАТОРНЫХ ПРОЦЕССОВ, ВКЛЮЧАЯ ПОВРЕЖДЕНИЯ ТКАНЕЙ ЧЕЛОВЕКА РАЗЛИЧНОЙ ЭТИОЛОГИИ, НА ОСНОВЕ СИНТЕТИЧЕСКОГО МОДИФИЦИРОВАННОГО ГЕНА ИНСУЛИНОПОДОБНОГО ФАКТОРА РОСТА ЧЕЛОВЕКА ПЕРВОГО ТИПА (ИФР-1, IGF-1)
Изобретение относится к области медицины, а именно к генной терапии, и касается нуклеотидной последовательности, кодирующей инсулиноподобный фактор роста человека, IGF-1, представленную синтетическим геном, включающим последовательность SEQ ID NO:1, рекомбинантной плазмидной ДНК, содержащей эту последовательность, эукариотической клетки, содержащей рекомбинантную плазмидную ДНК, конструкции для генной терапии и фармацевтической композиции для генной терапии, обладающей регенеративным и ранозаживляющим действием. Преимущество изобретения заключается в снижении доз инъекционных препаратов и частоты их введения. 5 н.п. ф-лы, 6 ил. |
2372941 патент выдан: опубликован: 20.11.2009 |
|
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pHINS11, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК-ПРЕДШЕСТВЕННИК ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА, КЛЕТКА Escherichia coli, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДНОЙ ДНК pHINS11, ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli JM109/pHINS11 - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО БЕЛКА-ПРЕДШЕСТВЕННИКА ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению рекомбинантного инсулина человека, и может быть использовано для приготовления лекарственных препаратов для лечения сахарного диабета. Гибридный белок - предшественник инсулина человека состоит из N-концевого фрагмента гамма-интерферона человека, соединенного через пептидный линкер с аминокислотной последовательностью проинсулина человека. Рекомбинантный инсулин человека получают путем культивирования штамма-продуцента Escherichia coli JM109/pNINS11, несущего плазмиду pHINS11, выделения телец включений и растворения их в буфере, содержащем мочевину и дитиотреитол. Далее проводят ренатурацию гибридного белка, осаждение примесных соединений, очистку ренатурированного гибридного белка ионообменной хроматографией, совместный ферментативный гидролиз гибридного белка трипсином и карбоксипептидазой Б. На последнем этапе проводят очистку инсулина катионообменной хроматографией и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на обращенных фазах. Изобретение позволяет упростить получение высокоочищенного рекомбинантного инсулина человека и повысить его выход. 6 н.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл. |
2354702 патент выдан: опубликован: 10.05.2009 |
|
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pAS-2, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД ПРОИНСУЛИНА Aspart ЧЕЛОВЕКА, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli BAS2 - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ПРОИНСУЛИНА Aspart
Изобретение относится к генной инженерии и может быть использовано в фармацевтической промышленности при создании лекарственных препаратов для лечения инсулинозависимого сахарного диабета. Плазмида pAS-2 образована HindIII/BamHI-фрагментом плазмиды pPINS07, содержащим часть искусственного гена, кодирующего IgG-связывающий домен белка А из S. aureus и пептид His6 GlySerArg, и HindIII/BamHI-фрагментом, кодирующим проинсулин Aspart. Плазмида pAS-2 обеспечивает в клетках Е. coli биосинтез гибридного белка, в котором последовательность домена В стафилококкового белка A Staphylococcus aureus соединена через пептидный линкер His6GlySerArg с аминокислотной последовательностью проинсулина Aspart человека. Штамм бактерий Escherichia coli BAS2 человека, полученный путем трансформирования клеток штамма бактерий Escherichia coli BL21 плазмидой pAS-2, продуцирует указанный гибридный белок. Применение изобретения позволяет получать инсулин Aspart человека по упрощенной технологии и с высоким выходом. 2 н.п. ф-лы, 4 ил. |
2337964 патент выдан: опубликован: 10.11.2008 |
|
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pGG-1, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД ПРОИНСУЛИНА GLARGIN ЧЕЛОВЕКА И ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI BGG18 - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ПРОИНСУЛИНА GLARGIN
Изобретение относится к генной инженерии, конкретно к получению проинсулина Glargin, и может быть использовано для создания лекарственных препаратов нового поколения для лечения инсулинозависимого сахарного диабета. Конструируют рекомбинантную плазмидную ДНК pGG-1, кодирующую гибридный белок с аминокислотной последовательностью проинсулина Glargin, в котором последовательность домена В белка A Staphylococcus aureus соединена через пептидный линкер His6 GlySerArg с аминокислотной последовательностью проинсулина Glargin, имеющую молекулярную массу 3,3 МДа (5051 п.о.), содержащую HindIII/BamHI-фрагмент плазмиды pPINS07, включающий гибридный tac-промотор, ген |
2325440 патент выдан: опубликован: 27.05.2008 |
|
ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI BLP21 - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ПРОИНСУЛИНА LYSPRO ЧЕЛОВЕКА
Изобретение относится к генной инженерии и может быть использовано для получения высокоочищенного генно-инженерного инсулина Lyspro - быстродействующего аналога инсулина человека. Путем трансформации родительского штамма бактерий Escherichia coli BL21 плазмидной ДНК pLP-3-1 получают штамм Escherichia coli BLP21 - продуцент проинсулина Lyspro. Изобретение позволяет получить стабильный рекомбинантный инсулин Lyspro с высоким выходом и по упрощенной технологии. 1 ил. |
2325438 патент выдан: опубликован: 27.05.2008 |
|
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНОГО ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению генно-инженерного инсулина человека для изготовления лекарственных препаратов, применяемых при лечении сахарного диабета. Способ осуществляют путем культивирования штамма-продуцента гибридного белка, содержащего проинсулин человека, Escherichia coli BL21/pPINS07(BL07) или Escherichia coli JM109/pPINS07, разрушения клеток дезинтеграцией, отделения телец включения, содержащих гибридный белок. Далее проводят предварительную отмывку телец включения, одновременное растворение белка и восстановление дисульфидных связей в буфере с 5-10 мМ дитиотреитола и 1 мМ ЭДТА, ренатурацию и очистку ренатурированного гибридного белка ионообменной хроматографией. Расщепление гибридного белка проводят совместным гидролизом трипсином и карбоксипептидазой Б при массовом соотношении гибридного белка, трипсина и карбоксипептидазы Б 4000:0,6:0,9. Очистку инсулина проводят гидрофобной хроматографией или обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографией с последующей гель-фильтрацией, а выделение инсулина - кристаллизацией в присутствии солей цинка. Изобретение позволяет сократить процесс получения генно-инженерного инсулина человека и увеличить его выход. |
2322504 патент выдан: опубликован: 20.04.2008 |
|
ПРЕДШЕСТВЕННИК ИНСУЛИНА, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медико-биологической промышленности. Предложены новые полипептиды - предшественники инсулина или его аналогов, характеризующиеся повышенной стабильностью структуры и высоким уровнем экспрессии при получении в виде рекомбинантных форм в дрожжевых клетках. Полипептиды по изобретению отличаются от природной формы предшественника инсулина тем, что содержат укороченный С-пептид, включающий остаток ароматической аминокислоты, и имеют общую формулу: В (1-27)-X2-X3-X1 -Y-A (1-21), где Х1-пептидная последовательность из 1-3 аминокислотных остатков, в которой рядом с Y расположен остаток ароматической аминокислоты; Х2-Pro или Asp; Х 3-Lys; Y-Lys или Arg; A (1-21) - А-цепь инсулина человека, а В (1-27) - первые 27 аминокислотных остатков В-цепи инсулина человека. Раскрыт способ получения новых предшественников инсулина с помощью технологии рекомбинантных ДНК и последующего преобразования их в активный гормон. 5 с. и 4 з.п. ф-лы, 6 табл., 10 ил. |
2283846 патент выдан: опубликован: 20.09.2006 |
|
ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI BL21/pPINS07(BL07)-ПРОДУЦЕНТ ПРОИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА
Изобретение относится к генной инженерии и касается нового штамма бактерий Escherichia coli, который может быть использован для получения высокоочищенного генно-инженерного инсулина человека. Путем трансформации клеток E.coli BL21 плазмидной ДНК pINS07, определяющей синтез проинсулина, получают штамм бактерий Escherichia coli BL21/pРINS07(BL07) - продуцент рекомбинантного проинсулина человека. Изобретение решает задачу повышения внутриклеточной стабильности рекомбинантного проинсулина человека. (56) (продолжение): CLASS="b560m"WINTER J. et al. Recombinant expression and in vitro folding of proinsulin are stimulated by the synthetic dithiol Vectrase-P. FEMS Microbiol. Lett . 2002,v. 213, n.2, p.225-230. |
2267534 патент выдан: опубликован: 10.01.2006 |
|
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pHINS05, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД, СОДЕРЖАЩИЙ ПРОИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА, КЛЕТКА ESCHERICHIA COLI, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДНОЙ ДНК pHINS05, И ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI JM109/pHINS05 - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО ПОЛИПЕПТИДА, СОДЕРЖАЩЕГО ПРОИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА
Изобретение относится к генной инженерии и может быть использовано для получения рекомбинантного инсулина человека. Рекомбинантная плазмидная ДНК pHINS05 содержит ген, кодирующий гибридный белок, состоящий из N-концевого фрагмента гамма-интерферона человека, пептидного линкера His4GlySerArg и проинсулина человека. Рекомбинантной плазмидной ДНК pHINS05 трансформируют клетки Е. coli и получают штамм Е. coli JM109/pHINS05 - продуцент гибридного белка с проинсулином человека. Изобретение позволяет увеличить выход рекомбинантного проинсулина человека и удешевить технологический процесс получения инсулина человека. 3 н.п. ф-лы, 2 ил. |
2263147 патент выдан: опубликован: 27.10.2005 |
|
СПОСОБ ПРОМЫШЛЕННОГО ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного инсулина человека, используемого для приготовления лекарственных препаратов для лечения сахарного диабета. Культивирование штамма продуцента E.coli JM109/pPINS07 осуществляют в промышленном ферментере объемом 200-1500 л. Концентрацию растворенного кислорода поддерживают на уровне 40±15%. После разрушения клеток дезинтеграцией тельца включения растворяют в буфере, содержащем 8 М мочевину, затем добавляют дитиотреитол. Ренатурацию гибридного белка инсулина проводят в одну стадию путем инкубации в 5-10-кратном объеме буфера до стадии очистки путем кислотного осаждения. Гибридный белок хроматографируют на КМ-сефарозе. Ферментативное расщепление осуществляют последовательно при соотношении трипсин : гибридный белок и карбоксипептидаза Б : гибридный белок - 1:(500-1000). Между стадиями расщепления гибридного белка трипсином и карбоксипептидазой Б проводят хроматографию на СП-сефарозе. Инсулин очищают методом препаративной обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с последующей гель-фильтрацией и выделением в присутствии солей цинка. Изобретение позволяет упростить получение высокоочищенного рекомбинантного инсулина человека и повысить его выход в промышленном масштабе. 4 з.п. ф-лы, 4 табл. | 2232813 патент выдан: опубликован: 20.07.2004 |
|
НОВЫЕ АНАЛОГИ ИНСУЛИНА С ПОВЫШЕННЫМ СВЯЗЫВАНИЕМ ЦИНКА Изобретение относится к медицине, точнее к аналогам инсулина. Группа изобретений раскрывает способы получения аналогов инсулина, их применение, в частности, в фармацевтических препаративных формах для лечения сахарного диабета типа I, а также типа II. Технический результат: новые аналоги инсулина обладают повышенной способностью связывания цинка, а также к их устойчивым комплексам с цинком, которые по сравнению с человеческим инсулином обладают замедленным профилем действия. 20 с. и 40 з.п.ф-лы, 2 табл. | 2225723 патент выдан: опубликован: 20.03.2004 |
|
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНОГО ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению генно-инженерного инсулина человека для изготовления лекарственных препаратов, применяемых при лечении сахарного диабета. Способ получения генно-инженерного инсулина человека осуществляют путем культивирования штамма-продуцента Escherichia coli JM 109/pPINS07, выделения телец включения, содержащих гибридный белок, далее проводят отмывку телец включения, растворение и восстановление дисульфидных связей проводят одновременно в буфере, дополнительно содержащем 5-10 мМ дитиотреитола, в течение 3-7 ч. Очистку регенерированного гибридного белка проводят в одну стадию ионнообменной хроматографией. Расщепление гибридного белка осуществляют совместным гидролизом трипсином и карбоксипептидазой Б при массовом соотношении гибридного белка, трипсина и карбоксипептидазы Б 4000:1-2:1. Очистку инсулина проводят гидрофобной хроматографией с последующей гель-фильтрацией, а выделение инсулина - кристаллизацией в присутствии солей цинка. Изобретение позволяет сократить процесс получения генно-инженерного инсулина человека и увеличить его выход. | 2208637 патент выдан: опубликован: 20.07.2003 |
|
ПРОИЗВОДНОЕ ИНСУЛИНА ИЛИ ЕГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМАЯ СОЛЬ, ПРЕДШЕСТВЕННИК ПРОИЗВОДНОГО ИНСУЛИНА, ДНК-ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ, КОДИРУЮЩАЯ ПРЕДШЕСТВЕННИК, ВЕКТОР ЭКСПРЕССИИ, СОДЕРЖАЩИЙ УПОМЯНУТУЮ ДНК-ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ, СУБСТРАТ, ТРАНСФОРМИРОВАННЫЙ УПОМЯНУТЫМ ВЕКТОРОМ ЭКСПРЕССИИ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ С ПОНИЖАЮЩЕЙ, СООТВЕТСТВЕННО РЕГУЛИРУЮЩЕЙ УРОВЕНЬ ГЛЮКОЗЫ В КРОВИ ЭФФЕКТИВНОСТЬЮ
Изобретение относится к медицинской промышленности и касается производного инсулина или его физиологически приемлемой соли с ускоренным по сравнению с человеческим инсулином наступлением действия, в котором аспарагин (Asn) в положении В3 цепи В заменен на природный основной аминокислотный остаток и по меньшей мере один аминокислотный остаток в положениях В27, В28 или В29 цепи В замещен на другой природный нейтральный или кислый аминокислотный остаток, причем аспарагин (Asn) в положении А21 цепи А может быть заменен на Asp, Gly, Ser, Thr или Ala, а фенилаланин (Phe) в положении В1 цепи В и аминокислотный остаток в положении В30 цепи В могут отсутствовать. Описываются также ДНК-последовательности, кодирующие предшественник производного инсулина, вектор экспрессии, содержащие эту ДНК, а также штаммы, экспрессирующие предшественник инсулина, и фармацевтическая композиция с понижающей, соответственно регулирующей уровень глюкозы в крови эффективностью. Преимущество изобретения заключается в разработке препарата с ускоренным наступлением действия. 6 н. и 17 з.п. ф-лы, 6 табл., 1 ил. |
2207874 патент выдан: опубликован: 10.07.2003 |
|
ПАПИЛЛОМАВИРУСНЫЕ ВАКЦИНЫ Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам получения вирусоподобных частиц (VLP) папилломавируса человека, используемых для создания вакцин. Способ включает трансформацию дрожжевой клетки молекулой ДНК, кодирующей L1 HPV или L1+L2 HPV, культивирование трансформированной клетки, сбор VLP из трансформированной клетки и очистку VLP с помощью стадии хроматографии. 2 з.п.ф-лы, 14 ил. | 2206608 патент выдан: опубликован: 20.06.2003 |
|
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения проинсулина человека. Сущность изобретения включает получение предшественника рекомбинантного инсулина посредством суспендирования клеток Е. coli, экспрессирующих слитые белки проинсулина в форме телец включения, лизиса, суспендирования телец включения в растворе, содержащем мочевину или гуанидин HCl, сульфирования слитых белков проинсулина сульфонатом натрия и тетратионатом натрия, центрифугирования слитого белка S-сульфоната проинсулина, его очистки посредством анионообменной хроматографии, его разведения в буферном растворе и продувки газообразного азота, смешивании с буферным раствором, содержащим 2-меркаптоэтанол и перемешивание с получением реакционной рефолдинг-смеси, очистки адсорбционной и элюиций проинсулина человека с реконструированной цепью. Преимущество изобретения заключается в увеличении выхода продукта. 16 з.п.ф-лы, 4 табл., 3 ил. | 2203949 патент выдан: опубликован: 10.05.2003 |
|
СПОСОБ ПРОДУЦИРОВАНИЯ ПОЛИПЕПТИДА В ДРОЖЖАХ Изобретение относится к биотехнологии. Способ продуцирования полипептида в дрожжах заключается в культивировании дрожжевой клетки, способной экспрессировать этот полипептид, трансформированной дрожжевым вектором экспрессии, содержащим экспрессирующую кассету. Кассета включает промоторную последовательность, ДНК последовательность, кодирующую сигнальный пептид, терминаторную последовательность, ДНК, кодирующую желаемый пептид, ДНК, кодирующую процессинговый сайт, и ДНК последовательность LS, кодирующую лидерный пептид общей формулы 1: GlnProlle(Asp/Glu)(Asp/Glu)X1(Glu/Asp)X2AsnZ(Thr/Ser)X3 1, где Х1 обозначает пептидную связь или кодируемую аминокислоту, Х2 обозначает пептидную связь или кодируемую аминокислоту, или последовательность до 4 одинаковых или разных кодируемых аминокислот, Z обозначает кодируемую аминокислоту кроме Рro, и Х3 обозначает последовательность от 4 до 30 одинаковых или разных кодируемых аминокислот. Культивирование проводят в подходящей среде для достижения экспрессии и секреции указанного полипептида, после чего это полипептид выделяют из среды. 22 з.п. ф-лы, 22 ил., 2 табл. | 2167939 патент выдан: опубликован: 27.05.2001 |
|
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК С ПРОИНСУЛИНОМ ЧЕЛОВЕКА (ВАРИАНТЫ)
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для создания лекарственных препаратов человеческого инсулина. Плазмиды содержат промоторы, обеспечивающие высокую конститутивную экспрессию гена гибридного белка. Гибридный белок состоит из N-концевого фрагмента фактора некроза опухолей ![]() ![]() |
2162102 патент выдан: опубликован: 20.01.2001 |
|
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК PPINS16, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД, СОДЕРЖАЩИЙ ПРОИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК PPINS25, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД, СОДЕРЖАЩИЙ ПРОИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА, И ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО ПОЛИПЕПТИДА, СОДЕРЖАЩЕГО ПРОИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической инженерии. Может быть использовано для получения рекомбинатного проинсулина человека. Рекомбинантная плазмидная ДНК pPINS16 содержит искусственный ген, кодирующий гибридный полипептид, состоящий из одного IgG-связывающего домена белка А из S. aureus, пептидного линкера His6GlySerArg и проинсулина человека, тандем промоторов триптофанового оперона Е.соli и синтетический усилитель трансляции гена 10 бактериофага Т7. Рекомбинантная плазмидная ДНК pPINS16 обеспечивает в клетках E.coli SG20050 конститутивный биосинтез гибридного полипептида на уровне 25-30% суммарного клеточного белка. Рекомбинантная плазмидная ДНК pPINS25 содержит искусственный ген, кодирующий гибридный полипептид, состоящий из одного IgG-связывающего домена белка А из S. aureus, пептидного линкера His6GlySerArg и проинсулина человека, гибридный trc-промотор, тандем двух терминаторов рибосомного оперона E.coli и мутантный ген, кодирующий термочувствительный lac-репрессор. Штамм Escherichia coli SG20050/pPINS25-продуцент гибридного полипептида, содержащего проинсулин человека. Изобретение позволяет индуцировать биосинтез целевого гибридного полипептида сдвигом температуры культивирования штамма-продуцента с 30 до 42°С. Уровень биосинтеза составляет не ниже 25% суммарного клеточного белка. 3 с.п.ф-лы, 3 ил. | 2143493 патент выдан: опубликован: 27.12.1999 |
|
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА Изобретение относится к биотехнологии. Способ заключается в том, что культивируют штамм-продуцент Е. coli JM109/pPINS07, разрушают клетки дезинтеграцией, отделяют тельца включения, содержащие гибридный белок, растворяют их в буфере, содержащем мочевину и дитиотреитол, ренатурируют, очищают ренатурированный гибридный белок путем осаждения примесных соединений в 40% изопропаноле с последующей хроматографией на КМ-сефарозе. Затем расщепляют гибридный белок трипсином, продукты трипсинолиза хроматографируют на СП-сефарозе с элюцией фракцией линейным градиентом хлористого натрия от 0 до 0,5 М в стартовом буфере, расщепляют карбоксипептидазой Б. Полученную фракцию инсулина очищают методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на обращенных фазах с последующей гель-фильтрацией. Способ позволяет получить инсулин более высокого качества и степени очистки с чистотой не ниже 96% и активностью не ниже 26 Е/мг. Отсутствие принципиальных сложностей на всех промежуточных стадиях получения рекомбинантного инсулина человека, доступность используемых реактивов и надежность сорбентов открывает широкие возможности для промышленного освоения способа. 1 табл. | 2141531 патент выдан: опубликован: 20.11.1999 |
|
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК, КОДИРУЮЩАЯ ПРЕПРОИНСУЛИН ЧЕЛОВЕКА Сконструированная рекомбинантная плазмидная ДНК может быть использована в биотехнологии для получения инсулина человека. Рекомбинантная ДНК получена на основе плазмиды рКК223-3. ДНК, кодирующая препроинсулин, встроена между сайтами рестрикции EcoRI и Hinol III. Триплет, кодирующий метионин, заменен на триплет, кодирующий аргинин, что позволяет получать проинсулин путем ферментативного расщепления. 2 ил. | 2115729 патент выдан: опубликован: 20.07.1998 |
|
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИНСУЛИНА Использование: изобретение относится к генной инженерии, в частности к получению слитых белков и трансформации клеток стерптомицетов. Сущность изобретения: гены, кодирующие сигнальную последовательность и первые девять аминокислот тендамистата, экспрессируются в стрептомицетных клетках с высоким выходом и слитые белки секретируются в среду. 3 з. п. ф-лы. | 2055892 патент выдан: опубликован: 10.03.1996 |
|